1984年上海市第一人民医院新生儿病房急性胃肠炎流行

用ELISA和RNA PAGE银染法检测了上海市第一人民医院新生儿病房及隔壁婴儿病房8份急性腹泻粪便标本;3份粪标本呈轮状病毒特异抗原阳性,3份粪标本能提供RNA进行电泳分析。6份病人恢复期血清抗体效价均>1:1280,较正常配对组的抗体水平高4倍以上,说明新生儿病房及隔壁婴儿病房急性腹泻流行为轮状病毒感染所引起。分析其RNA迁移图谱,均为电泳型2L,第3电泳亚型。经混合电泳显示3例RNA无差异,提示病人感染来自同一传染源;并探讨了轮状病毒传播的可能途径,为今后改进医疗质量提供了资料。     

哈尔滨地区婴幼儿腹泻轮状病毒优势株的变化

本文对1988—1989年哈尔滨地区婴幼儿腹泻进行了轮状病毒核酸电泳型调查,并于1984—1985年资料比较,以探明这一地区轮状病毒流行优势株的变化。 标本:婴幼儿腹泻粪便标本采自哈尔滨医科大学附属二院儿科及哈尔滨红十字儿童医院。病毒RNA提取:参考Herring方法。聚丙烯酰胺电泳(PAGE):参考Uaemmli方法。 结果:123份急性婴幼儿腹泻粪便标本PAGE检测,47例呈现轮状病毒RNA图型,阳性率为38.2％。电泳图型的基本模式为4:2:3:2,表明均为A组轮状病毒。根据各片段的迁移位置差异,共可见9种不同的电泳型,其中短型3例,占6.4％,含2个电泳型;长型44例,     

山东省十地市人轮状病毒分子流行病学研究

用核酸凝胶电泳法对1985—1986年山东省十地市的318份婴幼儿急性腹泻粪便标本中测出的170份HRV阳性标本作了RNA电泳型分析,发现3个地区为HRVI亚群流行,3个地区为HRVⅡ亚群流行,4个地区为两亚群共同流行,共检出差异电泳型34个,其中14个属长RNA电泳型,20个属短RNA电泳型。在一个地区虽有多个差异电泳型毒株流行,但仅有其中的1—2个占流行优势。在两亚群毒株共同流行区,检出的差异电泳型特别多。本文并对HRV RNA电泳型多形性的原因及意义进行了讨论。     

沙市地区婴幼儿腹泻轮状病毒分子流行病学的探讨

本文报告用SDS-PAGE法对1980—1982年湖北沙市地区婴幼儿秋季腹泻轮状病毒核酸的分析结果,共检测粪便标本131份,轮状病毒核酸阳性者49份,阳性率为37.4％,其中长型45份,短型4份。长型中按7、8、9三条RNA带迁移模式的差别,1980—1982年三个秋季中均以Ⅱ亚型占优势。     

人轮状病毒的细胞培养分离

用CV-1细胞从急性腹泻病儿7份粪便标本中直接分离出4株人轮状病毒(HRV),并适应传代14代。感染细胞出现特征性细胞病变,经电镜、ELISA、免疫荧光染色及病毒RNA电泳等试验证实HRV毒株在CV-1细胞中的繁殖及抗原特异性。病毒滴度为10~(6.0)TCID_(60)。分离的4株HRV毒株均为RNA电泳型长型,经CV-1细胞传7～14代后,RNA图型与原粪样相比未见变异。     

青岛、淄博地区人轮状病毒分子流行病学研究

用核酸凝胶电泳法对1983～1984年青岛、淄博地区的108份轮状病毒标本作了RNA电泳型分析。发现同一时期两地区流行的轮状病毒亚群不同,同一时期存在两亚群毒株的共同流行。共检出13个不同的差异电泳型,其中4个电泳型多于11条核酸带。提示轮状病毒毒株间存在一定的变异,电泳型不同的毒株可能同时感染一个病人。本文还对轮状病毒核酸电泳型多形性的原因及意义进行了讨论。     

2018-2019年福州腹泻住院儿童A组轮状病毒全基因组分析

了解2018-2019年福州市五岁以下腹泻住院儿童标本中A组轮状病毒(RVA)基因组特征.通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)对49份RVA阳性标本进行核酸扩增,对扩增到的40份标本进行全基因组二代测序,获得G1P[8]型RVA毒株7株,G9P[8]型RVA毒株33株.根据VP7节段分型,40株RVA毒株中有30株G9-Ⅵ亚型、3株G9-Ⅲ亚型和7株G1-Ⅰ亚型;根据VP4节段分型,40株RVA毒株均属于P[8]-3亚型.全基因组核苷酸序列分析表明,除了VP7节段外,序列差异比较大的有NSP4和NSP1两个节段.本研究获得11株G9P[8]型Waa-ike株(G9-P[8]-I1-R1-C1-M1-A1-N1-T1-E1-H1),22株NSP4节段重配的G9P[8]-E2株(G9-P[8]-I1-R1-C1-M1-A1-N1-T1-E2-H1),在测序的33株G9P[8]型RVA毒株中G9P[8]-E2重配株占66.7％.7株G1P[8]型RVA毒株均为Wa-like株.研究结果表明,2018-2019年福州地区流行的RVA毒株中G9P[8]-E2重配株已经成为优势株,为了更全面了解福州地区RVA毒株的遗传变异情况,后续还需加大标本量持续进行监测.     

南京地区2012～2013年G9型轮状病毒VP7基因特征的分析

A组轮状病毒是引起成人和婴幼儿急性腹泻的主要病原。了解轮状病毒流行株的型别,对主要中和抗原VP7的编码基因进行遗传变异分析,可为当地轮状病毒疫苗的应用和开发提供指导。我们对2012年10月至2013年12月南京地区908例腹泻门诊患者的粪便标本进行轮状病毒检测,采用RT-PCR方法对随机抽取的50份阳性标本进行G分型,并对其中19份G9型轮状病毒的VP7基因序列测序分析。结果发现轮状病毒阳性率11.34%(103/908),其中以G9型为主,占78.0%(39/50),其次是G2、G1和G3型。对G9型轮状病毒VP7基因核苷酸序列进行分析,显示主要分为G9-VI亚型和G9-III亚型,以G9-VI亚型为主,且属于中国和日本G9型轮状病毒亚簇,部分毒株在A、B、C、F四个中和抗原表位中有变异,这可能有助于G9型轮状病毒的流行,值得引起注意。     

2012-2015年广东省活禽市场外环境禽流感病毒污染状况研究

研究广东省活禽市场外环境禽流感病毒污染状况并及时发现人流感发病潜在的危险因素,为人流感防治提供科学参考依据。应用传染病技术监测平台信息管理系统数据,采用描述性流行病学方法分析各种亚型病毒感染的流行病学特征,研究2012-2015年广东省活禽市场外环境禽流感病毒污染。共采集检测广东省21个地市级样本33079份,FluA 总阳性率为24．23％,H5、H7和 H9型高致病性禽流感病毒阳性率分别为3．70％、3．89％和13．53％;除2012年阳性率呈现季节性增加外,其他年份 FluA 核酸检测阳性率均在冬春季出现一个高峰。不同部位或地点采集的标本中,宰杀或摆放禽肉案板表面阳性率最高（FluA39．49％,H58．41％,H77．41％,H923．84％）,而采集的粪便标本阳性率最低（FluA14．99％,H51．73％、H72．38％、和 H97．23％）;所采集的标本所对应的相关动物种类中,鸡（64．08％）、鸭（55．84％）和鸟类（51．92％）的禽流感病毒阳性率都达到50％以上,H5、H7和 H9在各禽类中均可以检出。同时发现,在环境中检出 H7亚型多的地区分布与其相应地区 H7N9感染的病例数呈显著相关性,（r ＝0．689,P ＜0．05）;对2322份样本进行 H6亚型核酸检测,总阳性率为2．58％,并选取 H5、H6和 H9亚型标本153份进行 N 亚型检测,检测出 H5N1、H5N2、H5N6、H6N2和 H9N2等多种亚型。2012-2015年广东省21个地市活禽市场均存在 HA 亚型（H5、H7、H9和 H6）和 NA 亚型（N1、N2、N6）等多种亚型的污染,污染程度呈现季节性分布,不同样本类型和禽类其禽流感病毒分状况不同,H7亚型的污染严重程度与 H7N9的病例感染数呈正相关性。     

人轮状病毒HRB-02株的分离鉴定

从哈尔滨医科大学第二临床医学院发生腹泻患儿粪便中取得标本 ,用MA10 4细胞传代培养 ,传至第4代时 ,细胞出现明显病变 ;电镜观察见到典型的轮状病毒颗粒 ;其RNA电泳型为 4∶2∶3∶2型 ,属A群轮状病毒。对其蚀斑特性和血凝特性进行了初步研究 ,把这株轮状病毒地方株命名为HRB 0 2株。为研究该株轮状病毒的分子生物学特性 ,从而研制诊断性抗原和疫苗奠定基础。     

白色念珠菌的临床分布及Rosco纸片法药敏结果分析

目的了解目前白色念珠菌的临床分布及其耐药现状,以加强抗真菌药物的合理应用。方法采用Rosco纸片扩散法检测2005年2—9月安徽医科大学第一附属医院临床分离的260株白色念珠菌对7种抗真菌药物的药敏结果。结果白色念珠菌的临床分布以痰液标本为主,老年患者居多。白色念珠菌对制霉菌素、两性霉素B和伊曲康唑的敏感率均较高,分别为98.9％、96．9％和94．2％;其次为酮康唑和氟康唑,敏感率分别为84．6％和82．3％;灰黄霉素、益康唑和眯康唑的敏感率较低,分别为73．9％、57．8％和57．6％。结论临床微生物实验室要加强对白色念珠菌的分离培养和药敏试验,指导临床合理用药,有效控制和减少真菌感染。     

我国首例孕妇感染高致病性禽流感(H5N1)的病原学研究

对2005年11月8日安徽省铜陵市人民医院报告的一例孕妇不明原因肺炎病例的死亡病因进行研究。采集病人的气管吸出物及血液标本,用RT-PCR和Real-ti me PCR方法检测流感病毒A/M、A/H5N1、A/H7N7、A/H9N1亚型特异性核苷酸片段;气管吸出物接种SPF鸡胚进行病毒分离,并对分离物进行鉴定和序列测定及分析;利用血凝抑制试验检测血清标本抗体。结果表明病人气管吸出物可以检测到甲型流感病毒M片段及H5亚型的特异性HA基因。2005年11月9日采集的血清标本用Real-ti me PCR检测到甲型流感病毒M基因。从病人的气管吸出物中分离到H5N1病毒(A/Anhui/1/2005),对病毒的HA基因序列结果进行分析表明病毒是禽源的,其主要依据是受体结合位点第226~228位氨基酸位点(QSG)为禽流感病毒所特异,HA受体连接肽仍为9个碱性氨基酸(LRERRRKRP);基因进化树分析显示,HA基因与禽源病毒进化距离接近。发病后7、8、9d的血清H5N1禽流感病毒HI抗体小于20。对该病例的病原学研究证明,该病例为H5N1禽流感感染病例。     

结核分枝杆菌菌体蛋白双向电泳技术的优化

目的：提取结核分枝杆菌菌体蛋白并建立一种利用双向电泳分离结核分枝杆菌蛋白质组的方法。方法：分离提取结核分枝杆菌菌体蛋白。样品采用不同pH梯度的鹏胶条进行第一向等电聚焦,12％SDS—PAGE凝胶进行二向电泳。银染后双向电泳图谱用Molecular Image Fx激光图像扫描仪扫描,PDQuest6．0软件完成配比分析。结果：优化了结核分枝杆菌菌体蛋白的提取方法,用裂解液8mol／L尿素结合2mol／L硫脲,140mmol／LDTT,0．5％biolyte,4％CHAPs,400mg／m1lOG处理,成功提取了蛋白,并通过结核分枝杆菌双向电泳技术体系的优化,建立了结核分枝杆菌菌体蛋白的分解图谱。pH4—7及pH7—10两胶面上共1387个点,占所检测到的蛋白总数的86％,绝大部分（1194个）蛋白位于pH4—7范围内。结论：为进一步开展结核分枝杆菌的比较蛋白质组学研究提供了方法学参考。     

住院8天过敏性紫癜患儿肠道菌群的变化研究

目的研究住院1～8d过敏性紫癜患儿肠道菌群的变化。方法（1）提取43例过敏性紫癜患儿（观察组）住院1～8d和43例健康儿童（对照组）粪便标本的细菌DNA,测量并比较对照组和观察组标本细菌的DNA-A240值;（2）采用16SrRNA／DNA荧光定量PCR技术进行对照组和观察组粪便标本中双歧杆菌、乳酸杆菌和大肠埃希菌的定量分析和比较。结果（1）粪便标本中细菌的DNA-A240值分别为：对照组d0（3605．9±1096．9）ng／μl,观察组治疗前1天d1（2225．9±616．1）ng／μl,治疗第3～4天d2（1780．3±547．4）ng／μl,治疗第7～8天d3（2055．6±570．2）ng／μl;对照组和观察组治疗前以及观察组治疗不同时期相比,d0与d1差异有显著性（P〈0．05）,d1与d2差异有显著性（P〈0．05）,d1与d3差异有显著性（P〈0．05）,d2与d3差异无显著性（P〉0．05）;（2）粪便标本中3种细菌量的对数值比较差异均有显著性（P〈0．05）。观察组双歧杆菌和乳酸杆菌数量在治疗第3—4天较低,第7—8天有所回升;大肠埃希菌的对数值亦有减少,治疗第3—4天较低,但第7～8天没有明显回升。结论（1）过敏性紫癜患儿肠道菌群总DNA-A260量和健康儿童相比有减少;（2）过敏性紫癜患儿肠道双歧杆菌、乳酸杆菌和大肠埃希菌量与正常儿童相比有下降,治疗的第7天有回升的趋势。过敏性紫癜患儿肠道益生菌数量减少可能影响其发病和转归。     

一步法电泳分析肌联蛋白亚型和肌球蛋白重链

目的为研究超大分子量肌小节蛋白肌联蛋白(titin)的生理病理功能,在一次电泳过程中同时分离titin各亚型和中分子量肌小节蛋白肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)。方法使用16cm×18cm垂直电泳系统,在电泳板下1/3灌注10g/L SDS-PAGE胶,上2/3灌注60g/L SDS-琼脂糖(SDS-VAGE)胶。低温8℃下持续电泳5h,在电泳板上层以SDS-VAGE胶电泳分离titin亚型,下层以SDS-PAGE胶电泳分离MHC。电泳后VAGE胶使用银染法标记titin各亚型,PAGE胶使用考马斯亮蓝染色法标记MHC。结果 titin各亚型得到有效的分离,目标蛋白条带显示清晰,与其分子量大小一一对应,分离效果明确。结论一步法垂直电泳系统可应用于超大分子量蛋白的电泳,同时可分离多个分子量差距大的蛋白,提高蛋白电泳实验效率。     

鸭源H9N2AIV血凝素基因序列比较

为明确国内外鸭源H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)血凝素基因(hemagglutinin,HA)的遗传进化关系、血凝素蛋白裂解位点的氨基酸结构特征和血凝素蛋白受体结合位点的氨基酸变异特征,本研究选取GenBank中登录鸭源H9N2亚型AIV HA基因,通过MEGA4.1进行比对和分析,并绘制其遗传进化树。结果表明,鸭源H9N2亚型AIV在遗传进化上分为2大谱系:即Ck-Bj-1-94-like和North-Ame-like,中国大陆鸭源H9N2亚型AIV和亚欧美其它国家鸭源H9N2亚型AIV在遗传进化上分居完全不同的谱系,相互之间遗传进化关系较远。从血凝素受体结合位点看,亚欧美国家鸭源H9N2亚型AIV在第183、190和226位点的氨基酸均为鸭源AIV经典H、E和Q,且高度保守。但中国大陆地区H9N2亚型AIV第183位为N;第190位为A or V or T,与中国大陆鸡源H9N2亚型AIV一致;第226位中国鸭源H9N2亚型AIV有相当一部分为L,且近年福建省H9N2亚型AIV分离株在此处均为L。提示我们,中国大陆地区H9N2亚型AIV鸭鸡和鸡鸭相互交叉感染较为普遍。     

重症监护病房洋葱伯克霍尔德菌医院感染的特征及耐药性分析

目的了解重症监护病房（ICU）洋葱伯克霍尔德菌引起医院感染的特征及耐药情况,为临床治疗及控制该菌的暴发流行提供实验依据。方法常规方法对我院2003年1月至2007年10月ICU的病人的各种临床标本进行分离培养,细菌鉴定及药敏试验采用全自动微生物鉴定仪VITEK-2进行。结果引起ICU医院感染的洋葱伯克霍尔德菌共有99例,感染以肺部感染为主,对临床常用的多种抗菌药物表现交叉耐药,对头孢匹肟、亚胺培南、哌拉西林、阿米卡星、庆大霉素的敏感率较差在50．0％以下;对环丙沙星、左氧氟沙星、头孢他啶、氨曲南、哌拉西林／他唑巴坦、美诺培南和复方新诺明的敏感率较高,分别为82．8％、87．9％、91．9％、72．7％、55．6％、62．6％和100．0％。结论引起ICU医院感染的洋葱伯克霍尔德菌具有多重耐药性,临床治疗时应根据药敏结果选用抗菌药物。     

U0126通过下调p-ERK1/2和GM130的表达对人胃癌细胞MKN-45的影响

探讨ERK1/2通路抑制剂U0126对人胃癌MKN-45细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的影响及机制。首先用CCK-8法测定U0126对MKN-45细胞增殖的影响并筛选药物作用的最适浓度和时间用于后续实验,并将实验分为药物处理组,阴性对照组和空白对照组。然后通过流式细胞术、Transwell迁移实验和Matrigel侵袭实验分别检测细胞凋亡、迁移和侵袭能力,RT-q PCR检测各组GM130的m RNA水平的变化,Western blotting检测ERK1/2、p-ERK1/2、MMP-9、MMP-2、GM-130的蛋白水平的变化。实验发现10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L、40μmol/L浓度的U0126均能抑制MKN-45细胞的增殖,其中20μmol/L浓度作用48 h效果最强(p0.05),且该药物作用条件下MKN-45细胞凋亡增加,迁移和侵袭作用减弱(p0.05)。Western blotting结果显示,药物处理组ERK1/2蛋白水平不变,而p-ERK1/2、MMP-9、MMP-2、GM-130的蛋白水平均明显低于阴性对照组和空白对照组(p0.05)。RT-q PCR结果显示,药物处理组GM130的m RNA水平明显低于阴性对照组和空白对照组(p0.05)。以上研究结果均表明U0126可促进MKN-45细胞凋亡,降低细胞体外增殖、迁移和侵袭的能力,其机制可能与p-ERK1/2和GM130的表达被抑制有关。     

东洞庭湖地区野禽驯养繁殖基地的禽流感病毒调查

为了解东洞庭湖地区野禽驯养繁殖基地禽流感病毒感染状况,2011年11月至2013年10月,调查4家野禽驯养繁殖基地的养殖情况,同时采集环境标本(包括新鲜粪便标本和水标本)。利用PCR和病毒分离方法对标本进行检测。部分标本进行了核酸检测,禽流感病毒(AIV)阳性率为36.62%,2012年3月份阳性率最高(47.83%)。粪便标本、水标本的AIV阳性率分别为40.45%、30.19%,二者无统计学差异。共分离到28株AIV病毒,亚型包括H10、H4、H5和N7、N8,集中于11~12月的标本,主要来源于君山区野禽驯养繁殖基地的雁类和野鸭的新鲜粪便标本。野禽驯养基地的环境标本中存在AIV病毒,以A(H10N7)为主,建议对其进行定期监测。