果园三种天蛾的DNA条形码鉴定

DNA条形码(DNA Barcoding)可以利用一段通用基因短片段对物种(包括不同生活史阶段)进行区分。本文尝试应用该技术对深色白眉天蛾Hyles gallii(Rottemburg)、构月天蛾Parum colligata(Walker)、桃红六点天蛾Marumba gaschkewitschi(Bremer et Grey)等3种天蛾进行了鉴别。测定了3种天蛾的COⅠ基因序列,并在BOLD(Barcode of Life Data Systems)及GenBank中进行了检索。结果发现BOLD系统比GenBank更能帮助准确鉴定到物种,而在GenBank中只有1种能鉴定到种。将实验室获得序列与GenBank中下载的474条同源序列整合后,利用MEGA4.0的Kimura-2-Parameter模型进行了遗传距离分析,利用MEGA4.0及PAUP4.0进行了系统发育树的构建,结果发现待鉴定标本序列在各个系统发育树的位置基本一致,并能准确鉴定出一种天蛾。本研究表明,随着BOLD系统、GenBank等公共数据库的不断完善,DNA条形码将有助于更加有效地鉴定特定类群物种。     

古DNA技术在人类墓葬遗骸研究中的应用及进展

考古工作中得到的生物遗骸由于长期的风化,自然侵蚀等因素的影响,遗骸本身含有的古代生物的DNA的大部分会分解,使得对遗骸中的生物遗传信息研究变得非常困难.可将现代生物工程的PCR技术应用到考古工作中,该技术能够对残存的微量DNA进行大量的生物体外扩增,得到更多的古代生物的遗传信息,提高时遗骸种属鉴定的准确性.通过对出土的人类遗骸中微量DNA的扩增、测试和遗骸间DNA序列的对比,在计算机软件的帮助下与已知的人类DNA序列进行比较,能确定同一墓葬中不同遗骸的亲缘关系和该遗骸群体在整个人类进化体系中的位置.对这一试验过程的一些方法、技术、研究进展和目前仍然面临的一些问题作了介绍.     

药用植物DNA条形码鉴定研究进展

DNA条形码是利用相对较短的标准DNA片段对物种进行快速准确鉴定的一门技术。DNA条形码技术可以从分子水平弥补传统鉴定方法的一些不足。该技术具有良好的通用性,使得物种鉴定过程更加快速,已经广泛应用于动物物种的鉴定研究中。近年来,随着药用植物DNA条形码鉴定研究的快速发展,逐渐形成了药用植物和植物源中药材鉴定的完善体系。本文综述了DNA条形码技术鉴定药用植物的原理,介绍了中草药传统鉴定方法及其缺陷、使用DNA条形码技术鉴定植物源药材的意义以及DNA条形码在药用植物鉴定中的应用,对其应用前景进行了展望。     

利用电子速度鉴定DNA

利用电子速度鉴定ＤＮＡ美国加利福尼亚理工学院的化学家ＴｈｏｍａｓＪ．Ｍｅａｄｅ和分子生物学家ＪｏｎＦ．Ｋａｙｙｅｍ报告,他们正在发展一种新的生物传感系统以快速、精确探测单个ＤＮＡ分子或其片段。方法依据的前提是,电子穿过ＤＮＡ螺旋中心需要的时间比它沿Ｄ...     

DNA条形码技术应用于人参鉴定

人参(Panax ginsengC.A.Meyer),被人们称为“百草之王”,是国内外常用的珍稀名贵中草药和高级滋补品,濒临灭绝,是急需进行资源保护的珍贵物种.随着中草药市场的国际化,由于利益的驱动,市场上伪混品屡见不鲜,对其正确鉴定就成为进行资源保护的首要条件.国内外学者对人参等药用植物资源的鉴定和可持续利用进行了广泛研究.DNA条形码(DNA barcoding)技术是分子鉴定的最新发展,即通过比较一段或几段通用DNA片段,对物种进行快速、准确的识别和鉴定,是近年来生物分类和鉴定的研究热点,在物种鉴定方面显示了广阔的应用前景.在分析传统的鉴定方法在适用范围和局限性的基础上,着重介绍了新兴的DNA条形码技术及其分析方法在人参鉴定上的特点及应用.     

运用DNA杂交法鉴定微生物

莱什曼病、疟疾、锥虫病、巴贝斯虫病以及疱疹等疾病有关的寄生虫和病毒,这类的微生物鉴定,采用传统方法,繁琐、效率低,有时还不准确。现在运用DNA杂交法,观察样品DNA一但与已知微生物中标记种特     

入侵种的DNA条形码鉴定

生物安全研究的范畴涉及任何由生物威胁所造成的风险。随着害虫优先考虑级别的不断变化,以及国家和部门间相互协作的不断加强,对DNA分子鉴定技术的标准化提出了更迫切的要求,而DNA条形码的出现为此类问题的解决提供了很好的机遇。我们以前人对毒蛾和果蝇的研究为例,比较了DNA条形码技术与PCR-RFLP等传统方法的鉴定效果,在此基础上提出了建立一个可对不同入侵种进行快速和准确鉴定的条形码技术平台的构想。     

木本植物基因组DNA提取及鉴定

采用改良后的CTAB法,对山葡萄、软枣猕猴桃、蒙古栎、核桃楸、西伯利亚红松和偃松基因组DNA进行提取。结果表明,所提基因组DNA分子量与λDNA（48 kb）接近,其紫外吸收比在1.66～1.89之间。第3次和第4次上清提取的DNA质量优于第1次和第2次。从提取产量看,每克鲜重提取DNA量最小为15 μg·g^-1（核桃楸第4次上清）,最高的为272 μg·g^-1（山葡萄第3次上清）。西伯利亚红松和偃松第1次和第2次上清基本未提出DNA,第3次和第4次上清中得到了较高质量的DNA。经酶切鉴定和PCR扩增,所提的基因组DNA可以用于进一步研究。     

小小卫星DNA阳性克隆的鉴定及DNA指纹分析

提取四种近交系小鼠的肝脏ＤＮＡ,分别用ＨｉｎｆＩ和Ｈａｅ　Ⅲ酶切。用３３．１５和本课题组克隆的小鼠小卫星阳性克隆ＤＮＡ片断作探针,用［α－３２Ｐ］ｄＣＴＰ随机引物标记,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交,获得了理想的小鼠ＤＮＡ指纹图谱。初步确定阳性克隆ＤＮＡ片断Ｖ２具有较好的多态性,可作为小鼠基因组小卫星探针,用于实验动物的遗传监测、基因连锁分析和小鼠遗传图谱的研究。     

苹果园鳞翅目夜蛾科DNA条形码鉴定

为了检验DNA条形码在鳞翅目夜蛾科蛾类鉴定中的可行性,本文对采自北京昌平苹果园内的夜蛾科14种71头蛾类标本分别提取了DNA,并扩增了线粒体cox1及核基因28S,利用系统发育树、遗传距离、阈值等方法进行了鉴定和比较分析。同时,检验了目前BOLD系统的鉴定成功率。实验表明,基于cox1基因和BOLD系统的鉴定成功率达到了100%,而基于28S则很低,为64.8%。用不同方法构建的系统发育树,鉴定结果均相同。93%的种内遗传距离小于1%,94%的种间遗传距离为大于3%,种内种间的遗传距离形成明显的3%阈值现象。     

鉴定免疫细胞中DNA疫苗结合蛋白

为研究DNA疫苗从细胞质到细胞核的过程,对免疫细胞中DNA疫苗的结合蛋白进行初步鉴定。 提取小鼠脾脏免疫细胞的细胞质蛋白,将细胞质蛋白分别与 DNA 疫苗 pVAX-OVA 和空载体 pVAX 共孵育,孵育后首先由琼脂糖凝胶电泳分离与DNA结合的蛋白,然后通过SDS-PAGE进行分离和纯化,最后应用质谱技术分析其蛋白组分。质谱结果初步鉴定了免疫细胞中pVAX-OVA 结合的蛋白有IQ motif containing F4 等。免疫细胞中与 pVAX 结合的蛋白有Foxl2,SUV420H2 和 gamma actin 等。Foxl2具有核定位序列,DNA结合区域和与核转运蛋白相互作用的特点,可能对DNA疫苗的进入具有促进作用。这些蛋白质是否可以影响DNA疫苗有效进入细胞核进行基因表达需要进一步研究。     

庙台槭总DNA提取及鉴定

木本植物体内酚类、多糖等次生物质含量较高 ,严重影响从中提取总 DNA的产量和质量。针对这一问题探索出一种适合庙台槭总 DNA的提取方法 ,并对提取的总 DNA进行了纯度和浓度的鉴定 ,结果表明此方法可有效去除次生物质对 DNA的干扰 ,样品 DNA的质量和纯度较高 ,可用于随机引物 RAPD扩增和随后的各种遗传学分析。     

DNA条形码快速鉴定广州木槿蚜虫

为快速、准确鉴定木槿蚜虫,本文在广州市30个采样点采集了木槿蚜虫样本64份,利用DNA条形码技术获得了64份线粒体细胞色素C氧化酶亚基I(COI)基因的658 bp序列,同时利用形态鉴定和DAN条形码鉴定确定其中共包括5种蚜虫,棉蚜Aphis gossypii Glover、绣线菊蚜Aphis spiraecola Patch、苹果蚜Aphis pomi de Geer、月季长管蚜Sitobion rosivorum(Zhang)和桃蚜Myzus persicae(Sulzer)。所有样品的种内平均遗传距离为0.30%(0~2.30±0.36%),种间平均遗传距离为9.00%(3.30%~10.90±1.22%)。邻接法(neighbor-joining,NJ)构建的系统发育树显示采自30个采样点木槿上的5种蚜虫分别聚为一支,支持率达99%。所获DNA条形码对指导木槿的蚜虫防治有一定的指导意义。     

降香黄檀的DNA条形码鉴定研究

DNA条形码技术是利用基因组中一段短的标准序列进行物种的鉴定并探索其亲缘进化关系。本研究对采自海南不同地区降香黄檀五个居群24份样品的psbA-trnH,rbcL,核ITS及ITS2序列进行PCR扩增和测序,比较各序列扩增和测序效率。种间和种内变异,采用BLAST1和邻接 (NJ) 法构建系统聚类树方法评价不同序列的鉴定能力。结果表明ITS2在所研究的材料中具有最高的扩增和测序效率,而ITS扩增效率较低。ITS2完整序列在区分黄檀属不同种间差异具有较大优势。因此可利用ITS2从分子水平区分降香黄檀与其他混伪种。     

大白口蘑分离菌株的DNA鉴定

以松口蘑Tricholoma matsutake子实体为外类群,对大白口蘑T. giganteum 野生子实体及其组织分离菌丝进行ITS序列测序,通过DNAStar软件进行比较分析。结果表明大白口蘑ITS序列长度为589bp,松口蘑ITS序列长度为601bp,ITS1和ITS2呈现不同程度的种间多态性;ITS序列测定证实了大白口蘑野生子实体及其组织分离菌丝的同质性,并且ITS区序列在大白口蘑种内不同菌株间的变异程度很小,表明使用通用引物ITS4和ITS5,通过PCR扩增测序即可用于大白口蘑的种质鉴定。     

快速提取基因组DNA鉴定转基因鼠

剪取鼠尾提取基因组DNA做点杂交、DNA印迹或做PCR,是鉴定转基因鼠常用的方法,而后者因操作简单快速更受青睐。传统的提取基因组DNA方法需要蛋白酶K消化、酚/氯仿抽提、乙醇沉淀等步骤。对于做PCR模板的DNA来说,不需要这些复杂的纯化程序,另外开发更为简洁的方法对于筛选大批量样品快速鉴定转基因鼠无疑具有重要意义。本文作者在试验中摸索出一种快速提取DNA做PCR模板的方法,在转基因鼠的鉴定中取得了较好的结果。现将结果报告如下,并将其与其它几种方法进行了比较。     

大白口蘑分离菌株的DNA鉴定

以松口蘑Tricholoma matsutake子实体为外类群,对大白口蘑T.giganteum野生子实体及其组织分离菌丝进行ITS序列测序,通过DNAStar软件进行比较分析。结果表明大白口蘑ITS序列长度为589bp,松口蘑ITS序列长度为601bp,ITS1和ITS2呈现不同程度的种间多态性;ITS序列测定证实了大白口蘑野生子实体及其组织分离菌丝的同质性,并且ITS区序列在大白口蘑种内不同菌株间的变异程度很小,表明使用通用引物ITS4和ITS5,通过PCR扩增测序即可用于大白口蘑的种质鉴定。