食物水限制对子午沙鼠肾和肝组织线粒体呼吸链复合物活性及相关自由基代谢的影响

目的观察食物水限制条件下对肾和肝组织线粒体呼吸链复合物活性的影响,研究组织线粒体能量代谢相关的响应特征。方法以健康成年子午沙鼠Meriones meridianus为材料,运用分光光度法测定了食物水限制3 d、6 d、9 d后子午沙鼠肾脏与肝脏组织线粒体呼吸链复合物Ⅰ~Ⅳ活性及超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量变化。结果水限制胁迫可引起肾和肝组织中线粒体呼吸链4种复合物的活性明显升高(P<0.05,P<0.01),体质量逐渐降低。其中水限制3 d是其适应性反应的重要阶段,3 d时呼吸链复合物活性升高幅度较大,9 d时活性均降低,但仍高于对照组。肾组织线粒体SOD活性呈不同程度升高,肾与肝组织线粒体MDA含量在水限制下显著升高。结论食物水限制引起肾和肝组织线粒体呼吸链复合物活性的升高与肾对水的重吸收和肝代谢增加有关,长时间水限制诱导自由基水平升高,对代谢酶活性的维持可能产生不利的影响。     

子午沙鼠子鼠肾中水通道蛋白1、2的表达

应用免疫组织化学方法和体视学半定量方法检测了水通道蛋白1、2(aquaporin 1,2)在子午沙鼠(Meriones meridianus)子鼠肾中的表达,利用IPP专业图像分析软件对其表达强度进行了定量分析。结果显示,1、7、14、21、32日龄子午沙鼠仔鼠肾均有水通道蛋白1、2的阳性表达,AQP1表达部位为肾近曲小管上皮细胞的顶质膜和基底膜、髓袢细段;AQP2的表达位于集合管主细胞的游离面细胞膜;7日龄子午沙鼠仔鼠肾AQP1阳性表达的面密度增加显著(P0.05),光密度增加极显著(P0.01),7日龄子午沙鼠仔鼠肾AQP2阳性表达的面密度和光密度增加极显著(P0.01),7日龄后无差异(P0.05)。结果表明,7日龄后子午沙鼠子鼠肾AQP1、2的表达水平增强,近曲小管与髓袢细段、集合管对水的重吸收增强,以浓缩尿液,AQP1、2对子鼠尿的浓缩起重要作用,从而调节肾水的平衡。     

低氧及低氧预处理时心肌细胞HIF-1α与凋亡相关蛋白表达的变化

目的:观察低氧时心肌细胞HIF-1α表达变化与凋亡相关蛋白表达关系.方法:采用体外心肌细胞培养的方法,将原代培养4～6 d的大鼠乳鼠心肌细胞随机分为对照组、低氧组与低氧预处理组.低氧预处理组在低氧培养箱中通入1%O2、5%CO2、94%N2的低氧混合气体,每天低氧12 h,低氧5 d,第6 d与急性低氧组一同放入0%O2、5%CO2、95%N2的低氧培养箱中进行低氧暴露.低氧48 h后,通过Western blot方法分别检测心肌细胞中HIF-1α、Bcl-2、P53及Bax的表达变化.结果:常氧时细胞不表达HIF-1α,低氧可增加HIF-1的表达,低氧预处理后,能降低HIF-1α的表达.低氧时,Bax的表达变化大致与此相同.p53在低氧时的变化也与其相同,但低氧预处理后似乎没有明显的改变.Bcl-2在低氧时表达下降,低氧预处理后可增加其表达.结论:HIF-1α的表达可协同Bcl-2家族凋亡相关蛋白的表达,在低氧导致的心肌细胞凋亡中发挥重要作用.     

ING4和HIF-1α在口腔鳞癌中的表达及临床意义

目的:探讨人口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中生长抑制因子4(ING4)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及其临床意义。方法:选择我院确诊的口腔鳞癌患者共计65例,均经过手术治疗,术前未行放化疗,切除标本经过石蜡包埋切片,同时选取20例正常口腔黏膜作为对照。采用免疫组化S-P法检测人口腔鳞状细胞癌和正常口腔黏膜组织中ING4和HIF-1α的表达,并分析其与OSCC患者临床病理特征的相关性及人口腔鳞状细胞癌组织中ING4和HIF-1α表达的相关性。结果:OSCC组织中ING4的阳性表达率为41.5%(27/65),显著低于正常口腔黏膜组织(P0.05);OSCC组织中HIF-1α的阳性表达率为64.6%(42/65),显著高于正常口腔黏膜组织(P0.05)。ING4和HIF-1α的表达与OSCC的病理分级、TNM分期和是否有淋巴结转移显著相关(P0.05);OSCC组织中,ING4的表达与HIF-1α的表达呈显著负相关(P0.05)。结论:口腔鳞状细胞癌组织中ING4的表达下调,HIF-1α的表达上调,二者可能通过负向调控作用在口腔鳞状细胞癌的发生、发展、侵袭和转移中发挥着重要作用。     

P-mTOR、HIF-1α、P—GP在胰腺癌中的表达及其临床病理意义

目的 研究P-mTOR、HIF-α、P-GP三种蛋白在胰腺癌组织中的表达并探讨其临床病理学意义及三者之间的相关性。方法采用免疫组织化学SP法检测43例胰腺癌组织、9例慢性胰腺炎组织和8例正常胰腺组织中P-mTOR、HIF-1α及P-GP3种蛋白的表达。结果P-mTOR的阳性表达主要位于肿瘤细胞胞质,HIF-1α的阳性表达主要位于细胞核或细胞质,P-GP则主要位于细胞膜或细胞质。P-mTOR、HIF-1α、P-GP在胰腺癌组织中的阳性表达率分别为67．44％、69．77％和58．14％,三者在胰腺癌中的表达均明显高于其在正常胰腺组织中和慢性胰腺炎中的表达（分别为P〈0．01和P〈0．05）。P-mTOR、HIF-1α和P-GP的异常表达均与胰腺癌的淋巴结转移和TNM分期相关（P〈0．05）,与患者的性别、年龄、部位、分化程度和病理分型无关（P〉0．05）。P-GP与P-mTOR、HIF-1α蛋白的表达之间均呈正相关,P-mTOR与HIF-1α蛋白的表达也呈显著正相关。结论胰腺癌组织中存在P-mTOR、HIF-1α和P-GP蛋白表达的上调。在胰腺癌中,P-mTOR可能上调HIF-1α的表达,而P-mTOR、HIF-1α可能通过促使或激活P-GP的过表达而参与胰腺癌的发生发展和侵袭转移。     

大黄鱼HIF-1α基因的克隆鉴定与表达分析

为研究低氧诱导因子1α(Hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α)在鱼类免疫应答中的作用,研究克隆得到了大黄鱼(Larimichthys crocea)HIF-1α基因(LcHIF-1α)的cDNA序列,其开放阅读框全长2256个核苷酸,编码一个751个氨基酸的蛋白。通过氨基酸序列比对发现, LcHIF-1α蛋白具有5个典型的功能结构域,包括1个helix-loophelix(HLH)结构域, 2个PAS结构域, 1个DNA结合结构域(HIF-1)和1个羧基端反式激活结构域(HIF-1a_CTAD)。系统进化分析显示, LcHIF-1α和其他硬骨鱼类HIF-1α聚成一支,与两栖类、鸟类和哺乳类HIF-1α的亲缘关系相对较远。序列分析结果表明, LcHIF-1α具有保守的特征结构域,预示着其功能可能与哺乳动物HIF-1α类似。荧光定量PCR结果显示, LcHIF-1α在所检测的健康大黄鱼各个组织中都有表达,在溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)感染后,大黄鱼脾脏和头肾组织中的LcHIF-1α表达水平显著上调,达到峰值时分别...     

雌雄同居对子午沙鼠情绪及下丘脑催产素表达的影响

雌雄同居是配偶关系形成的重要阶段,涉及到一系列生理和情绪的变化,对长期稳定的配偶关系形成具有重要意义。然而由于单配制动物模型较少,雌雄同居过程中的神经调控,尤其是两性差异仍不清楚。本研究以室内繁殖的子午沙鼠(Meriones meridianus)为研究对象,采用高架十字迷宫、强迫游泳和免疫组化法,探究雌雄同居对雌雄子午沙鼠的情绪变化及其相关脑区催产素表达的影响。结果表明：雌雄同居10 d后,在高架十字迷宫中,雌性沙鼠进入开放臂的频次显著减少(P <0.05),焦虑指数显著升高(P <0.05);在强迫游泳实验中,同居组雌性沙鼠停止游泳的频次和时间显著增加(P <0.05);同居组雌性沙鼠在下丘脑室旁核和视上核中的催产素表达水平显著升高(P <0.05)。然而同居组雄性的行为和催产素水平均没有出现显著变化,这可能与雌雄配偶关系形成过程中的两性不同步有关。综上,雌雄同居仅使得雌性子午沙鼠表现出焦虑样行为,且下丘脑催产素系统可能参与了该过程。     

HIF-1α 在卵巢癌中的表达及与化疗耐药相关性研究

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在卵巢癌中的表达及其在卵巢癌化疗耐药中的作用。方法:采用免疫组化方法,检测96例卵巢癌组织,45例良性卵巢肿瘤和30例正常卵巢组织中HIF-1α的表达,分析其表达与临床病理特征及化疗耐药的相关性。结果:卵巢癌中HIF-1α的表达高于正常卵巢及良性卵巢肿瘤组织,且临床分期越晚其表达越高(P<0.001),而与肿瘤组织类型、病理分级及患者年龄无显著相关性。HIF-1α在卵巢癌化疗耐药组阳性率明显高于化疗敏感组(P<0.001)。结论:卵巢癌中HIF-1α高表达与卵巢癌的发生、发展、浸润和转移有关,与卵巢癌化疗耐药密切相关,HIF-1α可成为卵巢癌化疗新的分子治疗靶点。     

HIF-1α、HSP90α在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和热休克蛋白9Oα(HSP90α)在肝细胞癌中的表达及其与临床病理特征之间的关系。方法:采用免疫组织化学Envision二步法检测H HIF-1α和HSP90α蛋白在65例肝细胞癌和癌旁组织、20例正常肝组织中的表达,并分析其与肝细胞癌临床病理因素的关系。结果:HCC组织中HIF-1α和HSP90α阳性表达率均明显高于癌旁组织及正常肝脏组织,差异均具有统计学意义(P<0.01)。HIF-1α在HCC组织中的表达与肿瘤大小、临床分期、病理分级、有无淋巴结转移、有无门静脉癌栓密切相关(P<0.01),HSP90α在HCC组织中的表达与临床分期、病理分级、有无淋巴结转移、有无门静脉癌栓密切相关(P<0.01)。Spearman相关性检验分析提示HIF-1α和HSP90α表达阳性程度呈正相关(r=0.536,P<0.01)。结论:HIF-1α和HSP90α参与肝细胞癌的发生、发展,并起协同作用,可能作为判断肝细胞癌预后的指标。     

HIF-1α和VEGF—c在胃癌组织中的表达及临床意义研究

目的：探讨HIF-1α和VEGF—c在胃癌组织中的表达情况及临床病理意义。方法：选取2010年12月至2012年12月期间就诊于我院肿瘤外科需进行手术切除的胃癌标本及其配对的癌旁组织各73例进行研究分析,采用免疫组化SP（streptavidin perotridase）对胃癌组织以及癌旁组织中HIF-1α和VEGF-c的表达情况进行检测。结果：①HIF-1α和VEGF-c在癌旁组织几乎不表达,而在胃癌组织中的阳性表达率分别为83．56％、78．08％,显著高于癌旁组织,经分析,差异具有统计学意义（P〈0．05）;②HIF—hx和VEGF-c的阳性表达和浸润深度、淋巴结转移以及临床分期密切相关,差异具有统计学意义（P〈0．05）;③HIF-1α和VEGF-c在胃癌组织中的表达存在一定的相关性（r=0．654,P〈0．05）。结论：HIF．hx和VEGF-c的阳性表达可以作为胃癌侵袭转移的重要判定指标,这对于本病的临床治疗具有一定的指导性意义。     

TGF-β1、HIF-1α、VEGF在胃癌组织及癌旁组织中的表达及临床意义

目的：研究TGF-β1（转化生长因子-β1）、HIF-1α（低氧诱导因子-1α）、VEGF（血管内皮生长因子）在胃癌组织及癌旁组织中的表达及临床意义。方法：选取于我院就诊的160例胃癌手术患者切除的组织,采用免疫组化技术检测手术切除的胃癌组织中的TGF-β1、HIF-1α及VEGF的表达,分析其与患者临床病理参数的关系。结果：免疫组化结果显示：TGF-β1、HIF-1α及VEGF在胃癌组织中的表达均高于癌旁组织,差异均有统计学意义（P〈0.05）;TGF-β1、HIF-1α及VEGF的表达均与肿瘤分期、淋巴结转移及浸润深度有关（P〈0.05）;VEGF的表达分别与TGF-β1、HIF-1α的表达呈相关关系（P〈0.05）。结论：TGF-β1、HIF-1α及VEGF在胃癌组织中的表达与胃癌的病理学特征有关,检测TGF-β1、HIF-1α及VEGF的表达将有助于临床诊治胃癌患者。     

人HIF-1α的腺病毒表达载体的构建与分析

低氧诱导因子1 (hypoxia inducible factor 1, HIF1)是由HIF1α和 HIF1β组成的异源二聚体转录因子,在细胞的氧平衡过程中起重要作用。在应答低氧信号时,HIF1α亚基表达水平上调,并通过激活参与细胞能量代谢、红血细胞生成以及血管生成的靶基因表达,达到保护局部缺/贫血细胞免于凋亡或死亡,而后者则是临床上影响大脑和脊椎神经损伤恢复的主要原因。为了达到基因治疗急性神经损伤的目的,我们构建了表达HIF-1α的重组腺病毒载体。实验表明,重组腺病毒可以在大肠杆菌中组装,并在HEK293T细胞中包装。包装后的HIF-1α重组腺病毒载体的病毒感染效率为2×10¹³CFU,外源基因HIF-1α在He1a细胞中的表达6 h后达到峰值。目前正在开展建立在此基础上的急性神经损伤动物模型试验。     

神经胶质瘤中PTEN、Ki-67和HIF-1α的表达及临床意义

目的:抑癌基因PTEN、癌基因Ki-67及HIF-1α对多种人类肿瘤的恶性进展均起重要的调控作用。本研究主要探讨PTEN、Ki-67及HIF-1α在人脑胶质瘤中的表达及临床意义,为胶质瘤患者预后的判定、分子病理学的诊断、基因靶向的治疗奠定理论基础。方法:在83例原发性人脑胶质瘤组织样本中,通过免疫组化的方法检测PTEN、Ki-67及HIF-1α的表达情况,并分析其表达相互间及其表达与肿瘤恶性级别之间的相关性。结果:在正常脑组织中,PTEN的表达均为阳性,Ki-67的表达均为阴性,10%(1/10)的样本HIF-1α的表达为阳性。在胶质细胞瘤中,PTEN的表达显著降低(P=0.001),而Ki-67(P0.001)和HIF-1α(P=0.001)的表达明显增高。随肿瘤恶性级别的增高,PTEN的表达呈降低趋势(P0.001),而Ki-67和HIF-1α的表达呈升高趋势(两者P均0.001)。相关性分析表明,PTEN的表达与Ki-67和HIF-1α的表达呈负相关(r值分别为-0.289和-0.304;P值分别为0.008和0.005),Ki-67的表达与HIF-1α的表达呈正相关(r=0.833;P0.001)。结论:胶质瘤组织缺乏抑癌基因PTEN蛋白的表达,而高度表达癌基因Ki-67和HIF-1α。抑癌基因PTEN表达减少或失活,癌基因Ki-67和HIF-1α的过表达对胶质瘤恶性进展可能起到至关重要的作用。PTEN、Ki-67和HIF-1α蛋白的联合检测对胶质瘤恶性程度和预后的判定有十分重要的临床意义。     

人口腔鳞癌组织中HIF-1a和NF-kB的表达及意义

目的:探讨缺氧诱导因子(HIF-1a)和核因子-KB(NF-KB)口腔鳞癌中的表达及相互关系,研究它们的表达与肿瘤临床病理指标的联系.方法:应用SP染色法检测HIF-1a和NF-KB在49例口腔鳞癌组织、10例正常口腔黏膜组织中的阳性率.结果在口腔鳞癌中HIF-1a和NF-KB的阳性表达率分别为80.0%和78.4%,其阳性率及表达等级均显著高于正常对照组(P<0.05),在中一低分化组和有淋巴结转移组中的表达显著高于高分化组和无淋巴结转移组(P<0.05).HIF-1a表达与NF-KB表达成等级正相关(r=0.45,P<0.05).结论:HIF-1a或NF-KB与口腔鳞癌生物学行为有密切关系,二者的联合检测,有助于口腔鳞癌恶性程度和生物学特性的判断.     

Gli1蛋白和PDGFRα在大肠癌组织中的表达及临床意义

Gli1蛋白和血小板衍生生长因子受体α(PDGFRα)的表达在大肠癌的发生发展过程中的作用还不清楚.通过免疫组化法检测60例大肠癌及30例正常组织中Gli1和PDGFRα的表达,并与临床病理因素进行相关性分析,研究两者在大肠癌中的作用.研究发现,Gli1和PDGFRα蛋白在大肠癌组织中的阳性率分别为73.7%和78.3%,明显高于正常组织的表达(P<0.05).Gli1和PDGFRα蛋白表达与患者年龄、肿瘤大小、组织学类型等均无关(P>0.05),但是Gli1蛋白和PDGFRα表达与淋巴结转移状况和Duke分期相关(P<0.05).Spear-man相关分析显示,Gli1与PDGFRα蛋白表达正相关(r=0.298,P<0.05).结果表明Gli1和PDGFRα在大肠癌发生、发展中呈协同和相互调节作用,Gli1和PDGFRα的表达参与大肠癌的侵袭和转移过程.联合检测可作为判断大肠癌预后,筛选高危转移患者的有效指标,同时也可用于指导大肠癌的靶向药物治疗.     

牦牛水通道蛋白AQP1和AQP3基因克隆及在不同组织中表达和定位

水通道蛋白(Aquaporin,AQP)广泛存在于生物体的各组织部位,影响着生物体水代谢的过程.为进一步研究水通道蛋白1(AQP1)和水通道蛋白3(AQP3)生物学功能,本文对牦牛(Bos grunniens)不同组织中 AQP1和AQP3基因的表达与定位进行了研究.采用PCR方法扩增牦牛AQP1和AQP3基因,对其序...     

生半夏、南星水提物对人胃癌BGC823 细胞的侵袭力及 HIF-1αmRNA 蛋白表达的影响

目的:观察生半夏、南星中药水提物对缺氧环境中人胃癌细胞株BGC823细胞HIF-1α蛋白表达和侵袭力的影响。方法:运用CoCl(2氯化钴)诱导BCG823细胞缺氧,使得细胞中HIF-1α蛋白表达升高.实验组加入生半夏、南星水提物对细胞进行预处理,然后在进行缺氧诱导。通过甲基噻唑基四唑法(MTT)检测细胞活性,使用Transwell检测细胞侵袭能力变化,RT-PCR、Western blotting分别检测HIF-1α mRNA及蛋白含量及变化。结果:生半夏、南星水提物能抑制人胃癌BGC823细胞的增殖;生半夏、南星水提物均能抑制缺氧诱导胃癌细胞的侵袭力,并且能降低HIF-1α mRNA及蛋白表达。结论:生半夏、南星水提物可抑制人胃癌BGC823细胞的增殖,抑制人胃癌BGC823细胞侵袭力,可能通过降低HIF-1α蛋白表达有关。     

肝细胞癌中HIF-1α与PHD2的表达及临床意义

目的 研究HIF-1α和PHD2在肝细胞癌（HCC）组织中的表达,并分析其与临床病理特征间的相关性及临床意义.方法 应用免疫组化Envision法检测103例HCC组织、14例癌旁组织及13例正常肝组织中HIF-1α和PHD2的表达.结果在HCC、癌旁组织、正常组织中HIF-1α阳性表达率分别为63.1%、35.7%、0%,差异显著（P≤0.05）,其阳性表达与肿瘤大小、脉管瘤栓、分化程度、TNM分期均有显著差异 （P〈0.05）.PHD2在HCC组织中表达阳性率明显低于正常肝组织 （P≤0.05）.HCC中PHD2表达水平下调与肿瘤大小、分化程度、TNM分期的差异有统计学意义（P〈0.05）.生存分析显示HIF-1α阳性组与阴性组2年生存率分别为53.8%（35/65）、81.6%（31/38）,差异有统计学意义（P〈0.05）.Cox多因素分析显示肿瘤大小、脉管瘤栓、HBsAg阳性及HIF-1α的表达是影响HCC的独立预后因素.HIF-1α和PHD2表达呈正相关（r=0.219,P〈0.05）.结论 HIF-1α和PHD2的异常表达与HCC的一些恶性进展临床病理特征相关,提示其可能参与肝癌的发生、发展、侵袭,有助于肿瘤的预后分析.     

食管癌组织中HIF-1α、Survivin、CyclinD 1蛋白的表达及其意义

目的：探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、生存蛋白（survivin）、细胞周期蛋白D1（cyclinD 1）在食管癌组织中的表达及其临床意义。方法：应用免疫组化技术检测50例食管癌组织和10例手术切除的远端正常食管组织中HIF-1α、Survivin、CyclinD 1蛋白的表达。结果：食管癌组织中HIF-1α、Survivin、CyclinD 1蛋白阳性表达率均与肿瘤浸润深度以及淋巴结转移相关（P〈0.05）,Survivin阳性表达率与肿瘤分级相关（P〈0.05）,HIF-1α与CyclinD 1的表达呈显著正相关（P〈0.05）。结论：检测HIF-1α、Survivin、CyclinD 1的蛋白的表达有助于判断食管癌的恶性程度以及推断其临床预后。     

AKT2、HIF-1α在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨胰腺癌组织中丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶2(AKT2)、HIF-1α蛋白的表达及其临床意义。方法应用免疫组化SABC法检测63例胰腺癌组织和23例胰腺良性病变组织中AKT2、HIF-1α蛋白的表达,分析其与胰腺癌临床病理因素的关系。结果AKT2、HIF-1α蛋白在胰腺癌组织中的阳性表达率分别为39.7%(25/63)、63.5%(40/63),明显高于胰腺良性病变组的13%(3/23)、17.4%(4/23)(P<0.05)。AKT2表达与HIF-1α表达呈正相关(P<0.05)。AKT2表达与组织学分级、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05),而与患者的性别、年龄、胰腺癌大小无关(P>0.05)。结论AKT2和HIF-1α在胰腺癌组织中表达增高,AKT2可能通过调节HIF-1α表达来影响胰腺癌的发生、发展、转移。