肠道菌共同抗原(ECA)(续四)

<正> 九、其它交叉反应及有关抗原 各种“共同”抗原 其它在不同细菌间的共同或“交叉反应”抗原曾有记述,有些与ECA可能相同,有些与之有明显的区别。 Brodhage氏记述过一种血清学上的交叉反应性,大概是由ECA引起的,他称之为共同或“C”抗原。肠道菌中的ECA系用细菌的尿素提取物做间接血凝测定。出现这些交叉反应的抗血清是一种抗宋内氏志贺氏菌血清,大概含有抗ECA。宋内氏志贺氏菌培养物常常含有一部分R变种,这些菌具有R1型LPS核心,与ECA的免疫原性形式相连。 所有革兰氏阴性菌的外膜具有一种相似的成分:LPS,(脂)蛋白,和脂类。LPS代表O抗原的差别,它是形成大肠艾希氏菌及     

固定含A蛋白的葡萄球菌作为固相免疫吸附剂

<正>序言 金黄色葡萄球菌A蛋白(SpA)在免疫技术中已经成为一种重要的试剂,这是由于它和大多数哺乳类动物的免疫球蛋白(主要是IgG)能相互作用。甲醛固定金葡菌提供了一个有用的SpA固相结果物,能和IgG相互作用,持续数月不受影响。开始,这个试剂借协同凝集试验用于细菌血清学分群,但是目前,它更常被作为一种固相抗IgG的试剂用于放射免疫试验及细胞膜抗原的免疫沉淀反应。根据淋巴细胞表面抗原不同,金葡菌也能用于细胞检测和分离,也可以作为一     

伤寒沙门菌与甲、乙、丙副伤寒沙门菌质控血清的制备

应用免疫学原理,将伤寒沙门菌O901、H901和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌分别制成全菌体抗原,免疫实验兔获取免疫血清。依据伤寒沙门菌和副伤寒沙门菌的抗原成分的异同性,选择适当的吸收菌除去免疫血清中的交叉反应抗体和类属凝集素,而保留其特异性的抗体。通过对诊断菌液的验证试验,证实吸收充分的免疫血清具有质控血清的特性。具备可靠性能的质控血清,适用于伤寒沙门菌与副伤寒沙门菌的菌种检定及其效价检测;亦有利于肥达氏诊断菌液的质量控制。     

抗迟缓爱德华菌(Edwardsiella tarda)单克隆抗体的制备及双抗夹心ELISA检测方法的建立

以迟缓爱德华菌株2CDM001为抗原,利用杂交瘤技术制备了迟缓爱德华菌的单抗8D11、8H4、2F4、18C12、16E2、20D3、19G2、5F7、4E6、7C5、18H9。在特异性方面,单抗8H4和2F4特异性较差,与美人鱼弧菌ATCC33539、鮰爱德华菌ATCC33202等参考菌株均出现不同程度的交叉反应,而其余9株单抗特异性强,与实验中用到的除迟缓爱德华菌外的参考菌株均不结合;但与迟缓爱德华菌分离株的检测结果表明,仅有20D3和8H4可与所有分离株结合,其余单抗不能与实验中所有迟缓爱德华菌发生反应。由于单抗8H4与美人鱼弧菌ATCC33539有交叉反应,因此选单抗20D3和兔源多抗建立迟缓爱德华菌的双抗夹心ELISA检测方法,该方法特异性强,灵敏度达到5×10~7CFU/mL。本研究扩充了迟缓爱德华菌单克隆抗体库,为迟缓爱德华菌单克隆抗体的进一步应用提供更多参考数据和可选择的材料。     

六种致病性白蛉病毒原核表达核蛋白抗原性初步研究

初步研究六种致病性白蛉病毒原核表达核蛋白(Nucleocapsid protein,NP)抗原的抗原性,为开发相应的血清学诊断试剂提供理论依据。利用原核表达系统表达纯化六种致病性白蛉病毒核蛋白,并分别免疫新西兰白兔。通过间接ELISA方法及Western-blotting方法对所获得的兔免疫血清进行交叉反应检测,确定其抗体ELISA滴度。此外,分别用上述六种致病性白蛉病毒NP抗原包被ELISA反应板并对发热伴血小板减少综合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)病人血清进行间接ELISA检测,确定其血清学交叉反应及IgG抗体滴度。通过原核表达系统表达并纯化的六种白蛉病毒NP抗原浓度及纯度均达到免疫和检测要求。ELISA及Western-blotting检测结果显示六种病毒NP抗原兔免疫血清中的每种血清与其余五种病毒NP抗原可能存在血清学交叉反应。SFTSV病人血清与除SFTSV-NP以外的五种NP抗原亦可能存在部分交叉反应。本研究初步评价了原核表达的六种致病性白蛉病毒核蛋白的抗原性和免疫反应性,为相应诊断试剂的研制奠定了基础。     

间接ELISA法在注射用矛头蝮蛇血凝酶蛇毒种属鉴别中的应用

目的建立间接ELISA法定性检测矛头蝮蛇血凝酶,用于巴曲亭蛇毒种属来源检测。方法将矛头蝮蛇血凝酶为抗原免疫小鼠,与尖吻蝮蛇血凝酶、白眉蝮蛇血凝酶交叉筛选获得特异性单克隆抗体。优化矛头蝮蛇血凝酶单抗(一抗)、HRP标记的羊抗鼠(二抗)IgG、矛头蝮蛇血凝酶(抗原)工作浓度,建立间接ELISA检测方法。考察方法的重复性、中间精密度,确定方法的适用性。采用膜超滤法将巴曲亭中辅料去除,按照建立的ELISA法检测,判定种属来源。结果矛头蝮蛇血凝酶单抗具有强特异性,一抗的最佳工作浓度1∶4000(250ng),二抗的最佳工作浓度1∶4000(250ng),抗原浓度2μg/孔,该法重复性和中间精密度较好。巴曲亭与矛头蝮蛇血凝酶单抗有特异性反应,与其它蛇毒来源血凝酶单抗无交叉反应,确定巴曲亭来源于矛头蝮蛇蛇毒。结论本研究建立的ELISA法具有较好的特异性,可作为巴曲亭蛇毒种属来源判断的方法。     

抗A型肉毒神经毒素中和抗体间接ELISA的建立

目的建立间接ELISA,检测血清中抗A型肉毒神经毒素(botulinum neurotoxin type A, BoNT-A)中和抗体。方法以纯化的BoNT-A作为包被抗原,抗BoNT-A兔血清作为一抗,辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)标记的金黄色葡萄球菌蛋白A(Staphylococal Protein A, SPA)作为二抗,结合实验设计,建立检测血清中抗BoNT-A中和抗体的间接ELISA,验证该方法的特异性、灵敏度和重复性,并与经典动物中和试验法检测抗BoNT-A中和抗体的结果进行比较。结果①间接ELISA条件的建立与优化,使用2.50μg/mL纯化的BoNT-A抗原包被,4℃过夜;1%明胶作为封闭剂,37℃封闭2 h;确定一抗优化条件:反应条件为1∶5 000稀释,37℃孵育90 min;二抗优化条件:反应条件为1∶10 000稀释,37℃孵育90 min;加入底物37℃显色10 min,加终止液终止后,用酶标仪测定A_(450 nm)值;②经过验证该方法特异性好,所包被抗原与抗伤寒杆菌兔血清、抗破伤风毒素兔血清、抗B型肉毒毒素兔血清、抗E型肉毒毒素兔血清、抗F型肉毒毒素兔血清均无交叉反应;灵敏度高,当抗BoNT-A兔血清按照1∶320 000稀释时,检测结果依然呈阳性;重复性良好,批内重复性验证CV分别为2.62%、1.40%、2.14%,变异系数均小于3%,批间差异无统计学意义(P=0.103,P>0.05);该方法检测抗BoNT-A中和抗体检出限为抗-0.03 LD_(50)/mL,大约是经典动物中和试验法的1/30,显著地提高了检测灵敏度。结论建立了一种可用于检测血清中抗BoNT-A中和抗体的间接ELISA。     

2种β2-受体激动剂抗血清的比较研究

目的:通过比较分析,为β2-受体激动剂的快速免疫学检测方法及最佳免疫抗血清的选择提供依据。方法:分别以偶氮化法和碳二亚胺法将β2-受体激动剂克伦特罗(CL)和沙丁胺醇(Sal)连接到牛血清白蛋白和卵清蛋白上,免疫家兔;4次免疫后,采血制备抗CL和抗Sal的抗血清;用间接ELISA检测抗血清效价,用间接抑制ELISA检测抗血清交叉反应。结果:为抗CL抗血清的效价为1∶2560,抗Sal抗血清的效价为1∶5120。抗CL抗血清对Sal有0.088%的交叉反应,而抗Sal抗血清对CL有200%的交叉反应;就对CL的抑制而言,抗Sal血清比抗CL血清更敏感。结论:在检测β2-受体激动剂CL时,Sal完全抗原可能是制备抗血清的最佳抗原。     

牛IgA、IgM、IgG_1、IgG_2、重链特异性抗血清的制备

<正>通过选择对类和亚类具有选择性反应的特异性决定簇种类(而不是交叉反应决定族),可有效地制备免疫球蛋白类和亚类的特异性抗血清。牛IgG_1和IgG_2的完整分子在其重链和轻链上有共同抗原,用兔制备牛IgG_1和IgG_2抗血清,二者有交叉反应。同样,用兔制备的牛IgA、IgM和IgG抗血     

多重PCR方法特异性鉴定卡介苗菌株多糖核酸的初探

与结核分枝杆菌H37Rv菌株进行比较,BCG菌株可找到一个特殊的缺失片段RD1,它存在于所有有毒分枝杆菌中,而在所有的卡介苗菌株中均缺失。应用多重PCR方法检测RD1区的存在与否,可以区别BCG和其它有毒的分枝杆菌。卡介菌多糖核酸来源于卡介菌,检测成品中DNA是否含有RD1区,能特异性地鉴别该制品。结果显示牛分枝杆菌标准株和结核分枝杆菌H37Rv存在RD1区;而卡介菌多糖核酸注射液和国内皮内注射用BCG疫苗生产用菌株扩增产物一致,提示均缺失RD1区。因此,这种多重PCR方法适用于卡介菌多糖核酸注射液的特异性鉴别试验。     

探讨一起金葡菌引起食物中毒的检验结果分析

目的:探讨一起食物中事件中的致病因素以及与金葡菌的关系。方法:采集15份与食物中毒有关联的样本。根据GB4789.10-2010【食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球检验】对目的菌进行分离葡萄球菌及生化反应。结果:在二人呕吐物、三份豆沙、一份大米中检测出了金黄色葡萄球菌。结论:根据病人的临床反映、流行病学调查、以及微生物学检测的结果来分析,已经可以证实,这是一起由金葡菌感染而引起的食物中毒事件。     

草鱼、中华鳖T淋巴细胞表面抗原的研究

以草鱼脑组织、中华鳖脑组织和胸腺细胞为抗原制备兔抗草鱼脑血清（RACBS）、兔抗顺华鳖脑血清（RATBS）和兔抗中华鳖胸腺细胞血清（RATTS）。补体依赖性细胞毒试验和不同组织对RATBS、RATTS的吸收试验结果表明：中华鳖胸腺细胞和脑组织均存在Thy1抗原（亦称脑组织抗原或胸腺-脑组织T细胞抗原）;草鱼脑组织缺乏Thy1抗原。应用间接酶标免疫组化染色技术显示：Thy1抗原阳性反应物沉淀于中华鳖胸腺细胞和外周一部分淋巴细胞表面,进一步用抗人白细胞分化抗原CD4、CD8单克隆抗体进行免疫组化交叉反应提示中华鳖淋巴细胞膜上含有与人类T淋巴细胞表面抗原CD4、CD8类似结构的物质。本文讨论了Thy1抗原、CD抗原的出现及其意义。探讨了淋巴细胞异质性及RATBS、RATTS的特异性和作用。     

兔抗五种鱼免疫球蛋白抗体的制备和HRP标记

目的制备兔抗鱼类免疫球蛋白抗体并进行辣根过氧化酶标记,为鱼类血清学检测系统的建立提供工具。方法利用proteinA亲和层析的方法纯化鱼血清免疫球蛋白,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散来检测抗血清的效价,并用Protein A亲和层析的方法来纯化兔抗鱼免疫球蛋白的抗体,采用简易过碘酸钠法对纯化的兔抗鱼免疫球蛋白的抗体进行HRP标记,通过ELISA方法测定标记抗体的效价,并利用Western blotting来考察标记抗体与其他常见鱼类血清蛋白间的交叉反应。结果纯化了鳙、鲤、乌鳢、黄鳝、鲈五种鱼血清免疫球蛋白,免疫双扩散法测定兔抗这五种鱼免疫球蛋白的抗血清效价均达到1∶32,并对纯化的兔抗鳙、鲤、乌鳢、黄鳝、鲈五种鱼类免疫球蛋白的抗体进行了HRP标记,ELISA测定标记抗体的效价达到1∶10000左右,Western blots显示标记抗体与部分其他鱼类免疫球蛋白之间存在不同程度的交叉反应。结论成功制备了HRP标记的兔抗鱼类免疫球蛋白抗体,为鱼类血清学检测体系的建立提供了工具。     

聚合牛血红蛋白抗原性的初步研究

对乙醇醛聚合的牛血红蛋白的抗原性进行了研究。将聚合的牛血红蛋白桉兔血量的10％和20％分别输入兔耳缘静脉,间隔7天后重复输液,共输注3次。ELISA检测未显示抗体产生。将聚合的牛血红蛋白、人血红蛋白和兔血红蛋白分别与免疫佐剂混合常规免疫家兔3次,并用上述抗原包被聚乙烯板,用ELISA方法检测抗体滴度,结果显示聚合牛血红蛋白和人血红蛋白加佐剂免疫家兔后均产生抗体,且有交叉反应,表明这两种血红蛋白有同源性,存在相似的抗厚决定簇。兔血红蛋白免疫家兔后无抗体产生,且无交叉反应,表明机体对自体蛋白有天然的耐受。     

家蚕核型多角体病毒蛋白组份检测方法建立

研制了兔抗家蚕核型多角体病毒蛋白组份的多克隆抗体,用间接法建立了家蚕核型多角体病毒蛋白的dot-ELISA检测方法。此法检测多角体病毒蛋白的灵敏度达10ng,与人血清和兔血清无交叉反应,可用于家蚕生物反应器生产的目的蛋白中多角体病毒蛋白组份的检测。     

抗人肺癌细胞单克隆抗体的制备及其特性的研究

用人肺鳞癌细胞LTEP-78细胞系免疫Blab/c小鼠获得3株抗人肺癌细胞的单克隆抗体杂交瘤系。其中BLTI-01株经六次克隆化培养,体外传代8个月以上。BLTI-01与白细胞抗原及血型抗原基本上无交叉反应;与骨髓细胞无交叉反应;与癌胚抗原和胎甲球蛋白不相关;与肺鳞癌、肺腺癌细胞系及部分其它肿瘤细胞呈阳性反应。     

6种沙门菌单克隆抗体的制备和效能评价

目的：制备稳定、特异、高亲和性的分别针对甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌、丙型副伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌的单克隆抗体。方法：用甲醛灭活的菌液抗原免疫BALB／c小鼠,取脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合;用灭活的菌液包被酶标板,ELISA筛选阳性克隆株,建立细胞系;选取高效分泌杂交瘤细胞,常规制备腹水并纯化,进行单抗特异性与亲和性评价。结果：筛选得到分泌6种沙门菌相应单克隆抗体的杂交瘤细胞株,获得高亲和性单抗;所有单抗与大部分病原菌（包括7种沙门菌、3株志贺菌、2株李斯特菌、4株致病性大肠杆菌、2株霍乱弧菌）无交叉反应,但由于同类型O抗原的广泛分布,抗乙型副伤寒沙门菌单抗与鼠伤寒沙门菌、抗伤寒沙门菌单抗与肠炎沙门菌有明显的交叉反应。结论：沙门菌单抗的制备,为感染性腹泻的监测、诊断奠定了基础。     

成人腹泻轮状病毒的提纯及其高价免疫血清的制备

本文采用交叉免疫电泳技术,首先提纯了成人腹泻轮状病毒(Adult DiarrhoeaRotavirus简称:ADRV),并经电镜确认,用作免疫抗原,首次制备了高价兔与豚鼠抗ADRV血清和小鼠抗ADRV腹水,其特异性经交叉免疫电泳和对流免疫电泳鉴定,其效价经酶联免疫吸附试验(ELISA)检测均在1:2,000以上。     

金黄色葡萄球菌荚膜分型血清研制及初步应用

为了解中国金葡菌荚膜流行型,用5型和8型国际标准菌株的菌悬液免疫家兔,吸收除去交叉凝集素研制出金葡菌5型和8型荚膜分型血清,并应用于333株临床菌株荚膜分型。该血清效价为1：1280和1：640,与本菌及其它同型菌株玻片凝集反应呈强凝集,与其它型菌株不凝集,且与美国标准血清同时对333株临床分离菌株进行分型比较的符合率为100％。333株金葡地方菌株荚膜分型结果显示,8型菌株占绝对优势,所占百分率为70．9％;5型占6．3％,5型和8型菌株共占77．2％。这与国外金葡菌荚膜5型和8型占70％-80％的报道相似。试验为金葡菌疫苗株选择提供了流行病学依据。     

单核增生李斯特菌Internalin A的克隆表达与抗体制备

目的克隆表达单核增生李斯特菌Internalin A（InlA）,并以之为抗原制备检测单核增生李斯特菌的抗体。方法通过PCR技术从单核细胞增生李斯特菌4b中扩增出inlA基因,克隆筛选和测序鉴定后,最终构建该基因的原核表达质粒pGEX-4T-InlA,谷胱甘肽树脂亲和层析纯化表达产物后,免疫小鼠分别制备相应的多抗和单抗。结果在大肠埃希菌中成功表达了InlA,并对其进行了纯化,融合表达产物分子量约为110 kD;免疫小鼠获得的抗血清效价达到1∶1600;得到了3株抗InlA的单克隆抗体杂交瘤细胞株,腹水单抗效价为1∶1×10^5-1∶3×10^5。2种抗体与其他病原菌均无交叉反应。结论通过表达单核增生李斯特菌的特异性蛋白制备的抗体,能有效地消除交叉反应,提高检测的特异性。