超速离心技术

超速离心是生物学研究中的一项重要技术,用于细胞、亚细胞组分和生物大分子(如蛋白质、核酸等)的分离与分析。习惯上把每分钟4,000转的离心机称为低速离心机;每分钟20,000转的离心机称为高速离心     

薄层细胞涂片新方法在宫颈细胞学检查中应用的研究

目的：研究一种新的宫颈细胞薄层涂片方法,以提高传统手工涂片方法的制片质量。方法：随机选择的妇科门诊病人100例,随机分成2组,薄层细胞涂片组和手工涂片组,其中薄层细胞涂片组的刮片标本经过我们设计的双层滤网的过滤和分离液离心的步骤去除标本中的黏液、炎细胞和血细胞。这两组得到的涂片根据其细胞分布的均匀度及细胞重叠的多少,把涂片的结果分为满意、基本满意和不满意。结果：薄层细胞涂片组的涂片质量满意率（98％）高于手工涂片组的涂片质量满意程度（32％．P〈0．01）。讨论：薄层细胞涂片法在宫颈细胞学检查中的满意程度明显好于传统手工涂片（P〈0．01）,有统计学意义。效果稳定,适合在大范围内推广。薄层细胞涂片法相对于传统手工涂片有5大优点,大大提高了宫颈细胞学诊断的准确性。     

酶标抗原火箭免疫电泳法及其在蛇毒抗原成分含量测定中的应用

为解决目前蛇毒成份检测困难以及寻找一种可用于蛇伤快速鉴别诊断的方法,本研究建立了酶标抗原火箭免疫电泳法。本法结合了酶标法灵敏度高和火箭电泳操作简单的特点,对待测的同种抗原标记辣根过氧化物酶(酶标抗原),检测时把微量的酶标记抗原掺入被测样品中,在含多价抗血清的免疫电泳板进行电泳。最后用辣根过氧化物底物3.3′-二氨基联苯胺在板上直接显色,显色后观察到的免疫沉淀线高度与被测抗原含量呈正相关(r=+0.98)。采用本方法检测眼镜蛇毒细胞毒素和限镜王蛇毒 L-氨基酶氧化酶,细胞毒素的最低检测浓度为110ng/ml,氨基酸氧化酶为60ng/ml。比单向火箭免疫电泳法灵敏度高30倍。用同一原理的酶标记抗原融合电泳法监测L-氨基酸氧化酶的层析分离时,比酶活性法检测灵敏度高20倍。全部检测只需30分钟。初步观察商品眼镜蛇毒抗血清可对蛇毒15种成分产生免疫沉淀线,眼镜蛇的细胞毒与同科异科蛇毒的细胞毒素无交叉免疫反应。因此,采用本法可以确定不同蛇种蛇毒中所含的特异性抗原,获得蛇伤鉴别诊断的依据。     

介绍一种制备细胞膜的简易方法

为进行细胞膜的生物化学分析,必先分离出纯净的细胞膜.选用哺乳动物红细胞制备细胞膜是目前常用的方法,一般多在一步溶血法的基础上,用高速离心分离制备.由于高速离心机设备目前国内尚不普及,我们尝试在低速离心(4℃,1,200×g,离心45分钟)条件下,进行人红细胞影泡制备.所谓“影泡”,即哺乳动物红细胞溶血去除血红蛋白后,分离到的细胞质膜.成熟的哺乳动物红细胞中没有通常真核细胞所含的任何细胞器.经制备,容易得到纯净的细胞膜,并且材料来源方便,故红细胞影泡是目前研究细胞膜结构功能时常用的一种膜制剂.     

辣根过氧化物酶标记抗体在免疫定位上的应用 Ⅱ.肝细胞内乙型肝炎表面抗原的电子显微镜定位方法

本文介绍辣根过氧化物酶标记抗体对肝细胞内乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的免疫电镜定位方法。电镜样品制备,可采用酶标免疫显色组织切片的再包埋、或直接利用超薄切片进行酶标免疫显色定位。对实验中应注意的一些问题进行了讨论。在电子显微镜下初步观察了HBsAg 阳性肝细胞中HBsAg 的分布和形态,并发现在光学显微镜下,辣根过氧化物酶标免疫定位HBsAg 完全为阴性部位的肝细胞中,有的细胞胞浆内或扩大的内质网池内,尚可见到少量散在的HBsAg 与酶标抗体的沉积物,提示电镜观察有更好的灵敏性。     

FISH检测宫颈脱落细胞与宫颈组织中hTERC基因制片方法的研究

目的:探讨FISH实验中用直接涂片法、盐水制片法、TCT制片法、低渗滴片法制片法和宫颈切片组织取材方法对于FISH成功率的影响.方法:收集2008年3月至2009年3月青岛大学医学院附属医院妇科162例宫颈脱落细胞标本及2008年5月至2009年3月手术切除或活检的宫颈组织63例,用荧光原位杂交(FISH)方法检测hTERC基因.结果:直接涂片法、盐水制片法、生理盐水法、TCT制片法和石蜡包埋组织切片法hTERC基因杂交成功率分别为58.3%,65%,55%,87.1%,85.7%,TCT制片高于其它四组;低渗滴片法背景干净度、细胞形态、裸核数量满意度最高;TCT制片法细胞数量满意率最高;石蜡包埋组织切片法荧光信号满意率最高.结论:在检测hTERC基因的宫颈癌筛查中,TCT制片法明显优于其他方法,而在指导宫颈病变及宫颈癌的治疗中,石蜡包埋组织切片法的染色体破坏最小,实际意义更大.     

改良离心集菌法检测痰内抗酸杆菌的研究

目的研究改良离心集菌法,测定其是否能使抗酸杆菌的诊断更为安全简便。方法选取传统的抗酸杆菌直接涂片法1＋和1＋以下的阳性标本100例,用改良离心集菌法复检;再配制浓度为10000、5000、1000和100条／mL的痰菌液各100份,分别用直接涂片法和改良离心集菌法检测其检出限和检出率;最后以日常门诊标本1036例分别用两种方法进行临床应用检测和分析。结果100例直接涂片法1＋和1＋以下的阳性标本改为改良离心集菌法复检,结果为4＋有93例、3＋为7例;直接涂片法和改良集菌法的检出限分别为1000和100条／mL;10000、5000、1000和100条／mL的痰菌液用直接涂片法和改良离心集菌法检测其检出率分别为97％、53％、5％、0％和100％、100％、94％、7％。1036例日常标本用直接涂片法和改良集菌法检测的阳性率分别12．74％和16．47％。结论改良离心集菌法的阳性率高于直接涂片法,检出限低于直接涂片法,不但大大改善了实验室和实验人员生物安全,还弥补了直接涂片法中对结核杆菌在痰液中分布不均一性带来的漏检的方法局限性,因此改良离心集菌法是安全、简便的抗酸杆菌实验室值得推广使用的新诊断方法。     

蔗糖密度梯度离心法测定蛋白质的沉降系数

沉降系数(S值)是蛋白质的一个重要物理常数,一般在分析超迷离心机中进行分析。由于分析超速离心机需要配备特殊的分析转头和监测记录沉降粒子在离心过程中行为的装置,价格昂贵,一般实验室难以配备。Martin和Ames使用制备超速离心机,采用蔗糖密度梯度超离心法,测定了细菌组氨酸生物合成的有关酶的沉降系数,取得了较好的效果。我们参照该方法,并作了某些改进,现报告如下。     

GLL-18高速冷冻离心机

随着科学技术的发展,离心机的使用日趋广泛。除生物学、化学、医药卫生、食品等传统使用离心机的部门之外,在某些国防尖端部门也开始使用离心技术。因而各主要工业国家都对离心机的研制和生产给予一定的重视,并建立了自己的离心机系列,包括低速、高速和超速。高速冷冻离心机是离心机系列中不可缺少的一个组成部分。我国各科研和生产部门所用高速离心机基本依赖进口,这不仅要花费国家的大量外汇,而且仪器发生故障时,修理比较麻     

一种用于染色体观察的改良绒毛细胞直接制备法

为弥补羊水检查时间过晚之不足,1984年 Simoni利用绒毛标本直接制备法观察染色体获 得成功,此后,即日益为人们所注目。我们改良 了绒毛细胞直接制备方法,以胶原酶代替乙酸 处理,对绒毛细胞直接制备法（简称乙酸法）和 改良法（简称胶原酶法）进行了比较。大致过程 如下： 取妊娠6-7周人流绒毛组织50mg左 右,严格挑选后,生理盐水洗净,移人含最终浓 度0.5,ug/ ml秋水仙素的RPMI 1640培养液中 孵育1小时（pH7.2, 370C),然后分成两份。一 份按乙酸处理法进行制片：(1)去除培养液,加 3m11.5外拘椽酸钠溶液低渗15分钟;(2）加人 数滴3:1的甲醇：冰乙酸预固定10分钟;(3）吸 弃固定液,重复固定巧分钟;(4)吸弃固定液, 加入1m160并乙酸水溶液,处理2分钟,即追加 纯甲醇2ml; (5)吸取细胞悬液于离心管内离心 (1500-1800rpm); (6）冰水滴片,风干,Giemsa 染色。另一份按改良的胶原酶法制备染色体,大 致如下：(1)弃培养液加人15ng/ml胶原酶4ml, 孵育15-20分钟（370C); (2）加人4m1生理盐 水,离心（1000rpm),分钟,弃上清液,经0.75% 氯化钾4 ml低渗20分钟（370C),用甲醇冰醋 酸固定液lml预固定后,依上法离心,弃上清 液;(3）甲醇冰醋酸（3:1)重复固定15分钟,混 匀后自然沉降,吸上层细胞悬液离心,如此重复 二次后,再固定15分钟,气干法制片。28例实 验结果见表1,无论是可数分裂相,还是完整分 裂相出现率,胶原酶法均比乙酸法为高,二者间 有显著差异。     

人动脉平滑肌细胞HDL受体酶联测定法

利用辣根过氧化物酶（HRP）与纯化的高密度脂蛋白（HDL）交联,并将人动脉平滑肌细胞（SMC）固定于酶标板上,成功地建立了人动脉平滑肌细胞HDL受体的酶联测定法．1材料与方法1．1材料辣根过氧化物酶（HRP,RZ=3.0,Sigma）;96孔酶标板（Sigma）;培养基DMEM（GIBCO）．1．2人动脉平滑肌细胞培养培养按本室汪浩川[1]方法体外培养．1．3去apoE-HDL3制备人血清去apoE-HDL3（d=1.20～1.175）按改进的磷钨酸钠-氯化镁沉淀密度梯度超速离心法制备[2]．然后按张林华等[3]一次性密度梯度超速离心分离法分离HDL．SDS-PAGE电泳鉴…     

重组胰酶在口服轮状病毒活疫苗制备中的初步应用

目的探究重组胰酶替代猪源胰酶在轮状病毒疫苗制备中的可行性。方法确立3种重组胰酶的最佳工作浓度;观察3种重组胰酶和猪源胰酶消化MA104细胞并连续传10代(P1~P10),根据消化时间、消化后细胞总数、细胞活率、细胞生长状况、细胞形态变化等方面进行考量比较;观察轮状病毒LH9株经4种胰酶活化,分别接种对应胰酶传代的MA104细胞上培养,通过病毒滴度(lg CCID_(50)/mL)及RNA-PAGE检测,分析重组胰酶替代猪源胰酶在轮状病毒疫苗制备中的应用。结果连续P1~P10代后3种重组胰酶和猪源胰酶在细胞总数、细胞活率及细胞生长状况,差异均无统计学意义(P0.05),显微镜观察细胞形态无明显改变。轮状病毒LH9株经不同胰酶活化,接种MA104细胞P1~P10代培养后,病毒滴度差异均无统计学意义(P0.05),且RNA-PAGE电泳图谱未见差异。结论初步应用试验表明3种重组胰酶均可替代猪源胰酶用于轮状病毒疫苗的制备。     

实验室常用离心技术与应用

离心机是生物学教学、科研领域中常见的仪器,离心技术也是分离、制备、纯化生物样品的重要手段。沉淀离心法、差速离心法、密度梯度离心法是实验室常用的3种离心技术,对其工作原理及应用范围做出简单的分析和比较。     

介绍一种简单适用的胸腹水脱落细胞石蜡包埋法

常规胸腹水脱落细胞检测多采用直接涂片法,该法简便、快速,在临床上得以广泛应用。但在实际工作中,我们发现直接涂片常出现细胞重叠,堆积,厚薄不均匀,细胞结构及背景不清晰,细胞量少,细胞脱落等现象,往往导致癌细胞检出率低。特别是某些需要通过免疫细胞化学进行鉴别诊断的病例,如转移性腺癌细胞与问皮源性细胞,诊断前一般并未预留涂片,在进行HE染色涂片观察后,     

浅谈超速离心技术在生物学中的应用

超速离心机是一种利用高速旋转的转头所产生的强大离心力场,对样品进行分离、提纯、分析的精密仪器。从1926年瑞典物理学家Sydberg研制成功第一台超速离心机以来,至今已有五十多年的历史。超速离心机已有小规模的试制到成批地进行商品生产。由于超速离心机的产生和超速离心技术的发展以及电子显微镜的作用,人们对细胞的结构和功能的了解越来越清楚了。过去人们只能在电子显微镜中看     

蝙蝠血清IgG的纯化及兔抗蝙蝠IgG酶标抗体的制备

目的纯化蝙蝠血清IgG,制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体。方法采用亲和层析纯化法纯化蝙蝠血清IgG,SDS-PAGE电泳鉴定蝙蝠IgG纯度。免疫大白兔制备兔抗蝙蝠IgG抗血清,免疫双扩散法测定抗血清效价,亲和层析纯化法纯化抗血清IgG。用改良过碘酸钠标记法制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体,直接ELISA和Western blot法对兔抗蝙蝠IgG酶标抗体进行工作浓度测定。结果纯化的蝙蝠血清IgG,其SDS-PAGE测定纯度大于95%;免疫大白兔所制备的抗血清免疫双扩散效价为1∶64;用改良过碘酸钠标记法制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体,其直接ELISA和Western blot工作浓度分别为1∶12800和大于1∶2000。结论制备了蝙蝠血清IgG的抗血清和酶标抗体,为蝙蝠的血清学检测体系提供了技术和资源储备。     

罗非鱼鱼皮酶解液对体外培养大鼠骨髓基质细胞的影响

目的:观察两种罗非鱼鱼皮酶解液对大鼠骨髓基质细胞的影响。方法:用密度梯度离心和贴壁筛选的方法获得骨髓基质细胞,用碱性磷酸酶染色法观察是否成功诱导骨髓基质细胞向成骨细胞分化,并分别采用MTT法和PNPP法测定两种酶解液对骨髓基质细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响。结果:密度梯度离心和贴壁筛选可得到较为均一的骨髓基质细胞。这些骨髓基质细胞诱导后可以向成骨细胞分化。两种酶解液作用于骨髓基质细胞时,在浓度0.1mg·ml~(-1)均可以促进骨髓基质细胞增殖,在浓度0.1mg·ml~(-1)1,0.01mg·ml~(-1)均可以提高骨髓基质细胞碱性磷酸酶活力。实验用两种酶解液的三个浓度与成骨诱导液协同作用于骨髓基质细胞时,均没有促进细胞增殖和提高碱性磷酸酶活性的显著作用。结论:两种酶解液可以促进骨髓基质细胞增殖,提高细胞碱性磷酸酶活力;与成骨诱导液协同作用于骨髓基质细胞时,对细胞增殖和碱性磷酸酶活性没有显著促进及提高作用。     

透析式洗涤冰冻红细胞去除白细胞和血小板的方法

目的：用低速离心的方法减少悬浮红细胞中自细胞和血小板的数量,使透析式洗涤机洗涤的冰冻红细胞中白细胞和血小板的残留量小于1％。方法：分别选用低速离心（700和500r／min）和常规离心（3800r／min）全血制备悬浮红细胞,计算白细胞和血小板的清除率;甘油低温冰冻保存,透析式冰冻红细胞洗涤机洗涤冰冻红细胞,对洗涤后的红细胞进行质量检测。结果：500r／min离心后白细胞和血小板的清除率（％）分别为53.82±6.83和85.23±4.21;洗涤后的冰冻红细胞中白细胞和血小板残留量（％）分别为0.843±0.058和0.903±0.035。700r／min离心后白细胞和血小板的清除率（％）分别为23.38±2.36和62.61±3.82;洗涤后的冰冻红细胞中白细胞和血小板残留量（％）分别为0.983±0.024和1.021±0.045。3800r／min离心后白细胞和血小板的清除率（％）分别为9.82±4.12和6.39±3.26;洗涤后的冰冻红细胞中白细胞和血小板残留量（％）分别为3.839±2.896和3.528±2.689。结论：用500r／min离心全血制备的悬浮红细胞,经甘油低温冻存,透析式洗涤机洗涤后,血小板和白细胞的残留量等各项指标均符合国家标准。     

动物骨髓细胞染色体标本制备失败的原因分析

旨在对动物骨髓染色体标本制备失败的原因进行分析并提出解决的方法。在对动物骨髓染色体标本制备中,被选取动物的健康、免疫力情况,秋水仙素的用量,低渗的温度及时间,离心速度,细胞悬液的浓度以及摘片的技巧,染液的pH值均可影响标本的好坏。特别是秋水仙素和低渗操作对制片效果影响最大。针对这些因素采取相应的解决方法,掌握关键步骤的操作,避免不利因素的影响,就能取得良好的制片效果。     

一种能避免因断轴造成机器损坏的离心机主轴系统

HSC—20R型高速冷冻离心机从1979年开始研制,1981年通过鉴定并获吉林省人民政府科技成果二等奖,现由图们市离心机厂生产,已为国内三十多个单位采用。该机最高转速为20,000rpm,可用多种转子,并带冷冻系统。其主轴系统具有特殊结构,不会因断轴造成机器损坏。本文将先对该机作一简介,然后重点介绍具有特殊结构的主轴系统。一、HSC—20R型高速冷冻离心机简介此离心机是在GDL—Ⅱ—S型离心机的基础上改进而成的。GDL—Ⅱ—S型机是1964年研制的,稍加简化改动后由现北京市医用离心