嗜酸乳杆菌LB10.16及枯草芽孢杆菌BS7.29安全性评价

目的:评价枯草芽孢杆菌BS7.29和嗜酸乳杆菌LB10.16的安全性,为其应用研究提供技术支持。方法:本文通过对小鼠灌服、急性攻毒、腹腔注射、小鼠最大耐受剂量、急性攻毒等试验方法进行枯草芽孢杆菌BS7.29和嗜酸乳杆菌LB10.16的安全性研究。结果:1×108cfu/kg.bw的LB10.16和5×108cfu/kg.bw的BS7.29能够明显提高肠道推动力,改善小鼠肠道蠕动性。结论:两个菌种急性攻毒试验结果表明属于无毒物质,安全性比较高。     

嗜酸乳杆菌LB10.16及枯草芽孢杆菌BS7.29安全性评价

目的：评价枯草芽孢杆菌BS7.29和嗜酸乳杆菌LB10.16的安全性,为其应用研究提供技术支持。方法：本文通过对小鼠灌服、急性攻毒、腹腔注射、小鼠最大耐受剂量、急性攻毒等试验方法进行枯草芽孢杆菌BS7.29和嗜酸乳杆菌LB10.16的安全性研究。结果：1×108cfu/kg.bw的LB10.16和5×108cfu/kg.bw的BS7.29能够明显提高肠道推动力,改善小鼠肠道蠕动性。结论：两个菌种急性攻毒试验结果表明属于无毒物质,安全性比较高。     

饲用凝结芽孢杆菌高密度发酵及高纯度菌粉的制备

对凝结芽孢杆菌的发酵工艺进行了研究,150 L发酵罐发酵44 h,最终发酵液活菌数达到了2.01×1010cfu/m L,芽孢形成率达到96.82%。3 m3罐中试,发酵时间为44 h,发酵液中的活菌数达到2.10×1010cfu/m L,芽孢形成率达到91.70%。发酵液离心后,收集菌液进行喷雾干燥以收获菌粉(进风温度160℃,出风温度80℃),菌粉收率为2.50%,芽孢收率86.07%。     

微生物制剂对奥尼罗非鱼生长及消化酶活性的影响

选用192尾初始体重(34.500.25) g的健康奥尼罗非鱼(Oreochromis niloticusO. aureu), 研究在基础饲料中分别添加相同剂量(活菌含量为3.01011 cfu/kg饲料)的汉逊德巴利酵母、枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌对奥尼罗非鱼生长及消化酶活性的影响, 试验期56d。试验结果表明, 与对照组相比, 添加枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌, 奥尼罗非鱼的增重率分别提高12.27%和8.56%(P0.05), 饵料系数分别降低10.92%和8.18%(P0.05)。饲料干物质表观消化率分别提高10.54%和10.07%(P0.05), 蛋白质表观消化率分别提高4.18%和3.63%(P0.05)。添加枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌组, 奥尼罗非鱼肠道、肝胰脏和胃蛋白酶活性显著高于对照组和汉逊德巴利酵母组(P 0.05), 而添加三种微生物制剂对奥尼罗非鱼肠道、肝胰脏和胃的淀粉酶和脂肪酶没有显著影响(P0.05)。结果显示, 三种微生物制剂相互比较, 饲料中添加剂量为3.01011 cfu/kg饲料的枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌能显著提高肠道、肝胰脏和胃的蛋白酶活性, 满足最佳生长。       

一株凝结芽孢杆菌的分离筛选及产孢条件优化

【背景】凝结芽孢杆菌除了具有一般乳酸菌的益生功能外,还具较强的耐酸、耐胆盐、耐高温、易贮存等生物特性。【目的】从泡菜中筛选一株性能优良的凝结芽孢杆菌用于微生态制剂的制备,并对其产孢率进行优化,为该菌株的进一步工业化生产提供参考依据。【方法】采用选择性培养基通过特定的培养条件,筛选到一株抑菌效果良好的产酸芽孢杆菌,并对其进行特异性引物的鉴定、16S rRNA基因序列分析及生理生化实验。通过单因素及正交试验对菌株的产芽孢条件进行优化。【结果】筛选得到一株凝结芽孢杆菌BC01,该菌株对大肠杆菌(Escherichia coli CVCC 1527)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium CVCC 2228)、产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens CVCC 46)、猪霍乱沙门氏菌(Salmonella choleraesuis CVCC 503)等均有较强的抑制作用;模拟胃液处理120 min存活率达到94%;0.3%的胆盐存活率达到84.3%。单因素及正交试验优化后的最适培养基配方:糖蜜10.0 g/L,酵母浸出粉20.0 g/L,NaCl 5.0 g/L,K_2HPO_4 5.0 g/L,MnSO_4 10.0 mg/L;最适培养条件:接种量4%,温度45°C,初始pH 7.0,转速200 r/min,培养时间36 h。在该优化条件下,其活菌数最高达到6.7×10~9 CFU/mL,产孢率达到89.2%。【结论】筛选得到一株可用于微生态制剂的菌株——凝结芽孢杆菌BC01,对其产孢率进行了优化,为工业化生产奠定了基础。     

表达鸡传染性法氏囊病毒VP2蛋白的干酪乳杆菌免疫保护效力

利用干酪乳杆菌作为传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2抗原传递系统,探讨口服雏鸡的免疫次数、免疫剂量、免疫途径和攻毒保护效果。用pLA-VP2重组干酪乳杆菌对5日龄雏鸡进行二次和三次免疫,并设108、109、1010 CFU/mL的重组干酪乳杆菌组,间接ELISA检测血清IgG和小肠洗液sIgA,末免后7 d攻毒,计算保护效果。根据确定的2次免疫和109 CFU/mL免疫剂量免疫5日龄雏鸡,分别口服、滴鼻/点眼pLA-VP2/L.casei,口服、肌注商品活苗及口服pLA/L.casei和PBS为对照,监测IgG和sIgA抗体水平;末免后7 d检测脾淋巴细胞增殖情况并攻毒,7 d后剖检,观察法氏囊损伤程度并记录病变得分和保护率。结果表明各组的特异性sIgA、IgG抗体水平显著高于对照组(P0.01);口服pLA-VP2/L.casei组的淋巴细胞刺激指数显著高于其他组(P0.01),保护率高达83.3%,免疫保护效果优于滴鼻/点眼组。因此,构建的重组干酪乳杆菌的安全性优于商品活苗,可以作为IBDV候选疫苗。     

地衣芽孢杆菌对凡纳滨对虾Toll和HSP70基因表达的影响

目的 分析地衣芽孢杆菌对凡纳滨对虾Toll和HSP70基因表达的影响.方法 根据芽孢杆菌的使用量设置测试1组(LDG,用菌量2.0×103 CFU/mL),测试2组(HDG,用菌量1.0 × 104 CFU/mL)及未使用芽孢杆菌的对照组(CG),每7d施菌1次,实验持续24 d.每6d取样对虾肌肉和肝胰腺检测Toll基因和HSP70基因的mRNA相对表达量.结果 对虾肝胰腺Toll基因mRNA表达量在LDG组和HDG组分别较CG组提高了410.05％和78.31％,但在肌肉中CG组的表达量则分别较LDG组和HDG组提高了31.81％和8.43％.可见,芽孢杆菌在一定程度上可提高Toll基因mRNA在对虾肝胰腺的表达,但对其在肌肉中的表达则呈一定的限制作用.在肝胰腺HSP70基因的mRNA表达量,HDG组显著高于CG组和LDG组(P＜0.05),CG组和LDG组的差异无统计学意义(P＞0.05);在肌肉中LDG组和HDG组的HSP70基因mRNA表达分别较CG组提高了26.07％和26.46％,但实验组的组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 在水体中施用芽孢杆菌104 CFU/mL和2.0×103 CFU/mL可分别提高对虾肝胰腺和肌肉HSP70基因的mRNA表达量.     

培养条件对凝结芽孢杆菌芽孢形成的影响

目的:提高凝结芽孢杆菌芽孢形成率及芽孢数量,为凝结芽孢杆菌芽孢制剂的产业化生产提供理论依据.方法:在摇瓶、15L自动发酵罐中考察了碳源、氮源、无机盐、微量元素Mn2+、pH、温度、接种量、溶氧水平对凝结芽孢杆菌液体培养形成芽孢的影响.结果:芽孢形成的最适培养基组成为:麸皮20g/L,酵母膏5g/L,豆粕粉10g/L,NaCl 5g/L,K2HPO4 3g/L,MnSO4.3g/L;最适培养条件为:初始pH7.0,接种后最适起始芽孢浓度为106CFU/mL,培养温度为40℃,180r/min摇瓶培养,250mL三角瓶中最适装液体积为15mL.在15L自动发酵罐中扩大培养,控制溶氧在30%以上,培养20h,芽孢数量可达5.8×109CFU/mL,芽孢率达96.7%.结论:试验获得的最佳培养条件可进一步应用于生产.     

解淀粉芽孢杆菌M1摇瓶发酵条件优化及脱氮性能评价

旨在提高解淀粉芽孢杆菌M1液体发酵产芽孢量,并考察其对实际废水的反硝化脱氮效果。首先采用单因子实验研究了碳源、氮源、初始pH值、温度、转速和装液量等因子对M1液体发酵产芽孢量的影响。然后对其中显著性因子:氮源浓度、接种量、装液量、温度4个因素进行正交试验,进一步优化发酵条件。结果显示,优化后的培养基成分为:5 g/L碳源(可溶性淀粉)、10 g/L氮源(酵母粉∶蛋白胨=2∶1)、1 g/L NaCl;最佳培养条件为:初始pH6.5、发酵温度34℃、摇床转速180 r/min、培养瓶装液量30%、接种量7%。在此条件下,芽孢杆菌M1芽孢数可达到6.8×108 CFU/mL,高于优化前的2.08×108 CFU/mL。将芽孢杆菌M1投加于反应器中,与不加菌种相比,反硝化脱氮效果提升15%-34%。     

抗炭疽人源化单抗在炭疽芽孢致死小鼠模型中的治疗效力评价

目的:建立炭疽芽孢(疫苗株A16R)攻击DBA/2J小鼠的致死模型,并使用该模型评价抗炭疽人源化单抗5E11的治疗效力。方法:用不同剂量A16R芽孢背部皮下攻击小鼠,计算半数致死剂量(LD_(50));ELISA定量检测5E11在小鼠体内的药代动力学参数;用100倍LD_(50)的芽孢攻击小鼠,攻毒后不同时间用不同剂量的5E11单抗治疗小鼠,观察小鼠存活等情况。结果:A16R芽孢攻击DBA/2J小鼠的LD50为7.8×10～3CFU;5E11在小鼠体内的平均消除半衰期约为7 d;攻毒后1 d给药的几个剂量组能够完全保护,攻毒后2～3 d给药能够提供40%～80%的保护。结论:抗炭疽人源化单抗5E11在芽孢攻击致死小鼠模型中表现出良好的保护效果,具有紧急治疗炭疽芽孢感染导致的急性炭疽的潜力。     

禽类饲用芽孢杆菌的筛选及固体发酵条件优化

筛选得到3株适用作为禽类饲料添加剂的枯草芽孢杆菌,分别命名为B395、B605和BM1。该3株菌株均能够在42℃正常生长,能抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌,且能耐受0.3%胆盐,能产生淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶。通过饲喂试验,观察到菌剂组可明显促进肉鸡生长,有效降低料肉比。选取B395作为试验菌株,以培养后活菌数为指标,得到其最佳固体发酵条件为麦麸∶稻糠为3∶2、葡萄糖0.5%、尿素2%、KH2PO40.5%,含水量45%、接种量5%、温度37℃、培养时间3d。按上述培养条件,对B395进行培养,摇瓶式发酵可使活菌数可达到(1.3±0.1)×1010CFU/g,浅盘式发酵可使活菌数达到(1.3-1.4)×1010CFU/g;并对B605和BM1进行培养,得到活菌数均超过109CFU/g。     

分离自马奶及其制品中7株乳酸菌的安全性初步评价

【目的】通过小鼠的急性毒性、30 d喂养及细菌移位试验,对马奶及其制品(酸马奶)中分离出来的7株肠球菌属乳酸菌进行初步安全性评价。【方法】分别对小鼠连续7 d及30 d灌胃不同剂量的肠球菌JHZ9、JHZ15、JHZ17、JHZ22、JHZ25、JHZ28、JNN1,对其一般体征进行观察,记录体重和食物摄入量,最后进行大体解剖,观察肝、肾、脾、心、肺并称重,同时进行细菌移位试验。【结果】除30 d喂养中,试验菌株JHZ17的高剂量组与生理盐水组差异显著(P0.05),7 d急性毒性试验及30 d喂养试验中各试验组小鼠体重、食物摄入量与对照组相比无显著性差异(P0.05),30 d喂养后小鼠各脏器(心、肝、脾、肺、肾)指标与对照组无显著性差异(P0.05),小鼠的经口急性毒性最大耐受剂量(MTD)大于1010 CFU/(mL bw)20 mL/(kg·d),属无毒级别,未发现细菌移位现象。【结论】肠球菌JHZ9、JHZ15、JHZ17、JHZ22、JHZ25、JHZ28、JNN1安全,无毒副作用。     

生防用枯草芽孢杆菌固态发酵工艺的研究

目的:提高一株生防用枯草芽孢杆菌固体发酵生产过程中的芽孢产量。方法:研究通过优化固体发酵培养基及发酵生产工艺条件等方法提高了固体发酵枯草芽孢杆菌的芽孢产量。结果:固体发酵过程中,豆饼粉作用显著,能显著提高固体发酵枯草芽孢杆菌的芽孢数,可达到7.1×1010CFU/g。结论:该枯草芽孢杆菌的最优培养基为:麸皮84.4%、稻壳粉10%、豆饼粉5%、硫酸铵0.5%、硫酸镁0.1%、硫酸锰0.05%。生产工艺为料水比为1:1.2,发酵温度为37℃,发酵培养时间为52 h。     

五株乳酸菌和三株芽孢杆菌的生物学特性和功能

【背景】乳酸菌和芽孢杆菌是应用于生产最多的益生菌,但不同菌株间的生长特性均不相同,因此了解菌株的生物学特性具有重要意义。【目的】研究菌株的生物学特性,能合理地开发和利用菌株,以保证菌株生产应用的安全性。【方法】活化后鉴定5株乳酸菌和3株芽孢杆菌并对其形态进行观察,探究菌株的生长曲线、产酸能力及最适生长条件,测定菌株的抑菌活性和产酶性能,同时探究菌株的益生性和安全性。【结果】五株乳酸菌分别编号鉴定为干酪乳杆菌R1、副干酪乳杆菌R2、香肠乳杆菌R3、福莱乳杆菌R4和唾液乳杆菌R5;3株芽孢杆菌分别编号命名为贝莱斯芽孢杆菌Y1、枯草芽孢杆菌Y2和地衣芽孢杆菌Y3。八株菌形态结构均不相同但都为杆状,均在2–10 h为对数生长期,18–24 h为稳定期,培养24 h时乳酸菌和芽孢杆菌的活菌数均保持在10⁹和10⁸ CFU/mL,最适生长温度为37.0℃。乳酸菌具有较强的产酸能力和抑菌活性,芽孢杆菌有较强的产酶性,在人工胃液中都有较强的耐受性。八株菌都无溶血活性、无毒力基因、对抗生素都保持中度敏感以上;其中唾液乳杆菌有四环素耐药基因,但对四环素抗性为中度敏感。【结论】八株菌生长繁殖速度快,乳酸菌产酸能力和抑菌活性较强,芽孢杆菌具有较强的产酶性能,在体外具有较好的益生性和安全性,可应用于生产实践。     

凝结芽孢杆菌活菌片联合益生菌低聚糖粉治疗妊娠期便秘的临床观察

【摘 要】 目的 观察和评价凝结芽孢杆菌活菌片（商品名：爽舒宝）联合益生菌低聚糖粉治疗妊娠期便秘的临床疗效。方法 将100例妊娠期便秘患者随机分为治疗组和对照组,治疗组60例,对照组40例,两组均给予基础治疗。其中治疗组在此基础上同时口服凝结芽孢杆菌活菌片和益生菌低聚糖粉,凝结芽孢杆菌活菌片首次2.1 g,以后1.05 g/次,3次/d;益生菌低聚糖粉10 g/次,3次/d,温水送服,疗程14 d。观察治疗前后便秘改善情况。结果 治疗组总有效率、大便频率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05 )。结论 凝结芽孢杆菌活菌片联合益生菌低聚糖粉治疗妊娠期便秘疗效显著,值得临床推广。     

一株具有噬菌体抗性的芽孢杆菌BS-2的鉴定及葡萄糖流加工艺优化

筛选噬菌体抗性菌株以解决枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)生产过程中噬菌体污染问题并提高抗性菌株的发酵水平。采用双层平板法从异常发酵液中分离并纯化以枯草芽孢杆菌为宿主的噬菌体,利用纯化得到的噬菌体筛选实验室芽孢杆菌库以得到抗性菌株,结合16S rDNA和gyrA基因序列进行系统发育分析确定其分类地位,以分批发酵的生长曲线及葡萄糖含量曲线作为基础,对发酵培养基的初糖浓度及葡萄糖的流加方式进行优化提高筛选到的噬菌体抗性菌株的发酵水平。从异常发酵液中分离到噬菌体S01及S02并在实验室芽孢杆菌库中筛选到一株噬菌体无法侵染的芽孢杆菌BS-2,结合16S rDNA及gyrA基因序列的系统发育分析将BS-2鉴定为枯草芽孢杆菌,按照葡萄糖初始浓度15 g/L,葡萄糖浓度低于5 g/L时以2 g/L·h的速度流加葡萄糖,补加量10 g/L的流加补料方法,可以将发酵水平提高至2.43×1010 CFU/mL。枯草芽孢杆菌BS-2具有较好的噬菌体抗性且经过工艺优化可以达到较高发酵水平,有较强工业化应用潜力。     

高渗提高凝结芽孢杆菌P4-102B菌株的电击转化效率

【目的】凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)是一种非常有工业应用前景的微生物,但遗传转化的困难是限制对其进行代谢工程改造的关键因素。本研究主要考察生长培养基、电击缓冲液、复苏培养基中添加高渗剂如山梨醇、甘露醇等对凝结芽孢杆菌转化效率稳定性的影响,并对凝结芽孢杆菌电击转化条件进行优化。【方法】用穿梭质粒p NW33N电转化凝结芽孢杆菌P4-102B,系统地考察高渗条件下细胞生长阶段、感受态菌体浓度、电击缓冲液组分和复苏培养基组成等因素对转化效率的影响。【结果】同一电场压力下高渗体系转化效率较低渗体系明显提高且稳定性较好,菌体在含有0.5 mol/L山梨醇的LB培养基中生长到OD600为0.8时收集,用SMG[0.5 mol/L山梨醇,0.5 mol/L甘露醇,10%(质量体积比)甘油]电击缓冲液洗涤菌体4次制备感受态,在固定电场强度14 k V/cm、脉冲时间5 ms、1 mm规格的电转杯进行电击转化,电转化后立即加入含有0.5 mol/L山梨醇和0.38 mol/L甘露醇的LB复苏培养基培养,能够获得最佳的转化效率2.7×102 CFU/μg DNA。【结论】使用高渗电击转化法能够提高电击转化的稳定性和重复性,并且可以获得较高的转化效率。     

凝结芽孢杆菌与酵母核苷酸对团头鲂生长和肠道的影响

目的 考察饲料中单独添加凝结芽孢杆菌或与酵母核苷酸联合添加,对团头鲂生长和其肠道的影响.方法 以团头鲂为试验对象随机分为3组,对照组饲喂基础饲料,A试验组饲喂“基础饲料+1 000 mg/kg凝结芽孢杆菌制剂”;B试验组饲喂“基础饲料+1 000 mg/kg凝结芽孢杆菌制剂+200 mg/kg酵母核苷酸”.饲喂56 d后,测定鱼体的各项生长指标、小肠绒毛高度、肠道菌群数量和消化酶活力.结果 与对照组比较,A组的特定生长率、蛋白质效率、肠道凝结芽孢杆菌数量和蛋白酶活力显著提高(P＜0.05),饲料系数和肠道大肠埃希菌数量显著降低(P＜0.05),但肠绒毛高度和肠道淀粉酶活力无明显增加(P＞0.05).与对照组和A组比较,B组的特定生长率、蛋白质效率、肠绒毛高度、肠道凝结芽孢杆菌数量、蛋白酶和淀粉酶活力均有显著提高(P＜0.05),饲料系数和肠道大肠埃希菌数量均有显著降低(P＜0.05).3组的摄食率没有明显改变(P＞0.05).A组和B组均不能提高肠道二糖酶活力(P＞0.05).结论 凝结芽孢杆菌与酵母核苷酸能协同促进团头鲂的生长和其肠道功能.     

双歧杆菌与辐射损伤的拮抗效应

目的探讨双歧杆菌拮抗辐射损伤的时效、量效和理想的拮抗分子。方法实验动物均选用SPF级C57BL小鼠,用不同药物和不同照射剂量处理后,建立急性放射损伤模型。WBC计数:用不同数量级浓度的双歧杆菌菌悬液对小鼠灌肠28 d后,5.0 Gy照射后3 d、6 d和10 d采取小鼠外周血检测WBC数。30 d小鼠生存率:用1×109CFU/m l双歧杆菌菌悬液灌肠28 d后,用一次性8.0 Gy60Coγ射线全身照射,建立急性放射损伤模型,每日上下午各观察小鼠1次,记录死亡动物数和死亡日期。抗氧化指标检测:用双歧杆菌菌体3种不同成分LTA、WPG和EPS,连续7 d腹腔注射小鼠后6.0 Gy照射,检测肝组织CAT和SOD的活性。结果WBC计数结果显示:双歧杆菌提高了辐射损伤WBC的最低值(P<0.05),随着剂量增加有上升趋势,理想的双歧杆菌菌悬液浓度为1×109CFU/m l。30 d小鼠生存率试验结果显示:双歧杆菌将小鼠生存率提高了43.3%。抗氧化结果显示:双歧杆菌菌体3种成分均具有抗氧化作用,尤其LTA抗氧化作用最为明显(P<0.05)。结论双歧杆菌对辐射损伤具有拮抗作用,其较为理想的双歧杆菌菌悬液浓度数量级为109CFU/m l,双歧杆菌细胞壁的3种成分中抗辐射较为理想的效应分子是LTA。     

球形芽孢杆菌C3-41对致倦库蚊的毒效及在蚊体内的再循环

球形芽孢杆菌Csub3-41菌株(Bacillus sphaericus C3-41)对致倦库蚊(Culex puinquefa-seiatus)幼虫有很高毒效,对2龄和3-4龄幼虫的半致死剂量(LD₅₀)分别为63.1 和89.7芽孢/蚊幼虫。处理浓度越高,取食时间越长,蚊幼虫取食到的杀蚊活性物质量越多,死亡率越高。当蚊幼虫取食亚致死剂量杀蚊活性物质后,球形芽孢杆菌在感染的活幼虫体内不增殖;但当蚊幼虫取食致死剂量杀蚊活性物质后,蚊幼死亡,球形芽孢杆菌在死蚊幼虫体内增殖明显,6天内芽孢从感染初期的1.86X10²蚊幼虫增加到1.59X10⁶/蚊幼虫。芽孢在死蚊幼虫体内能正常萌发、生长、产孢和形成毒素。增殖的芽孢同样对致倦库蚊幼虫有较高毒力。