广州市公共场所中央空调冷却塔水中军团菌mip基因分型

【目的】研究广州市公共场所中央空调冷却塔水中军团菌的基因特征和优势型别。【方法】采用军团菌巨噬细胞感染力增强因子(Macrophage infectivity potentiator,mip)基因分型方法。提取广州市2008-2010年分离的140株(119株嗜肺,21株非嗜肺)军团菌基因组DNA,针对mip基因进行PCR扩增并测序,将核苷酸序列上传至欧洲军团菌感染工作组(EWGLI)数据库进行比对,得到mip型别,并构建系统发育进化树。【结果】140株军团菌均可扩增出700 bp左右的目的条带。119株嗜肺军团菌分为10个mip型别,L.pneumophila-phil-1为优势型别,占52.9%(63/119);21株非嗜肺军团菌分为6个mip型别,L.feeleii-D3131为优势型别,占47.6%(10/21)。【结论】广州市公共场所中央空调冷却塔水中军团菌具有多样性,mip分型技术可用于军团菌的快速基因分型。     

辽宁省2006-2016年集中空调冷却水中嗜肺军团菌毒力岛基因组携带情况

目的 了解2006‒2016年辽宁地区集中空调冷却水中军团菌携带毒力岛基因情况及其致病性。方法 根据GenBank公布的嗜肺军团菌核苷酸序列设计和合成嗜肺军团菌种和毒力岛基因鉴定引物,采用PCR法对2006‒2016年辽宁省各大公共场所委托及抽样检测中分离到的军团菌,进行了毒力岛基因组检测,并与血清型进行比较分析,其中嗜肺军团菌15株、非嗜肺军团菌8株。结果 标准菌株ATCC（33152）12个毒力岛基因全阳性;9株LP1型嗜肺军团菌分别检出9~11个毒力岛基因,6株LP2-14型嗜肺军团菌分别检出6~9个毒力岛基因,8株非嗜肺军团菌分别检出2~11个毒力岛基因。结论 辽宁地区军团菌广泛存在公共环境集中空调冷却系统中,以LP1型嗜肺军团菌居多,LP2-14型嗜肺军团菌与非嗜肺军团菌也普遍存在,而且所测菌株均携带毒力岛基因,是细菌感染性肺炎的重要隐患病源之一。     

嗜肺军团菌生物膜形成及其影响因素

嗜肺军团菌在自然环境和人工供水系统中普遍存在,能够在阿米巴原虫和其他原生动物体内繁殖,所引起的军团菌病主要表现为严重的呼吸系统疾病。但在自然环境中,嗜肺军团菌的生存和繁殖受到多菌种生物膜形成和繁殖的影响,一些军团菌病的暴发与生物膜的存在相关。因此,阻止自然环境和人工水系统中生物膜的形成显然已成为降低水污染的有效策略之一。根据近年来的报道分别对影响嗜肺军团菌生物膜形成的生化因子和嗜肺军团菌的毒力因子,以及其他生物物种在嗜肺军团菌生物膜形成过程中所起的不同作用等进行综述。     

西安地铁中央空调卫生学项目及新风量状况分析

目的:监测西安地铁2号线车站内站厅与站台积尘量、细菌总数、真菌总数、PM10、β-溶血性链球菌、新风量、嗜肺军团菌状况。方法:用普通琼脂培养皿和血培养皿分别采集站厅、站台真菌总数、β-溶血性链球菌;用无纺布采集风管内积尘量;利用智能粉尘检测仪采集PM10;利用热球式风速仪采集风口风速求平均风速计算新风量、利用500 mL无菌瓶采集冷却水和冷凝水检测嗜肺军团菌。结果:除冷却水中检出嗜肺军团菌外,其他各项指标符合国家相关标准,总体上西安地铁站中央空调卫生学项目及新风量状况较好。结论:按照卫生学预评价意见,健全卫生管理制度,完善必要的卫生设施,使运营过程中产生的各种影响乘客健康的因素得到有效控制、减轻或消除,从公共场所卫生学角度评价该项目是可行的。     

公共场所水环境中活嗜肺军团菌的快速检测方法

旨在建立一种基于16S rRNA前体的分子学检测方法用于快速检测活嗜肺军团菌,应用该方法与ISO标准法调查公共场所水环境中嗜肺军团菌的水平及污染现状。此研究方法的理论基础在于营养刺激后可诱导嗜肺军团菌16S rRNA前体的合成,后者可作为检测细胞活性的指标。分别应用预刺激RT-qPCR法和ISO法对嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌以及非军团菌进行检测,并验证两种方法的特异性、灵敏度。应用预刺激RT-qPCR法和ISO法检测公共场所水环境中的嗜肺军团菌,比较两者结果的一致性。结果显示,预刺激时间大于3 h时,嗜肺军团菌16S rRNA前体的增长缓慢,最佳预刺激时间设置为3 h。预刺激RT-qPCR法与ISO法均能较好地检出嗜肺军团菌,特异性均为100%,预刺激法的最低检测浓度(Limit of detection,LOD)为102Cell/L,ISO标准法的LOD为104 Cell/L。预刺激法及ISO法的总阳性率分别为43.5%(30/69)和40.6%(28/69),两种方法的检出率差异无明显统计学意义(C2=0.119,P=0.730)。预刺激RT-qPCR法是一种快速有效的检测活嗜肺军团菌的方法,诊断灵敏度及特异性高,是ISO标准法潜在的替代方案。     

嗜肺军团菌分子检测最新进展

嗜肺军团菌是军团病最主要的致病原,在人工水体或空调冷却系统中多有存在,是影响公众健康的一大隐患。能否准确高效地检测嗜肺军团菌,对军团病的防控具有重要意义。分子生物学技术多具有快速、简便、特异、灵敏等优点,近年越来越多地应用于嗜肺军团菌的检测。本文简要综述了嗜肺军团菌分子检测的最新进展,介绍了PCR及其衍生技术、核酸等温扩增技术、基因分型、探针杂交及其相关技术,以及新一代测序在嗜肺军团菌分子检测中的应用,并简单讨论了嗜肺军团菌检测存在的问题,对嗜肺军团菌分子检测的前景进行了展望。     

嗜肺军团菌效应蛋白之间的调控机制

嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)是一种革兰氏阴性致病菌,它可以引起人类军团病。嗜肺军团菌的Dot/Icm分泌系统在其致病过程中至关重要,其向宿主细胞内转运约330种效应蛋白,通过修饰细胞调节因子、抑制细胞凋亡等一系列措施操纵宿主细胞的多种生命活动,以完成自身的增殖与侵染。为避免对宿主生理造成不必要的破坏,嗜肺军团菌已进化出复杂而精细的调控机制来平衡嗜肺军团菌毒力与宿主细胞的稳态,以确保嗜肺军团菌在宿主细胞内的生存。军团菌效应蛋白的功能及分子机制的研究近几年取得突破性进展,嗜肺军团菌效应蛋白之间的作用机理也成为我们进一步研究的热点。该文主要对嗜肺军团菌的致病机制及其效应蛋白间的调控机制进行了综述,为进一步了解嗜肺军团菌致病机制提供了一定的参考。     

PCR-酶切技术快速鉴定军团菌

[目的]建立一种新型的军团菌鉴定方法,并探讨该法在鉴定环境水源和临床标本军团菌菌株中的应用价值.[方法]根据军团菌16S rRNA基因保守序列设计引物,以分离培养得到的可疑军团菌菌株作为模板,采用PCR法对模板扩增,并用限制性内切酶对PCR产物进行酶切分析,建立一种嗜肺军团菌及非嗜肺军团菌的鉴定方法.对16株嗜肺军团菌、22株非嗜肺军团菌及12株其他细菌标准菌株进行检测,验证该方法的可靠性,最后用该法检测广州地区分离的169株可疑军团菌菌株并进行基因测序.[结果]该PCR方法检测嗜肺军团菌及非嗜肺军团菌所有标准菌株均为阳性,非军团菌检测结果均为阴性;进一步的Hinf Ⅰ酶切分析可准确的区分嗜肺军团菌标准菌株;广州地区分离的169株可疑军团菌菌株经该法检测发现160株为军团菌,其中79株为嗜肺军团菌,与基因测序检测结果一致.[结论]PCR-酶切技术可快速、特异地检测军团菌及嗜肺军团菌,适用于环境水源和临床标本可疑军团菌菌株的检测.     

抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体的制备及双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测法的建立

目的：制备针对嗜肺军团茵血清8型的单克隆抗体,并建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测方法。方法：用甲醛灭活的嗜肺军团菌血清8型菌免疫BALB／c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体,建立双抗夹心ELISA检测方法。结果：研制出8株能特异性分泌抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体的杂交瘤细胞株,Ig类型分别为IgM（2株）、IgG,（1株）和IgG,（5株）;利用IgG1型单抗6G10与6C7配对,建立了双抗夹心ELISA检测方法,该方法的最低检出浓度为2．6×10^5cfu／mL,除与金黄色葡萄球菌有微弱的交叉反应外,与14株其他血清型嗜肺军团菌、17株非嗜肺军团菌及11株非军团菌均无交叉反应,具有较高的特异性。结论：制备了具有高特异性和亲和力的抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体,并建立了双抗夹心EUSA检测方法。     

应用双重PCR检测环境水体中的军团菌

建立双重PCR方法以检出环境水体中的军团菌。设计两对引物,分别扩增军团菌的16S rRNA和M ip基因,扩增片段长各为375bp和996bp。该方法检测军团菌的灵敏度为5.8×102cfu/m l,6株嗜肺标准军团菌均扩增出996bp和375bp两条带,4株非嗜肺军团菌扩增出375bp条带,4株非军团菌无条带;检测71份环境水样,5份出现两条条带,2份可见375bp条带,阳性率为7.0%。该方法快速、灵敏、特异,为水体中的嗜肺军团菌检测提供了有效方法。     

嗜肺军团菌SBT、PFGE、AFLP分子分型方法的比较

比较SBT、PFGE、AFLP三种分子分型方法在嗜肺军团菌分型研究中的分辨力,探讨SBT方法在嗜肺军团菌分型中的可应用性。收集石家庄市6所医院冷却塔水中分离的32株嗜肺军团菌,对其中的24株血清I型嗜肺军团菌进行SBT分型研究,并与PFGE和AFLP分型结果进行了比较。24株LP1型嗜肺军团菌共分为4个ST型,分辨系数为0.239 1。PFGE方法将32株菌株共分为15个PFGE型,分辨系数为0.925 4。AFLP方法将32株菌株分为23个AFLP型,分辨系数为0.973 7。通过比对EWGLI网站SBT数据库,ST1021型和ST345型为本地区独特型别且属于同一克隆系;ST1型为优势型别并在我国长期流行;由于缺失neuA而未分型的嗜肺军团菌株与其他23株菌分属于不同的克隆系。SBT方法的分型能力不及PFGE方法和AFLP方法。但SBT分型方法能够通过全球比对数据库得到更多的关于菌株遗传进化和流行分布的资料,在研究菌株分子流行病学及进化方面优于PFGE和AFLP方法。     

嗜肺军团菌简易鞭毛染色法及在不同培养基上鞭毛的生长观察

本文报道了一种较为简易、快速的嗜肺军团菌 Legionella pneumophila 鞭毛染色法,并探讨了嗜肺军团菌在两种培养基(BCYE、NYE)上鞭毛的生长情况。实验结果提示这种鞭毛染色法有助于军团病的病原学诊断。     

高密度鳙池塘分区养殖浮游动物群落结构及水环境特征

研究在高密度鳙和黄颡鱼、鲢混养模式下, 通过在池塘中设置1/4拦网(A组)、1/2拦网(B组)和无拦网(C组)处理和分析养殖期不同处理组的水质特征和浮游动物群落结构, 来探讨设置拦网是否会减轻浮游动物种群的生存压力, 以保证水体中大型浮游动物的生物量。结果显示, A、B组TSS明显降低(P<0.05), 但TN、TP等营养盐显著增高(P<0.05)。各处理组中的原生动物和轮虫的种类相对较多, 分别占比为30.4%—36.6% 和51.6%—57.0%, 枝角类和桡足类种类相对较少。各处理组的物种组成变化不明显, 物种多样性(H')仅在7月9日和7月23日2次采样中, A、B组显著高于C组(P<0.05), 其他时间各处理组无明显差异。各处理组中的主要优势种群为原生动物和轮虫, 但轮虫在实验后期趋于小型化。另外, 大型优势物种多刺裸腹溞Moina macrocopa随着采样时间在C组中消失, 在A、B组仍存在。轮虫和原生动物的生物量在实验期间各处理组中的变化不显著, 枝角类和桡足类总生物量则是在B组显著高于A组和C组, 说明拦网分区养殖在一定程度上能有效地减轻大型浮游动物种群的生存压力, 减缓其生物量的骤降。研究结果对维持池塘浮游动物生态平衡和增加池塘中鳙的天然饵料具有积极的指导作用。     

嗜肺军团菌效应蛋白质介导的新型泛素化过程

泛素化是真核细胞特有的蛋白质翻译后修饰方式,调节真核细胞内多种重要生理过程,例如蛋白质稳态、细胞周期、免疫反应、DNA修复以及囊泡转运等。鉴于泛素化对于生命活动的重要性,病原菌在与宿主细胞的长期进化过程中衍生出一系列针对宿主泛素化过程的效应蛋白质,调控宿主体内泛素化过程,从而构建有利于病原菌自身生长繁殖的内环境。嗜肺军团菌是一种革兰氏阴性菌,是军团菌肺炎的致病菌,能够引起发热和肺部感染,重型病死率高达15%~30%。Dot/Icm Ⅳ型分泌系统是嗜肺军团菌侵染过程中最主要的毒力系统。在侵染宿主细胞的过程中,嗜肺军团菌利用该分泌系统,分泌超过330种效应蛋白质,协助细菌在宿主胞内生存、增殖和逃逸。多种嗜肺军团菌效应蛋白质通过直接或者间接的方式对宿主泛素化过程进行调控。近年的研究发现,多种效应蛋白质可以介导不同于真核生物经典泛素化的新型泛素化过程。本文介绍了嗜肺军团菌效应蛋白质介导的新型泛素化过程的最新研究进展,为理解泛素化过程在嗜肺军团菌致病过程中的重要作用提供参考依据。     

广东地区嗜肺军团菌的扩增片段长度多态性分析

【目的】了解广东部分地区2002~2007年环境水中嗜肺军团菌的基因型及遗传学关系。【方法】参考欧洲军团菌感染工作组（the European Working Group for Legionella Infections, EWGLI）制定的分型草案（1.2版）,采用PstⅠ酶对我室保存的2株标准菌株及41株不同时间、不同地点的嗜肺军团菌环境分离株进行扩增片段长度多态性（amplified fragment length polymorphism, AFLP）分析,电泳图谱与EWGLI进行比对。【结果】AFLP分型结果稳定,重复性好;43株嗜肺军团菌,其不同来源菌株呈现多态性分布,经AFLP分析得到33个基因型,辨别力指数为99.79%,其中Kingmed AFLP 011为优势基因型。按Dice系数≥0.8,可分为18个群,Kingmed AFLP D群为优势群,占总菌株数的34.88%。由电泳图谱的相似性,初步推断存在EWGLI 001 Lugano型、002 Lugano、012 Rome、013 London、014 London型、015 Dresden型、021 Lyon等7个基因型,以及多个未报道的新基因型。【结论】广东地区嗜肺军团菌的基因型十分丰富,AFLP技术是其分子流行病学研究的有效手段。     

园林树木增湿降温生态功能评价方法

试验以吉林农业大学校园内的9种园林树木为研究对象,将树冠由外向内分为4个部位(分别记为表层A、外层B、中层C和内层D),分别测定各部位单位叶面积蒸腾降温量的变化规律,分析比较种内和种间不同部位单位叶面积增湿降温量的变化,以期探讨园林树木增湿降温生态功能评价的合理取样部位。结果表明:9种园林树木树冠各测定部位的单位叶面积增湿降温量均由树冠外围向树冠内部显著降低,树冠不同测定部位增湿降温量与平均值比较,种间SD和CV的变化大于种内。9个树种不同部位单位叶面积增湿量平均值为2.32 kg m-2d-1,降温量平均值为0.45℃。其中,表层A和外层B的增湿量较平均值分别提高了23.71%和10.77%,中层C和内层D分别较平均值下降了8.62%和26.46%;表层A和外层B的降温量较平均值分别提高了22.22%和11.11%,中层C和内层D分别较平均值下降了8.89%和26.67%;外层B和中层C平均增湿降温量为2.35 kg m-2d-1和0.46℃,与各测定部位平均值基本一致。9个树种各测定部位增湿降温量的偏离程度和和离散系数与平均值比较,外层B和中层C与各测定部位平均偏离程度接近,离散系数外层B最低。因此,在评价园林树木增湿降温生态功能时,提出用外层B或中层C偏向B点处的叶片作为取样部位更为合理。     

滩涂富营养池塘中浮游生物种群结构及其生态调控研究

本文研究了种植芦苇和菖蒲,放养鲢,接种有益微生物对滩涂富营养水体藻类和浮游动物的群落结构、数量、生物量等。不同处理藻的种类有差异,对照和放养鲢水体无隐藻门和黄藻门,其他两处理都有7门。种植芦苇、菖蒲等水生植物以及接种有益微生物都可以使水体藻类多样化,减少蓝藻生物量比例。放养鲢水体藻类种数减少,提高了蓝藻生物量的比例,优势种群变为铜绿微囊藻、针状蓝纤维藻、线形棒条藻等。对照和放养鲢处理水体原生动物种类较多,其生物量比例较高;接种有益微生物水体浮游动物数量最多、生物量最大,以轮虫类和枝角类为主。接种有益微生物大幅度地降低生态系统中总氮、氨态氮、总磷的浓度,其含量分别是对照的57.1%、42.7%、57.9%;同时可以降低COD值,提高溶氧水平和透明度。总之,种植芦苇、唐菖蒲等水生植物或接种有益微生物可以改善水体微生态机构和生态结构。       

冻干人用狂犬病纯化疫苗稳定剂的筛选

取同一批人用狂犬病纯化疫苗纯化液,分别加入筛选出的A、B、C和D稳定剂,按已确定的适宜冻干曲线进行冻干后,分别检测其安全、效力、外观、水分等,效力结果显示,使用A、B、D稳定剂的制品在37℃放置3个月,效价降低了48%～60%;使用C稳定剂的制品在37℃放置3个月效价仅下降了16.1%。表明C稳定剂为冻干人用狂犬病纯化疫苗适宜的稳定剂配方。     

复方嗜酸乳杆菌片联合三联方案根除幽门螺杆菌的临床研究

目的探讨复方嗜酸乳杆菌片联合三联方案根除幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)的疗效及不良反应。方法将143例H.pylori检测阳性的患者随机分为A1组(48例)、A2组(46例)和B组(49例)。B组给予三联方案(埃索美拉唑、阿莫西林、克拉霉素)根除H.pylori治疗,疗程10d。A1组、A2组分别在上述三联方案的基础上同时加用10d、20d的复方嗜酸乳杆菌片。治疗过程中观察并记录上述三组的不良反应发生情况,停药4周后查13 C呼气试验判别H.pylori根除是否成功。结果共133例患者完成治疗和随访,A1组、A2组、B组根除率按方案(PP)分析分别为65.9%、69.8%、63.0%,按意向性(ITT)分析分别为60.4%、65.2%、59.2%,无论按方案分析还是意向性分析三组根除率差异均无统计学意义(P0.05)。纳入三组的共143例患者均完成不良反应的随访,A1组、A2组、B组不良反应发生率分别为10.4%、8.7%、30.6%,三组相比差异有统计学意义(P0.05),其中A1组、A2组分别与B组相比差异有统计学意义(P0.05),A1组与A2组相比差异无统计学意义(P0.05)。结论三联方案加用10d、20d的复方嗜酸乳杆菌片未能提高H.pylori根除率,但可降低不良反应发生率。     

烟台养马岛潮间带大型海藻分布特征及环境影响因素

2010年4月—2011年3月对烟台养马岛潮间带大型海藻进行了逐月调查.在养马岛潮间带共设置了A、B两个点,对大型海藻物种组成、生物量以及与环境变化的关系进行了研究.结果表明: 调查区域共有大型海藻35种,其中红藻24种,占总数的68.6%;绿藻6种,占总数的17.1%;褐藻5种,占总数的14.3%.夏季优势种以褐藻和绿藻为主,秋、冬、春季优势种以红藻和褐藻为主,鼠尾藻在各季节中均为优势种.大型海藻生物量呈现夏季高、冬季低的特点,生物量最高值出现在6月,A、B采样点大型海藻生物量最小值分别出现在1月和11月,具有温带海域藻类变化特点.温度、营养盐和pH对大型海藻生物量有显著影响.