高效液相色谱法测定山楂叶中熊果酸含量的研究

本文建立了一种可靠性高、重现性好的高效液相色谱(HPLC)测定山楂叶中熊果酸含量的方法,在测定中采用富集和固相萃取组合纯化工艺去除干扰物质。高效液相色谱测定条件为Hypersil(ODS)色谱柱,流动相为甲醇:0.2%磷酸二氢钠(90∶10,V/V),检测波长210nm,流速0.8mL/min。熊果酸浓度在100~800μg/mL与峰面积存在良好线性关系(r2=0.9992),该方法准确可靠,日内稳定性标准偏差在0.6%~1.5%,日间稳定性标准偏差在0.7%~2.6%。为不同产地山楂叶中熊果酸含量建立有效的分析方法。     

离子色谱法对甲硝唑片中亚硝酸盐含量的测定

为检测甲硝唑片中的亚硝酸盐含量,寻求科学合理的质量控制方法,本研究拟采用离子色谱法定量分析国药准字H20143031(青海绿色药业有限公司)、国药准字H64020164(宁夏金太阳药业有限公司)、国药准字H37021096(山东仁和制药有限公司)等三个企业生产的甲硝唑片中亚硝酸盐的含量,以亚硝酸根标准品为对照,制备甲硝唑片样品溶液,进样体积为100μL,分别计算分离度和理论塔板数检测系统可用性,绘制回归曲线得回归方程,检验该方法的精密度、重复性及稳定性,测定定量限,检测回收率和样品含量。结果显示,该方法检测亚硝酸根分离度2.5,理论塔板数3 000,该色谱峰系统可用;所得回归方程为y=11.696x-0.015 8,r=0.999 9,线性关系较好,精密度测定RSD为0.7%,重复性RSD为0.8%,稳定性RSD为0.7%,定量限为0.004 1μg/m L,平均回收率为99.0%,RSD为0.32%,说明该方法准确可靠;3个企业生产的甲硝唑片中亚硝酸盐含量分别为青海绿色药业有限公司(2.016μg/片)、宁夏金太阳药业有限公司(1.989μg/片)、山东仁和制药有限公司(2.015μg/片)。说明采用离子色谱法检测甲硝唑片中的亚硝酸盐含量,简便、准确且快速,值得推广应用。     

硫酸铜络合法测定枸橼酸钾含量

目的:确定测定枸橼酸钾缓释片中枸橼酸钾含量的方法.方法:利用枸橼酸盐与Cu2+的络合物在紫外区有特定吸收,测定枸橼酸钾缓释片中枸橼酸钾的含量.结果:枸橼酸钾与硫酸铜形成络合物时最大摩尔比为1:1,枸橼酸钾浓度在10.78～53.9 ug/ml范围内,测定波长为(240±2)nm,吸收度与浓度呈良好线性关系,平均回收率为98.1%,RSD=1.85%(n=9).结论:方法、简单、准确,可作为枸橼酸钾缓释片中枸橼酸钾含量测定方法.     

肌苷酶电极生物传感器

为了构建肌苷酶电极生物传感器,以固定化核苷磷酸化酶(EC 2.4.2.1)、黄嘌呤氧化酶(EC 1.2.3.2)与过氧化氢电极组成电流型酶电极生物传感器,用于检测肌苷片中的肌苷,其输出电流可达500nA.结果发现,肌苷测定的线性范围为1-268 mg/L,精度:RSD小于0.14%,响应时间:60 s,使用寿命大于25 d,实际测定肌苷片中肌苷含量回收率:100.8%.由此表明:采用双酶电极法测定肌苷片中的肌苷含量,由于酶促反应专一性高、样品不需分离直接进样分析、处理条件温和、反应时间短暂因而结果较为可靠.     

北山楂叶与云南山楂叶中总黄酮与金丝桃苷含量的比较

目的:比较北山楂叶和云南山楂叶中总黄酮和金丝桃苷的含量.方法:以芦丁为对照品,采用紫外-可见分光光度法在500nm波长处测定总黄酮的含量;以金丝桃苷为对照品,采用高效液相色谱法,用C18色谱柱,以乙腈-甲醇-四氢呋喃-0.5%冰醋酸溶液(1:1:19.4:64.2)为流动相,检测波长为363nm,测定金丝桃苷的含量.结果:北山楂叶和云南山楂叶中总黄酮及金丝桃苷的含量分别为7.70%和6.79%,0.143%和0.289%.结论:北山楂叶中总黄酮的含量高于云南山楂叶,而金丝桃苷的含量则刚好相反.     

HPLC法测定大果山楂果实中八种酚酸类成分的含量

建立HPLC法同时测定大果山楂果实中原儿茶酸、绿原酸、二氢咖啡酸、咖啡酸、根皮酸、p-香豆酸、阿魏酸和肉桂酸的方法,并通过HPLC法分析这八种酚酸在不同产地大果山楂果实中的含量。采用ZORBAX SB-C18色谱柱,以甲醇/1.5%甲酸水溶液(v/v)为流动相,梯度洗脱,柱温35℃,流速1.0 m L·min~(-1),检测波长280、320 nm。结果表明:(1)在线性范围内八种酚酸质量浓度与色谱峰峰面积的线性关系良好,相关系数均0.997,检出限0.08～0.20μg·m L~(-1),定量下限0.27～0.67μg·m L~(-1),变异系数均5.0%,加标回收率99.3%～103.3%;(2) 10个不同产地的大果山楂果实中酚酸含量丰富,均检出原儿茶酸、绿原酸、二氢咖啡酸、咖啡酸、根皮酸、阿魏酸和肉桂酸七种酚酸,其中,二氢咖啡酸、根皮酸、阿魏酸均为首次检出,以绿原酸为主(8 410.2～13 826.7μg·g~(-1)),占总酚酸的80%以上,总酚酸的质量分数在10 187.8～15 583.9μg·g~(-1)之间,其中广西百色靖西和桂林恭城产的果实总酚酸质量分数相对较高,均大于15 000μg·g~(-1)。综上结果表明,该研究的HPLC法适用于大果山楂果实中酚酸含量的测定,可为大果山楂优良品种的选育、产品质量控制及深度开发利用提供方法和科学参考。     

高效亲和色谱法测定牛初乳加钙咀嚼片中免疫球蛋白IgG的含量

目的:建立高效亲和色谱法(HPAC)测定牛初乳加钙咀嚼片中免疫球蛋白IgG含量的方法。方法:采用HI-Trap Protein G HP亲和色谱柱(1 mL)色谱柱,以0.05 mol/L磷酸盐缓冲液和0.05 mol/L的甘氨酸-盐酸缓冲液为流动相,流速0.4 mL·min-1,检测波长280 nm,柱温30℃。结果:IgG含量在0.1502~0.7512 mg/mL浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 9);平均回收率为98.5%,RSD为1.2%(n=6)。结论:方法简便、快速,重现性好。可作为牛初乳加钙咀嚼片的质量控制方法。     

HILIC-MS/MS技术同时检测蛹虫草中虫草素、虫草酸、腺苷和肌苷含量的方法学

蛹虫草是我国具有极高药用价值的滋补中药材。对蛹虫草成分的含量进行准确的定性定量分析,可为相关产品质量控制、筛选高活性蛹虫草及进一步研究蛹虫草的功效提供技术手段。建立一种灵敏稳定的亲水作用色谱法-串联质谱(HILIC-MS/MS)方法,同时对蛹虫草中虫草素、虫草酸(D-甘露糖醇)、腺苷和肌苷的含量进行测定。研究发现其线性范围分别为0.02～5μg/mL(R~2=0.995 3)、0.2～50μg/mL(R~2=0.999 4)、0.002～0.5μg/mL(R~2=0.997 0)和0.002～0.5μg/mL(R~2=0.995 0)。采用HILIC-MS/MS技术,测定结果精密度小于10.0%,准确度在8.0%左右,具有较好的特异性、灵敏度和重现性。     

16种中草药的营养价值

为了研究中草药饲料添加剂的作用机制,测定了16种常用中草药中常规营养成分、常量和微量元素及氨基酸的含量。结果表明,韭菜籽中总能(23.33 M J/kg)、粗脂肪(21.19%)、粗蛋白(26.39%)、铜(13.26 mg/kg)和锌(45.91 mg/kg)的含量均最高;猪苓中铁(2116.90 mg/kg)和粗灰分(19.91%)的含量均最高。各种中草药中氨基酸特别是必需氨基酸含量较高,韭菜籽和黄芪中除蛋氨酸、半胱氨酸和酪氨酸外的其它14种氨基酸的含量均相对较高,特别是山楂中谷氨酸、精氨酸和天门冬氨酸的含量分别为4.23%、1.94%和1.44%;当归中精氨酸的含量远高于其它中草药,达2.26%。本结果为进一步研究中草药资源在饲料中的应用提供了一定的理论依据。     

青霉素对草莓组培苗硝酸还原酶活性的影响

本实验利用植物组织培养的方法,在基本培养基中添加不同浓度的青霉紊对草莓进行根的诱导,以测定植株的 NR 活性。结果表明:实验剂量范围内,其 NR 活性随青霉素浓度增加呈正相关,同时发现草莓体内 NR 主要存在于地上部分。本实验设两个处理:MS 青霉素50mg/1;MS 青霉素100mg/1;对照 MS,各80瓶,在无菌条件下,分别取草莓组培丛芽接种于上述培养基中70天后进行 NR 活性的测定:取草莓组培植株0.5克,置三角瓶中,各瓶中分别加入5ml 0.1M/L 硝酸缓冲液,5ml 0.2M/L     

复方利血平氨苯蝶啶片采用RH-HPLC法同时测定其4种有效成分的含量

目的:通过RH-HPLC法准确并同时测定复方利血平氨苯蝶啶片中4种有效成分(包括氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪、氨苯蝶啶和利血平)的含量。方法:通过RH-HPLC法测定其4种有效成分含量,色谱柱Eclipse XDB-C18;流动相:0.01 mol/L庚烷磺酸钠溶液(用冰醋酸将其PH值调整为3.0);甲醇(40:60);检测波长:265nm;流速:0.8 ml/min。结果:氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪、氨苯蝶啶线性范围为0.04~0.25 mg/ml,利血平线性范围为0.5~2μg/ml;4种有效成分回收率96%~105%,平均回收率102%。结论:采用RH-HPLC法能够准确、简单、迅速的同时测定复方利血平氨苯蝶啶片中氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪、氨苯蝶啶和利血平的含量,因此该种方法能够用于测定复方利血平氨苯蝶啶片的含量。     

高效液相色谱法检测格列齐特缓释片中格列齐特含量的分析

目的采用高效液相色谱法对格列齐特缓释片中的格列齐特含量进行检测。方法用型号为Hypersil ODS2的250mm×4.6mm液相色谱柱,流动相为甲醇-水(60:40,磷酸调至pH 3.3),填料颗粒直径为5μm,检测波长为228nm,流速为1.0ml/min。结果格列齐特在0.6~6.0μg/ml浓度范围内呈良好的线性关系,平均回收率为99.32%,RSD=1.28%。结论应用高效液相色谱法对格列齐特缓释片中格列齐特含量进行测定,具有操作简便、重现性好,可用于该制剂格列齐特含量测定。     

HPLC法测定甘薯叶片中的叶黄素

建立甘薯叶片中有效成分叶黄素含量的高效液相色谱测定方法,以寻求含量高的甘薯品种。采用Waters SunFire^TM C₁₈(150 mm×4.6 mm,5 μm )色谱柱;以甲醇—水为95:5(V/V)为流动相,流速为0.8 mL·min^-1;检测波长为445 nm;外标法定量。此色谱条件下,叶黄素含量在5~100 μg·mL^-1范围内时,与峰面积呈线性关系;样品平均回收率为99.5%;相对标准偏差 (RSD)为1.9%(n=5)。该方法灵敏、准确、专属性强,适用于甘薯叶片中叶黄素的测定;大部分供试品种间存在显著差异,其中以苏薯8号的含量最高。     

HPLC测定马来酸氯苯那敏片中的有关物质

目的:建立测定马来酸氯苯那敏片中有关物质的HPLC法.方法:C18色谱柱(250mm×4.6mm,粒度:5μ m),甲醇-0.03mol/l磷酸二氢钾(70:30)为流动相;流速:0.7ml/min;检测波长:262nm.结果:三批样品(080201、080202、080203)对应的有关物质量分别是0.14%、0.10%、0.09%.结论:本法简便准确,可用于测定马来酸氯苯那敏片中的有关物质.     

基于纳米磁珠和双标记抗体的玉米赤霉烯酮快速、高灵敏检测方法的建立及应用

玉米赤霉烯酮(zeralenone,ZEN)具有雌激素活性,主要污染谷物和饲料,大量聚积可导致流产和死胎,给动物和人类健康带来严重威胁。本研究通过将ZEN偶联抗原ZEN-BSA包被于纳米磁珠(magnetic nanoparticles,MNPs),制备纳米磁珠-偶联抗原复合物(MNPs-BSA-ZEN),同时使用金颗粒(Au nanoparticles,AuNPs)和辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)双标记的ZEN单克隆抗体,建立新型酶联免疫检测方法(MNPs-HRP-AuNPsIC-ELISA)。检测下限(IC10)达到0.03ng/mL,检测区间(IC20–IC80)为0.05–0.89ng/mL,半数抑制率(IC50)为0.22ng/mL,与ZEN类似物(α-zearalanol、zearalanone、α-zearalenol、β-zearalenol和β-zearalanol)的交叉反应性依次为19.2%、11.7%、8.3%、1.2%和4.3%,与黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、伏马毒素B1、桔青霉素和展青霉毒素几乎不存在交叉反应。在玉米、面粉和大豆样本中的加标回收率可达81.6%–113.5%,与LC-MS/MS同时对天然样本中ZEN含量的检测结果表明,两种方法相关性良好。本研究建立的MNPs-HRP-AuNPs IC-ELISA具备快速和高灵敏的双重优势,也可为其他霉菌毒素精准检测技术的开发提供参考。     

樟树叶挥发性成分研究

通过GC/MS方法,对湖南樟树嫩叶、老叶以及枯叶挥发油的成分和抗氧化性能进行了研究,分析鉴定了其中含量占95%以上的31个化合物.结果表明:嫩叶中以Copaene(28.55%)、石竹烯(25.81%)和α-石竹烯(12.69%)为主要成分;老叶挥发油以芳樟醇含量最高(78.30%);枯叶挥发油主含石竹烯(38.64%...     

亚高山针叶林土壤有机层有效氮动态及其对外源C、N增加的响应

为了解川西亚高山针叶林土壤有机层有效N的动态及其对外源C、N增加的响应,2005年4～10月采用人为施加C、N的控制实验方法,研究了川西亚高山紫果云杉(Picea purpurea Masters)林和岷江冷杉(Abies faxoniana Rehder & E. H. Wilson)林下土壤有机层(OL)的半分解层(FL)和完全分解层(HL)及矿质土壤层(MS)有效氮(NH+4-N + NO-3-N)动态及其对外源C、N的响应.云杉和冷杉林FL和HL的有效氮含量均显著高于MS.云杉林FL、HL和MS的NH+4-N分别为总有效氮含量的77.4%、72.4%和76.6%,而冷杉林分别为65.2%、57.6%和67.2%.有效氮和NH+4-N含量均以10月份最高,而NO-3-N含量以8月份最高.外源C输入使云杉林土壤FL、HL和MS有效氮含量提高了14.6%、21.2%和28.0%,使冷杉林提高了16.7%、25.3%和5 2%.外源N输入使云杉林土壤FL、HL和MS有效氮含量提高了53.9%、11.6%和13.2%,冷杉林提高了14.2%、23.8%和50.5%.OL对外源C、N输入的响应比MS更敏感,且云杉林大于冷杉林.处理时间越长,外源C、N输入对OL和MS有效氮含量的影响越大.     

UPLC-MS法测定羊耳菊中6种成分的含量

建立了UPLC-MS/MS同时测定羊耳菊药材中东莨菪苷、1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸6个成分含量的方法。采用Waters BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱,用0.1%甲酸乙腈溶液-0.1%甲酸水溶液作流动相,梯度洗脱,电喷雾电离源(ESI),以多反应离子监测(MRM)检测。6种成分分别在0.058~42.000、0.178~129.630、0.087~63.400、0.288~69.930、0.172~125.500、0.184~134.130μg/m L浓度范围线性良好,平均回收率为97.84%~105.67%(RSD1%)。稳定性,重复性及精密度良好,本方法能简便、快捷、有效的测定羊耳菊药材中多种成分含量,为羊耳菊药材的全面质量控制提供了新的方法。     

珠子参地上部分氨基酸测定及营养评价

对珠子参茎、叶、花的氨基酸组成与含量进行测定和营养评价分析。结果表明,珠子参茎、叶、花中均含有17种常见氨基酸,氨基酸总量分别为3.73%,14.80%和8.72%;珠子参的茎中必需氨基酸与总氨基酸的比值(E/T)为0.39,必需氨基酸与非必需氨基酸的比值(E/N)为0.64,叶中E/T为0.41,E/N为0.71,花中E/T为0.39,E/N为0.63,氨基酸配比较为合理;珠子参茎、叶、花中蛋氨酸+胱氨酸均为第一限制氨基酸;珠子参茎、叶、花中均含有γ-氨基丁酸,含量分别为0.12%,0.26%和0.16%,叶片中γ-氨基丁酸的含量最高。     

高效液相色谱-串联质谱检测基因组DNA甲基化方法的建立

目的:建立高效液相色谱-串联质谱(HPLC-ESI-MS/MS)检测基因组DNA甲基化水平的方法。方法:以5-mdC和dG为标准品,采用全自动高效液相色谱系统进行分离,串联电喷雾质谱检测,选择多反应监测模式(MRM)测定标准品,绘制标准工作曲线。结果:在MRM模式下选取5-mdC(m/z 241.9→126.3)和dG(m/z 268.1→152.3)分别作为定量检测的母子离子对,各化合物能实现良好的基线分离;5-mdC和dG碰撞能均为15 eV,去簇电压分别为40和45 V,最低定量限分别为1.65和2.47 fmol;标准品的响应值比为90%~110%;5-mdC含量的天内相对标准偏差和天间相对标准偏差均小于8%。结论:HPLC-ESI-MS/MS是能应用于检测基因组DNA甲基化的一种高通量、高准确率、高分辨率、高灵敏度且重复性好的方法。