原位杂交检测石蜡包埋组织中丙型肝炎病毒RNA

为了提高ＨＣＶＲＮＡ的原位杂交检出率,我们应用地高辛标记ＨＣＶ５＇非编码区ｃＤＮＡ作探针,采用原位分子杂交法对９６Ｎ肝硬变,１０２例肝细胞肝癌进行了ＨＣＶＲＮＡ检测,并结合不同年份标本中ＨＣＶＲＮＡ的检出率,探讨ＨＣＶＲＮＡ在肝脏的分布及其丢失问题．结果显示ＨＣＶＲＮＡ定位于肝细胞和肝癌细胞胞浆内,肝脏其它细胞未见明确阳性杂交信号。ＨＣＶＲＮＡ杂交阳性细胞呈灶状和弥漫分布,正常对照、替代、空白对照为阴性,在不同年份肝硬变及肝细胞肝癌中两两比较表明新近包埋蜡块组织较陈旧蜡块组织ＨＣＶ　ＲＮＡ检出率明显高。本文结果证实ＨＣＶＲＮＡ存在于肝细胞和癌细胞的胞浆内,未见肝内其它细胞阳性,还发现ＨＣＶＲＮＡ在肝硬变、肝细胞癌中的检出率随保存时间的延长,其阳性检出率明显降低,表明ＨＣＶＲＮＡ在蜡块中存在明显的降解,应尽可能选用近期标本、为临床分析ＨＣＶ感染,ＨＣＶ与肝硬变、肝细胞肝癌的关系提供更客观的数据。     

应用鼠单抗显示鼠组织中特异性抗原的免疫细胞化学方法

作者在应用小鼠抗肾综合征出血热病毒(HFRSV)单克隆抗体(MAbs)免疫细胞化学法定位HFRSV自然感染大鼠组织中的病毒抗原时发现,部分大鼠组织的特异性HFRSV MAbs的染色切片及无关MAb对照和空白对照染色的切片中均出现血液。血细胞,血管壁,单核吞噬细胞系统,肾小球毛细血管及散在的心肌和肝细胞阳性,说明组织中有交叉反应。免疫双扩试验,羊抗鼠IgG桥抗可与大鼠Ig产生免疫沉淀反应,提示,组织中的交叉反应是由桥抗与大鼠细胞中本身存在的Ig(EIg)反应所致。为了避免EIg对特异性病毒抗原染色的干扰,我们以HFRSV MAbs预先分别与二抗羊抗鼠IgG结合,再用正常鼠Ig结合可能存在的二抗中尚未结合MAbs的Fab结合位点,制成一抗分子复合物,并以此作为一个新的相当于羊源性单克隆抗体孵育组织,以抗羊抗体连接羊PAP的多重PAP法显示一抗分子复合物的特异性抗原结合位点,结果显示该方法具有一抗的特异性,以有多重PAP法的敏感性,可有效的避免因EIg产生的交叉反应。用小鼠抗大鼠Kappa轻链MAb按同样方法制备一抗分子复合物用于染色证实,产生交叉阳性的部位确为大鼠组织中的Ig。病毒抗原及Ig的定位结果说明,HFRSV自然感染大鼠组织中的病毒抗原有广泛分布,也存在免疫复合物,但后者有别于HFRS人体组织的分布,另外,心肌及肝细胞Ig阳性说明该组织存在因HFRSV感染所造成的组织损伤,该损伤可能与机体的免疫反应有关。