基因工程

890690制备棒状病毒表达载体的方法〔专,英〕/Smith,G.E.…/US Patent US4745051.Pub。17.05.88.ApPI.US498s5a,filed 27.05.83〔译自CBA,1955, (8),3152〕 酶切棒状病毒DNA,产生一个含多角体蛋白启动子以及充足的两翼序列(以利于同源重组)的棒状DNA。将此片段插人到一种克隆载体中,并将一外源基因置子该启动子的下游,形成重组穿梭载体。(主璋瑜)890691链霉菌分泌载体仁专,英〕/USPatent US 4745056,.Pob.17.05.38,Appl.US 66384母,f呈lod 23一0.84〔译自CBA,1988,(8),3153〕 能在链霉菌(s考呷户加呷馏。中产生所需蛋白的DN…     

其它药剂

8了2304与淋巴结病综合症和(或)艾滋病相关的病毒的重组蛋白巨专,英〕/Luciw,P .A.…了European Patent Appl.EP0181一50.Plzb:l凌.05.86.Appl.US 66750],filed 31 .10.54〔译自CBA,一956,(s),3129〕 以含有来源于ARV一2核普酸的DNA构建物的表达载体,制备了重组的人T细胞嗜淋巴     

疫苗

922901在杂种病毒辐粒表面表达口蹄痊病毒外宪蛋白抗原决定签单体或二聚体的修饰的活的感染性牛.炎病拜度苗〔英〕/K it,5.…f Areh.virol一i。。1,120(i~2)。一i~17〔译自DBA,1992,11(s), 92一01373〕 将化学合成的编码牛生长激素信号肤序列和口蹄疫病毒(FMDV)VPI抗原决定基序列单体或二聚体擂入到感染性牛鼻炎(IRV)主要糖蛋白g皿基因中,构建了修饰的减活的牛感染性鼻炎杂种病毒疫苗。外源DNA序列擂入到IRVg皿编码序列的N一末端上,并受IRV 9111启动子控制。由含单体和二聚体FMDV抗原决定基序列插入的杂种病毒分别选择编码IRVg…     

激素和活性多肽

870339加糖多肚的制做过程〔专,英〕/Nagata,s.…/European Patent Appl.EP 0169907.Pub.05.. 02.86.Appl.JP1649/45,filed 09.or.84〔译自CBA,1986, (4),1319〕加糖多肤,特别是人类件干扰素的制备是通过培养由牛乳头瘤病毒DNA转化的哺乳类细胞而制备的。牛乳头瘤病毒中结合进了多肤基因,这样就可在灵长类病毒启动子的控制下,恒定地起作用。     

基因工程

872378带有重组表面蛋白的病毒〔专,英」/Dulbeeeo,R.//US Patent US 4593002.Pub.03.06.86.Appl.US338416,filed.11.01.82〔译自CBA,1986,(9),3352〕肽基因作为表面病毒蛋白的一个裸露片段,经遗传操作及其后的表达,可实行对病毒的修饰。     

疫苗

924009异源基因在牛分枝杆菌BCG中的表达:抗HIV一1Nef蛋白细饱反应的诱导〔英〕/Winter,N.…了Geue一1991,109(i)一47~54〔译自DBA,1992,11(8),92一04359〕 为了用牛分枝杆菌菌株BCG作保护性抗原载体,将编码Nef蛋白的H工V一病毒一1基因克隆于大肠杆菌一分枝杆菌穿梭载体(质粒pRR3)几中并导人BCG。质粒pRR3含一个在分枝杆菌中复制和保留必需的质粒pALSOo。片段、转座子Tn 903卡那霉素抗性基因和大肠杆菌复制原。n“f_基因在含白色链霉菌(St,epto哪歹ees albos)groES/groELi操纵子的启动子和合成核糖体结合位点的DNA表达框架(…     

基因工程

862962装配型质粒克隆用载体〔专,英]Hunter,1.5.了European Patent Appl.EP 0146368.Pub.26.06.85.Appl.GB833659,filed 16.12.83〔译自CBA,1985, (9),2835」 构建了一个双功能的杂种装配型质粒克隆载体,它能够在大肠杆菌和链霉菌属中复制。这个载体叫pPZ74,它可能用于在大肠杆菌中构建基因文库,然后,可以下经进一步的DNA操作,即能被转回到链霉菌中。 (郭殿瑞)862963编码兔肿瘤坏死因子(TNF)的DNA,具有上述插人的DNA的运载体,用上述载体转化的寄生,兔TNF多肤和这种肚的生产方法〔专,日〕/Yamada,M一了European Patant Appl。…     

PRRSV全长感染性cDNA克隆的构建：非结构蛋白和结构蛋白之间编码区的分离

猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）是近两年来流行于我国大部分省份的“猪高热综合征”的主要病原体．该病毒在繁殖过程中具有遗传多变性和高频率的抗原突变．如何设计有效的疫苗来防治持续多变的流行变异株是研究者所关注的焦点．本研究中我们构建了Ⅱ型PRRSV弱毒株的感染性cDNA克隆,并对编码结构蛋白的ORF1和编码结构蛋白的ORF2之间插入几个酶切位点．通过RT-PCR和DNA测序以及分子克隆方法,获得了细胞致弱株（APRRS）的全长cDNA克隆．APRRSV基因组RNA为15521个核苷酸（不包括poly（A）尾）．与PRRSV Nsp株和疫苗株的相似性均为99．7％．根据测序结果,利用基因组上的酶切位点将全长PRRSV cDNA克隆到pBlueScript载体中,在病毒5＇末端引入T7启动子序列．为了区分重组病毒和亲本病毒,在ORF5编码区引入Mlu I酶切位点．将最初构建的全长cDNA和带有Mlu I酶切位点的cDNA分别体外转录成RNA后转染MA-104,均能够观察到典型的细胞病变（cytopathic effect,CPE）．拯救的重组病毒与亲本病毒有着相同的病毒学特性．通过突变PCR的方法将编码非结构蛋白基因ORF1和编码结构蛋白基因ORF2-7之间的编码区分离,从而构建了克隆pCSA．pCSA体外转录产物具有感染性,而且拯救的病毒与亲本病毒具有相同的病毒学特性．本研究为构建嵌合病毒作为疫苗候选株以此对遗传多变的PRRSV毒株提供有效的交叉保护提供了宝贵的工具,同时也为建立PRRSV为基因表达载体来构建针对其他重要的猪源疾病重组疫苗搭建了一个很好的平台．     

轮状病毒VP4抗原表位在VP6载体蛋白同一位点表达比较研究

目的:评价轮状病毒(RV)VP4两个抗原表位插入VP6载体蛋白同一位点所表达的重组嵌合蛋白免疫学性质及在研制嵌合蛋白疫苗中的意义。方法:采用分子克隆和基因重组技术将RV VP4的两个抗原表位插入到VP6载体蛋白同一位点上,构建重组抗原表达质粒,表达携带不同抗原表位的重组嵌合蛋白,用Western blot和中和试验分析重组嵌合蛋白的抗原反应性和免疫原性。结果:成功构建了两个嵌合蛋白表达质粒,并在大肠杆菌中高效表达;表达的嵌合蛋白可与相应抗体特异性反应;可诱导豚鼠产生特异性血清抗体;抗嵌合蛋白血清抗体可特异性识别载体蛋白VP6F,Wa株病毒的VP6和VP4蛋白,可中和Wa株病毒在MA104细胞上的感染性;结果表明,所构建和表达的两个以VP6为载体的VP4抗原表位嵌合蛋白具有较高抗原反应性和免疫原性;嵌合蛋白携带的VP4抗原表位具有增强载体蛋白免疫原性作用;为研制新型RV重组蛋白疫苗的奠定了较好的基础。     

基因工程

891040降低了胞外蛋白水解酶活性的枯草杆菌菌株;获得菌株的方法以及采用上述菌株分泌蛋白的方法〔专,英〕/Furutani,Y.…/UK Patent ApPI。GB 2198439.Pub.15。06。88。Appl.GB 8723033,filed02.10.86〔译自CBA,1988,(9),3724〕 将刺激胞外蛋白水解酶水平的基因引人到枯草杆菌菌株FERM BP一108。染色体DNA中,从而在回收时可进一步降低胞外蛋白水解酶残留量。采用编码所需蛋白的重组质粒转化所得菌株;该蛋白可大量表达并积累于培养基中,从而易于收集。例如,经处理后的枯草杆菌MT一430(携有重组DNAph GH427,编码人生长激素)分…     

烟草花叶病毒外壳蛋白嵌合基团的重组

普通烟草花叶病毒外壳蛋白基因已和花椰菜花叶病毒35S启动子及3′未端重组成嵌合基因。在连接了用于筛选在土壤杆菌中导入外源基因的新霉素磷酸转移酶Ⅰ(NPT Ⅰ)基因和用于筛选在植物细胞中导入外源基因的嵌合的新霉素磷酸转移酶Ⅱ(NPT Ⅱ)基因后,已导入一个去致瘤基因的Ti载体T-DNA区中。这种在Ti载体T-DNA区带嵌合的烟草花叶病毒外壳蛋白基因的土壤杆菌菌株,可以用来转化植物。观察在转化植物中表达的这种外壳蛋白能否延缓或减轻烟草花叶病毒对它们的危害。     

疫苗

920931生物技术在研制动物皮苗中的应用〔英〕/Redm。-nd,M J.…了Genet。Eng.Bioteehnol。-1991,11(1)一14一21〔译自DBA,1991,10 (15),91一08572〕 本文综述了应用生物技术生产动物疫苗。讨论的题目有:工程疫苗(即经修饰的减毒重组活疫苗或重组的载体活疫苗如痘苗病毒载体或鼠伤寒沙门菌载体),亚单位重组疫苗(原核系统如大肠杆菌表达的蛋白)、和真核系统(如酿酒酵母菌表达的乙型肝炎病毒、CHO细胞表达的单纯疙疹病毒、携带首落银纹夜蛾核型多角体病毒载体的草地夜蛾昆虫细胞表达的流感病毒或人轮状病毒)表达的蛋白;合成肤疫苗;疫苗配…     

激素和活性多肽

剂〔专,英〕/Hung,p .p.…了UK Patent Appl.GB 2179948.P让b.18.03.87. Appl.US 766163,filed 14.05.55仁译自 CBA,1987,(6),2591〕 杂交的血纤维蛋白溶酶原激活素含有多 种异质性肤Kringles,已经用重组DNA技术8811肠增强人细胞在培养中生长的方法制备出。一个Krillgle是肤的一个三环状区,〔专,英〕/Eisinger,M.…了European Pa一有三个双硫健。它们的作用是使激活素与其tent Appl.EP 02一2遵65.pub.04.03.他物质结合。通过改变Kringles的数目和类87.Appl.us 765714,filed 14.08.85型,可以改进其功效和货架寿命,同时也便于〔译…     

猫ω-like干扰素在家蚕中的表达和生物活性检测

干扰素在畜牧养殖业和宠物治疗中可以用于治疗病毒性传染病和提高疫苗免疫效力。用杆状病毒表达系统在家蚕中表达猫ω-like干扰素,将猫ω-like干扰素基因进行优化后合成,克隆到杆状病毒转移载体p VL1393上,与病毒复制基因失活拯救型Bm Bacmid病毒DNA共转染Bm N细胞系,获得重组Bm NPV病毒,猫ω-like干扰素基因位于多角体基因启动子下游,用重组病毒感染家蚕收获表达产物。采用细胞病变法利用干扰素抑制VSV-GFP感染猫肾细胞的方法来测定干扰素活性,结果显示干扰素效价可以达到4.53×106IU/m L以上。研究结果有望为研制新型动物干扰素疫苗提供参考。     

基因工程

862389链霉菌和相关徽生物中应用的克隆载体〔专,英〕/Fayerman,J.T.…//USP-atent US 4513086.Pub.23.o4.85.Appl.US 404082,filed 02.08.82〔译自CBA,1985,(7),2127〕一种rD NA载体含有功能性复制原点,这一复制原点含有质粒pEL102的内切酶切割片段和一个或几个至少能表现一种抗生素抗性的DNA片段。     

淋巴因子和干扰素

863322?一千扰素克隆和表达的载体及其转化的细菌和制备过程〔专,法〕/S。。rmoyer,P.…了European Patent Appl.EP01遵6462.Pub,26,06.55,APpl.FR 8319777,filed 09.12.83〔译自CBA, 1985,(9),3045〕 只翻译了该文的题目。(邓永鸿) 863323重组的,一干扰素,有关重组DNA 以及含这些千扰素的药物〔专,英万Gray,P .W‘.…了European Patent Appl.EP 0146354.Pub.26.06.85。Appl.US 562009, filed 16.12.83〔译自CBA,1985,(9), 3046〕 该专利披露了一些新的、稳定的重组v-千扰素,其在人体内显示有一定程度的抗病毒和抗增生活性,还…     

Norden公司销售由Symbiotics公司开发的诊断猫白血病的诊断药

美国Norden Laboratories公司(NL,内布拉斯中州林肯市)最近出售醮棒型的猫白血病病毒(FeLV)检查药“Virastat/FeLV”。此种检查药是Symbiotic公司(加利福尼亚州San Piego)开发的,用的是对猫白血病病毒的单克隆抗体,检查猫的唾液。据NL公司经理Daniel B.Hannah说:“通过销售这种药盒,有可能为兽医提供一套猫白血病病毒     

人Ⅰ型免疫缺陷病毒gag-env嵌合基因在重组痘苗中的表达

Gag和Env蛋白是人Ⅰ型免疫缺陷病毒(Humanimmunodeficiencyvirustype1,HIV1)的结构蛋白,是HIV1诱导机体产生体液免疫和细胞免疫的主要抗原。本实验通过多次亚克隆,将env基因以正确的三联密码读框插入gag基因的下游,制备了HIV1gagenv嵌合基因,并将嵌合基因分别置于痘苗病毒p75启动子和牛痘病毒A型包涵体(ATI)启动子的下游,经过同源重组和红细胞吸附试验筛选,获得了2株重组痘苗病毒。免疫荧光试验和酶免疫试验证明,两株重组痘苗病毒均能正确地表达HIV1gagenv嵌合基因。动物实验表明,gagenv嵌合基因重组痘苗病毒可诱导小鼠产生抗HIV特异性抗体。这些结果为艾滋病颗粒化疫苗的研制提供了借鉴。     

麻疹病毒全长cDNA构建及其感染性的研究

为发展新型疫苗和改造目前使用的麻疹病毒疫苗,以麻疹病毒疫苗株为模板,构建了具有感染性的麻疹病毒cDNA克隆.用RT-PCR分6段扩增出麻疹病毒全长基因,通过酶切、拼接构建麻疹病毒疫苗株CC-47的全长正链cDNA序列,并精确地置于T7启动子控制下与丁型肝炎病毒核酶序列之前.克隆麻疹病毒CC-47株蛋白N、P、L编码区质粒并置于T7启动子控制下,用4个质粒共转染哺乳动物细胞,在表达T7 RNA聚合酶的重组痘苗病毒VTF7-3的作用下进行病毒拯救.经免疫荧光、PCR等方法检测证实,获得了具有感染性的麻疹病毒.所拯救的病毒在哺乳动物细胞连续传3代后,仍能检出病毒抗原和核酸.     

专利索引

1.含付异体基因的怜染性减巍巨细胞病毒能够(.8一lp卜-在彼巨绷枯病毒感染的宿主细胞表达,具有疫苗 World 8806 185;Zb August 1988潜势。12. 牛白血病疫苗含有渗人牛白血病病毒表面 Leland Stanford Jr Unly.抗原基因并重组的痘苗病毒 Eur.277 773: 10 August 1985 Toa Fuel: Rikagaku Res lust 2.酵母能够表达乙肝病毒DNA编码及其杂合 World 8806 182;25 August 1988子,从而制备疟疾和乙肝疫苗13.重组禽痘病毒及质粒P们ZIs。表达载体等, SK&F—RIT 对马立克病、传染牲喉气管支气管炎、传染忖二&冒 Ellll.刀8卯卜 厂Allgll。ti…