菠萝叶片PEP羧激酶与底物结合时构象的变化

菠萝叶片PEP羧激酶与底物OAA和ATP及配基Mn~(2+)等结合时引起紫外差示吸收光谱峰位和方向上的变化。OAA与酶结合诱导产生的差示吸收光谱在268—280nm处有一个宽负峰。ATP与酶结合出现两个差示负峰(242.5和273.5nm)。双底物OAA和ATP同时与酶结合,光谱上呈现252nm和268nm两个峰。Mn~(2+)不论与ATP或与ATP+OAA一起与酶反应时,皆使原来的峰位漂移,且正负方向逆转。酶蛋白在323nm有最大的荧光发射。OAA引起荧光发射强度增大,ATP及ATP+Mn~(2+)则减弱荧光发射。Mn~(2+)与OAA及ATP的复合效应导致荧光强度进一步减弱。     

菠萝叶片PEP羧激酶活性及草酰乙酸与腺苷酸库的昼夜变化

自然条件下生长的菠萝植株,其叶片的ＰＥＰ羧激酶的脱羧与可逆羧化活性于中午１２时达最大值。脱羧／羧化比值在上午明显高于下午和晚上。脱羧反应底物ＯＡＡ含量于夜间增高,至次日早晨６时最高,随后下降。白天的ＯＡＡ／Ｍａｌ值高于夜间。参与Ｍａｌ及ＯＡＡ形成转化的ＰＥＰＣ和ＭＤＨ活性的昼夜变化与ＰＥＰ羧激酶（ＰＥＰＣＫ）活性的图式相似。ＰＥＰ羧激酶脱羧反应的另一底物ＡＴＰ在夜间０～６时内处于低水平,白天９～１５时内则显著增高。     

菠萝叶片的稳定碳同位素比与PEP羧化酶及PEP羧激酶活性

专性景天酸代谢（ＣＡＭ）植物菠萝（Ａｎａｎａｓｃｏｍ ｏｓｕｓ （Ｌ．） Ｍｅｒｒ．）的下数第５ 到第３５ 位叶为材料,研究稳定性碳素同位素（δ１３Ｃ）值,磷酸稀醇式丙酮酸（ＰＥＰ）羧化酶和ＰＥＰ羧激酶活性的变化。１１ 个不同叶位叶片的δ１３Ｃ值平均为－ １２．９４‰,最大变幅相差－ ２．０６‰。两个酶的活性呈单峰形变化,第８—１１ 位叶的活性最高,低位叶的酶活下降。本试验条件下,ＰＥＰ羧激酶平均活性比ＰＥＰ羧化酶高３．４ 倍。结果表明,ＣＡＭ 植物的暗下羧化与光下脱羧之间具有一定的协调性。老叶虽然酶活较低,但总的看来,ＣＡＭ 水平变化不大     

海带磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶的提取和特性(简报)

提取得到的海带PEP羧激酶粗酶比活性为1.21nmolNADH/mg蛋白·分。经硫酸铵分步沉淀和冻融过程后其比活性提高近4倍。抗氧化剂可提高PEPCK活性。该酶催化的羧化反应底物是PEP。ADP和Mn~(2+)是必需的辅助因子。酶反应的最适pH值是7.5。用部分纯化酶测得底物HCO_3~-的K_m值是14.0mmol/L,pEP是0.3mmol/L,ADP是0.1 mmol/L。     

菠萝叶片依赖焦磷酸的磷酸果糖激酶的纯化及其特性

经硫酸铵分部,DEAE—纤维素、羟基磷灰石、Sephadex G—200及磷酸纤维素柱层析,从菠萝叶片分离得到电泳均一的依赖焦磷酸的磷酸果糖激酶(PFP)。SDS电泳图谱表明有一条分子量为62kD的主带和一条57 kD的弱带。Fru—2,6—P_2对酶的正反应活性有促进作用。动力学研究表明,Fru—2,6—P_2增加V_(max)及酶对底物Fru—6—P和Mg~(2+)的亲和性。     

菠萝叶片中有机酸含量,转氨酶和脱氨酶活性的昼夜变化

研究了菠萝叶片中苹果酸,柠檬酸,草酰乙酰,α－酮戊二酸和草酸等有机酸和转氨酶、脱氢酶活性的昼夜变化。结果表明,除了草酸外,其他４种机酸的含量都呈白天降低晚上增高的趋势。     

菠萝叶片绿色组织与贮水组织中代谢物水平的昼夜变化

研究了景天酸代谢（CAM）植物菠萝叶片绿色组织与贮水组织（WSP）的苹果酸、柠檬酸、异柠檬酸、淀粉、果糖、葡萄糖、蔗糖、葡糖－1－磷酸（G－1－P）、葡糖－6－磷酸（G－6－P）、果糖6－磷酸（F－6－P）、草酰乙酸（OAA）及磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）水平的昼夜变化。夜间苹果酸的积累仅发生在绿色组织中,表明只有绿色组织才能进行CAM。可溶性已糖（葡萄糖和果糖）是绿色组织中夜间苹果酸累积的主要碳源。绿色组织G－1－P、G－6－P和F－6－P水平在夜间的初期上升,后期下降,昼间的头3h仍下降,3h后变化不明显。绿色组织中OAA和PEP水平也发生昼夜变化。在贮水组织中没有测到淀粉、蔗糖、OAA和PEP。除葡萄糖和果糖外,WSP中其它代谢物的含量都远低于绿色组织,而且WSP中所有代谢物都无明显的昼夜变化。     

菠萝叶片中有机酸含量、转氨酶和脱氢酶活性的昼夜变化

研究了菠萝叶片中苹果酸、柠檬酸、草酰乙酸、α－酮戊二酸和草酸等有机酸和转氨酶、脱氢酶活性的昼夜变化。结果表明,除了草酸外,其他４种有机酸的含量都呈白天降低晚上增高的趋势。有机酸的含量在上午９∶００时有最高值,下午１８∶００时有最低值。苹果酸、柠檬酸、草酰乙酸、α－酮戊二酸和草酸的昼夜最大差值分别为１４０、６１、３１．８、８．２和６．７ｍｍｏｌ·ｋｇ－１ＦＷ。异柠檬酸脱氢酶和琥珀酸脱氢酶活性的昼夜变化与有机酸的趋势一致,白天降低晚上增高。可溶性蛋白和游离氨基酸含量以及谷草转氨酸、谷丙转氨酶活性在下午１８∶００时有最高值,凝胶电泳显示菠萝叶片中有新的蛋白带出现。     

菠萝叶片绿色组织与贮水组织中代谢物水平的昼夜变化

研究了景天酸代谢(CAM)植物菠萝叶片绿色组织与贮水组织(WSP)的苹果酸、柠檬酸、异柠檬酸、淀粉、果糖、葡萄糖、蔗糖、葡糖-1-磷酸(G-1-P)、葡糖-6-磷酸(G-6-P)、果糖-6-磷酸(F-6-P)、草酰乙酸(OAA)及磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)水平的昼夜变化。夜间苹果酸的积累仅发生在绿色组织中,表明只有绿色组织才能进行CAM。可溶性已糖(葡萄糖和果糖)是绿色组织中夜间苹果酸累积的主要碳源。绿色组织G-1-P、G-6-P和F-6-P水平在夜间的初期上升,后期下降,昼间的头3h仍下降,3h后变化不明显。绿色组织中OAA和PEP水平也发生昼夜变化。在贮水组织中没有测到淀粉、蔗糖、OAA和PEP。除葡萄糖和果糖外,WSP中其它代谢物的含量都远低于绿色组织,而且WSP中所有代谢物都无明显的昼夜变化。     

菠萝叶片绿色组织与贮水组织的腺苷酸及焦磷酸水平的昼夜变化

研究了景天酸代谢（CAM）植物菠萝（Ananas comosus)叶片绿色组织与贮水组织的苹果酸、腺苷酸及焦磷酸含量的昼夜变化。夜间苹果酸的积累仅发生在绿公组织中,而且,其含量也远高于贮水组织,绿色组织中能荷和无机磷含量夜间增高,白天下降,绿色组织中焦磷酸含量夜间增加,在白天的头几个小时迅速下降到低的水平,然后保持稳定,与绿色组织相比,贮水组织中ATP、ADP、无机磷和焦磷酸的含量低得多,且不表现昼夜变化,在贮水组织中没有测到AMP。     

菠萝叶片绿色组织与贮水组织的腺苷酸及焦磷酸水平的昼夜变化

研究了景天酸代谢(CAM)植物菠萝(Ananascomosus)叶片绿色组织与贮水组织的苹果酸、腺苷酸及焦磷酸含量的昼夜变化。夜间苹果酸的积累仅发生在绿色组织中,而且,其含量也远高于贮水组织。绿色组织中能荷和无机磷含量夜间增高,白天下降。绿色组织中焦磷酸含量夜间增加,在白天的头几个小时迅速下降到低的水平,然后保持稳定。与绿色组织相比,贮水组织中ATP、ADP、无机磷和焦磷酸的含量低得多,且不表现昼夜变化,在贮水组织中没有测到AMP。