乳杆菌优良菌株的筛选及对小鼠阴道白假丝酵母菌过度增殖干预

目的探讨乳杆菌优良菌株的筛选及其对小鼠阴道白假丝酵母菌过度增殖干预作用。方法对德氏乳杆菌DM8909菌株进行诱变筛选,得到耐抗生素突变株208,以ICR小鼠为实验对象,用甲硝唑进行小鼠阴道菌群脱污染,将白假丝酵母菌接种到小鼠阴道内,构建小鼠阴道白假丝酵母菌过度增殖模型。采用阴道接种德氏乳杆菌DM8909突变株208菌液（2×108CFU/mL）处理,取其阴道冲洗液进行阴道菌群分析,并进行阴道上皮细胞的电镜检查。结果乳杆菌干预后显著清除阴道内的假丝酵母菌,肠杆菌恢复正常水平,与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论德氏乳杆菌DM8909抗性菌株208能调整白假丝酵母菌在小鼠阴道内定植,对小鼠阴道上皮细胞有恢复作用。     

抗生素诱导小鼠阴道菌群失衡及乳杆菌调节作用的研究

目的 构建抗生素诱导的小鼠阴道菌群失衡模型,并研究乳杆菌对假丝酵母菌的阴道菌群失调的调整作用.方法 以IRC小鼠为实验对象,用头孢曲松造成阴道菌群失调,并将白假丝酵母接种到小鼠阴道内,造成小鼠阴道白假丝酵母过度增殖模型.对抗生素作用后的小鼠,采用乳杆菌预防、同步、治疗3种方式,阴道接种德氏乳杆菌DM8909菌液(2×108CFU/ml);取其阴道分泌物进行假丝酵母菌及乳杆菌的阴道菌群分析,并同时进行分泌物镜检,取阴道组织标本做病理组织学检查.结果 模型组小鼠阴道内细菌总数显著下降(P<0.01),出现阴道红肿、分泌物涂片镜检查到白细胞及假丝酵母.乳杆菌对小鼠抗生素导致的阴道菌群失衡的调节作用明显,受损小鼠阴道菌群的多样性和数量恢复至正常(P>0.05),其中乳杆菌预防组阴道菌群破坏程度最小(P<0.01);乳杆菌干预后的小鼠都可以显著性清除阴道内的假丝酵母菌(P<0.01),以乳杆菌预防组效果最好.结论 德氏乳杆菌DM8909能阻止白假丝酵母对阴道上皮的黏附作用,能调整阴道的菌群,对阴道黏膜有一定的修复功能.     

乳杆菌代谢物脂肪酸组分对白假丝酵母菌的抑制及临床疗效观察

目的观察乳杆菌DM9811代谢物中脂肪酸组分（以下称抑菌液）在体内外对白假丝酵母菌的抑制效果,探索外阴阴道假丝酵母菌病（VVC）的安全、有效、无副作用的生态制剂疗法。方法不同浓度抑菌液对白假丝酵母菌的作用及作用不同时间的抑菌效果;对2003年9月～2004年1月57例VVC患者分别给予抑菌液（试验组）及达克宁栓（对照组）进行治疗,并做相关细菌培养及疗效判定。结果（1）体外试验中抑菌液对白假丝酵母菌的抑制作用随着浓度的降低而降低;在1：2浓度（乙酸含量0．8mg／ml）抑制作用随着时闻的延长而增强,12h达100％;对乳杆菌无抑制作用。（2）体内试验中抑菌液使阴道白假丝酵母菌数量明显减少（P〈0．05）,使阴道pH明显降低（P〈0．05）,阴道内乳杆菌数量差异无显著性（P〉0．05）;达克宁栓使阴道内白假丝酵母菌数量明显减少,乳酸杆菌数量明显下降（P〈0．05）,而阴道pH无变化。（3）2组1疗程治愈率及1个月复查治愈率均差异无显著性。（4）副反应：两者比较差异有显著性（P〈0．05）。结论抑菌液在体内外对白假丝酵母茵均有明显的抑杀作用;降低阴道pH;对阴道乳杆菌数量无影响;无副作用;可用于VVC的治疗。     

纳米银体外对三种微生物的抑制作用及机制

目的探讨纳米银广谱的抗菌作用及机制。方法以金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌及白假丝酵母菌为研究对象,采用涂布法检测纳米银的杀菌作用,利用细菌呼吸链脱氢酶活性检测及透射电镜探讨纳米银抑菌的作用机制。结果≥0.05μg/mL的纳米银对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌及白假丝酵母菌具有明显的杀菌作用;5μg/mL的纳米银对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌及白假丝酵母菌作用60、30、15和5min均有明显的杀菌作用;纳米银对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的呼吸链脱氢酶活性具有明显的抑制作用;纳米银对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白假丝酵母菌的菌体形态具有明显的破坏作用。结论纳米银对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白假丝酵母菌具有高效、迅速及广谱的杀菌作用,这些作用可能与纳米银的多靶位作用机制有关。     

黄连解毒汤乙酸乙酯提取物对白假丝酵母菌黏附作用的影响

目的探讨黄连解毒汤乙酸乙酯提取物（ethyl acetateextract of Huanglianjiedu decoction,EAHD）对白假丝酵母菌黏附作用的影响。方法XTT法检测白假丝酵母菌黏附力;平板法计数导管上黏附的白假丝酵母菌CFU;倒置显微镜观察黏附的白假丝酵母菌;qRT—PCR法定量检测黏附相关基因EAP1、HWP1、ALS1、ALS3、MP65的表达。结果312μg/mL EDHA可显著抑制白假丝酵母菌在聚苯乙烯和聚酯导管上的黏附;白假丝酵母菌生长早期在EDHA作用下,菌细胞出芽数均呈现剂量依赖性降低;EDHA作用后,EAP1、HWP1均下调,ALS3、MP65均上调,ALS1几乎未变化。结论EAHD可显著抑制白假丝酵母菌的黏附作用。     

大鼠外阴阴道假丝酵母菌病模型中局部与全身免疫机制的研究

外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)是妇女常见病及多发病,白假丝酵母(白色念珠菌)是其主要致病菌。我们通过在大鼠皮下注射大剂量雌激素建立大鼠的假发情模型,然后在大鼠阴道内接种白假丝酵母(白色念珠菌)SC5314悬液,建立大鼠的外阴阴道假丝酵母菌病模型。在不同时间点检测大鼠血浆中及阴道局部白细胞介素‐2(IL2)、甘露糖结合凝集素(MBL)、Toll样受体‐4(TLR4)的值,探讨VVC及复发性外阴阴道假丝酵母菌病(RVVC)的免疫发病机制。我们发现大鼠血清中只有TLR4在第2周出现显著性上升,而在阴道灌洗液中,IL2在第3周显著下降,TLR4在第2和第3周显著上升,MBL在第1至第3周均显著下降。由此我们推断在外阴阴道假丝酵母菌发病过程中,阴道局部免疫功能异常可能与VVC和RVVC的发生密切相关。     

乳杆菌活菌胶囊辅助治疗妊娠期外阴阴道假丝酵母菌病疗效观察

目的探讨乳杆菌活菌胶囊辅助治疗妊娠期外阴阴道假丝酵母菌病疗效观察。方法选取妊娠期外阴阴道假丝酵母菌病患者70例,采用随机数字表将纳入患者分为观察组35例和对照组35例。观察组患者予以乳杆菌活菌胶囊联合制菌素阴道栓治疗,对照组予以单纯的制菌素阴道栓治疗,均连用10d。两组患者停药2周后进行临床疗效观察,并比较治疗后随访3个月的复发率。结果治疗后停药2周,观察组患者的临床总有效率（91．43％）明显优于对照组（71．43％）（χ2=4．63,P〈0．05）;治疗后随访观察3个月,对照组复发11例（44．00％）,观察组复发5例（15．63％）,观察组患者复发率明显低于对照组（χ2=5．60,P〈0．05）。结论乳杆菌活菌胶囊辅助治疗妊娠期外阴阴道假丝酵母菌病疗效好,复发率低,对外阴阴道假丝酵母菌病具有治疗和预防复发的双重功效。     

1800例妇科门诊患者阴道分泌物的病原学分析

目的了解妇科门诊患者中阴道分泌物的病原学。方法用湿片法进行阴道分泌物及细菌性阴道病（BV）检查,革兰染色法检查G^-双球菌。观察分泌物的病原体分布情况。结果1800例妇科门诊患者中,其阴道分泌物假丝酵母菌阳性549例,阳性率为30．50％;阴道毛滴虫阳性34例,阳性率为1．89％;BV399例,阳性率为22．17％;G^-双球菌16例,阳性率为0．89％。混合感染：假丝酵母菌合并阴道毛滴虫感染2例（0．11％）;假丝酵母菌合并BV192例（10．67％）;假丝酵母菌合并G^-双球菌5例（0．28％）;假丝酵母菌合并BV和G^-双球菌3例（0．17％）。结论妇科门诊患者阴道分泌物的病原体构成复杂,阴道炎主要以外阴阴道假丝酵母菌病和BV为主,部分可多种病原体混合感染。     

大肠埃希菌性阴道感染小鼠模型的建立

目的 :建立大肠埃希菌定植的阴道感染小鼠模型。方法 :在阿莫西林溶液 (12 5mg/ml)冲洗小鼠阴道冲洗处理下 ,将致病性大肠埃希菌接种到小鼠阴道内。结果 :各组小鼠阴道冲洗液检出的平均对数值比较 ,经过阿莫西林溶液小鼠阴道冲洗处理后再接种大肠埃希菌的阿莫西林 +大肠埃希菌组 ,阴道内定植的大肠埃希菌数量 (8 18± 1 0 9)较经过生理盐水小鼠阴道冲洗处理后再接种大肠埃希菌组 (5 72± 0 6 8)明显增多 (P <0 0 5 ) ,而且小鼠阴道感染的症状明显 (P <0 0 5 )。结论 :通过抗生素处理后 ,再在小鼠阴道内接种大肠埃希菌 ,大肠埃希菌能够在小鼠阴道内得到定植 ,即建立起大肠埃希菌性阴道感染的小鼠模型。     

乳杆菌DM9811代谢产物脂肪酸组分对义齿性口炎患者口腔中白假丝酵母菌的抑制

目的从调整口腔菌群平衡的角度出发,观察乳杆菌DM9811代谢产物脂肪酸组分对义齿性口炎患者口腔菌群的影响。方法（1）体外试验：配制不同浓度乳杆菌DM9811代谢产物脂肪酸组分的沙包液体培养基,分别接种10^8CFU／ml白假丝酵母菌菌液,用CFU活菌记数法计数。（2）临床试验：符合义齿性口炎病例40例,随机分为试验组20例和对照组20例（阴性对照组和阳性对照组各10例）。分别给予乳杆菌DM9811代谢产物脂肪酸组分、纯净水、洗必泰含漱液。观察菌群变化。结果（1）体外试验：乳杆菌DM9811代谢产物脂肪酸组分在浓度为1．6、0．8和0．4mg／ml时对白假丝酵母菌的抑制作用分别为100％、98．11％和62．72％。（2）临床试验：试验组在治疗后口腔黏膜白假丝酵母菌数量明显降低,口腔链球菌数量升高,较治疗前差异均有显著性（P〈0．01）;停药后第21天较治疗7d差异无显著性（P〉0.05）。结论乳杆菌DM9811代谢产物脂肪酸组分对口腔白假丝酵母菌有明显的抑杀作用;对口腔链球菌有促进作用,可能有调整口腔菌群平衡的作用。     

乳杆菌细胞壁成分对小鼠阴道组织β-防御素2诱导表达的影响

目的探讨乳杆菌细胞壁成分（Lactobacilluscell wall extract,LCWE）对小鼠阴道组织β-防御素2诱导表达的影响。方法将雌性ICR小鼠随机分成5组,实验组给予不同浓度的（5、20和100 mg/L）LCWE 200μL阴道接种处理;阴性对照组小鼠阴道接种生理盐水,阳性对照组小鼠阴道接种大肠埃希菌EPEC104菌液（3×109CFU/mL）,5 d后处死,取小鼠阴道组织,做阴道菌群分析评价,部分阴道组织提取总RNA,以β-actin为内参照,采用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测小鼠阴道组织β-防御素2表达。结果 20 mg/L和100 mg/L浓度LCWE处理后,小鼠阴道菌群较生理盐水组的肠杆菌、葡萄球菌明显减少（P〈0.05）,乳杆菌无显著性变化（P〉0.05）。生理盐水组小鼠阴道组织β-防御素2 mRNA表达量极低,大肠埃希菌阳性对照组能显著诱导小鼠阴道组织β-防御素2 mRNA的表达;5 mg/L浓度LCWE处理组开始,β-防御素2表达量开始提高,在100 mg/L浓度LCWE组其表达量达到最高。Western blot结果显示：生理盐水组小鼠阴道组织未检测到β-防御素2蛋白表达,而100 mg/L浓度LCWE处理组和大肠埃希菌EPEC104组均出现特异性条带。结论 LCWE可上调小鼠阴道组织β-防御素2的表达且存在着剂量依赖关系。     

纳米硒通过抗氧化应激调节大脑NO含量改善睡眠剥夺小鼠认知功能

研究了纳米硒对睡眠剥夺(SD)小鼠(Mus musculus)认知功能的影响,并探讨其作用机制。将120只雄性昆明小鼠随机分成两批,第一批24只分为3组:对照组(NC)、亚硒酸钠组(SE)和纳米硒组(NS),分别给予硒浓度为4μg/ml的亚硒酸钠和纳米硒溶液每只0.5ml/d,NC组给等体积蒸馏水,连续30d,第31天测定SE和NS两组小鼠的血硒及全血GSH-Px活性,评价两种硒源的生物利用性;第二批96只分为4组:对照组(N-SeC),纳米硒低、中、高剂量组(L、M、H),L、M和H组分别给予硒浓度为2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml的纳米硒溶液每只0.5ml/d,N-SeC组给予同体积蒸馏水,连续30d。第二批小鼠每组又各自分为4小组:SD对照组(SDC)及SD18h、SD36h、SD54h组,采用单平台水环境法(SPM)制作小鼠SD模型。在SD后,N-SeC、L、M和H组利用Y-型迷宫试验测定认知能力,同时测定小鼠大脑GSH-Px、NO、MDA含量。结果表明,纳米硒对GSH-Px活性的提高优于传统硒源亚硒酸钠,但血硒无显著差异;与SDC组比较,SD降低了小鼠的认知能力及大脑GSH-Px活性,提高了NO和MDA含量;与N-SeC比较,纳米硒使SD小鼠的认知功能得到改善,大脑GSH-Px活性提高,MDA和NO含量下降。上述结果表明,纳米硒能够改善SD小鼠的认知功能,这可能与其提高大脑GSH-Px活性并降低了自由基对大脑神经的损害有关。     

Metronidazole acid acyl sulfonamide: a novel class of anticancer agents and potential EGFR tyrosine kinase inhibitors

A series of novel metronidazole derivatives were recently reported as potent anticancer agents targeting EGFR and HER-2 by our group [Qian, Y.; Zhang, H. J.; Zhang, H.; Xu, C.; Zhao, J.; Zhu, H. L. Bioorg. Med. Chem.2010, 18, 4991]. Based on the previous results, we designed and synthesized a new series of metronidazole acid acyl sulfonamide derivatives and a new series of phenylacetyl benzenesulfonamide derivatives and their anticancer activities were evaluated as potential EGFR and HER-2 kinase inhibitors. Among all the compounds, compound 12 displayed the most potent inhibitory activity EGFR and HER-2 (IC(50)=0.39 μM for EGFR and IC(50)=1.53 μM for HER-2) and it also showed the most potent growth inhibitory activity against A549 and B16-F10 cancer cell line in vitro, with an IC(50) value of 1.26 μg/mL for A549 and 0.35 μg/mL for B16-F10. Docking simulation was further performed to position compound 12 into the EGFR active site to determine the probable binding model.     

Therapeutic efficacy of moxifloxacin in a murine model of severe systemic mixed infection with Escherichia coli and Bacteroides fragilis

The therapeutic efficacy of moxifloxacin was studied in an experimental murine model of a systemic aerobic/anaerobic mixed infection and compared to therapies with either imipenem or ciprofloxacin plus metronidazole. Groups of 20 mice each were intravenously (iv) infected with approximately 2.5 x 10(6) colony forming units (CFU) of Escherichia coli and 2 x 10(7)CFU of Bacteroides fragilis. Iv therapy was started 24 h post-infection (pi) with either moxifloxacin, imipenem, or ciprofloxacin plus metronidazole, for 3 days. A control group of 20 mice was left untreated. Survival rate at day seven pi was recorded, mice were then sacrificed and bacterial organ contents of livers and kidneys were determined. All mice treated survived at day seven, while six animals of the untreated group died. B. fragilis was not detected in any of the treated mice. E. coli was found in two of the moxifloxacin-treated mice and in two and five of the ciprofloxacin plus metronidazole and imipenem-treated animals, respectively. The results indicate that a therapy of severe mixed aerobic/anaerobic infections with moxifloxacin might be feasible and possibly be as efficacious as current therapy regimens with ciprofloxacin plus metronidazole or imipenem.     

人胃癌细胞株裸鼠皮下移植瘤模型的建立及其生物学特性

目的初步建立不同浓度下制备人胃癌细胞株BGC-823裸鼠皮下移植瘤模型,观察其生物学特性。方法培养人胃癌细胞系BGC-823细胞,并分别以四个浓度皮下注射于裸鼠腋下每只0.2 mL。根据BGC-823细胞注射浓度将40只裸鼠随机分为四组：组一5×107个活细胞/mL（n=10）;组二1×107个活细胞/mL（n=10）;组三1×106个活细胞/mL（n=10）;组四1×105个活细胞/mL（n=10）。观察各组裸鼠摄食、活动情况、精神状态、死亡率、成瘤时间、成瘤率、肿瘤生长情况,采用免疫组化法检测肿瘤微血管密度。结果各组裸鼠摄食、精神情况正常,无死亡现象。除组四1×105个活细胞/mL浓度组成瘤率为0%外,其余各组成瘤率均为100%,瘤体出现时间在3～7 d,肿瘤血管密度MVD平均为：（123.26±31.57）个/mm2。结论初步建立了人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型及建立此细胞系模型的最低浓度。为胃癌的进一步研究奠定了基础。     

烧烫伤创面感染的小鼠模型构建

目的探讨一种简单、稳定的烧烫伤创面感染的小鼠模型构建方法,以便进行相关烧烫伤创面修复研究。方法取30只BALB/c小鼠,采用自制木质烫伤板,沸水浴法烫取直径8 mm的圆形创面,烫伤时间分别为5 s、10 s、15 s。伤后48 h,取创面组织进行HE染色观察,筛选最佳创面烫伤时间。另取72只小鼠制成深Ⅱ度烫伤创面,采用擦刮法分别接种20μL菌浓度为1×106、l×107、1×108CFU/mL金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC 25923的菌液。接种细菌后72 h,取创面组织HE染色观察创面炎症反应情况,并测定3、7、14 d的皮肤菌负荷,筛选最佳的细菌接种浓度。最后,按最佳条件建模后,观察创面的完全愈合时间以及创面愈中、愈后的组织学变化,以确定此创面感染模型是否建立成功。结果组织学结果表明,10 s为深Ⅱ度创面的理想致伤时间,最佳接种菌浓度为l×108CFU/mL,此时期,14 d内菌负荷均高于l×105CFU/g。该模型的创面愈合时间(21±0.95 d)较正常创面愈合时间(15.92±0.34 d)明显延长(P<0.01),炎性反应明显,愈后不佳。结论烧烫伤创面感染的小鼠模型构建成功,可作为感染创面防治研究的实验动物模型。     

多孔板-MTT比色法评价植物和微生物代谢产物的抗真菌活性

多孔板-MTF比色法测定植物和微生物代谢产物对真菌抑制活性的步骤为:在多孔板的每孔中依次加入浓度为105孢子/mL的供试真菌孢子悬液90μL,不同浓度的药液10 μL.25℃暗培养48 h,然后每孔中加入8mg/mL的MTT溶液10μL,继续培养10 h后,离心去上清,加入DMS0 150 μL,振荡30 min,离心后上清液在510nm测定吸光值.采用上述条件测定了白屈菜红碱对稻瘟病菌和西瓜枯萎病菌的MIC值分别为80和1.5μg/mL,IC50值分别为21.99和0.78 μg/mL;Diepoxinζ对稻瘟病菌的MIC和IC50值分别为200和96.21 μg/mL.多孔板-MTT比色法为快速有效地筛选和评价植物和微生物抗真菌活性成分创造了条件.     

In vitro Activity of Moxifloxacin Against 179 Strains of Anaerobic Bacteria Found in Pulmonary Infections

The activity of moxifloxacin (BAY 12-8039), a new 8-methoxyquinolone, was determined using the NCCLS-approved Wadsworth brucella laked blood agar method and compared to the activities of metronidazole, penicillin G, piperacillin/tazobactam and trovafloxacin. Breakpoints used to define susceptible and resistant categories were, respectively: ≤ 8 and ≥ 32 μg/mL for metronidazole, ≤ 2 and ≥ 8 μg/mL for moxifloxacin and trovafloxacin, ≤ 0.5 and ≥ 2 μg/mL for penicillin G and ≤ 32 and ≥128 μg/mL for piperacillin/tazobactam. A total of 179 anaerobic isolates from pulmonary infections were tested. Piperacillin/tazobactam was the most active antimicrobial, inhibiting 99% of strains at the susceptible breakpoint. Ninety-seven percent of these isolates were susceptible to moxifloxacin; 96% to trovafloxacin, 89% to metronidazole and 43% to penicillin G. Geometric mean moxifloxacin MIC values forBacteroides fragilis and the B. fragilis group were 0.5 and 0.8 μg/mL, respectively. Eighty-eight percent of B. fragilis and 100% of other B. fragilis group species were susceptible to both moxifloxacin and trovafloxacin. All of the strains of B. fragilis and most of the other B. fragilis group species were resistant to penicillin G. At least 99% of other Bacteroides species, Prevotella, and Fusobacterium strains were susceptible to moxifloxacin, metronidazole, piperacillin/tazobactam and trovafloxacin (88% were susceptible to trovafloxacin at 2 μg/mL and all were susceptible at 4 μg/mL). The strains of Clostridium difficile andClostridium ramosum found in these specimens were both resistant to penicillin G but susceptible to the other agents. All strains of Peptostreptococcus species were susceptible to all of the agents except penicillin G. Activities of the agents against non-spore-forming Gram-positive rods at the intermediate breakpoint were, respectively, moxifloxacin-100%, metronidazole-49%, penicillin G-86%, piperacillin/tazobactam-100%, and trovafloxacin-97%. The promising in vitro activity of moxifloxacin against anaerobic pulmonary isolates warrants further investigation, including clinical correlation studies.