一个能与水稻未成熟种子核蛋白特异结合的31bp的DNA片段

水稻蜡质基因5'上游序列中有5个能与水稻胚乳核蛋白结合的片段,其中HinfId和RsaIe片段有部分重叠,而重叠部分含AACGT顺序。按重叠区上下游顺序合成了其中含有3次重复的AACGT顺序的31bp寡核苷酸,并以此为探针进行凝胶滞后实验,表明它不仅能与未成熟水稻种子的胚乳核蛋白特异结合,而且也与HinfId和RsaIe片段有强烈的竞争作用。因此31bp顺序中含有与水稻胚乳核蛋白专一结合位点,从而有可能应用此31bp的寡核苷酸作探针来分离编码蜡质基因的调控蛋白基因。     

水稻蜡质基因5‘端上游顺序中的核蛋白结合区

通过ｗｘ基因转录起始点上游２１２０ｂｐ长的ＤＮＡ序列的测定,用不同的限制性内切酶对此片段进行消化,获得１５个大小不同的ＤＮＡ片段并构建成不同的亚克隆。     

水稻蜡质基因5’端上游顺序中的核蛋白结合区

通过ｗｘ基因转录起始点上游２１２０ｂｐ长的ＤＮＡ序列的测定,用不同的限制性内切酶对此片段进行消化,获得１５个大小不同的ＤＮＡ片段并构建成不同的亚克隆。这些片段经３２Ｐ标记后分别做探针同水稻不同组织来源的核蛋白进行凝胶滞后实验和特异的竞争实验,表明ＨｉｎｆＩａ－２、ＨｉｎｆＩｃ－１、ＨｉｎｆＩｃ－２、ＨｉｎｆＩｄ、ＲｓａＩａ和ＲｓａＩｅ（ＲｓａＩａ片段与ＨｉｎｆＩａ、ＨｉｎｆＩｃ片段重叠）片段能与从未成熟的水稻种子中抽提的核蛋白结合。     

水稻蜡质基因第一内含子中g片段上核蛋白因子结合位点的确定

水稻蜡质基因５’非翻译区中的第一内含子具有增强基因表达的作用,本实验室曾检测到该内含子中的一段１７１ｂｐ长的ｇ的片段与水稻未成熟种子核蛋白存在特异性结合。本文进一步用凝胶滞后实验和足印实验确定了该核蛋白在ｇ片段上的结合位点位于蜡质基因转录起始点下游７８３－８１８ｂｐ处,该结合位点富含ＡＴ碱基;Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｍ ｂｌｏｔ实验测出该蛋白的分子量约为２０ｋＤ。用硫酸铵分步沉淀和肝素－Ｓｅｐｈａｒｏ     

野败型水稻保持系线粒体特异DNA片段的克隆及序列分析

利用RAPD技术,从水稻野败型细胞质雄性不育系珍汕97A的保持系珍汕97B中得到一个特异的扩增片段PWP-13。该片段全长808bp,1-142区段为正常的cob基因片段;143-372、406-707区段与一个报告的嵌合cob基因的同源性分别为98％、100％,但由于碱基缺失,所推测的氨基酸序列差异较大;373-405区段为PWP-13所特有的重复序列,708-808区段为未知序列。序列内含有3组长度分别为9、31、27bp的小重复序列。     

水稻核糖核蛋白基因片段的结构分析与鉴定

利用两个源自于核糖核蛋白（ＲＮＰ）一致顺序Ⅰ和一致顺序Ⅱ氨基酸顺序的寡核苷酸片段作ＰＣＲ引物,从水稻（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）“广陆矮４号”黄化苗ｃＤＮＡ 中扩增到了一个３００ ｂｐ长的基因片段．顺序分析显示这个基因片段具有典型的ＲＮＰ蛋白特征,即两个含ＲＮＰ一致顺序的ＲＮＡ 结合区域     

人N-ras癌基因细胞型特异DNA结合蛋白

本文利用Southwestern印迹技术发现人肿瘤HT1080细胞染色质蛋白中一组与N-ras基因结合的蛋白,分子量约为150,105,95,90KDa,而与Ha-ras基因结合的一组蛋白,分子量约为160,115,100,55KDa,其中150KDa蛋白是N-ras基因特异的DNA结合蛋白,具有细胞型特异性,在HT1080细胞中含量最多,T24细胞次之,而在人HeLa细胞,淋巴细胞、肠细胞以及未转化的NTH3T3细胞中未被发现。此种蛋白可能与N-ras基因在HT1080细胞内的激活有密切关系。     

水稻蜡质基因第一内含子中g片段上核蛋白因子结合位点的确定

水稻蜡质基因 5’非翻译区中的第一内含子具有增强基因表达的作用 ,本实验室曾检测到该内含子中的一段 171bp长的g片段与水稻未成熟种子核蛋白存在特异性结合。本文进一步用凝胶滞后实验和足印实验确定了该核蛋白在g片段上的结合位点位于蜡质基因转录起始点下游 783～ 818bp处 ,该结合位点富含AT碱基 ;Southwesternblot实验测出该蛋白的分子量约为 2 0kD。用硫酸铵分步沉淀和肝素 Sepharose柱层析的方法对这一蛋白进行了初步纯化。还初步检测了此蛋白DNA结合活性对温度的耐受性。以上特征提示它可能属于HMG类DNA结合蛋白     

一个新的泥鳅雄性特异DNA片段（简报）

世界上现存鱼类多达24000余种．是脊椎动物中分布最广,种类最多的类群．具有多种多样的生物学特性和重大的经济价值。与高等脊椎动物相比．其性别决定具有多样性和可塑性。大多数鱼类的性别决定机制很原始。性染色体的分化处于萌芽状态。在已进行细胞遗传学研究的1700多种鱼类中．大约有176种（占10．4％）发现有明显的异型性染色体。     

水稻单粒种子DNA提取及RAPD程序的优化研究结果

浙江大学农业与生物技术学院彭锁堂等4位先生,用水稻单粒干种子作材料,进行DNA提取方法和RAPD程序优化研究,结果表明,用CTAB法微量提取水稻干种子DNA,可获得理想的扩增结果,其最佳的反应体系和条件是随机引物浓度100～400μg／L、Mg^2＋浓度2～4mmol／L、dNTPs浓度100～400μmol／L、Taq酶IU。变性94 30S,退火38℃ 30S,延伸72℃ 1min,40个循环;若要节省时间和成本,可不进行预变性处理,其反应体积可降至12．5μl,扩增效果仍与前者一样。这是由于RAPD技术在广泛应用中稳定性差、重复性不好、伪阳性多,而PCR在反应中变性、退火、延伸温度、费时,反应过程有循环数,反应体系中有多种试剂来源,     

豌豆花DNA导入小麦后种子蛋白质组分变化的研究

豌豆花ＤＮＡ直接导入小麦体可诱导小麦种子蛋白质组分发生明显的变化,小麦种子蛋白质和总氨基酸含量都比对照增高２０％。这些变异性状能稳定遗传给后代。因此直接导入豌豆花ＤＮＡ技术可以为小麦品质改良和分子育种研究提供一条新途径。     

经大豆DNA溶液处理的水稻后代种子的粗蛋白的氨基酸含量分？…

以大豆为外源ＤＮＡ供体,用浸种及幼苗期浇灌法和花粉管通道法直接将大豆总ＤＮＡ导入受体水稻,经常规栽培获得水稻后代种子。采用微量凯氏定氮法和氨基酸自动分析仪进行水稻后代种子糙米的粗蛋白含量和氨基酸含量的测定。结果显示：三组经大豆ＤＮＡ溶液处理获得的水稻后代种子糙米粗蛋白平均含量分别为１６．４２％、１６．８０％和１９．８７％,与对照组相比有明显提高,统计分析都达到极显的差异（Ｐ＜０．０１）;在氨基酸     

三链DNA的形成抑制DNA结合蛋白与启动子的结合

电泳迁移分析方法及DNaseⅠ足迹实验表明21nt脱氧寡核苷酸G3TG2T GT2G5TG2TGT(CP1)与乙肝病毒(HBV)核心启动子(Cp)片段之间三链DNA的形成有较高的特异性及稳定性.凝胶滞留实验显示, 在大鼠肝细胞核提取物体外转录系统中, CP1可特异地抑制DNA结合蛋白与Cp片段的结合, 而不能与Cp结合形成三链DNA的脱氧寡核苷酸CP3(TGTG2TG5T2GTG2TG3)对蛋白与Cp的结合并无抑制作用.这些结果表明, 三链DNA的形成有可能抑制HBV DNA的转录.     

人Ha-ras基因中蛋白质特异结合DNA位点的鉴定

利用迁移率改变法和DNaseⅠ足纹法观察了Ha-ras癌基因5’端上游序列与特异结合蛋白的相互作用。用限制性内切酶XmaⅠ消化6.6kb Ha-ras基因得到约10个片段,进行3’-末端标记,与T24细胞核提取液反应,经低离子强度聚丙烯酰胺凝胶电泳,发现与蛋白质特异结合的416bp片段,位于Ha-ras基因5’-端上游1230—1646区域内,靠近转录起始点1660bp处(CAP位置)。另一个与蛋白质特异结合的389bp片段,位于转录起始点上游162—551处。