巴西橡胶成龄无性系茎段的试管微繁技术研究

巴西橡胶成龄无性系茎段组织培养在生产中有很大的潜在应用价值,但一直是橡胶树组织培养的难点,至今国内外鲜有成功的报道.本研究以在中国热带地区大面积推广种植的巴西橡胶树优良品种热研7-33-97不同生长时期成龄树茎段为外植体,进行无性系试管微繁技术研究.研究结果表明不同生长时期的茎段在自然条件中受污染程度不同,茎段真菌污染率为稳定期＞淡绿期＞古铜期,细菌污染率为淡绿期＞稳定期＞古铜期.不同生长时期的成龄树茎段需要通过不同的灭菌方法才能显著提高外植体的利用率,外植体灭菌方法显著影响橡胶成龄树茎段的组织培养效率;与稳定期相比,古铜期和淡绿期茎段在组织培养过程中诱导丛生芽萌芽快、萌芽多,是较优的外植体材料;古铜期和淡绿期茎段在激素配比为4.0～5.0 mg/L6-BA+0.5 mg/L GA3的条件下能很好的诱导抽出丛生芽;丛生芽在激素配比为2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/LNAA,1.0 mg/t 6-BA+1.0 mg/L KT+0.5 mg/L NAA或0.5 mg/L 6-BA+1.5 mg/L KT+0.5 mg/L NAA的条件下能很好的诱导丛生芽抽出健壮的芽条;丛生芽抽出的健壮芽条在激素配比为0.5 mg/L IBA+0.5 mg/L IAA的条件下能较好的抽根成苗.外植体生长时期、激素种类和浓度配比都是影响巴西橡胶成龄无性系茎段的试管微繁的重要因素.     

山竹组织培养技术

本研究以山竹的合子胚为组织培养的外植体材料,研究不同激素浓度配比对山竹得出芽诱导/增殖诱导及生根诱导的影响,以获得一套山竹组织快繁技术,结果表明:GA3能有效提高山竹合子胚的出芽率,最适的山竹合子胚组织培养的基本培养基为WPM;诱导芽的最适培养基为WPM+3.0 mg/L 6-BA+GA31.0 mg/L,增殖最适培养基为WPM+3.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L GA4+7。生根最适培养基为1/2 WPM+1.0 mg/L IBA+1.0 g/L AC。     

鱼腥草组织培养的研究

通过对鱼腥草组织培养过程中激素配比、碳源的研究,得出适于鱼腥草侧芽分化生长的最佳培养基为MS 6-BA1.0～2.0mg/L NAA0．1—0．5mg/L。碳源以蔗糖浓度2％-3％最佳。适宜鱼腥草生根的最佳培养基为MS NAA1．0mg,L 6-BA0．25mg/L。     

培养条件对三七愈伤组织生长和皂苷积累的影响

以MS为基础培养基,改变激素配比、氮源和光照等因素,以分光光度法和HPLC法分析三七愈伤组织培养过程中皂苷含量的变化。结果表明:培养条件对三七愈伤组织中皂苷积累有一定影响,激素配比对愈伤组织中皂苷含量的影响最大,在0.5 mg·L-12,4-D+1.0 mg·L-16-BA组合下,培养物中总皂苷含量最多,达到4.72%±0.29%;在总氮量为60 mmol·L-1条件下,45 mmol·L-1KNO3+7.5 mmol·L-1NH4NO3(NO3-/NH4+=7∶1)时,愈伤组织皂苷含量最多,达到4.71%±0.17%;分别在1 000 lx和500 lx光强下每天光照12 h的愈伤组织,皂苷含量均低于黑暗培养的愈伤组织,三者皂苷含量分别为1.94%±0.31%、2.38%±0.12%和3.57%±0.27%,光照引起愈伤组织表面变绿及细胞分化,可能是抑制愈伤组织中皂苷合成与积累的主要原因;HPLC检测发现,三七愈伤组织和根中均含有Rg1、Re、Rb1及Rd四种皂苷,但栽培三七根含有R1皂苷,而三七愈伤组织中未检测到R1,其原因需要进一步研究。该研究结果为未来愈伤组织培养成为部分代替人工栽培生产三七天然产物的潜在途径提供了研究基础。     

不同引种地白背三七主要活性成分分析及其对生态因子的响应

以白背三七茎叶为研究对象,分别对陕西省12个引种试验地种植的白背三七总黄酮和B族维生素含量进行了测定和相关性分析,并采用中国气象科学数据共享服务平台获得不同产地的生态因子数据,通过冗余分析(RDA)其化学成分含量与生态因子间的相关性。结果显示：(1)不同采样地白背三七的总黄酮含量和B族维生素各成分含量有明显差异,其中洛南4个样地种植的白背三七茎叶中总黄酮含量显著高于其他8个样地,但B族维生素含量较其他8个样地的低;白背三七茎叶中总黄酮含量与B₂、B₆、B₁₂及B族维生素总量之间具有显著或极显著负相关关系。(2)种植地的海拔、降雨量和温度对白背三七黄酮类物质累积具有重要作用,其中总黄酮含量的主要影响因子是海拔和降雨量,且均呈正相关关系;降雨量和海拔对白背三七中B族维生素含量的影响均呈负相关关系。研究表明,地理位置和环境因子对白背三七活性物质含量具有重要影响,以洛南为代表的秦巴山区(海拔800～900 m,7～8月平均降雨量78～84 mm,平均地温26～27.5 ℃)是栽培白背三七较适宜的生态区。     

白蕊草组织培养和快速繁殖的研究

通过对白蕊草组织培养的培养基种类,激素配比,添加物汁液,碳源的研究,得出适合白蕊草侧芽分化生长的最佳培养基为MS＋6－BA2.0mg/L＋NAA0．5mg/L 狗牙根汁液。诱导愈伤组织以2,4－D浓度在0.5mg/L-2mg/L之间最佳。碳源以蔗糖,浓度3％最佳。生根实验表明：较低浓度的生长素不利于生根,最佳生根培养基为MS＋6－BA0.5mg/L NAA2mg/L 狗牙根汁液或MS＋6－BA0.5mg/L IBA2mg/L 狗牙根汁液。     

延龄草中微量元素研究

目的:通过测定延龄草中微量元素的含量,发挥延龄草的药用和食用价值.方法:采用干法灰化处理样品,用石墨炉原子吸收光谱法测定延龄草中微量元素的含量.结果:延龄草中9种微量元素含量分别是:Zn 20.00 mg/kg,Fe 95.5 mg/kg,Cu 7.5 mg/kg,Mn 11.75 mg/kg,Cd 0.02 mg/kg,Cr 0.0955 mg/kg,Co 0.0075 mg/kg,Pb 0.01175 mg/kg,Ni 0.07275mg/kg.结论:延龄草中人体必需的微量元素Zn、Fe、Mn的含量较高,有害元素Pb、Cd等的含量很低.     

蔓花生组织培养和植株再生的条件优化

应用MS为基本培养基,通过各种培养条件和不同激素配比,探讨蔓花生组织培养及其植株再生条件的优化。结果显示:幼叶为最佳的外植体,在幼叶愈伤诱导过程中,不超过12h光照,光照强度在21.6μmol.m-2.s-1均可;诱导愈伤组织的适宜培养基为MS+0.5mg/L6-BA+0.2mg/L2,4-D或MS+0.5mg/L6-BA+2mg/LNAA;最适的分化培养基为MS+1mg/LTDZ+2mg/L6-BA+0.5mg/LNAA;最适的生根培养基1/2MS+1mg/LNAA+1mg/LPP333。     

铁皮石斛腋芽的快速繁殖

目的利用组织培养技术建立铁皮石斛的高效快繁体系,克隆繁殖种苗,为野生居群的恢复提供材料。方法以铁皮石斛腋芽为外植体,研究不同浓度和配比的基本培养基、激素以及天然提取物对腋芽萌发生长,丛生芽的诱导增殖以及壮苗生根的影响,比较不同培养阶段的增殖倍数,筛选各时期的最适培养基。并对试管苗的形态学特征进行了调查。结果1/2MS+NAA 0.2 mg/L+BA 1 mg/L适合腋芽的成活生长。BA与香蕉汁组合有利于丛生芽的诱导增殖,其最适比例为1/2MS+NAA 0.5 mg/L+BA 2.0 mg/L+香蕉汁100 g/L,增殖倍数最大可达14.0,平均增殖倍数为6.4。培养基中添加100 g/L香蕉汁或200 g/L马铃薯汁均有利于壮苗生根。结论铁皮石斛通过腋芽形成丛生芽途径建立高效的快繁技术体系获得优质种苗是可行的。     

Zn、B配施对鸡血藤黄酮类化合物积累的影响

为探讨Zn、B配施对鸡血藤(Spatholobus suberectus)黄酮类化合物积累的影响,采用营养液叶面喷施,对其总黄酮含量、可溶性蛋白质和PAL活性的变化进行研究。结果表明,Zn、B配施的鸡血藤总黄酮含量、可溶性蛋白质含量、PAL活性增加,其中施用50 mg L–1 Zn SO4+10 mg L–1 Na_2B_4O_7·10H_2O鸡血藤的可溶性蛋白质含量最高,达0.89%;施用25 mg L–1Zn SO4+50 mg L–1 Na2B4O7·10H2O鸡血藤的总黄酮含量和PAL活性最高,分别为4.65%、29.47 U g–1min–1。因此,合理配施Zn、B能促进鸡血藤黄酮类化合物的积累。     

安菜的组织培养与植株再生

通过对安菜组织培养的培养基种类、激素配比、碳源的研究,得出适于安菜侧芽分化生长的最佳培养基为MS＋6-BA0．5mg／L＋NAA0．2mg／L。诱导愈伤组织以2,4-D浓度在0．2mg／L～0．5mg／L之间最佳。碳源以蔗糖,浓度3％最佳。以IBA0．5mg／L～1．5mg／L浓度诱导生根效果最好。     

黄芩愈伤组织培养条件的研究

在暗培养条件下,黄芩愈伤组织生长和次级代谢物合成的最佳培养条件:在基本培养基MS中氮源浓度为60mmol/L(NH4 ∶NO3-为1∶1),KH2PO41.5mmol/L,附加80g/L蔗糖,0.3mg/LIAA、2mg/L6-BA和200mg/L蛋白胨,(25±1)℃。培养40d后收获愈伤组织生物量达28.7g/L,总黄酮的含量为354.6mg/g,黄芩苷的含量为167.4mg/g。并发现蔗糖作为一种最佳碳源,在黄芩次级代谢物合成过程中起着至关重要的作用。     

铁皮石斛茎段快繁技术的研究

通过组织培养建立铁皮石斛快繁体系,为更好利用开发铁皮石斛提供原料。以铁皮石斛茎段为外植体,研究不同种类和浓度配比的激素和天然添加物对组培过程中不定芽的诱导和丛生芽的增殖的影响,筛选出各阶段最适培养基。结果表明,不定芽诱导最适激素配比为NAA 1.0 mg/L+BA 2.0 mg/L,丛生芽增殖最适培养基为NAA 0.5 mg/L+BA 1.0 mg/L+香蕉100 g/L+活性炭100 g/L。以茎段为途径建立铁皮石斛快繁体系高效稳定的获得组培苗是可行的。     

二色补血草试管苗生根及移栽基质研究

以二色补血草为材料,研究了不同浓度激素配比对试管苗生根量及根长的影响,以及生根苗在不同移栽基质中的成活率和生长状况。结果表明,试管苗在MS+NAA 1.0mg/L培养基中的平均根量最多,在MS+IBA 1.0mg/L培养基中平均根长最长;生根苗在泥炭+珍珠岩(1:1)的基质中生长最好。同时进行降低成本的试验。     

益生菌Lactobacillus casei Zhang增殖培养基的优化

Lactobacillus casei Zhang 是一株分离自传统酸马奶中的益生菌.本文研究了不同碳源、氮源、碳氮比例、微量元素及缓冲盐对 Lactobacillus casei Zhang 增殖培养的效果,并采用响应面法对优选的碳源、氮源和缓冲盐类的组成含量进行优化,得到 Lactobacillus casei Zhang 的增殖培养基为:葡萄糖20.9 g/L、大豆蛋白胨10.45 g/L、酵母粉10.45 g/L、K2HPO4 3.5 g/L、醋酸钠14.6 g/L、柠檬酸钠2.3 g/L、MgSO4·7H2O 1 g/L,MnSO4·5H2O 54 mg/L、CuSO4·5H2O 10 mg/L、吐温80为1 g/L.Lactobacillus casei Zhang 在此增殖培养基中经37℃ 18 h培养活茵数可达到4.78×109 CFU/mL,比在MRS中(4.8×108 CFU/mL)提高近10倍.     

产木聚糖酶白地霉培养特性及部分纯化的酶学特性

本文对白地霉Ref1的培养特性、产酶条件和酶学特性进行了初步研究。结果表明:该菌为低温型菌株,其最佳生长条件为pH6、20℃和酵母膏作为氮源;最佳产酶条件为pH3-7、15℃及以酵母膏氮源;条件优化后产酶可达118.7U/mL,可溶蛋白含量可达到60μg/mL,酶溶液的比活可达到1250U/mg蛋白质;该木聚糖酶的最适反应温度和pH分别为50℃和5,金属离子Mg2+、Na+和8mmol/L的Fe2+、Cu2+、Zn2+等对木聚糖酶的活性有抑制作用,而Ca2+、4mmol/L的Fe2+、Cu2+、Zn2+和8mmol/L的Mn2+等对该酶反应则有促进作用;该木聚糖酶在保温2h后在15-40℃范围内能保持80%以上的酶活性,在50℃时能保持68%的酶活性;用lineweaver-Burk作图法(双倒数作图法)求得该酶的最大反应速度Vmax和Km值分别为163.38mmol/mg/min和0.75mg/mL。     

香附子块茎试管苗繁殖

以香附子块茎为材料,用组织培养的方法,进行试管苗繁殖研究。结果表明,1/3MS+炉灰渣培养基是块茎生长芽培养的适宜培养基;1/2MS+ZT 0.6 mg/L+NAA 0.1 mg/L是生长芽分化和继代分化繁殖培养的适宜培养基;1/2MS+ABT 2号6 mg/L+IAA 0.4 mg/L是生根和试管苗微型块茎培养的适宜培养基。培养30 d试管苗移栽成活率96%;培养60 d试管苗移栽成活率89.7%;种植的块茎发芽率99.8%;试管苗和微型块茎定植的成活率在99%以上;定植试管苗保持了香附子的植物学特征。     

紫色红曲霉Mp-24高产Monacolin K发酵工艺响应面优化

将单因素实验结果与响应面法相结合,对高产Monacolin K的紫色红曲霉Mp-24菌株进行发酵工艺条件优化。通过摇瓶发酵对碳源、氮源、碳源含量、氮源含量、培养时间等进行单因素优化,确定Mp-24菌株摇瓶发酵适宜条件：乳糖为碳源、酵母膏为氮源、碳源含量7%、氮源含量2%、培养时间12 d,Monacolin K产量为167 mg/L。应用Box-Behnken中心组合试验设计建立数学模型,进行响应面分析优化发酵条件,结果显示最佳发酵工艺条件为：碳源(乳糖)8%,氮源(酵母膏)3%,培养时间11 d,在此条件下Monacolin K的含量达到247.8 mg/L,比优化前提高1.5倍。     

杭白菊茎尖组织培养及试管苗繁殖技术研究

采用茎尖组织培养技术,建立了杭白菊中大洋菊(Chrysanthemum morifolium Ramat.)的无菌试管苗体系.通过基本培养基和激素配比实验,筛选出杭白菊试管苗快速繁殖的最佳培养基组成.结果表明:最适宜的外植体为直径0.3 mm的茎尖;诱导丛生芽的最适培养基为:MS 6-BA 0.1 mg*L-1 IAA 0.02 mg*L-1;诱导试管苗生根的最适培养基为:1/2MS IAA 0.7 mg*L-1.用电子显微镜进行病毒检测后,筛选出2个脱病毒株系,脱病毒试管苗可作为今后提供优质种苗的种源.     

不同激素配比对麝香百合鳞茎芽诱导的影响

采用麝香百合的鳞茎片作为外植体进行组织培养,结果表明,不同激素浓度配比对百合鳞茎芽的诱导效果不同,供试的几个组合中,以MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L效果最好;在继代培养中,以MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L对百合鳞茎的增殖效果最好;在生根培养中,附加活性炭可促进根的生长。