枯草芽孢杆菌B-903菌株的诱变选育

枯草芽孢杆菌B-903菌株是由河南省农业科学院植物保护研究所从郑州果园中分离得到,其代谢产生的抗菌物质对多种植物病原真菌具有较强抑制作用。以此菌株为出发菌株,进行亚硝基胍（NTG）和微波诱变处理,确定了,二者诱变处理的最佳处理剂量：NTG最佳处理浓度为200μg／mL,微波诱变为HI微波挡（850W、脉冲频率2450MHz）处理100s,筛选出13个高效突变株。经传代实验,2株高效突变株N1和W2抑菌圈直径分别稳定在26mm和24mm以上,比出发菌株提高21．8％和14．8％．     

一种球形芽孢杆菌的选择性培养基

一种球形芽孢杆菌的选择性培养基袁志明,陈宗胜,刘娥英,张用梅,蔡全信（中国科学院武汉病毒研究所,武汉４３００７１）球形芽孢杆菌（ＢａｃｉｌｌｕｓｓｐｈａｅｒｉｃｕｓＮｅｉｄｅ）是一种孢子囊末端膨大、芽孢球形的好氧性芽孢杆菌。其中ＤＮＡ同源型ⅡＡ型,血...     

球形芽孢杆菌TS—1原生质体电诱导质粒转化研究

This report gave the best conditions of Bacillus sphaericus Ts-1 protoplast-plasmid pHV33 electroporation. The highest transformation frequency and transformation efficiency induced by three pulse of 21 KV/cm and 10 microseconds duration applied at an interval of one sec., was 2.44 x 10(2) transformants/micrograms DNA and 3.16 x 10(-6) respectively. The saturated concentration of DNA absorbed by the protoplast was 5 micrograms DNA/10(9) cells/ml. By means of this method, pJB417, a recombinant mosquito larvicide clone, was introduced into B. subtilis 168M and B. sphaericus Ts-1. The transformants of B. subtilis 168M with biocide activity were obtained, but the toxicity of B. sphaericus Ts-1 was not increased.     

枯草芽孢杆菌B-903菌株的诱变选育*

枯草芽孢杆菌B-903菌株是由河南省农业科学院植物保护研究所从郑州果园中分离得到,其代谢产生的抗菌物质对多种植物病原真菌具有较强抑制作用。以此菌株为出发菌株,进行亚硝基胍(NTG)和微波诱变处理,确定了二者诱变处理的最佳处理剂量:NTG最佳处理浓度为200μg/mL,微波诱变为HI微波挡(850W、脉冲频率2450MHz)处理100s,筛选出13个高效突变株。经传代实验,2株高效突变株N₁和W₂抑菌圈直径分别稳定在26mm和24mm以上,比出发菌株提高21·8%     

我国部分地区土壤中的苏芸金芽孢杆菌和球形芽孢杆菌

从云南、贵州、四川和陕西4省的土壤中分离到大量苏芸金芽孢杆菌(Bacillus thuringie—nsis)和球形芽孢杆菌(Bacillus sphaeticus)菌株。血清型分析表明,苏芸金芽孢杆菌分离株分属于23个血清型中的13个血清型,另有近20％的自凝型菌株及部分与所有标准菌抗血清无反应的菌株。对该两种昆虫病原细菌的生态分布规律进行了分析。研究了全部苏芸金芽孢杆菌分离株对鳞翅目、鞘翅目及双翅目的6种昆虫的毒力特性、伴孢晶体与芽孢的形态,以及晶体蛋白质成分。观察和测定了球形芽孢杆菌分离株的形态和毒力,并分析了部分菌株的晶体蛋白质成分。得到22株高效苏芸金芽孢杆菌和2株高效球形芽孢杆菌。证明苏芸金芽孢杆菌是典型的土壤微生物类群,我国西南地区土壤中的苏芸金芽孢杆菌资源十分丰富。     

苏云金芽孢杆菌以色列亚种cyt1 Aa基因在球形芽孢杆菌中表达

将编码cyt1Aa基因和 p2 0蛋白基因的DNA片段分别克隆连接于两个不同的穿梭载体 pBU 4和pMK 3上 ,构建了重组质粒 pBA 30和 pMA 6,通过电击法 ,将重组质粒分别转化 B .s野生株2 2 97,获得了转化菌株Bs 97 30和Bs 97 6。SDS PAGE和Westernblot分析证实了cyt1Aa基因在转化菌株Bs 97 30中获得了表达 ,而在转化菌株Bs 97 6中未检测到cyt1Aa基因表达的蛋白。转化菌株Bs 97 30中 ,cyt1Aa基因与B .s二元毒素基因同步于菌体生长的对数期起始表达 ,并持续至芽孢形成。生测结果表明 ,转化菌株Bs 97 30中cyt1Aa基因的表达并未明显增强其对敏感和抗性致倦库蚊幼虫的毒力。其原因可能是弱毒性的 cyt1Aa蛋白在转化菌株中的表达量不高。     

球形芽孢杆菌(Bacillus sphaericus)对抗生素的抗性

考查了27株球形芽孢杆菌有毒株对青霉素、链霉素、四环素、氯霉素、红霉素、卡那霉素、庆大霉素、麦迪霉素、核糖霉素、利福平、吖啶黄、磺胺和迭氮钠的自然抗性。结果表明,所有菌株对高浓度的链霉素和迭氮钠及低浓度的氯霉素有抗性,大部分菌株对四环素有抗性。所有菌株对所考查的其它几种抗生素敏感。     

球形芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌以色列亚种杀蚊毒素间的协同作用

本研究测定了分别表达苏云金芽孢杆菌Cry4Aa、Cry4Ba、Cry11Aa、Cyt1Aa和球形芽孢杆菌二元毒素Bin的转化菌株Bt B60 1、Bt B611、Bt B640、Bt U 30和Bt CW 3全发酵培养物两两或两两以上不同组合对抗性库蚊的毒力 ,分析了杀蚊毒素间的协同作用。结果表明 ,Bin和Cry4Aa、Bin和Cry 4Ba间有明显的协同作用 ,此外 ,Cry4Aa和Cry4Ba、Cry4Aa和Cry11Aa、Cyt1Aa和Cry4Aa之间也有明显的协同作用     

球形芽孢杆菌Ts-1原生质体电诱导质粒转化研究

本文探讨了球形芽孢杆菌Bacillus sphaericus Ts-1原生质体电诱导质粒pHV 33转化的最佳条件：3个连续的间隔为1秒,时程为10μs,强度为21Kv／cm的脉冲,使其转化频率为2．44×102转化子／μgDNA,转化效率为3．16×10-6,质粒转化吸附的饱和浓度为5μg／l03CFU。利用此条件,将重组杀蚊毒蛋白克隆pJB41 7转入Bacillus subtillis 168M和Bacillumphaericus Ts-1中,使得B．Sublilis有了杀蚊活性,但未能提高Ts-1的毒性。     

温度和pH对B.s.C3—41菌株生长和毒力的影响

本文报道了不同培养温度和液体培养基的起始州值对球形芽孢杆菌Ｃ３－４１菌株的生长和毒力的影响绪果。在２０－４０℃下分别进行摇瓶发酵实验时,以３５℃下培养的发酵液菌数最高,杀蚊毒力最强,其生长周期最短;当将液体培养基ｐＨ分别调至５、６、７、８、９、１０在３０℃以２２０ｒ／ｍｉｎ进行摇瓶发酵时,证明在ｐＨ７下培养的发酵液毒力最强。     

球形芽孢杆菌杀蚊毒素蛋白及其 遗传操作研究进展

蚊虫是多种人类传染疾病的主要传播媒介,如疟疾、丝虫病、乙型脑炎、黄热病和登革热等,对人类的健康造成了极大的危害［１］。控制蚊虫被认为是消除这些蚊媒疾病的有效途径。在过去的４５年里,尽管化学杀虫剂和各种抗病药物的使用对降低疟疾和蚊媒疾病的发病率和死亡率...     

球形芽孢杆菌TS-1发酵条件的研究

本文用正交试验设计方法选出的球形芽孢杆菌发酵培养基配方,菌体数量可达到100亿/ml,芽孢形成率达到70—80%,杀蚊幼的半致死剂量在0.125ppm以下。上述的三个指标明显优于以前的报道。通过摇瓶发酵验证和50L³小罐的放大试验,证明所有的实验结果都很稳定。使用现在的发酵配方,使每吨发酵液的成本降低了33%。     

球形芽孢杆菌LP1-G的发酵特性及杀蚊活性

球形芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ）ＬＰ１－Ｇ菌株在ＭＢＳ培养基上能正常生长、发育,产生位于芽孢孢外膜外的伴孢晶体。其产生的４１．９和５１．２ｋＤ二元毒素蛋白合成于芽孢形成期,另一分子量约为４９ｋＤ蛋白和二元毒素同期合成,并随着芽孢的释放而被降解。生物测定结果表明该菌株在营养体生长阶段对致倦库蚊幼虫无毒,孢子囊初期毒力较高,并在整个芽孢形成期都维持较高的毒力水平。其全发酵液对敏感和抗性库蚊幼虫都具有中等的毒杀作用,对３～４龄幼虫４８ｈ的ＬＣ_５０。值分别为０．１１３和０．１３７ｍｇ／ｍＬ。该菌株对敏感和抗性致倦库蚊幼虫的毒杀作用可能同其产生４９ｋＤ蛋白相关。     

球形芽孢杆菌C_3—41菌株胞外蛋白酶特性

球形芽孢杆菌能够合成具杀蚊活性的蛋白晶体,该晶体在蚊中肠碱性条件下降解产生毒性,尽管球形芽孢杆菌蛋白酶与杀蚊毒素的降解无关,但它在球形芽孢杆菌杀蚊制剂的产生中有重要意义。同时球形芽孢杆菌产生的碱性蛋白酶具有潜在的医疗价值。 我们以本实验室分离的高效杀蚊菌C_3—41菌株为材料,研究了球形芽孢杆菌蛋白酶的产生特性及其理化性质,在国内尚属首次报道。     

球形芽孢杆菌C3-41超氧化物岐化酶的特性

本文研究了球形芽孢杆菌（Bacillussphaericus）C3－41超氧化物歧化酶（SOD）的产生条件和部分特性。当C3－41菌株处于孢子囊中期时为产SOD酶高峰期,在30℃下的平板培养物及培养基起始pH为中性（pH7．0）时产生的SOD酶比活最高,经硫酸铵分级沉淀,DEAE－32离子交换层析和SephadexG-100凝胶过滤提纯了SOD酶。此酶属Mn－SOD,在25～35℃和pH5～9范围内较稳定,但在55℃下10min完全失活。     

球形芽孢杆菌Mtx1杀蚊毒素在苏云金芽孢杆菌以色列亚种中的表达

将来源于球形芽孢杆菌SSII-1的mtx1毒素基因克隆至穿梭载体pBU4上,得到mtx1插入方向相反的重组质粒pMT9和pMT4.含有pMT9和pMT4的大肠杆菌转化子能表达产生Mtx1毒素,发酵液对敏感和抗性致倦库蚊幼虫具有中度毒杀作用;含有pMT9和pMT4的苏云金芽孢杆菌转化子B-pMT9和B-pMT4在营养体生长阶段对敏感蚊幼和抗性幼虫也具有毒性,毒力与野生型SSII-1相当,而不同转化子在芽孢形成期的毒力因插入的mtx1基因转录方向不同而表现出差异,其中B-pMT4对目标蚊幼毒力极低(LC50＞100mg/mL),而B-pMT9对蚊幼虫具有毒性(LC50=2.49mg/mL).     

我国海南省杀蚊球形芽孢杆菌的分离和分布

在我国海南省共采集158个各种类型的泥土样品,采用选择性培养基（PBMYS）进行样品分离,并结合形态学观察、血清学鉴定和生物测定,获得对致倦库蚊（Culexquinquefasciatus）幼虫有毒性的球形芽孢杆菌（Bacillussphaericus）73株,有毒株的分离率占样品总数的342％。血清学试验表明,新分离菌株有71株属H5a5b型,两株属在我国首次分离出比型菌株。许多球形芽bqn杆菌新菌株对致倦库蚊幼虫具有很强的毒杀作用。其中228－2和117－1菌株的丙酮粉剂效     

几株球形芽孢杆菌二元毒素基因的检测及对敏感和抗性尖音库蚊的毒性

根据Bacillus sphaericus 2362二元毒素基因核苷酸序列合成的一组寡聚核苷酸为引物,通过PCR扩增出1.1 kb的DNA片段作探针检测了C₃-41、IAB881、IAB872、BS-197和lPl-G菌株中二元毒素基因。Southern杂交表明C₃-41、IAB881、IAB872和BS-197菌株中3.5kb Hind III及LPl-G中4.7kb Hind III的酶切片段分别带有与探针有高度同源性的二元毒素基因。SDS-PAGE和Western印迹杂交表明所有菌株都能产生41.9kD和51.4kD的毒素蛋白。C₃.41、IAB881、BS.197和2362的全发酵液和碱抽提液对敏感尖音库蚊Culex pipienssubsp.Pipiens幼虫毒性高,但对抗性幼虫几乎无毒,LPl-G对敏感和抗性蚊幼虫具有相同的中度毒杀作用;IAB872对敏感幼虫毒性高,对抗性幼虫的毒力同LPl-G相似。这两株菌对抗性蚊幼虫的毒性可能是由Mtx毒素蛋白所导致的。