一株耐铝隐球酵母菌株5-2的分离鉴定及耐铝特性分析

目的分离高耐铝的微生物菌株,为耐铝基因克隆和耐铝机制研究奠定基础。方法用含5 mmol/L铝的平板逐级筛选和纯化,PCR扩增ITS序列和26S r DNA D1/D2序列,用菌株在不同铝浓度的固体培养基和液体培养基中的生长状况鉴定耐铝能力,用ICP-AES测量菌液上清中剩余活性铝的含量。结果通过ITS序列和26S r DNA D1/D2序列比对及形态观察,初步鉴定该菌株为Cryptococcus podzolicus,该菌株的最大耐铝能力达到100 mmol/L,而且该菌株能够吸附溶液中的活性铝,这可能是其耐铝的原因之一。结论该菌种是首次发现具有耐铝能力,从而为土壤微生物耐铝机制的研究及克隆耐铝基因提供了很好的实验材料。     

低温污水中耐冷微生物的筛选及多样性分析

采用4种分离培养基对新疆乌鲁木齐市污水处理厂低温污水中的耐冷微生物进行分离筛选, 共获得各种耐冷微生物154株, 其中丝状真菌12株, 酵母46株, 放线菌6株, 细菌90株。并对部分菌株的耐受性和产酶特性进行了研究, 获得了耐4%NaCl的菌株44株, 耐0.2%苯酚的16株, 耐0.5% SDS的33株, 具有淀粉酶活性的菌株40株, 蛋白酶活性的30株, 脂酶活性的27株。对其中60株细菌进行16S rRNA基因测序, 序列比对分析表明, 其分属13个属, 其中菌株39与不动杆菌属中的标准菌株Aci     

茶园土壤耐酸铝酵母菌的分离鉴定及其耐铝特性的初步研究

目的为研究铝毒及耐铝机制提供更好的模式生物材料和进一步研究耐铝机制提供依据。方法通过对云南龙陵县茶园土壤耐酸铝微生物的筛选、分离和纯化,筛选出一株Y31耐酸铝酵母。结果经D1/D2区域克隆测序获取全长26S rDNA区域序列,构建系统发育树,初步鉴定Y31为长形隐球酵母（Cryptococcus longus）。在LPM培养基及GM培养基上耐铝水平检测表明Y31分别能耐100 mmol/L和50 mmol/L铝。用不同铝浓度处理酵母菌后,进行FDA PI双染色并用荧光显微镜观察,当铝浓度达到100 mmol/L时,出现明显的细胞凋亡过程。结论本研究为铝毒和生物体耐铝机制提供了生物材料。     

一株耐碳酸盐Bacillus属细菌的鉴定与特性分析

本研究从松嫩平原pH值在10.0以上、植物难以生存的斑块状裸地中分离到一株细菌SA-5,经鉴定该菌株为革兰氏染色阴性,杆状,接触酶阳性,氧化酶阴性,菌落呈橙黄色的好氧细菌,可水解淀粉.抗逆特性分析显示,菌株SA-5可在高达275 mmol/L Na2CO3或pH 12.0以及2.0 mol/L NaCl培养基中生长,中性条件下生长明显受到抑制,其中对碳酸盐的耐受性远高于普通植物.根据16S rDNA序列等分析结果显示,菌株SA-5属于Bacillus属,仅与菌株Bacillus aurantiacus K1-5T相似性最高,为99%,与其余已发表菌株均低于97%.由以上结果可见,菌株SA-5是Bacillus属中一株嗜碱耐盐菌,并且菌株SA-5对耐碳酸盐基因的开发具有潜在的价值.     

耐铝的和对铝敏感的玉米自交系根系的有机酸分泌

对玉米不同耐铝自交系在含A1^3 (0.1mmol/L)的完全营养液和A1C13 14．3μmol/L CaCl2 227．5μmol/L溶液等两种溶液中根系有机酸的分泌特征进行了研究。铝胁迫下,耐铝自交系Z1的生长与正常偏离不大,表现出较强的耐铝性,而铝敏感自交系Z2的生长则受到明显抑制。2种自交系根系分泌的有机酸种类包括苹果酸、柠檬酸、琥珀酸、马米酸、乙酸和草酸等,以苹果酸为主;其分泌量随铝处理时间而异。在两种溶液中,铝胁迫均可显著增加Z1苹果酸分泌量,且根系内苹果酸含量也显著增加。铝胁迫下,Z1根系NADP—苹果酸脱氢酶活性显著增加。从对试验结果分析得出：根系分泌苹果酸可能是玉米耐铝自交系适应酸性土壤逆境的生理特性之一,而分泌的苹果酸可能是在根系中通过PEP→4OAA→苹果酸途径合成的。     

一株耐盐细菌的16S rRNA基因序列分析

从舟山群岛滩涂土壤中获得了海水和底泥样品,并从中提取到了一株耐盐细菌,通过用不同盐浓度的培养基培养,挑取单菌落,反复划线纯化,得到了耐盐菌的单菌落。通过菌株基因组DNA的提取、菌株的抗性实验、质粒的提取、16S rRNA的PCR扩增及克隆、16S rRNA的全序列分析等手段,对该菌株的16S rRNA的基因序列进行了研究。     

氟化物对家蚕耐氟和氟敏感品种肠道中留存产酶菌群落组成和多样性的影响

【目的】研究氟化物对家蚕Bombyx mori肠道内留存产酶菌的影响, 有助于了解家蚕耐氟和氟敏品种的耐氟力差异。【方法】分别给家蚕耐氟品种T6和氟敏品种734添食NaF溶液浸泡后的新鲜桑叶, 至5龄第3天取材。采用筛选培养基筛选产蛋白酶、 纤维素酶、 脂肪酶、 淀粉酶的菌株, 并结合16S rDNA系统发育关系, 对菌株进行分类鉴定。【结果】家蚕肠道内产消化酶细菌有芽孢杆菌属Bacillus、 葡萄球菌属Staphylococcus、 肠杆菌属Enterobacter和不动杆菌属Acinetobacter和微小杆菌属Exiguobaterium, 其中芽孢杆菌Bacillus sp.、 葡萄球菌Staphylococcus sp. 和不动杆菌Acinetobacter sp.细菌可同时产4种酶。氟中毒后T6肠道内产酶菌由5种减少到4种, 734肠道内产酶菌由2种减少到1种。【结论】家蚕肠道内留存的产酶菌与家蚕自身的耐氟能力相关。     

金川镍矿可培养细菌的多样性及耐镍菌株筛选

目的:了解金川镍矿可培养细菌的多样性和分离筛选有较高镍耐受性的菌株.方法:2007年8月从金川镍矿采集土壤样品,经过在TSA固体培养基上稀释涂布和划线分离得到55株纯培养菌株,对分离的所有菌株均提取基因组DNA,利用通用引物27F和1492R扩增得到16S rDNA的序列并测序,同时利用含不同浓度镍离子的MH培养基对所分离的菌株做了MIC分析.结果:55株菌属于11个属14个分类单元(16S rDNA序列相似性在97%以上为同一个分类单元),其中2株属于变形菌门γ亚群(Gammaproteobaaeria)(3.6%)、3株属于变形菌门α亚群(Alphaproteobacteria)(5.5%)、12株属于厚壁菌门(Firmicutes)(21.8%)、38 株属于放线菌门(Actinobacteria)(69.1%),优势菌是节杆菌属(60%),其中菌株C4、D3、D7的MIC最高达到20mmol/L.结论:金川镍矿有着较丰富的细菌多样性,菌株C4、D3、D7有潜在的应用价值.     

微生物铝毒害和耐铝毒机制研究进展

在酸性土壤中,铝毒是限制农作物生产的关键问题之一,铝同样对微生物产生毒害作用。研究微生物的铝毒害和耐铝毒机制可以为植物耐铝毒机制的研究提供一种新视角。目前的研究表明,铝作用于微生物细胞的细胞壁、细胞膜、细胞核和细胞器,影响微生物的物质和能量代谢,抑制微生物的生长和发育。针对这些毒害作用,铝毒耐受微生物通过多途径全方位的机制适应外界的铝毒环境。该文结合作者的研究工作,综述了微生物的铝毒害和耐铝毒机制。     

不同决明基因型的耐铝特性

在铝浓度120 mg·L-1条件下,通过溶液培养试验,研究了40个决明品种(系)对铝毒的反应.比较了不同基因型各性状的相对耐性值及其与综合评价系数的相关性.结果表明:相对株高、相对根系干物质量、相对地上部干物质量和相对根系活力可作为决明耐铝毒基因型筛选的重要指标.40个品种(系)中,86134R2、2208、3170、316、2211、2232的耐铝毒能力较强,属于耐铝毒的决明基因型,而34721R1、92985、3184的耐铝毒能力较弱,属于铝敏感的决明基因型.     

Isolation and Characterization of NH+4-Excreting Mutants of Enterobacter gergoviae

NH4+-excreting mutants were isolated from Enterobacter gergoviae 57–7 wild type as methylamine resistant strains which were obtained by mutagenesis with a transposable element Tn5. The MG 61 mutants excreted 2 mmol/L of ammonium during a diazotrophic growth. The growth of MG 61 mutants were slower than the growth of wild types because of its excreting ammonium. MG 61 mutants expressed up to 86% of the fully depressed nitrogenase activity when grown in a medium containing 20 mmol/L ammonium. By contrast the ammonium grown cultures of wild type had no nitrogenase activity. In the presence of 5 mmol/L or 30 mmol/L of ammonium in the medium, the growth of MG 61 mutants was as same as CK and much slower than that of the wild types which means that the mutants could not utilize amonium very well in the medium. But MG 61 mutants could utilize glutamate as a sole nitrogen source. In the presence of nitrate (10 mmol/L) in the medium, MG 61 mutants grew slowly but excreted 7.8 mmol/L of ammonium.     

联合固氮菌Enterobactergergoviae57—7泌铵突变株的分离和特性

经 Tn5转座子诱变从野生型菌株 ( Enterobacter gergoviae 5 7- 7)筛选到抗甲胺 ( 0 .3mol/L )的泌铵突变株 MG61 ,该突变株在固氮生长时能分泌铵 2 .0 mmol/L。由于泌铵 MG61的生长比野生型菌株慢 ,在培养基中含铵 ( 5 mmol/L或 30 mmol/L)条件下 ,MG61的生长速率与对照相同 ,而远比野生型菌株慢 ,表明 MG 61不能很好地利用铵。在含 2 0 mmol/L铵的培养基中 MG 61仍表达 86%的固氮活性 ,而野生型菌株完全丧失了固氮活性。在谷氨酸存在下 MG61的生长速率及固氮酶活性都比对照高。在硝酸盐存在下 MG61的生长速率与对照相同 ,但泌铵量达 7.8mmol/L。     

高产吲哚乙酸及高泌氨巴西固氨螺菌的筛选与鉴定

目的：从玉米根际和土壤中分离具有高产吲哚乙酸较强的泌氨能力的巴西固氮螺菌。方法：分别通过半固体NFb培养基、CR培养基、LB培养基分离培养固氮菌株,并经过一系列菌落菌体形态特征、生理生化特性和16S rDNA序列测定等试验对其进行鉴定。结果：经分离纯化获得10株固氮菌,并鉴定均为巴西固氮螺菌（Azospirillum brasilense）,其中菌株R7在甘油半固体培养基上能分泌约14mmol/L的氨,在添加了色氨酸的培养基中能够合成58.8μg/ml的吲哚-3-乙酸（IAA）。结论：成功筛选得到一株既高产吲哚乙酸又有较强的泌氨能力的巴西固氮螺菌。     

一株重金属高耐受菌的分离及鉴定

利用含不同浓度的重金属选择性培养基,对采集的微生物样本进行分离,并筛选出一株超高耐受重金属菌ZM-12。对ZM-12的16S rDNA高变区序列进行BLAST比较和MEGA 4.0分析,结果通过同源进化树分析表明该菌属于肠杆菌属（Enterobacter）。对该菌进行生理生化实验、最低抑菌浓度（MIC）的测定和火焰原子吸收实验,结果表明：ZM-12属于革兰氏阴性杆菌,在不同种类的重金属培养基中,其MIC值各不相同,Cu2+、Pb2+、Mn2+、Ni2+对ZM-12的MIC值分别为22.33 mmol/L、14.48 mmol/L、>200 mmol/L、58.69 mmol/L。通过火焰原子吸收的方法,测定了ZM-12对培养基中重金属的去除率,培养一定时间后,分别测定了溶液中重金属Pb2+、Mn2+、Cu2+、Ni2+的浓度,得到其最大去除率分别达到97.68%、99.93%、41.23%、99.46%。该菌株的发现及鉴定为重金属污染环境的治理提供了参考。     

The effect of citric acid on growth of proteolytic strains of Clostridium botulinum

In strictly anaerobic conditions in a culture medium adjusted to pH 5.2 with HCl and incubated at 30 degrees C, inocula containing less than 10 vegetative bacteria of Clostridium botulinum ZK3 (type A) multiplied to give greater than 10(8) bacteria per ml in 3 d. Growth from an inoculum of between 10 and 100 spores occurred after a delay of 10-20 weeks. Citric acid concentrations of 10-50 mmol/l at pH 5.2 inhibited growth from both vegetative bacteria and spore inocula, a concentration of 50 mmol/l increasing the number of vegetative bacteria or of spores required to produce growth by a factor of approximately 10(6). The citric acid also reduced the concentration of free Ca2+ in the medium. The inhibitory effect of citric acid on vegetative bacteria at pH 5.2 could be prevented by the addition of Ca2+ or Mg2+ and greatly reduced by Fe2+ and Mn2+. The addition of Ca2+, but not of the remaining divalent metal ions, restored the concentration of free Ca2+ in the medium to that in the citrate-free medium. The inhibitory effect of citric acid on growth from a spore inoculum was only partially prevented by Ca2+. Citric acid (50 mmol/l) did not inhibit growth of strain ZK3 at pH 6 despite the greater chelating activity of citrate at pH 6 than at pH 5.2. The effect of citric acid and Ca2+ at pH 5.2 on vegetative bacteria of strains VL1 (type A) and 2346 and B6 (proteolytic type B) was similar to that on strain ZK3.     

Use of 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-beta-D-galactopyranoside for the isolation of beta-galactosidase-positive bacteria from municipal water supplies

A new medium, mX-Gal, has been developed for the membrane filter enumeration of beta-galactosidase-positive bacteria in municipal water supplies. mX-Gal medium contains the chromogenic beta-galactosidase substrate 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-beta-D-galactopyranoside (X-Gal). All Aeromonas, Citrobacter, and Enterobacter strains isolated from raw water on mX-Gal medium were beta-galactosidase positive. In contrast, only 10 to 20% of these strains produced a red colony with a metallic sheen on m-Endo agar LES medium. Of 674 chlorinated water samples analyzed for total coliforms on m-Endo agar LES medium and for beta-galactosidase-positive bacteria on mX-Gal medium, 18 that were negative for coliforms on m-Endo agar LES showed beta-galactosidase-positive bacteria on mX-Gal. Of a total of 50 beta-galactosidase-positive bacteria isolated from these samples, 76% were identified as Aeromonas hydrophila.     

废弃铅锌矿石和钨矿砂中可培养细菌多样性分析

为了了解废弃铅锌矿石和钨矿砂中可培养细菌的多样性,发掘其中的微生物新资源,采用3种培养基(R2A、无磷R2A、无磷R2A+Cd2+)分别对其中的可培养细菌进行分离纯化和培养。再通过16S rRNA基因测序获取相关的分类学信息,并进行系统进化分析。从2种材料中共分离到可培养细菌152株。其中,废弃铅锌矿石中的可培养细菌涵盖了5个门、7个分支,分属于Alphaproteobacteria、Betaproteobacteria、Gammaproteobacteria、Deinococcus-Thermus、Actinobacteria、Bacteroidetes和Firmicutes,以Massilia、Methylobacterium、Deinococcus和Sphingomonas为主要类群;而钨矿砂中的可培养细菌涵盖了3个门、4个分支,分属于Alphaproteobacteria、Betaproteobacteria、Actinobacteria和Firmicutes,以Methylobacterium、Massilia、Ralstonia和Microbacterium为主要类群。废弃铅锌矿石中可培养细菌的多样性和新分类单元发现率均大于钨矿砂,且两者的可培养细菌类群组成存在较大差异。此外,向培养基中添加重金属Cd2+降低了可培养细菌的多样性。研究分离到的Cd2+耐受菌株主要属于3个属：Methylobacterium、Herbaspirillum和Ralstonia,其能耐受2 mmol/L Cd2+,是金属尾矿中重金属耐受菌的优势种群。研究结果为金属尾矿中微生物新资源的深入发掘提供了依据。     

牛蒡根际可培养细菌多样性和镉耐性初步分析

从牛蒡根际土壤中分离可培养细菌,进行多样性分析,并对镉耐受性菌株进行筛选及其抗性和种群多样性进行了分析。限制性内切酶多态性分析显示,分离的菌株可分为9个操作分类单元(OUT),分别属于变形菌门、厚壁菌门和放线菌门,分属于6个科,9个属,其中隶属于肠杆菌属、芽胞杆菌属和假单胞菌属的是优势物种。分离到的耐镉菌株分别属于Bacillus subtilis、Enterobacter aerogenes、Enterobacter ludwigi、Klebsiellasp.、Pectobacterium carotovorum、Pseudomonassp.,而Pectobacterium carotovorumNP22、Enterobacter ludwigii NP23、Pseudomonassp.NP39三菌株可在Cd2+浓度为400 mg/L固体培养基上生长。     

抗Cu2+嗜酸氧化亚铁硫杆菌的驯化及诱变育种

从我国三大铜矿的酸性矿坑水中富集分离出9个具有较强活性的嗜酸氧化亚铁硫杆菌菌株,经过Cu~(2 )的系列浓度梯度的培养,选出其中天然抗铜能力最强的菌株26~#,在Cu~(2 )浓度为0．20mol/L的9K培养基中能在72h内完全氧化培养基中的Fe~(2 ),在含0．22mol/L Cu2~(2 )的9K培养基中能在192h内完全氧化培养基中的Fe~(2 )。以CuSO_4·5H_2O为单变量驯化介质驯化该26~#抗铜菌株,26~#驯化菌株的Fe~(2 )氧化能力明显增强:在含0．25mol/LCu~(2 )的9K培养基中能在84h内完全氧化其中的Fe~(2 )。为了提高驯化菌的稳定性,将驯化后的26~#菌株用紫外线进行诱变。研究结果表明:驯化诱变对菌种的改良有重要的作用,诱变后菌株的生长性能稳定,氧化活性进一步提高,26~#驯化诱变菌在0．25mol/LCu~(2 )存在的条件下完全氧化9K培养基中Fe~(2 )的时间约为60h,对Fe~(2 )氧化能力明显强于驯化菌及野生菌。