油菜游离细胞培养及易再生的体细胞无性系的建立

以芥菜型油菜(Brcssica juncea)下胚轴来源的愈伤组织为材料,进行悬浮细胞振荡培养,得到游离的单细胞。这些细胞作浅层液体静置培养,可获得高频率的愈伤组织。在附加有水解乳蛋白200毫克/升、BA 2—3毫克/升及GA,0.1—1毫克/升的MS培养基上,这些愈伤组织分化了芽。分化的芽在无激素或附加有0.01—0.1毫克/升IAA或NAA的MS培养基上长出根,从而发育成完整植株。当对游离细胞获得的再生植株的茎切段愈伤组织,再经上述程序进行细胞培养时,发现愈伤组织诱导率及愈伤组织分化频率均远远高于原供体,从而建立了B.juncea易再生的体细胞无性系。     

单倍体水稻体细胞组织的植株再生及其激素调节

本文报道激素对调节单倍体幼穗组织去分化与分化的方向以及器官形成的影响。发现在试验浓度内(2毫克/升),2,4-D诱导组织去分化,NAA诱导根的大量形成,KT抑制愈伤组织形成和器官分化。KT2毫克/升 NAA2毫克/升使外植体不经过愈伤组织阶段就直接分化大量的苗。当KT/NAA=2:2时,直接分化苗的频率较高,达76％,不同浓度的2,4-D试验表明,2,4-D2毫克/升或4毫克/升时,愈伤组织诱导率高达94％以上。固体和液体继代培养中,低浓度的2,4-D(0.5—0.1毫克/升)加0.1毫克/升的KT,对愈伤组织保持旺盛的生长和后来的分化有良好的作用。发现单倍体体细胞组织再生的植株,白苗很少。讨论了单倍体体细胞愈伤组织无性系用于诱发突变和体细胞遗传研究的可能性。对于愈伤组织的再分化,不仅需要细胞分裂素,而且诱导培养基中生长素浓度的影响也是显著的。     

影响小麦叶片愈伤组织诱导和分化频率的几个因素

在小麦的组织培养中,研究了影响叶片愈伤组织诱导和分化频率的某些因素。试验结果表明:在较高温度下生长的幼苗,未伸出叶片或半伸出叶片基部的片段,愈伤组织的诱导和分化频率较高;不同品种的叶片,愈伤组织的诱导和分化频率有很大差异;直径大于5毫米,一月龄的愈伤组织,分化根的频率较高:补加激素IAA1.0毫克/升和KT1-2毫克/升的培养基,明显促进幼苗的分化。     

沙枣(Elaeagnus angustifolia L.)胚状体的产生及激素对器官发生的作用

供试材料为野生种(Elaeagnus angu-stifolia L.)的子房、茎和叶。在附加0.5毫克/升NAA和1毫克/升玉米素或再加2毫克/升2,4-D的MS培养基中均能诱导出愈伤组织。愈伤组织转入MS+KT(2毫克/升)或KT(2毫克/升)+IBA(0.2毫克/升)的分化培养基上可分化出大量的绿苗。苗分正常苗和异常苗两种类型,目前为止,沙枣愈伤组织无性系已继代培养了22代,将近两年的时间仍具有较强的分化能力。外源激素对正常苗的分化有直接的影响,高浓度的KT水平可促进正常苗的分化,其最佳浓度为4毫克/升,正常苗诱导频率可高达83—86%,基本上解决了分化的问题;高浓度的6-BA虽也能提高分化率,但异常苗占优势。试管苗形成的途径有二,一是通过不定芽的方式产生,一是通过胚状体的方式产生。沙枣胚状体原始细胞的来源有三种情况:(一)由紧邻表皮细胞的单个薄壁细胞产生,这种方式占优势;(二)由表皮细胞横裂产生;(三)由表皮细胞及其下面相邻的薄壁细胞同时分裂共同参与胚状体的形成,即二者的嵌合体。胚状体的发生与合子胚的发生过程基本相似,但在其发育的早期阶段无典型的基细胞与顶细胞之分,故也缺乏典型的胚柄结构,随着胚状体的长大,表皮细胞被撑破,其周围的薄壁细胞内含物被吸收而解体,最后胚状体脱离开愈伤组织的表面,孤立出来成一个完整的个体。     

籼稻花药培养研究——Ⅰ.基本培养基及附加成分在诱导籼稻花药产生愈伤组织及根芽分化中的作用

对6个籼稻(oryza sativa Subsp.Shien)品种和39个籼×籼杂种的花药在离体条件下进行培养,有5个品种及35个杂种得到了愈伤组织,平均诱导率为2.18％。在3个品种及11个籼×籼杂种中得到了绿苗或绿芽。本文着重报道基本培养基及其附加成分在诱导籼稻花药产生愈伤组织及根芽分化中的作用。 1.试验了几种诱导愈伤组织的培养基,以Miller培养基 2,4—D2毫克/升 酵母浸出液1,000毫克/升 激动素1毫克/升 吲哚乙酸2毫克/升 椰乳15％为最好。诱导率高者可达11—15％,平均诱导率在3％以上。 2.Ms、Nitsch及Miller培养基均可诱导籼稻花药愈伤组织分化出绿色的花粉植株。 3.籼稻花药愈伤组织的分化,随着激动素/生长素比值的增高,绿苗分化率及总分化率均有提高的趋势。而粳稻的这种关系不甚明显。 4.Miller培养基附加2毫克/升的吲哚乙酸对促进具茎、叶而无根的籼稻花粉小植株产生根有很好的作用。在这种培养基上,不仅可以诱导根的发生,而且根系发达,生长较弱的苗转移到这种培养基后,因根系健壮,生势好,转入盆栽,基本可以全部成活。     

不同培养基对水稻胚性愈伤组织诱导及分化的影响

以水稻成熟胚为材料诱导愈伤组织,统计在不同基本培养基上的愈伤诱导率以及绿苗分化率,分析不同基本培养基及外源激素的含量和比例对愈伤组织生长及分化的影响。结果表明,试验材料对基本培养基具有选择性,MS培养基对籼稻种胚愈伤的诱导培养效果较好,NB培养基则更适合粳稻种胚愈伤的诱导培养;诱导继代培养基中加入多种氨基酸组合可有效提高出愈率和分化率,特别是粳稻的愈伤组织的诱导和分化需要多种氨基酸的共同作用;不同基因型水稻材料对激素和氨基酸组合的需求不同。     

稻属植物的组织培养和细胞分化及其遗传变异的研究——Ⅰ.粳型杂交水稻茎尖愈伤组织的悬液培养与细胞分化及其再生植株的各种变异研究

本文报道利用粳型杂交水稻苗端诱导形成的愈伤组织进行悬液培养试验,获得了初步成功。试验系采用MS 和N_6基本培养液,另加2,4-D 1—2毫克/升,IAA0.5毫克/升,水解乳蛋白500毫克/升,蔗糖3%。结果均能生长。当愈伤组织生长至直径2—3毫米大小时,将其转移到固体再分化培养基上,使其再生形成绿苗。再分化培养基为MS 或N_6基本培养基另加激动素2毫克/升,6-BA 1毫克/升,水解乳蛋白800毫克/升,蔗糖3%以及琼脂1%。经过了多次悬液继代培养以后,发现在各个“愈伤无性系”之间,于细胞形态和器官分化方面,均发生了各种各样的变异。本试验的目的,在于探索能否为利用悬液培养方法保持杂交水稻的杂种优势以及进行工厂化生产秧苗开辟道路。     

平贝母花粉植株的诱导及无性系的建立

采用附加植物激素的MS、N_6、百合、米勒和改良怀特培养基,培养平贝母单核中期的花药,诱导出一些愈伤组织(平均诱导频率为0.20％),其中MS培养基的诱导效果最好。绝大多数再生植株出现在不加任何激素的1/2MS(其大量元素的含量是MS的一半)培养基上。再生植株的根尖细胞的染色体计数表明,约有1/4的细胞2n=12,证明再生植株是来源于花粉细胞的单倍体植株。在愈伤组织的分化培养中,建立起了能继代繁殖、不断保持绿苗分化能力的愈伤组织无性系。     

水稻花药液体培养下影响愈伤组织诱导和分化的一些因素的研究

水稻花药液体漂浮培养能大幅度提高愈伤组织诱导频率,但这些愈伤组织的分化能力很低。为了提高液体培养下愈伤组织的分化频率,试验了5种诱导培养基和4种分化培养基。结果表明,诱导培养基对愈伤组织分化能力的高低起主要作用,其中以过滤灭菌的马铃薯提取液培养基的效果最好,绿苗分化率可高达50％;分化培养基对愈伤组织分化频率的影响较小,且不甚规律。浮在液面上的愈伤组织比沉在培养液底部的愈伤组织有较高的分化能力。愈伤组织转移时间的早晚对分化频率也有很大影响。     

川芎的组织培养及植株再生

植物名称:川芎(Ligusticum wallichii Franch)材料类别:长有1—2片真叶的幼嫩茎段和叶片培养条件:基本培养基采用MS。诱导愈伤组织培养基为MS,每升补加2,4-D2.0毫克,6BA0.4毫克;诱导芽分化培养基为MS,每升补加6BA0.4毫克、IAA0.5毫克;诱导根分化培养基为1/2MS,每升补加6BA0.2毫克,IAA1.0毫克。培养温度     

籼稻花药培养的研究——提高愈伤组织诱导率与分化率及根芽分化

3年来通过对籼稻(Oryza sativa subsp.hsien)花药培养的研究,愈伤组织的诱导率从0.2%提高到平均为2.85%,最高达18.75%;绿苗分化率从5%以下提高到平均为13.1%最高达到45.5%。在6个籼稻品种、38个籼×籼杂种中成功地诱导出了绿苗。本文着重研究了提高诱导率的有关因素。以单核晚期花粉的花药愈伤组织诱导频率最高。籼稻花粉去分化过程相对地要求较低浓度的培养基,籼稻花药对高浓度的改良 RM-1964培养基完全没反应。用杂种的诱导率较亲本材料为高。以易于诱导愈伤组织或易于分化绿苗的品种作亲本的杂种后代,诱导率与绿苗分化率亦较高。籼稻形成愈伤组织的高峰是在接种后的50—60天之间。愈伤组织分化的高潮是在转移后10—30天之间。籼稻愈伤组织的分化以先分化根的类型最多,在先分化根的愈伤组织中有36.74%能再分化出芽来。     

大麦成熟胚愈伤组织的诱导和植株再生的研究

以10个大麦优良品种为实验材料,成熟胚为外植体,研究基因型、种子的不同切割方式、培养基、激素等对大麦成熟胚愈伤组织的诱导及植株再生的影响.结果表明,种子纵切后接种出愈率显著高于横切;改良MS培养基能提高出愈率;在愈伤组织诱导过程中,不同品种对激素2,4-D与Dicamba的反应表现不同;初代愈伤组织经过3次继代培养后会转变为两种类型的胚性愈伤组织;不同品种的植株再生在不同浓度有机添加物的分化培养基上表现不同;长时间的继代培养,一些品种在植株再生过程中出现一定数量的白化苗.供试材料均能进行愈伤组织诱导,但是只有部分品种能再生植株.本实验筛选出愈伤组织诱导频率和绿苗分化率均较高,适合于遗传转化的受体材料,如87-3175、87-0053、97-4010、97-6004及208813-509.     

马铃薯未传粉子房离体培养诱导双单倍体植株

以MS为基本培养基,附加不同水平的生长素,培养未传粉马铃薯子房,经三年试验,从两个品种中获得了双单倍体的绿色小植株,(2n=2x=24);从分化绿苗力很强的球状愈伤组织中,又不断地分化出许多绿色小植株。绝大多数品种,都可以诱导出愈伤组织,一般诱导率为70％左右。品种的基因型和培养基中的生长素种类与水平在愈伤组织分化绿苗中起着重要作用。通过扦插和试管微型薯培养,可以大量繁殖试管苗,这为马铃薯单倍体育种提供了较有利的条件。     

芥菜型油菜原生质体再生成植株的研究

芥菜型油菜子叶和下胚轴原生质体在含0.5毫克/升NAA、0.5毫克/升2,4-D和1毫克/升BA的Nitsch培养基中发育成愈伤组织。“黄辣芥”子叶原生质体来源的愈伤组织在无生长素而含有3毫克/升BA或2毫克/升KIN的MS固体培养基上分化了芽;即使是低水平的生长素(0.05毫克/升NAA)也不利于芽的分化。当芽长到2—3厘米高时,将其从愈伤组织上切下,转移到不含细胞分裂素而有0.01—0.05毫克/升IAA的MS培养基上,很快长出根,从而得到完整的再生植株。     

从小黑麦未授粉的幼嫩子房培养出小植株

通过未授粉子房的离体培养技术,在Ms无机盐十甘氨酸(7.7毫克/升)十天门冬素(1480毫克/升)十烟酸(0.15毫克/升) VB_1(0.25毫克/升)十VB_6(0.25毫克/升)十泛酸钙(0.25毫克/升) 2%蔗糖的固体培养基上,由小黑麦1号未授粉的幼嫩子房中诱导出愈伤组织,诱导率为53.4—66.8%。将愈伤组织转移到N_6 2.4-D(0.5毫克/升) 动力精(2毫克/升) 2%蔗糖 1%琼脂的培养基上,或在愈伤组织转移到N_6 2.4-D(2毫克/升) 6-BA(2毫克/升) 2%蔗糖 1%琼脂培养基前后,分别注入2毫升的N_6 IAA(1毫克/升) 6-BA(2毫克/升) 2%蔗糖的培养液,均可由愈伤组织分化出小植株,但幼苗移栽时多数未成活,仅一株抽穗开花,然而不育。本文还讨论了外源激素对植株分化的作用问题。     

玉竹的组织培养与快速繁殖

以玉竹[Polygonatum odoratum (Mill.) Druce]根状茎、叶片和茎段为外植体,于附加不同激素配比的MS培养基中诱导愈伤组织、不定芽和不定根,探讨增殖培养和植株再生的条件.结果表明,叶片和茎段外植体诱导愈伤组织和芽的分化率很低;而根状茎外植体易于培养,有较高的诱导率和增殖倍数,其愈伤组织、不定芽和不定根的诱导率分别可达87%、90%和99%以上.适宜根状茎外植体愈伤组织诱导的培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,有利于增殖和丛生芽分化的培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IBA和MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA,而1/2MS+3.0～5.0 mg/L NAA适宜诱导试管苗生根培养.试管苗的移栽成活率可达85%以上.     

资源植物罗布麻的愈伤组织诱导和植株再生研究

以罗布麻（Apocynum venetum L.）无菌苗的叶、茎和根作为外植体,在不同激素与浓度组合的MS培养基上进行愈伤组织诱导和植株再生研究。结果表明,在多个激素浓度配比的培养基中,罗布麻叶和茎的愈伤组织诱导率均可达到100%;但进一步将愈伤组织转接到含有不同激素组合的培养基进行不定芽分化时,叶和茎来源的愈伤组织的不定芽分化率有很大不同,茎来源的愈伤组织虽可在多个培养基中有不定芽分化,但最高诱导率仅达20%;而叶片来源的愈伤组织虽仅有4个激素组合培养基中有不定芽的分化,但最高分化率可达到35%。因此,构建罗布麻再生体系的最佳外植体应选择叶片。愈伤组织诱导与不定芽分化的最佳培养基均为：MS＋NAA0.1 mg/L＋6-BA 1.0 mg/L;不定芽在1/2MS＋NAA 0.2 mg/L生根培养基的生根效果最佳,不仅根群质量好,且生根率也高达100%;此再生苗的移栽成活率也最高,在适宜条件下可达75%。     

不同杂种优势类群玉米幼胚愈伤组织的诱导及植株再生特性的研究

以Reid、唐四平头和其它种质等3个杂种优势类群共19份玉米自交系为试验材料,以玉米幼胚作为外植体,研究了基因型、培养基和激素对玉米幼胚愈伤组织的诱导及植株再生的影响,结果表明供试材料均能进行愈伤组织的诱导,但是仅有12个自交系能再生植株。N6和改良N6培养基有助于提高愈伤组织的质量及其生长速度,2,4-D在愈伤组织的诱导中起着关键性作用。在诱导培养基中添加0.2mg／L的6-BA或KT会使胚性愈伤组织的诱导频率下降以及降低愈伤组织的质量。在胚状体诱导培养基中添加1mg／L的KT能促进绿苗的分化,但是浓度过高会使丛生苗分化过多。此外,通过对不同杂种优势类群自交系玉米幼胚培养特性的分析,发现在唐四平头类群的4个自交系中,黄早四的绿苗分化率仅为0.5％,其它3个自交系不能再生植株。但是,从Reid和其它种质类群的供试自交系中筛选出了胚性愈伤组织的诱导频率和绿苗分化率均较高的、适合于遗传转化的受体材料,如3189／4380、4380／陕综5、8103、先早17、18-599红、18-599白、501、178和冀53。     

扁豆花药培养成植株的初步研究

植物名称:扁豆(Dolichos lablab),品种紫花扁豆。材料类别:花粉发育处于四分体至双核初期的花药。培养条件:诱导愈伤组织培养基是B_5培养基,每升附加2,4-D2毫克,BA 0.5毫克,蔗糖为6％。分化培养基为MS,每升附加IAA 0.2—0.5毫克,BA1—2毫克,蔗糖为3％。诱导生根的培养基为MS,每升附加IAA 0.2—0.5毫克,蔗糖浓度降低为2％。培养室温度为26—28℃,诱导愈伤组织时为暗培养,分化和诱导生根时,荧光灯人工光照,每天10小时,光强为1000lux左右。     

β-昆虫蜕皮激素对小麦花粉苗形成的影响

将β-蜕皮激素加入小麦花药培养基中,观察到它对花粉苗诱导的影响。0.5～10毫克/升β-蜕皮激素提高了花粉胚和愈伤组织诱导率,它们能直接长成小苗。1～10毫克/升激动素抑制这种作用。β-蜕皮激素加2,4-D能得到高的愈伤组织诱导率,但这些愈伤组织不能在原培养基上直接分化成苗。β-蜕皮激素1毫克/升与萘乙酸1～5毫克/升相配合产生最高的花粉苗诱导率。这些小苗移入土中容易成活。对花药培养中花粉发育过程进行了细胞学观察。