大豆乳清中蛋白质和异黄酮的超滤分离技术

研究了用超滤技术分离大豆乳清中的蛋白质和异黄酮的工艺条件. 结果表明,大豆乳清在超滤之前要进行预处理以减轻膜污染;通过2因素3水平正交试验,确定了最佳的预处理工艺：按大豆乳清中固形物含量的5%,向其中加入CaCl₂,并在85 ℃下加热15 min,在此条件下,蛋白质的沉淀率为49.8%,异黄酮的保留率为90.4%;通过单因素试验,确定了比较合适的超滤条件：选择切割分子量（MWCO）为10000的聚醚砜膜,超滤压力选择51～68 kPa,超滤温度选择30 ℃～40 ℃.在此条件下,大豆乳清中蛋白质的截留率为83.9%,而异黄酮的截留率为7.6%.     

超滤技术在生物分离中的应用

“超滤”、“膜分离”和我们日常生活,生产实践息息相关,如安全可用的净化水、血液透析或血液滤过人工肾、发酵产物的分离、牛奶浓缩等。超滤由于成本低．通量高．易于放大的优点,已得到广泛的应用。本文主要介绍了超滤技术在发酵液的澄清（固液分离）、生物产品的精制、药用蛋白的分离纯化以及质粒DNA的分离纯化中的研究进展和应用情况。     

分离纯化中蛋白质的不稳定性及其对策

分离纯化出高纯度有生物活性的蛋白质一直是一项艰巨的工作。在基因工程药物蛋白质的生产中,收率低和纯度低是亟待解决的关键问题。这里除了生物组份复杂、难以分离外,许多目标蛋白质自身活性的丧失也是一个重要原因。由于药物蛋白质昂贵的市场价格,回收率稍有提高就有可能带来巨大的经济效益,所以,有关蛋白质在分离纯化中的失活及其对策在近年来受到了极大的关注。1997年第十届欧洲生物技术大会上,蛋白质的稳定被单独列为一个专题。1999年在加拿大召开的第九届生物产品回收技术会议也对蛋白质的稳定性进行讨论。目前重点探索的是蛋白质失活的机制,采取相应的对策以保护活性,并在分离纯化中采用高效的分离纯化技术缩短操作周期,提高产物的活性回收率。     

分离纯化中蛋白质的不稳定性及其对策

分离纯化出高纯度有生物活性的蛋白质一直是一项艰巨的工作,在基因工程药物蛋白质的生产中,收率低和纯度低是亟待解决的关键问题。这里除了生物组份复杂、难以分离外,许多目标蛋白质自身活性的丧失也是一个重要原因。由于药物蛋白质昂贵的市场价格,回收率稍有提高就有可能带来巨大的经济效益,所以,有关蛋白质在分离纯化中的失活及其对策在近来受到了极大的关注。１９９７年第十届欧洲生物技术大会上,蛋白质的稳定被单称列为一     

用超滤法从猪血中分离纯化猪血红蛋白

为了给人工红细胞的研究提供较高纯度和浓度的血红蛋白,采用超滤膜分离的方法,通过研究分析,在一定超滤条件,从新鲜猪血中分离纯化得到猪血红蛋白。并应用SDS-PAGE凝胶电泳、紫外-可见分光光度计对纯化后的血红蛋白进行了鉴定分析。经分析,优化的超滤条件为:操作压力0.05Mpa、料液温度12℃;在此条件下分离纯化的猪血红蛋白,纯度达到了99%以上,浓度较纯化前提高了近20倍。     

超滤技术在Y群流脑原液纯化中的应用研究

目的:通过对比透析去酚与超滤去酚后原液的各项质量指标的差异,找到最为合适的操作方法,从而达到优化工艺的目的。方法:Y群流脑粗糖冷酚提取后,将酚提上清液平均分成4份,分别进行4组去酚工艺试验,制备成Y群多糖原液,并进行原液各项指标的检定。对比4组原液指标,并参考由粗糖到精糖的收率情况综合考虑确定最佳的纯化工艺。结果:300kd的超滤膜包超滤去酚工艺效果最好。     

聚合高分子电解质分离纯化蛋白质

聚合高分子电解质含有大量阳离子或阴离子,通过静电作用结合带相反电荷的蛋白质,生成聚合高分子电解质-蛋白质复合物,电解质-蛋白质复合物通过桥连作用或疏水作用形成沉淀颗粒;聚合高分子电解质的选择性沉淀作用受电解质的分子量、添加剂量、溶液离子强度和pH的影响。用高分子电解质从大规模的低浓度溶液中选择性地沉淀目的蛋白质,为生物工程的下游处理开辟了一条新途径。     

蛋白质分离纯化方法的研究进展

蛋白质作为生命物质基础之一,存在于自然界中复杂的混合体系中。蛋白质在细胞中的含量极低,将其从复杂体系中分离出来并保持其活性,难度较大,因此分离纯化蛋白质的方法受到生命科学领域广泛关注。本文首先阐述了蛋白质的预处理,其次阐述了蛋白质分离纯化的各种方法如沉淀、层析、离心等,重点阐述了蛋白质新纯化的各种原理,以及每种方法的适用范围。有助大家更全面、更彻底的了解蛋白纯化技术的发展,以期为今后开展蛋白质的制备及应用提供一定理论依据和实验指导。     

PEG蛋白质分离纯化的新方法

ＰＥＧ化蛋白质的分离纯化比较困难,本工作发现ＰＥＧ化蛋白质仍能被硫酸铵盐析,据此可以简单地将ＩＬ－２及ＰＥＧ化ＩＬ－２沉淀出来,而将有毒的活化ＰＥＧ等副产物留在溶液中。此方法效果理想而又十分简便。文献中未见报道。此外,实验还发现,在ＰＥＧ－ＩＬ－２与ＩＬ－２的混和液中加入一定量的ＰＥＧ后,二者之间溶解度差别增大,当用ＳｅｐｈａｃｒｙⅠＳ－２００柱分离时,先用含１０％ＰＥＧ,０．２５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ的缓冲液平衡洗脱ＰＥＧ－ＩＬ－２,再降低盐浓度洗下ＩＬ－２,即可使二者完全分开。过去要将ＩＬ－２与ＰＥＧ－ＩＬ－２分离开非常困难,本工作解决了这个问题,这点亦未见文献报道。     

重组蛋白质的分离纯化研究

随着基因技术的不断发展,重组蛋白质的分离纯化技术也得到了有效发展,很多学者与实验室都致力于重组蛋白质分离纯化技术的研究和试验。本文主要以层析技术为例,探讨最近几年基因重组蛋白质分离纯化技术的研究进展。     

重组蛋白质纯化技术

90年代以来 ,基因重组技术得到很大的发展 ,基因工程产品的分离纯化的成本约占其全部成本的 6 0 %～ 80 %,因此重组蛋白的分离纯化技术越来越重要。着重介绍了扩张柱床吸附层析技术 ,径向膜层析技术 ,灌注层析技术 ,液液萃取技术 ,置换层析技术和金属螯合亲和层析技术近年来进展情况以及它们的优缺点和应用范围。     

蛋白质的染料亲和色谱分离纯化

介绍了三嗪染料配基亲和色谱(包括高效亲和色谱)分离纯化蛋白质的基本原理和方法,并介绍了染料亲和色谱固定相制备方法及应用的最新发展。     

分离纯化对蛋白质活性的影响

在分离纯化中,蛋白质或多或少的受到与生理条件极不相同的溶液环境的有害影响。此影响也是蛋白质纯化过程中的一个最大问题之一。因而,在蛋白质的具体纯化过程中分析其活性受影响的主要因素以及采取一些相应的措施来对蛋白质的活性进行保护,只有这样才能提高蛋白质的纯度和活性回收率,降低生产成本,保证产品质量。     

生物分离中应用超滤的若干问题

本文对超滤技术应用中普遍存在着的诸多重要因素进行了讨论。有些内容在一般教材和方面中较少详细论述。本文从应用者角度分析了产率、吸附、消毒和保存、温控、活性问题、压力和秀过速率以及技术联用应该注意的问题,并将共与膜质量参数、膜配置选择和操作模式相关联。对活性生物样品的处理,文中给予了较多的讨论,并希望结合超滤技术自身特点,在选择和配置一节中,对系统的各组成部分进行部分进行配置优化。应用中,安全性操作也     

生物分离中应用超滤的若干问题

本文对超滤技术应用中普遍存在着的诸多重要因素进行了讨论,有些内容在一般教材和文献中较少详细论述。本文从应用者角度分析了产率、吸附、消毒和保存、温控、活性问题、压力和透过速率以及技术联用应该注意的问题,并将其与膜质量参数、膜配置选择和操作模式相关联。对活性生物样品的处理,文中给予了较多的讨论,并希望结合超滤技术自身特点,在选择和配置一节中,对系统的各组成部分进行配置优化。应用中,安全性操作也贯彻于各个问题的讨论之内。在最后,涉及超滤法进行分子量分级的问题,提出了参数上的建议 。     

层析技术在血液制品分离纯化中应用的探讨

随着市场需求的多元化发展,原采用低温乙醇法生产的血液制品在品种及质量上均已不能满足人们的需要。国外血浆分离过程中应用层析技术,显著地提高了血浆利用率及产品质量,并丰富了产品的种类,节约了经济成本。在我国分离技术起步较晚,血液制品的规模化生产仍以低温乙醇法为主。在分析国内外现有层析技术的应用现状的基础上,并对其主流层析工艺进行了简要综述,为我国改进现有血液制品的工艺提供参考依据。     

现代提取分离技术在食药用菌多糖分离纯化中的应用

详细综述了超声波法,酶解法,超滤法,透析法,色谱法等现代提取分离技术在食药用菌多糖分离纯化中的应用,简单阐述了各种技术的优缺点,并对其应用前景作了简要探讨。     

微生物蛋白质谷氨酰胺酶的初步分离纯化

蛋白质谷氨酰胺酶可以特异性地水解蛋白质和多肽的谷氨酰胺残基,研究了产吲哚金黄杆菌产生的微生物蛋白质谷氨酰胺酶的代谢曲线和初步的分离纯化。发酵过程中pH升高,氨浓度增加,到14 h时酶活达到最高为0.359 U/mL。发酵液离心去上清液经3 kD滤膜超滤4倍时,纯化倍数和得率都最高。超滤液加入4倍体积无水乙醇沉淀蛋白质,酶的得率最高为72.7%。沉淀用缓冲液复溶后,经过SP-Sepharose Fast Flow离子交换层析分离,得到单一峰。经过多步纯化后酶得率为31.72%,纯化倍数为124倍,经SDS-PAGE电泳鉴定为单一条带,分子量约为20 kD。     

基于计算机模拟的蛋白质分离纯化实验

利用数学建模的方法首次提出了衡量分离纯化效果优劣的定量指标——纯化效益;建立了便于应用推广的聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEG)和硫酸铵沉淀分离纯化模型,并以海芋过氧化物酶分离纯化为例,对模型进行求解、应用和检验,求解最优实验试剂用量.