环氧基高分子磁性复合微球固定化木瓜蛋白酶的研究

研究以甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)为单体,二甲基丙烯酸乙二醇酯(EDMA)为交联剂,聚乙烯醇(PVA)为分散剂,在Fe3O4磁性纳米粒子存在的条件下,合成了交联度为25%的磁性高分子复合微球(GMAE-DMA).并以这种微球为载体,进行了对木瓜蛋白酶的固定化研究.探讨了最佳的固定化条件如下:温度为25℃,反应时间20h,pH值为8.5,给酶量为160mg/g.同时以酪蛋白为底物,研究了固定化酶的酶学性质,结果表明:固定化酶对不同pH值环境的耐受力、热稳定性和操作稳定性都有较大幅度的提高.实验证明这种高分子磁性复合微球是一种优良的固定化酶载体.     

用磁性微球载体固定化酶的研究

含铁磁体的高分子微球,其表面可化学偶联酶,抗体、抗原等生物活性物质,从而增加生物质的稳定性和存活期,同时可用外部磁场快速简便地分离反应物,因此磁性微球载体已逐渐应用于细胞、蛋白质的分离、亲和层析和放射免疫等生化技术领域。许多酶反应是临床     

磁性复合微球固定化酶制备过程及其研究进展

磁性复合微球作为一种优良的载体,广泛应用于生物医学和技术上,如蛋白纯化、药物绑定、酶固定化等.磁性复合微球制备过程包括纳米磁性粒子合成、磁性复合微球制备,将酶与经表面戎基、氛基、环氧基等功能基团修饰或直接与磁性微球共价结合,或者与表面经金属离子鳌合的磁性微球吸附从而实现酶固定化.本文介绍了磁性复合微球的制备过程及其在固定化酶方面的研究进展.     

尼龙固定化木瓜蛋白酶及其应用研究

 尼龙经CaCl_2和H_2O的甲醇溶液处理,稀HCl水解用戊二醛交联以制备固定化木瓜蛋白酶。在溶液酶浓度为1mg/mL pH7.5—8.0、4—15℃条件下固定3h,活力回收42.5％,相对活力46％,偶联效率52％,半衰期72天。溶液酶Km值和固定化酶K_m~(aPP)值(底物酪蛋白W/V,％)分别为0.28％和0.35％。溶液酶和固定化酶分别在pH6.5和pH8.0以下活力稳定;最适pH分别为7.0和8.0;在65℃处理30min活力分别为原有活力的89％和66％。当酪蛋白浓度为1.5％和2.5％以上活力分别受到抑制。固定化酶在6mol/L脲中连续浸洗5次共6h其活力稳定,仍有原活力的44.4％;用以处理啤酒浊度比对照下降了2-11倍;蛋白质含量下降了55％;冷藏(4℃)120天,无冷混浊发生;同时各项理化指标和风味不变。     

磁性微球固定化胶原酶筛选抑制剂的研究

以表面修饰的磁性微球作为载体,以共价结合的方式将胶原酶固定化,从56种中草药中快速筛选具有抑制作用的种类。结果表明:表面羧基磁性微球与胶原酶能较好地固定化,酶的反应浓度为2 mg/m L,并且不影响其活性。以SDS-PAGE电泳的方法作为检测手段,从56种中草药中筛选出草河车对胶原酶具有较好的抑制作用。     

木瓜蛋白酶的固定化及其性质研究

在海藻酸钠-壳聚糖固定化木瓜蛋白酶(immobilized papin on sodium alginate-chitosan,IPSAC)的实验中,当给酶量为1 mg g1载体时,酶活性为39.2 U,酶活力回收为21.1%.在尼龙布固定化木瓜蛋白酶(knmobilized papain onnylon,IPN)的实验中,当每块尼龙布(3 cm×3 cm)给酶量为1 mg时,酶活性为35.6 U,酶活力回收为19.2%.木瓜蛋白酶(papain,PA)、IPSAC、IPN的最适pH分别为7.2、7.2和6.8.PA及IPSAC在70℃以下活性稳定;IPN在50℃以下活性稳定.IPSAC与IPN半衰期分别为59 d和66 d.     

漆酶在磁性壳聚糖微球上的固定及其酶学性质研究

以磁性壳聚糖微球为载体,戊二醛为交联剂,共价结合制备固定化漆酶。探讨了漆酶固定化的影响因素,并对固定化漆酶的性质进行了研究。确定漆酶固定化适宜条件为：50 mg磁性壳聚糖微球,加入10mL 0.8mg/mL 漆酶磷酸盐缓冲液（0.1mol/L,pH 7.0）,在4℃固定2h。固定化酶最适pH为3.0, 最适温度分别为10℃和55℃,均比游离酶降低5℃。在pH 3.0,温度37℃时,固定化酶对ABTS的表观米氏常数为171.1μmol/L。与游离酶相比,该固定化漆酶热稳定性明显提高,并具有良好的操作和存储稳定性。     

纤维素固相化木瓜蛋白酶

 本文用叠氮法制备了纤维素固相化木瓜蛋白酶(简称CMCP)。与相应酶液水解酪蛋白的反应相比,它表现出较低的酶活性,较高的最适pH值和较高的稳定性。CMCP的比活回收率约为24％,最适pH值向碱性范围移动约为0.5个单位。CMCP经60℃热处理,持续3h活性无明显下降,在4℃下保存127天,活性只下降了40％左右。对这些参数,本文都根据CMCP的结构特点进行了分析。 CMCP柱还表现出明显的对啤酒的防浊能力。过柱的啤酒,氨基酸的含量大大增加。     

壳聚糖固定化木瓜蛋白酶的研究

以壳聚糖为载体,成二醛为交联剂将木瓜蛋白酶固定化。5％戊二醛在4-6℃下处理载体5h,加酶液(3.5mg/mL蛋白,pH7.2)固定12h,活力回收达32％,作用于酪蛋白的半衰期为36天,其表观K_m(酪蛋白)值为0.075％(W/V),溶液酶的K_m值为0.086％;最适pH7.0～7.5,溶液酶为7.0～8.5。固定化酶在pH8.5以下,溶液酶在9.0以下活力稳定。固定化酶在45℃以下,溶液酶在75℃以下稳定。用6mol/L脲洗脱固定化酶4次(5.5h)活力仍有54.5％。用固定化酶处理啤酒浊度比对照下降了1.5-3.7倍,蛋白质含量下降了44％,冷藏(4℃)120天无冷混浊现象发生并保持了啤酒原有风味和理化性状。     

壳聚糖固定化木瓜蛋白酶的研究

以自制的壳聚糖作为载体,用戊二醛作交联剂,优化了固定化条件,研制成壳聚糖固定化木瓜蛋白酶。其活性回收率达到42—53％,操作半衰期达到一个月以上,对热、乙醇以及尿素的稳定性有很大的提高,Km值为0.67×10~2mg/mL,最适温度65—70℃,最适pH8.0,能使啤酒中的蛋白质浓度从56.5mg/L减少到2.7mg/L,可以消除啤酒的低温混浊现象。     

Papain Immobilization Study in Enzymatic Synthesis of Dipeptide Gly-Phe

Papain catalysed peptide synthesis was followed to determine the optimum conditions for adsorption and covalent binding immobilization methods. The synthesis of the dipeptide Gly-Phe was studied in two different reaction systems: a) For adsorbed papain, in an organic medium containing low water concentration, b) For covalently bound enzyme, in a two-liquid phase system, using trichloroethylene as organic phase. The amount of enzyme offered to the immobilization support and the p^H of the immobilization procedure were the main parameters studied.     

金属螯合载体定向固定化木瓜蛋白酶的研究

以磁性金属螯合琼脂糖微球为载体,利用金属螯合配体（IDACu²⁺）与蛋白质表面供电子氨基酸相互作用的原理,定向固定了木瓜蛋白酶。固定化最适条件为Cu²⁺1.5×10^-2mol/g载体、固定化时间4h、固定化pH7.0、给酶量30mg/g载体。固定化酶的最适反应温度70℃、最适反应pH8.0,固定化酶的热稳定性明显高于溶液酶,固定化酶活力回收为68.4％,且有较好的操作稳定性,载体重复使用5次后固定化酶酶活为首次固定化酶79.71%。     

葡聚糖磁性毫微粒固定化L－天冬酰胺酶的研究

葡聚糖磁性毫微粒固定化Ｌ－天冬酰胺酶的研究徐慧显,李民勤,潘再群,马建标,何炳林（南开大学高分子化学研究所,天津３０００７１）大肠杆菌天冬酰胺酶对急性淋巴白血病有明显疗效［１］,注射入体内以后,可迅速清除血清中的天冬酰胺──敏感性肿瘤细胞的必需营养成...     

氨基化二氧化硅颗粒固定木瓜蛋白酶研究

采用正硅酸乙酯与N-(β-氨乙基)氨丙基三乙氧基硅烷在油包水形成的微胶囊中同步水解的方法,一步法制备了氨基化的二氧化硅颗粒,得到的颗粒粒径在0.3～0.5μm之间,平均大小为0.37μm, 氨基含量和颗粒大小可控,氨基含量高达56mmol/g。此颗粒经戊二醛处理后,采用共价法固定木瓜蛋白酶,固定化最适pH6.5,最佳给酶量为15mg/g载体,固定化酶的最适反应温度为70℃,最适反应pH为6.5,固定化酶热稳定性,pH耐受性,贮存稳定性都明显高于游离酶,表明此颗粒可作为一种优良的酶固定化载体。     

Rhus vernicifera Laccase Immobilization on Magnetic Nanoparticles to Improve Stability and Its Potential Application in Bisphenol A Degradation

In the present study, Rhus vernicifera laccase (RvLac) was immobilized through covalent methods on the magnetic nanoparticles. Fe₂O₃ and Fe₃O₄ nanoparticles activated by 3-aminopropyltriethoxysilane followed with glutaraldehyde showed maximum immobilization yields and relative activity up to 81.4 and 84.3% at optimum incubation and pH of 18 h and 5.8, respectively. The maximum RvLac loading of 156 mg/g of support was recorded on Fe₂O₃ nanoparticles. A higher optimum pH and temperature of 4.0 and 45 °C were noted for immobilized enzyme compared to values of 3.5 and 40 °C for free form, respectively. Immobilized RvLac exhibited better relative activity profiles at various pH and temperature ranges. The immobilized enzyme showed up to 16-fold improvement in the thermal stability, when incubated at 60 °C, and retained up to 82.9% of residual activity after ten cycles of reuses. Immobilized RvLac exhibited up to 1.9-fold higher bisphenol A degradation efficiency potential over free enzyme. Previous reports have demonstrated the immobilization of RvLac on non-magnetic supports. This study has demonstrated that immobilization of RvLac on magnetic nanoparticles is very efficient especially for achieving high loading, better pH and temperature profiles, and thermal- and solvents-stability, high reusability, and higher degradation of bisphenol A.