基体辅助激光解吸电离质谱法及其应用

基体辅助激光解吸电离质谱是近几年才发展起来的一种新技术,它在生命科学研究中具有广阔的应用前景．对基体辅助激光解吸电离质谱技术的基本原理,运用基体辅助激光解吸电离质谱法研究蛋白质分子量的测定,蛋白质混合物的分离鉴定以及用基体辅助激光解吸电离质谱技术进行超快速的蛋白质序列分析和DNA序列分析的可行性和存在的问题作了介绍和讨论．     

序列搜索算法在多肽质谱解析中的应用

序列搜索算法由三部分组成：搜索过程、搜索得到多肽的各氨基酸残基的评分及两端（N端、C端）搜索得到的多肽的合并过程.通过若干实际多肽质谱的解析,结果表明,该算法对多种序列专一性离子并存的未知多肽质谱的解析,可获得较满意结果.尤其是它的评分方式及标准,比较适合多肽质谱图的实际情况,可最大限度地判断解析结果的准确度,为从事用质谱测定多肽一级结构的分析工作者提供了一比较简便且可靠的手段.也为质谱法快速测定蛋白质或多肽序列及其在生物学中的普及提供了一条方便之路.     

生物质谱技术在糖蛋白结构分析中的应用

生物质谱包括基质辅助激光解吸附飞行时间质谱及电喷雾质谱被广泛应用于生物样品如多肽、蛋白质及核酸的分析,由于这种具有软电离方式的质谱具有极高的灵敏度及准确度,目前也被成功地用于糖蛋白的结构分析,与普通的化学方法相比,质谱法快速、简单,结合网上数据库检索、凝集素亲和提取、二维凝胶电泳以及靶上直接酶切等新方法,可以提供糖蛋白的一级结构乃至高级结构的信息。     

噬菌体展示技术及其在肿瘤研究中的应用

噬菌体表面展示技术是一项特异性多肽或蛋白的筛选技术,它将随机序列的多肽或蛋白片段与噬菌体衣壳蛋白融合表达而呈现于病毒表面,被展示的多肽能保持相对独立的空间结构,使其能够与配体作用而达到模仿性筛选特异性分子表位,从而提供了高通量高效率的筛选系统。近年来噬菌体展示技术已广泛应用于肿瘤抗原抗体库的建立、单克隆抗体制备、多肽筛选、疫苗研制、肿瘤相关抗原筛选和抗原表位研究、药物设计、癌症检测和诊断、基因治疗及细胞信号转导研究等。就近年来噬菌体展示技术在肿瘤相关研究中的运用作以综述。     

MALDI TOF MS在细菌检测和鉴定中的应用

近年来质谱技术有了快速的发展,新的软电离技术,基质辅助激光解析电离和电喷雾电离使得质谱能够对核酸或蛋白质,多肽等生物大分子进行微量分析,且具有高灵敏度和高质量检测范围,通过串联质谱的分析还可以得到结构信息。MALDI TOF MS能给出微生物多方面的信息,包括分子量和结构信息等,用于微生物的各种研究中,如根据细菌的组成成分获得指纹图谱检测和鉴定细菌,细菌体内含有大量的生物标志分子能用于细菌的化学分类和鉴定。     

碎片结构分析在MALDI—TOF—MS法测定多肽序列中的 …

采用基质辅助的激光解吸电离习行时间质谱法碎片结构分析（ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ＴＯＦＭＳ,ＦＡＳＴ）技术,对多肽样品血管紧张肽Ⅱ（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎⅡ）和促肾上腺皮质激素（ａｄｒｎｏｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｉｃ ｈｏｒｍｏｎｅ,ＡＣＴＨ）１８￣３９肽段进行了测序研究。根据ＦＡＳＴ谱图中典型碎片离子峰的质谱数据,分析得到了多分子的主要氨基酸组成以     

电喷雾离子化/质谱法(ESI/MS)及其在生物大分子研究中的应用

电喷雾离子化／质谱法（ESI／MS）在各种有机化合物、多肽、蛋白质（含糖蛋白）、核苷酸、糖、脂类及合成高分子物质等分析领域获得了广泛的应用,本文系统介绍了ESI／MS的基本原理,其联用技术,及其在生物大分子研究,包括肽图谱测定,糖分析和核苷酸分析中的应用。     

蛋白质固相序列分析技术新进展

综述了近年来蛋白质与多肽固相序列测定技术的主要进展。对衍生PVDF膜载体,CPG毛细管柱,SDS与双相凝脘电泳分离的蛋白质的固相序列分析,TNBS的应用和磷酸化修饰位点的确定,以及第二代固相蛋白质序列分析仪等作了扼要的介绍。     

FDP相关肽修饰物合成与抗栓活性研究

采用多肽固相合成法合成了ＦＤＰ相关肽的修饰产物ＨＰＡ,经ＨＰＬＣ鉴定,其纯度为８５．５％,氨基酸组成分析及质谱法测定分子量结果均与理论值相符合。生物活性研究表明,在体外,该肽能有效地抑制ＡＴＰ引起的人血小板聚集作用．在体内,该肽能显著增强家兔血纤溶酶的活性,并能有效抑制家兔实验性血栓的形成。     

NPR1多肽抗体的制备和应用

根据NCBI GenBank中报道的NPR1一级结构信息,采用Blastn、Blastx、ExPASy和Protean等软件进行序列同源性和抗原性指数分析,获得三段序列特异性较高的多肽,并从中优选一段序列特异性多肽,采用9-氟甲氧羰基固相合成法获得序列特异性最好的多肽,采用HPLC和LC-MS测定合成多肽的浓度和分子量,试验表明目的多肽纯度达88%、目的多肽分子量为1.92234 kD。采用碳化二亚胺法将多肽与KLH进行偶联获得免疫原Pep-KLH,并将其免疫新西兰大白兔以获得抗血清和多克隆抗体,采用ELISA和Western blotting测定其效价和特异性,经ELISA检测表明抗血清和多克隆抗体可与Pep发生特异性免疫反应,经Western blotting试验表明抗血清和多克隆抗体可识别烟草叶片特异性条带,其相对分子量为65 kD,与预测分子量相符,表明利用该方法制备的NPR1多肽抗体具有较高特异性和灵敏度。     

基于等电聚焦-反相HPLC的虎纹捕鸟蛛毒素组学的初步研究

虎纹捕鸟蛛(Ornithoctonus huwena)是中国最毒的蜘蛛之一.已有研究表明,其粗毒中含有丰富的低分子量(<10 kD)多肽活性成分.为分析这些成分, 利用目标蛋白快速分离系统(ProteomeLab PF 2D)建立了一种新的二维液相色谱分离方法.该方法包括一维的基于蛋白质等电点(pI)的色谱聚焦分离和二维利用无孔硅胶反相柱的基于疏水性的高效液相色谱分离.得到的反相图谱通过仪器配套的ProteoVue软件转换成与凝胶电泳图像相似的pI/UV图,以更直观地显示多肽成分的数量、分布规律及相对丰度等.洗脱的多肽自动收集后用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱进行分析.从一维分离的11个馏分(pH 4.53-8.59)中共检测到大约600个多肽条带.通过质谱分析测得130个多肽的精确分子量,同时通过De novo测序得到26种多肽(其中包括12种已知多肽)的部分序列信息,并利用这些序列信息对未知多肽进行了生物信息学分析.     

电喷雾串联质谱图的叠合与多肽序列分析

利用离子阱电喷雾串联质谱仪,在选择性改变某些食品参数的条件下对模式分子Met-脑啡肽和自行固相化学合成的7肽及其修饰产物、10肽和20肽进行碎裂处理,从而获得一系列具有一定差异的串联质谱图。选择具有适当互补性的图谱进行叠合处理,得到具有连贯性“三联套”（triplet）及“二联套”（doublet）碎片离子峰的叠合串联质谱图,据此可以方便准确地角析出多肽的氨基酸序列。实验结果表明,这种方法在多肽的质谱法测定中具有一定的实用性。     

基于串联质谱的鱼皮明胶鉴别研究

在胶原蛋白序列比对基础上,以虹鳟鱼明胶、猪明胶和牛明胶为模型,利用高效液相色谱－串联质谱技术（HPLC-MS/MS）研究了3种明胶降解多肽组成的差异。使用胰蛋白酶将鱼皮明胶进行了酶解处理,使用HPLC-MS/MS对酶解产物中的多肽组成进行了分析,并与猪和牛明胶酶解产物中的多肽进行了比较。结果表明鱼明胶酶解产物中存在特征多肽,通过特征多肽的种类可区别鱼明胶与猪和牛明胶,研究了明胶多肽中脯氨酸羟基化修饰、明胶分子量范围和脱酰胺化对特征多肽识别的影响。研究表明利用HPLC-MS/MS技术通过识别明胶酶解产物中的特征多肽进行鱼皮明胶鉴别具有可行性。     

双靶向MMP-14和金属离子的结合肽筛选与分子模拟

以基质金属蛋白酶-14(MMP-14)催化结构域为靶标,通过噬菌体随机十二肽库 筛选和分子模拟、细胞免疫荧光、金属离子亲和层析以及体外细胞作用测定等技 术,进行了双靶向MMP-14和金属离子小分子结合多肽的筛选与研究.经4轮筛选, 噬菌体得到有效富集并获得13条不同的多肽序列.序列分析显示,可能的一致序列 有：AHQLH、HHXH、EI/LPLL/I.分子模拟与对接进一步确认一致序列AHQLH、HHTH 、LPLL与MMP-14催化结构域的氨基酸120~125区域良好分子对接并具有一定的专 一性,多条MMP-14结合肽不仅靶向MMP-14,同时结合金属离子.细胞生物学研究确 认,所测定的结合肽噬菌体对MMP-14诱导表达的MG63细胞具有良好的结合作用,揭 示结合肽对MMP-14的靶向结合特性,并且合成的AHQLH、LPLL一致序列多肽对MG63 细胞活力具有一定的抑制能力.这些新的和具有一定MMP-14专一性的一致序列可望 用于靶向MMP-14抗肿瘤药物的研发和利用.     

世纪之交的蛋白质序列测定技术

对蛋白质序列测定技术的发展过程作了简要回顾，介绍了近年在该方法学领域的主要进展，其中包括Ｎ－端顺序测定的微量化、毛细管ＨＰＬＣ与毛细管电泳的应用，新的Ｃ－端化学降解测序方法，以及快原子轰击（ＦＡＢ）、电喷雾（ＥＳＩ）和基质辅助激光解吸电离－飞行时间（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ）质谱在蛋白质序列测定中的应用，还对世纪之交该领域的发展趋势作了扼要的展望。     

新型神经保护肽[Gly14]-Humanin的表达，纯化和活性鉴定

Humanin（HN）是近年来在人体内发现的内源性多肽,能够保护神经细胞免于各种阿尔采默病病相关因素诱导的凋亡,HN肽链第14位氨基酸被Gly取代的突变体[Gly14]-Humanin（HNG）,神经保护活性比HN高近1 000倍。但由于HNG天然获取的途径有限,限制了对其功能的进一步研究。本课题组构建了HNG的表达质粒pET32a/HNG,并将其转化大肠杆菌BL21 trxB (DE3),诱导表达后HNG以可溶性融合蛋白的形式出现并用镍离子亲和层析纯化,纯化的融合蛋白用肠激酶切割后经反相层析得到纯化的HNG多肽（23 mg每1 L细菌培养液）,重组HNG多肽的分子量经电喷雾电离质谱（ESI-MS）检测为2876.5道尔顿,其N末端8个氨基酸残基的序列经Edman降解法测定为A-M-M-A-P-R-G-F,均与理论值一致。神经细胞保护实验表明,重组HNG多肽的神经保护作用与天然的HNG相近     

微生物学研究中的软电离质谱技术

包括基质辅助激光解吸电离（ＭＡＬＤＩ）和电喷雾（ＥＳＩ）在内的软电离质谱是最近发展起来的质谱技术,由于这些电离方式对样品的破坏性小,质量测定范围大,分子量测定准确,样品纯度要求不高很适合分析成分复杂的微生物样品,ＭＡＬＩＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ结合高分辨率的二维ＳＤＳ－ＰＡＧＥ可以分析１０＾－１２摩尔水平的蛋白,是细菌蛋白质研究过程中必不可少的工具。最近的研究工作表明,通过ＭＡＩＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ或ＨＰ     

整体蛋白质电喷雾质谱原位解析

蛋白质组学系统研究了生物体蛋白质组,尤其是一定生理、病理条件下差异表达的蛋白;对蛋白质序列、翻译后修饰及其位置的定性鉴定可以帮助我们系统地了解蛋白质的结构和功能。随着软电离技术(如电喷雾电离技术)及高质量测量精度、高质量分辨质谱仪(如轨道阱质谱仪)的发展与相对普及,完整蛋白质的质谱表征(即所谓的自上而下蛋白质组学)已成为可能且渐渐流行起来;相应的数据库搜索引擎和蛋白质鉴定生物信息学工具也有了一定的进展。本文对作者研发的蛋白质电喷雾质谱原位解析算法"同位素质荷比及轮廓指纹比对"及整体蛋白质数据库搜索引擎"Protein Goggle2.0"(http://proteingoggle.tongji.edu.cn/)做一个概述。     

高精度热电离质谱铀系法测定北京猿人遗址年代初步结果

热电离质谱法可用比经典的α能谱法少一个数量级的样品,实现高一个数量级的测量精度。本文报道了用这一新技术测定北京猿人遗址１－２层钙板样ＢＺＣ－３的铀系年代。     

家蚕质多角体病毒片段IV的全序列测定

在随机引物建库的基础上,通过交叉设计引物及加单链DNA接头,应用RT-PCR技术克隆的家蚕质多角体病毒dsRNA片段Ⅳ的全长cDNA,并测定了它的全序列。该片段长3,262bp,含有一个完整的开放讯码框,编码一个长1,058氨基酸的成熟多肽。序列分析表明,该片段与日本BmCPV片段Ⅳ的核苷酸序列同源性为89％,氨基酸序列同源性为95％。