抗人肺癌的单克隆抗体LC-1(简报)

我们曾经报道过抗人非小细胞肺癌的单克隆抗体(以下简称单抗)LAC系列和抗人小细胞肺癌的LSC系列单抗的制备及部分特征。抗人非小细胞肺癌单抗LAC-122与蓖麻毒蛋白的A链结合成免疫毒素后体外能明显杀伤靶细胞。在1986年进行的一次细胞融合中,我们注意到一个单抗的特点是可跟大多数不同类型的肺癌细胞有反应,本文简单报道这方面的初步研究结果。     

转录因子Hey1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的检测Hey1与Notch1在非小细胞肺癌组织中的表达,探讨Hey1在非小细胞肺癌中的表达与Notch1的表达、各临床病理特征之间的关系。方法制作组织芯片,采用免疫组织化学染色检测Notch1和Hey1在246例非小细胞肺癌组织及相应117例癌旁正常肺组织中的表达,应用SPSS 21.0进行统计分析。结果 Notch1在肺鳞癌、肺腺癌和癌旁正常肺组织的阳性率分别为78.8%,28.9%和30.8%,Hey1在肺鳞癌、肺腺癌和癌旁正常肺组织中的阳性率分别为79.7%,23.4%和33.3%;肺鳞癌患者Notch1阳性表达与TNM分期和淋巴结转移情况呈正相关;肺鳞癌患者Hey1阳性表达与TNM分期呈正相关,与肿瘤分化程度呈负相关;Spearman相关分析显示,肺鳞癌和肺腺癌组织中Notch1表达与Hey1表达具有显著的正相关关系。结论 Hey1和Notch1与肺鳞癌的恶性程度密切相关,可能是肺鳞癌发生、发展的重要参与因子。     

金黄色葡萄球菌肠毒素C3单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备稳定分泌抗金黄色葡萄球菌肠毒素C3（SEC3）单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的性质进行鉴定。方法以SEC3重组蛋白免疫Balb／c小鼠,应用细胞融合技术将小鼠的脾细胞与sR／0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA法检测筛选及2次有限稀释法克隆化培养,获得目的杂交瘤细胞株,并对其所产生的单克隆抗体进行效价、亲和常数及抗原识别表位等相关性质的鉴定。结果最终获得了两株能分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞1C12和2A2,两者细胞培养上清的效价分别为1：3200和1：1600。经分析可知1C12细胞株的亲和力高于2A2细胞株,同时相加实验表明两个单克隆抗体识别抗原表位相同。结论单克隆抗体制备成功,为进一步完善肠毒素SEC3的临床检测奠定了基础。     

PARP15在肺腺癌中的表达及其对肺腺癌细胞生长、凋亡的影响

该文研究了PARP15过表达在肺腺癌中的临床意义及其对肺腺癌细胞生长、凋亡的影响。利用UALCAN和GEPIA数据库比对PARP15基因在肺腺癌组织和正常组织中的表达水平,利用GEPIA数据库分析PARP15基因对肺腺癌患者预后生存的影响。构建核心质粒pCDH-PARP15,通过慢病毒包装及感染的方法在人肺腺癌细胞系A549和H1299中获得PARP15过表达稳定株,用Western blot鉴定PARP15过表达情况。采用CCK-8、克隆形成实验检测过表达PARP15对A549和H1299细胞生长的影响,流式细胞仪检测PARP15对A549和H1299细胞凋亡和细胞周期的影响。PARP15基因在肺腺癌组织中的表达水平均低于正常组织(P<0.05),且PARP15基因的表达水平与肺腺癌患者的良好预后呈正相关(P=0.003 6)。过表达PARP15抑制肺腺癌细胞的生长(P<0.05),并诱导细胞凋亡(P<0.05),但对细胞周期没有显著影响。PARP15可通过诱导肺腺癌细胞凋亡从而发挥抑制其生长的作用。     

鼠肺支原体单克隆抗体的研究

通过杂交瘤技术建立了３株抗鼠肺支原体单克隆抗体细胞株,它们分别是ＢＡ１１,ＢＤ７和Ｂ６１２．试验表明：３株细胞所分泌的抗体均属ＩｇＧ１亚类,都是鼠肺支原体的特异性抗体,与多种其它支原体无交叉反应。     

双盲交叉筛选分泌抗直肠腺癌神经节苷脂单克隆抗体杂交瘤细胞株PG 10

采用改良脾内免疫的方法,比较分析了甲、乙两组,经不同方法处理的直肠腺癌细胞株HR-8348的免疫效果(甲组未经酶处理;乙组用0.25％胰蛋白酶,37℃孵育20分钟)。实验结果表明:乙组对正常直肠和直肠腺癌神经节苷脂的阳性杂交瘤细胞集落数远远高于甲组。用分别分离、纯化自同一个体的正常直肠和直肠腺癌的神经节苷脂作检测抗原,交叉筛选出分泌抗直肠腺癌特异神经节苷脂单克隆抗体的PG10杂交瘤细胞株,经三次克隆,二次达百分之百阳性,培液中抗体的最高O.D.值(490nm)为1.85。描述了用双盲交叉法筛选抗直肠腺癌特异的神经节苷脂单克隆抗体的新方法。     

双水相纯化的人肺腺癌和癌旁正常肺组织质膜蛋白质组差异分析

肿瘤标志物对于肺腺癌病人的临床诊断和预后具有重要意义. 本研究根据临床诊断选取人肺腺癌组织和癌旁正常肺组织为研究对象,采用差速离心联合双水相法纯化组织细胞质膜,运用同位素标记相对和绝对定量技术结合高效液相色谱 串联质谱技术,鉴定出肺腺癌组织和癌旁正常肺组织的差异蛋白质41种. 同癌旁正常肺组织相比,18个蛋白质在肺腺癌组织中表达上调,23个蛋白质在肺腺癌组织中表达下调. 生物信息学分析发现,差异质膜蛋白质FLOT1、CAV1和ITGB1均处于蛋白质相互作用网络的重要位置,可能参与了肺腺癌相关信号转导.利用蛋白质印迹和免疫组织化学染色验证,差异蛋白质FLOT1、CAV1和ITGB1在肺腺癌织和癌旁正常肺组织的表达情况,其验证结果与蛋白质组学研究结果一致. 研究结果对肺腺癌诊断标志物和肺腺癌癌变分子机理研究具有重要意义.     

人类复制因子C4在肺腺癌进展中的初步功能探究

目的:分析人类复制因子C第四大亚基(RFC4)在肺腺癌组织和细胞中的表达,探究其在肺腺癌进展中的作用。方法:通过starBase分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库中RFC4在肺腺癌组织中的表达;通过Kaplan-Meier plotter分析RFC4与肺腺癌的预后关系;利用人肺腺癌细胞A549、H1437和人正常肺上皮细胞BEAS-2B分析RFC4在肺腺癌细胞中的表达情况;转染RFC4 siRNA后,利用CCK-8法和Transwell法检测RFC4 siRNA对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果:RFC4在肺腺癌组织中高表达,并与肺腺癌预后有较强的相关性,RFC4表达越高,肺腺癌患者的总生存期和无复发生存期就越低,预后较差;同样地,RFC4在肺腺癌细胞系中的表达也高于正常肺上皮细胞;RFC4 siRNA降低了肺腺癌细胞中RFC4的表达,使肺腺癌细胞的增殖、迁移侵袭能力下降。结论:RFC4在肺腺癌细胞中高表达,并促进了肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,涉及的详细分子机制还须进一步探究。     

抗人尿道高分化鳞癌单克隆抗体的研制

用本室建立的人尿道高分化鳞状上皮癌细胞株(Hus-98)免疫Balb/C小鼠,通过细胞杂交技术及ELISA方法进行筛选,SP免疫组织化学方法进行鉴定,获得10株能稳定分泌、选择性强、效价高的杂交瘤细胞株;同时从乳腺癌组织中提出肿瘤相关抗原行免疫印记实验(Western-blot)。结果6株经4次克隆能稳定分泌抗体Ig,免疫组化显示这些抗体是针对来源于上皮的鳞癌、腺癌细胞膜和细胞浆的,而癌旁正常组织及胎儿组织呈阴性反应;通过western-blot结果显示肿瘤相关抗原分子量为46.414kb。     

ILK在肺鳞状细胞癌和肺腺癌的表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的 探讨ILK在肺鳞状细胞癌和肺腺癌组织中的表达情况,及其与病理分型、肿瘤分化、分期、淋巴结转移及预后的关系。方法采用S-P免疫组织化学方法和Western Blot法,检测肺鳞状细胞癌和肺腺癌组织及相应癌旁肺组织中整合连接激酶（integrin-linkedkinase,ILK）的表达情况,并结合临床和病理资料进行分析。结果免疫组化结果显示：ILK在53／76（70％）的肺癌组织中阳性表达。其中鳞状细胞癌阳性率75％（33／44）,腺癌阳性率62．5％（20／32）,其表达与肺鳞状细胞癌的分化呈负相关（P〈0．01）,与临床分期（P〈0．01）、淋巴结转移（P〈0．01）呈正相关;与肺腺癌的临床分期（P〈0．01）和淋巴结转移（P〈0．01）正相关,与分化程度无相关性（P〉0．05）。同时,其表达与患者的生存时间呈负相关（P〈0．01）,与年龄、性别、肿瘤大小和组织类型等因素无关。Western Blot法进一步证实ILK在肺癌组织中的表达显著高于癌旁正常肺组织（P〈0．01）,其表达与肺癌的分化（P〈0．01）显著负相关。结论肺鳞状细胞癌和肺腺癌中,ILK与肺癌的侵袭和转移有关。ILK可作为判断肺鳞状细胞癌和肺腺癌预后的参考指标。     

金鱼精子质膜和核膜的区域特异性

本文结合采用扫描和透射电子显微镜(包括冷冻断裂-蚀刻、超薄切片以及细胞化学染色法),研究了金鱼精子的超微结构特征,结果表明金鱼精子的质膜和核膜都具有区域特异性:1)精子质膜内大部分区域含有许多蛋白颗粒,但在特定区域内,蛋白颗粒呈有序排列,构成晶格状结构。2)精子头颈部和尾部均有液泡密集之处,凡是覆盖着液泡区的质膜内,几乎都不含有蛋白颗粒。3)液泡区能被细胞化学方法染成致密色,表明内含糖蛋白。4)核膜孔只集中存在于靠近颈部的核膜上,而其他部分则没有。本文对上述诸点进行了讨论。     

注射装载孕酮的红细胞膜泡诱发蟾蜍卵成熟的研究

中华大蟾蜍长足的卵母细胞,经注入装载水相孕酮的红细胞膜泡,能被诱发成熟;直接注入水相孕酮的卵母细胞,无能恢复成熟分裂。将蛋白酶处理的红细胞制备成装载水相孕酮的膜泡,注入卵内,照样能诱发其成熟分裂;然而,分别用根皮素结合或磷脂酶A_2水解红细胞膜磷脂,制备的膜泡,虽亦包裹着水相孕酮,但注射的卵母细胞都未能被诱发成熟。这些结果表明,在通过红细胞膜转运孕酮诱发卵母细胞成熟过程中,红细胞膜上的某些膜蛋白可能不是必要的成份,而膜磷脂类却是关键成份,它不仅可能保证孕酮不被迅速代谢,且保证孕酮从卵母细胞内部诱发成熟分裂。     

低分子量神经丝蛋白(NF-L)的体外组装

利用超速离心和离子交换层析技术,从牛脊髓中分离纯化了神经丝蛋白三组分:NF-L,NF-M和NF-H。应用电镜负染色和金属投影方法研究神经丝的形态结构与NF-L的体外组装,结果表明:神经丝由10nm的核心纤维与外周的丝状突起组成;在近似生理条件下,NF-L可在60min内组装成10nm纤维,纤维由4根亚丝缠绕而成;在碱性缓冲液中,NaCl能促进NF-L装配成短纤维,这种10nm的短纤维无法连接成长纤维。     

血管内皮生长因子蛋白在大鼠睾丸和附睾的表达和定位研究

为探讨血管内皮生长因子(VEGF)在雄性生殖系精子发生发育和成熟过程中的调控作用,应用免疫组化、Periodic acid-Schiff(PAS)染色及蛋白质免疫印迹技术,检测VEGF蛋白在成年大鼠睾丸和附睾的表达和定位情况。Western-blots显示,在大鼠睾丸和附睾内均有VEGF蛋白(约45kD)的表达;免疫组化显示,睾丸内VEGF见于圆形和长形精子细胞、Sertoli细胞和Leydig细胞,免疫阳性产物位于细胞质内。精子细胞的VEGF表达伴随精子细胞顶体发育的全过程,精子残余体呈强阳性。附睾内VEGF表达于附睾管上皮,且有区域和细胞特异性。附睾起始段的所有上皮主细胞内都有VEGF阳性颗粒;头、体、尾各段的VEGF阳性细胞多数与含PAS阳性颗粒的细胞重合,证明为亮细胞;近端附睾的管腔内可见精子头部呈VEGF阳性染色。睾丸、附睾间质血管内皮为VEGF阴性。上述结果表明,VEGF蛋白可由生殖细胞和附睾管上皮细胞直接产生,它可能以自分泌和/或旁分泌的形式共同作用于睾丸和附睾的生殖细胞和血管内皮,直接或间接影响精子的发生、发育和成熟过程,特别是精子顶体的形成过程,并可能与精子在附睾内的成熟有关。     

多种神经活性物质在幼年猫和鸡视网膜神经细胞中的共存(简报)

视网膜起源于前脑泡,结构简单层次分明,因此常被视为脑的简化模型。但近期工作证明,视网膜包含的神经活性物质(神经递质、调质和神经肽)种类之多、分布之复杂并不亚于脑。尤其是无长突细胞不仅包含多种递质和肽类,而且还有递质与肽类或肽类与肽类在一个细胞中的共存。对视网膜神经递质、调质和神经肽的研究将是探索脑奥秘的有效途径。     

花背蟾蜍蝌蚪发生类坏死的皮肤在恢复过程中的超微结构

本实验以花背蟾蜍后肢芽期的蝌蚪为材料,用0.001 mol/L氨水(氨水组)和0.01mol/L醋酸(醋酸组)处理皮肤使之发生类坏死。以细胞核、细胞表面、细胞质及细胞间隙等的超微结构变化为指标,研究了各组皮肤发生类坏死后恢复过程中的可逆变化。结果观察到:两组均能引起核染色质浓缩,粘液分泌,液泡增多,线粒体及内质网膨大变形,细胞间隙变窄;醋酸还引起张力原纤维的凝集及紊乱等。恢复过程中,细胞核内染色质的分布趋于均匀,粘液的分泌渐正常,液泡减少,线粒体及内质网的形态逐步恢复,但细胞间隙一直很??窄;醋酸组中张力原纤维恢复成束且排列较整齐。作者认为氨水及醋酸引起蝌蚪皮肤发生类坏死后,在一定时间内是可以恢复的,而且此可逆变化也反映在超微结构的变化上。     

Chlorophyll isolation,structure and function: major landmarks of the early history of research in the Russian Empire and the Soviet Union

This paper covers major events of the early history of chlorophyll research in the Russian Empire and the Soviet Union from 1771 until 1952, when the modern period of studies on photosynthesis began in full swing. Short biographical sketches of key scientists, reviews of their major research contributions and some selected photographs are included. This revised version was published online in August 2006 with corrections to the Cover Date.     

磁场对丘脑下部一氧化氮含量的影响及与丘脑下部神经内分泌核团的关系

应用硝酸还原酶反应—分光光度法测定和NADPH-d组织化学技术,对磁场处理后丘脑下部一氧化氮量的变化及其可能的原因进行了研究,发现磁场可促使丘脑下部一氧化氮量(OD值)显著升高,并具有显著滞后效应。NADPH-d阳性神经细胞及NADPH-d和血管加压素(AVP)双染阳性神经细胞集中分布在丘脑下部室旁核、室周核和视上核,但不存在 于视交叉上核,提示室旁核、室周核和视上核一氧化氮能神经细胞是丘脑下部的一氧化氮的主要来源。磁场处理后大鼠丘脑下部一氧化氮含量(OD值)较正常对照组显著升高应归因于这些神经细胞受磁场作用表达增强。一氧化氮和血管加压素的共存可能对磁场调节内分泌具有一定意义。     

重组人pLXSN-CD80逆转录病毒载体的构建及在CHO和PA317细胞中的表达

CD80是表达于抗原提呈细胞表面的分化抗原,它提供T细胞活化的协同刺激信号,并在抗肿瘤免疫应答中起着重要作用。我们在克隆了CD80全长。cDNA的基础上,将其与逆转录病毒pLXSN表达载体连接,构建成表达质粒,并用磷酸钙沉淀法将其转染PA317和CHO细胞,经G_(418)筛选获得抗G_(418)的PA317和CHO细胞克隆。以RIA,FACs和Westernblot检测CD80分子在PA317和CHO细胞上的表达、分布和分子量,结果显示,pLXSN-CD80转染的CHO细胞可表达较高丰度的CD80分子,其表观分子量为40kD。pLXSN-CD80转染的PA317和CHO细胞经5个月连续传代培养,无论存在G_(418)的选择压力与否,仍然持续表达CD80分子,表明我们构建的pLXSN-CD80表达载体具有应用于试验性治疗的潜能。     

荧光脂质体导入黄瓜悬浮细胞原生质体的研究

用“脱水再加水法”制成包裹荧光黄的脂质体,通过PEG诱导融合或保温共培养法,成功地将脂质体导入了黄瓜悬浮细胞原生质体。PEG处理组摄入脂质体的细胞可达80—90%,其中50—60%的细胞荧光较强,均匀一致。脂质体/原生质体保温共培养半小时,荧光细胞达95%以上,荧光较弱,在细胞中呈点状分布,3—4天后脂质体逐渐破裂,点状荧光变为均匀一致的荧光。导入荧光黄脂质体的原生质体经持续分裂形成愈伤组织和胚状体,进一步分化出芽和根。