TRAIL及其受体在细胞凋亡中的作用

ＴＲＡＩＬ是最近发现的ＴＮＦ家族的新成员。它在结构和功能方面和ＴＮＦ家族的另一成员———Ｆａｓ／ＡＰＯ １Ｌ很相似。ＴＲＡＩＬ能够诱导多种转化细胞凋亡,但对正常细胞没有这种作用。目前共发现了ＴＲＡＩＬ的５个受体。本文就ＴＲＡＩＬ及其受体的结构和功能以及可能存在的调控机制等方面进行了综述。     

TRAIL在细胞中的表达及其诱导凋亡的活性分析

以PCR方法克隆了Trail cDNA全长,构建了其真核表达载体,通过脂质转染HeLa细胞,48小时后利用流式细胞仪分析Trail诱导细胞凋亡的比率,发现发生凋亡的细胞为总细胞数的19％。证实了Trail真核4表达系统的产物的生物学活性高,为从真核表达的途径获得Trail基因工程产品奠定了基础。     

胃癌细胞TRAIL受体的表达与其对TRAIL敏感性的关系

目的:探讨胃癌细胞表面TRAIL受体表达水平及其与TRAIL敏感性的关系.方法:PI染色、流式细胞仪检测TRAIL诱导BGC-823及SGC-7901细胞的凋亡率,流式细胞仪检测细胞膜表面四种TRAIL受体-R1、R2、R3、R4的表达情况.结果:TRAIL诱导胃癌细胞凋亡具有剂量和时间依赖性,BGC-823较SGC-7901对TRAIL诱导的凋亡更敏感,TRAIL(100μg·L-1)作用24h的细胞凋亡率分别是59.9%、24.3%.死亡受体TRAIL-R1/DR4、TRAIL-R2/DR5在BGC-823细胞膜表面表达的阳性率高达97.87%和99.42%,而在SGC-7901分别为7.03%和95-31%,诱骗受体TRAIL-R3/DcR1、TRAIL-R4/DcR2在两株细胞膜表面极少表达.结论:胃癌细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性差异可能与细胞膜表面死亡受体有关,尤其与DR4的表达有关.     

关于TRAIL对凋亡的作用

凋亡,即程序性细胞死亡,是允许多细胞动物严格调控细胞生长,防止癌症、免疫缺陷及自身反应性等病理过程的一种关键机制。在哺乳动物细胞中,凋亡可通过两个主要途径起始：一个与死亡受体的参与有关,另一个则与线粒体释放细胞色素c有关。线粒体途径既可由外部信号也可由内部信号如DNA损伤所触发。Bcl-2家族的促凋亡(pro—apoptotic)和抗凋亡(anti—apoptotic)成员可聚集于线粒体表     

TRAIL 慢病毒载体构建及其在肝癌细胞中的表达

目的:构建携带TRAIL基因的慢病毒表达载体并实现其在肝癌细胞株HepG2中的稳定高表达。方法:构建TRAIL重组慢病毒表达载体pCDH-CMV-TRAIL-EF1-GFP-T2A-Puro,脂质体法将重组慢病毒载体和包装质粒混合物共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒,纯化并测定病毒滴度。利用Western blotting检测TRAIL蛋白在HepG2中的表达。结果:酶切以及测序证实,成功构建TRAIL基因重组慢病毒载体,纯化的慢病毒滴度为1.02×104ifμ/μL。利用嘌呤霉素筛选获得稳定表达TRAIL的细胞系,经Western blot方法检测到TRAIL蛋白的稳定高表达。结论:成功构建了带有TRAIL基因的慢病毒载体,并实现其在HepG2的稳定高表达。     

核基质结合区对转基因表达的影响及其作用机制

核基质结合区(matrix attachment region,MAR)是一段在体外能与核基质结合的富含AT的DNA序列。研究发现MAR能使染色质形成环状结构;将其连到目的基因二侧构建载体并转至生物体中,发现它能增强基因转录表达水平及稳定性,在一定程度上降低转基因个体或细胞系之间转基因的表达水平的差异,这很可能是减低了基因沉默所致。现对MAR的序列特征、MAR对转基因表达的影响及对转基因效应的影响机制进行综述。     

ERas基因在胃癌中的表达及其作用机制的研究进展

胚胎干细胞（EScells）为多能干细胞,来自哺乳动物胚胎早期。ES细胞表达的Ras（ERas）基因促进其体外增殖和肿瘤形成。该基因产物Ras蛋白关联和激活多个下游效应,调控多种细胞反应来参与细胞增殖,存活与分化。ERas基因位于x染色体短臂（Xpll．23）,其cDNA编码的蛋白包含227个氨基酸,与传统ras基因Hras,Kras和Nras分别有43％,46％和47％的相似性,故属于新的ras家族成员,与传统ras基因不同的是ERas基因非常活跃但不带有任何突变。近几年发现ERas基因的表达与胃癌密切相关,本文就ERas基因在人胃癌细胞和组织中的表达及其机制的最新进展做一综述,主要包括三个方面：1,ERas基因在胃癌细胞和组织中的表达情况及其功能。2,ERas基因在胃癌细胞中的表观遗传调控。3,ERas基因与胃癌肝和淋巴结转移的关系。     

提高重组TRAIL表达产率的优化策略

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（Apo2L/TRAIL）是一种新型的抗肿瘤蛋白。针对缩短发酵周期,提高生产效率这一目标,首先在摇瓶中利用响应面设计优化发酵表达条件,总TRAIL蛋白的表达量提高到25.7%。在此基础上研究了发酵条件对可溶性TRAIL蛋白表达量的影响。于3.7L发酵罐放大进行补料-分批发酵实验时,单位菌体可溶性TRAIL蛋白的表达量提高了67%,实现了在大肠杆菌高密度培养过程中单位细胞重组TRAIL蛋白的可溶性表达和体积生产率的提高。     

重组可溶性TRAIL的表达与生物学活性

研究重组可溶性TRAIL的抗肿瘤生物学活性。采用基因分子生物学方法构建重组可溶性TRAIL的表达载体,建立大肠杆菌表达菌株,采用柱层析等方法获得纯化的重组可溶性TRAIL;采用流式细胞术、细胞活性测定法和体内药效学实验分析重组可溶性TRAIL杀伤肿瘤细胞的生物学活性。结果表明重组可溶性TRAIL在体外可诱导人白血病细胞和肝癌细胞凋亡,凋亡率达50%以上。中枢神经系统的肿瘤细胞对重组可溶性TRAIL不敏感。重组可溶性TRAIL在体内能显著抑制人非小细胞肺癌细胞在小鼠体内生长,抑制率达70%以上。结论为研究制备的重组可溶性TRAIL能在体内外杀死多种肿瘤细胞,具有显著的临床应用前景。     

ERas 基因在胃癌中的表达及其作用机制的研究进展

胚胎干细胞（ES cells)为多能干细胞,来自哺乳动物胚胎早期。ES细胞表达的Ras(ERas)基因促进其体外增殖和肿瘤形成。该 基因产物Ras蛋白关联和激活多个下游效应,调控多种细胞反应来参与细胞增殖,存活与分化。ERas 基因位于X染色体短臂 （Xp11.23）,其cDNA 编码的蛋白包含227 个氨基酸,与传统ras 基因Hras,Kras 和Nras 分别有43%,46%和47%的相似性,故属 于新的ras家族成员,与传统ras 基因不同的是ERas 基因非常活跃但不带有任何突变。近几年发现ERas基因的表达与胃癌密切 相关,本文就ERas基因在人胃癌细胞和组织中的表达及其机制的最新进展做一综述,主要包括三个方面：1,ERas 基因在胃癌细 胞和组织中的表达情况及其功能。2,ERas 基因在胃癌细胞中的表观遗传调控。3,ERas 基因与胃癌肝和淋巴结转移的关系。     

肿瘤细胞抗TRAIL凋亡诱导的分子机制

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(tumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand,TRAIL)是肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor,TNF)超家族的成员之一,它能选择性诱导肿瘤细胞凋亡,对大多数正常细胞无杀伤作用。研究表明,某些恶性肿瘤抵抗TRAIL诱导的凋亡,且TRAIL重复作用使一些TRAIL敏感的细胞产生获得性抗性,这是TRAIL应用于肿瘤治疗的重大障碍。现对与TRAIL凋亡诱导通路直接相关的抗TRAIL机制及由Akt等途径介导的抗性分子机制进行综述。     

人TRAIL基因cDNA的克隆及其在COS-7细胞中的表达

TRAIL(TNF-related apoptosis inducing ligand)是最近克隆的肿瘤坏死因子(TNF)家族的新成员,由于它的蛋白质结构和生物学效应类似于FAS/APO-1L,因此,也被称为APO-2L.     

Apelin/APJ系统的神经保护作用及其机制

Apelin/APJ系统在人与动物组织中广泛分布,不仅参与维持生理稳态,也参与多种疾病的病理生理过程。越来越多的证据表明,apelin/APJ系统具有神经保护作用,能对抗兴奋性毒性损伤、氧化应激损伤以及损伤诱导的神经元凋亡。本文现就apelin/APJ系统神经保护作用及其机制的相关研究进展作一综述。     

异位表达Dichaete对果蝇足部发育的影响及其作用机制

【目的】果蝇Dichaete基因是Sox家族B亚家族基因,其表达贯穿整个胚胎发育阶段,在个体发育过程中发挥重要作用。Dichaete在野生型果蝇幼虫足芽上也有微弱表达,然而其在足发育过程中的作用少有报道。本研究旨在研究异位表达Dichaete对果蝇足部形态构成的影响,探索相关的作用机制。【方法】黑腹果蝇Drosophila melanogaster en-Gal4品系雄性成虫与UAS-Dichaete转基因品系处女蝇杂交,驱动Dichaete异位表达,解剖子一代成虫足,在显微镜下观察异位表达的Dichaete对成虫足形态结构的影响;同时采用免疫组化技术检测异位表达Dichaete对果蝇足芽细胞凋亡和Distal-less(Dll)表达的影响。【结果】异位表达Dichaete导致黑腹果蝇成虫足末端结构缺陷,引起3龄幼虫足芽细胞凋亡增加,上调了Distal-less基因的表达,但对Wg和Dpp信号均无影响;抑制细胞凋亡也无法拯救该缺陷。【结论】异位表达Dichaete导致黑腹果蝇成虫足末端结构缺陷,Dichaete可能通过上调Distal-less基因影响足部发育。     

TRAIL及其受体介导的信号转导通路

1 .概述新近克隆的肿瘤坏死因子ＴＮＦ(ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ,ＴＮＦ)家族新成员———肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 (ＴＮＦ ｒｅｌａｔｅｄａｐｏｐ ｔｏｓｉｓ ｉｎｄｕｃｉｎｇｌｉｇａｎｄ ,ＴＲＡＩＬ) [1] 因其结构和功能与ＴＮＦ家族的另一成员ＦａｓＬ/Ａｐｏ 1Ｌ极为相似 ,又称Ａｐｏ 2Ｌ[2 ] 。与其他所有ＴＮＦ家族成员一样 ,ＴＲＡＩＬ属Ⅱ型跨膜糖蛋白 ,Ｃ末端胞外区 ( 1 1 4～ 2 81位氨基酸残基 )含有同源三聚体亚单位 ,在溶液中可形成三聚体或二聚体。可溶性ＴＲＡＩＬ在体外和体内均可诱导多种肿瘤细…     

人TRAIL基因cDNA的克隆及其在COS—7细胞中的表达

ＴＲＡＩＬ(ＴＮＦｒｅｌａｔｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｄｕｃｉｎｇｌｉｇａｎｄ)是最近克隆的肿瘤坏死因子(ＴＮＦ)家族的新成员,由于它的蛋白质结构和生物学效应类似于ＦＡＳ/ＡＰＯ1Ｌ,因此,也被称为ＡＰＯ2Ｌ。在低浓度下,ＴＲＡＩＬ能迅速地诱导多种肿瘤细胞系的?..     

ATBF1异构体的选择性表达及其抑癌作用的分子机制

ATBF1(AT motif binding factor 1)基因是一个新发现的抑癌基因,其表达产物是目前发现的分子量最大的转录调节因子,它能和甲胎蛋白（alpha fetoprotein, AFP）基因增强子AT富聚区结合,调节AFP的转录.ATBF1基因表达过程中,由于转录本mRNA的选择性剪接,可产生ATBF1-A和ATBF1-B两种异构体,这两种异构体对AFP表达的调节具有相互对抗作用.ATBF1-A是ATBF1基因的主要表达形式,其能抑制癌细胞生长,而ATBF1-B则能促进癌细胞增殖.本文分析ATBF1异构体如何调控AFP表达及其作用的多样性,阐述ATBF1表达下调对肿瘤细胞生长和侵袭产生的影响;探讨ATBF1异构体抑癌作用的可能机制和选择性应用ATBF1异构体治疗肿瘤的科学意义.     

动脉粥样硬化大鼠心肌梗死时钙敏感受体表达的变化及其作用机制

目的:探讨动脉粥样硬化大鼠心肌梗死时钙敏感受体表达的变化及其作用机制。方法:Wistar大鼠随机分为4组:正常对照组(Control);异丙肾上腺组(ISO);动脉硬化组(AS);动脉硬化+异丙肾上腺素组(AS/ISO)。采用腹腔注射VD3和高脂饮食及大剂量异丙肾上腺素(ISO 200 mg/kg)皮下注射复制大鼠在体动脉粥样硬化心肌梗死模型,应用RT-PCR测定心肌组织中Ca SR、Bax、Bcl-2和caspase-3 m RNA的表达变化;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况;光镜观察心肌形态学变化;紫外分光法检测血清肌酸激酶(CK)、电化学免疫发光法检测肌钙蛋白T(c Tn T)水平。结果:与正常组比较,ISO组CK活性、c Tn T水平以及Ca SR、Bax和caspase-3的表达均增加,同时Bcl-2表达减少,心肌细胞损伤严重,AS/ISO的心肌损伤进一步加重。结论:Ca SR的表达增多参与了动脉硬化大鼠心肌梗死的发生,其机制可能与促进心肌细胞凋亡有关。     

生物钟基因及其表达的调节机制

众所周知,生物体的新陈代谢过程,细胞和细胞器官的生理功能,以及心理行为等生命活动往往随着昼夜循环而发生规律性的变化.就是在实验室恒定的条件下,消除一切环境因子的影响,生命活动仍表现出昼夜节律性的变化.这说明昼夜节律受体内的测时系统--生物钟的控制.从50年代至今,人们对生物的昼夜节律及其调控机制进行了深入地研究,特别是应用生物化学和分子生物学的方法,使人们逐步了解了生物节律的特点,生物钟基因及其表达的调控机制.     

RNAi的作用机制及其应用

由双链RNA介导的,序列特异的转录后基因沉默的过程称为RNAi(RNA interference),它是双链RNA分子在mRNA水平关闭相应序列基因表达的过程,是一门新兴的基因阻断技术。RNAi有望成为今后分析人类基因组功能的有力工具,在病毒感染、肿瘤、移植免疫等疾病的治疗上有很诱人的广阔前景。