肾透明细胞癌中免疫检查点相关的免疫逃逸机制的研究进展

摘要：近年来,免疫治疗在晚期肾透明细胞癌的治疗中异军突起,使人们对于肾癌治疗有了全新的认识。肿瘤免疫治疗药物是通过抑制免疫检查点从而抑制肿瘤细胞免疫逃逸,使免疫细胞可以杀伤肿瘤细胞来发挥治疗作用。因此,了解肾透明细胞癌中免疫检查点相关免疫逃逸机制对于制定有效的治疗策略以及开发新的免疫治疗药物至关重要。本文对目前肾透明细胞癌中主要的免疫检查点（PD-1/PD-L1、CTLA-4、B7-H4、LAG-3、TIM-3和HLA-G）相关的免疫逃逸机制进行综述。     

人树突状细胞的大量培养及鉴定

摘要 目的：探讨人树突状细胞体外大量培养及鉴定方法。方法：采用免疫磁珠法分离纯化CD34⁺干细胞;采用含有TPO、SCF、Flt3L和IL-3的扩增培养基培养1周,以及含有SCF、Flt3L、GM-CSF和IL-4的分化培养基培养2-3周,获得CD34⁺细胞来源树突状细胞。采用普通光学显微镜观察细胞形态,牛鲍氏血细胞计数板进行细胞计数,荧光抗体标记、流式细胞仪检测细胞纯度和细胞表面共刺激分子的表达情况。结果：以含有TPO、SCF、Flt3L和IL-3的培养基扩展培养一周,及含有SCF、Flt3L、GM-CSF和IL-4的培养基诱导分化3周,可获得大量悬浮细胞;细胞数目扩增倍数约达50倍;普通光学显微镜下可见悬浮细胞有明显的树突状凸起;流式细胞术检测结果显示悬浮细胞中CD141和CD11c双阳性细胞（等同于单核细胞来源树突状细胞）比例达30%,此群细胞高表达HLA-DR和CD209,低表达共刺激分子CD80和CD86;细胞寿命较短,40天时培养体系中悬浮细胞和CD34⁺细胞来源树突状细胞数目急剧减少。结论：采用多细胞因子联合刺激可获得大量的树突状细胞,为树突状细胞的特性及功能学研究奠定了基础。     

抑郁状态对患者调节性T细胞和调节性B细胞的作用研究

目的:探讨抑郁状态对患者调节性T细胞(Treg细胞)和调节性B细胞(Breg细胞)的作用。方法:收集入住我院40名抑郁患者,同时将来我院进行体检的40名健康志愿者作为对照组。分离各组的淋巴细胞,CD4、CD25和Foxp3标记Treg细胞,CD3、CD19和TGF-β标记Breg细胞,之后流式检测各组细胞的比例。结果:流式结果显示CD4+的辅助T细胞比例在抑郁组和对照组之间没有显著的差别(P0.05);抑郁组中CD4+CD25+Foxp3+的Treg细胞的比例显著的高于对照组,升高了52.3%,结果具有统计学差异(P0.05);CD3-CD19+的B细胞比例在抑郁组和对照组之间没有显著的差别(P0.05);相对于对照组,抑郁组CD3-CD19+TGF-β+的Breg细胞比例显著升高,增加了91.7%,结果具有统计学差异(P0.05)。结论:抑郁患者体内Treg细胞和Breg细胞显著升高,引起机体免疫低下,我们的研究为了解神经和免疫的相关性提供了一定的理论参考。     

胃功能三项联合Hp抗体对胃癌及癌前病变的鉴别诊断价值

目的:探讨胃功能三项联合幽门螺杆菌(Hp)抗体对胃癌及癌前病变的鉴别诊断价值。方法:收集我院2014年5到2017年8月收治的胃癌患者34例(胃癌组)、癌前病变患者46例(癌前病变组),抽取研究对象空腹静脉血5 mL,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清胃蛋白酶原-I(PG-I)、血清胃蛋白酶原-II(PG-II),并计算PG-I/PG-II(PGR)值,采用胶体金法或胶乳免疫比浊法检测HP抗体,比较两组胃功能三项及HP抗体阳性率差异,分析胃功能三项联合HP抗体鉴别诊断价值。结果:胃癌组血清PG-Ⅰ和PGR水平低于癌前病变组(P0.05),胃癌组与癌前病变组血清PG-Ⅱ水平、HP抗体阳性率比较差异无统计学意义(P0.05)。胃癌组HP抗体阳性者和阴性者血清PG-Ⅰ、PG-Ⅱ、PGR水平比较差异均无统计学意义(P0.05),癌前病变组HP抗体阳性者血清PG-Ⅰ水平明显低于HP抗体阴性者,差异具有统计学意义(P0.05)。并联检查胃癌和癌前病变的准确度分别为67.6%(23/34)、43.5%(20/46),高于串联的14.7%(5/34)、6.5%(3/46),差异具有统计学意义(P0.05)。结论:Hp感染可能导致PG-Ⅰ降低,具有癌前病变风险,再降低可能具有胃癌风险,临床上根据胃功能三项筛检早期胃癌并且辅助HP检测可早期诊断胃癌。     

乌苯美司联合放化疗对晚期肺癌免疫功能的影响

目的:评价乌苯美司联合放化疗对晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者免疫功能的影响。方法:选择2014年1月至2016年1月来我院进行初治的NSCLC患者78例,按随机数字表法分为对照组和实验组各39例。对照组进行常规放化疗,实验组在常规放化疗的基础上加服乌苯美司进行治疗。观察并比较两组患者治疗前后免疫功能的情况。结果:实验组治疗后血清可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平与治疗前相比有所下降,且实验组显著低于对照组(P0.05)。实验组治疗后外周血中T细胞亚群(CD3~+、CD4~+)和NK细胞所占比例及CD4~+/CD8~+的比值与治疗前相比有所升高,且实验组高于对照组(P0.05);CD8~+所占比例有所下降,且实验组低于对照组,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:通过检测外周血中T细胞亚群、NK细胞含量和血清sIL-2R、IL-6、IL-8、TNF-α水平,可以反映患者的免疫状态。乌苯美司联合放化疗能够有效提高晚期NSCLC患者的免疫功能,可作为化疗的辅助性用药。     

树突状细胞与肠道免疫

肠道黏膜免疫系统是肠道防御细菌和病毒感染的第一道防线,在维持肠道黏膜自稳方面发挥着重要的作用。肠道黏膜免疫系统持续不断的与来自外界的食物抗原和病原微生物及自身长期共存的肠道菌群相互作用,刺激机体对有害抗原产生免疫应答反应,诱导机体对无害抗原产生免疫耐受。树突状细胞（Dendritic cells,DCs）是目前已知的最强有力的一种专职抗原递呈细胞（Professional antigen presenting cells,APC）,     

树突状细胞与抗肿瘤免疫

提高免疫系统对肿瘤的杀伤能力是肿瘤免疫学上目的,随着对免疫肿瘤抗原的了解以及对T细胞免疫反应和肿瘤逃逸机制的进一步认识。方面军一目的已取得了进展,体内含量稀少的抗原递呈细胞-树突状细胞（DC8）是这些机制的关键。体外从外周血祖细胞诱导扩增这些细胞为肿瘤治疗开辟了新纪元。DC8作为肿瘤疫苗,在B细胞淋巴瘤、黑色素瘤、前列腺癌等病人身上已有了一定的疗效。     

耗竭性T细胞在肿瘤中的作用

耗竭性T细胞(exhausted T cells)是一群效应功能减弱,持续表达抑制性受体的T细胞,在肿瘤中表现为T细胞功能缺陷状态,主要特征为一系列抑制性受体表达增加及细胞因子分泌减少。耗竭性T细胞主要通过细胞表面的抑制性分子,细胞因子和免疫调节细胞类型改变等参与肿瘤免疫负调控,从而引起肿瘤免疫逃逸。而T细胞耗竭状态并非不可逆转,应用相应单克隆抗体靶向免疫调控点可以有效逆转耗竭性T细胞,恢复机体抗肿瘤免疫反应,提高肿瘤控制率。因此,通过逆转肿瘤患者体内的耗竭性T细胞可能是肿瘤免疫治疗的新途径之一。     

信必可都保对慢性阻塞性肺疾病患者树突细胞的调节

目的:探讨布地奈德/福莫特罗吸入剂(商品名:信必可都保)对于慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary diseaseCOPD)患者外周血中树突状细胞(dendritic cell DCs)亚群、肺功能以及炎症反应因子的影响。方法:选取符合入组标准的COPD急性加重期患者,共80例,随机分成2组,每组40人。对照组给予常规对症治疗,实验组在此基础上给予信必可都保吸入,观察入组对象治疗前、治疗4周后两组患者外周血树突状细胞亚群(m DCs和pDCs)的水平、C反应蛋白(C-reactive protein CRP)、白细胞计数表达水平及CAT评分、肺功能的变化。结果:用药后m DCs和pDCs占外周血的百分比及m DCs/pDCs实验组及对照组均较用药前明显降低(P0.05),实验组优于对照组低,但差异无明显的统计学意义(P0.05)。用力肺活量(FVC)、FEV1占预计值百分比(FEV1%)、FEV1/FVC、CAT评分两组均较用药前有所改善,实验组较与对照组更明显(P0.05)。用药后C反应蛋白(CRP)、白细胞计数(WBC)较用药前有所改善,但用药后实验组与对照组相比无统计学差异(P0.05)。结论:信必可都保可有效改善COPD患者肺功能,改善其临床症状,但对树突细胞亚群的影响不明显。     

树突状细胞与肿瘤免疫

树突状细胞（dendriticcells,Dcs）是目前已知的功能最强的抗原提呈细胞,具有调节免疫应答与诱导免疫耐受的能力。而树突状细胞所发挥的功能与其是否成熟有很大的关系,未成熟状态的树突状细胞具备致耐受性,而成熟状态的树突状细胞则对肿瘤免疫起着重要作用。该文将对DC的免疫学特性及Dc与肿瘤的关系予以综述。     

IgA肾病患者扁桃体中树突状细胞和高内皮小静脉关系的研究

摘要 目的：探讨IgA肾病（IgA nephropathy,IgAN）患者扁桃体树突状细胞（dendritic cells,DCs）与高内皮小静脉(High endothelial venules, HEVs)的关系。方法：我们检测了25例IgAN患者的扁桃体,并以复发性扁桃体炎（Recurrent tonsilitis, RT）患者的扁桃体22例作为对照。用免疫组化方法检测DCs标志物CD208,用实时聚合酶链反应检测淋巴毒素β（ Lymphotoxin β,LT-β） mRNA水平,用Hematoxylin-eosin染色确定HEVs。结果：IgAN患者扁桃体CD208+DCs明显高于对照组（P<0.001）。IgAN患者扁桃体HEVs明显高于对照组（P<0.001）。此外, IgAN患者扁桃体LT-mRNA水平明显高于对照组（P<0.001）。IgAN 扁桃体中CD208+DC与HEVs明显成正相关（r=0.7427,P<0.001)。结论：扁桃体CD208+DCs可能通过HEVs导致IgAN患者扁桃体免疫的异常而促进肾脏疾病的发展。     

CCR7在树突状细胞中的功能及对角膜免疫调节的研究进展

树突状细胞（dendritic cells,DCs）是体内已知的功能最强大的专职抗原提呈细胞,对于诱导机体初始免疫应答尤为重要。趋化受体因子7（chemokine receptor 7,CCR7）是一个已知的调节各类免疫细胞向初级、次级淋巴细胞分化,并向外周淋巴器官归巢的趋化因子受体,其具有自我平衡表达能力,在趋化DCs从外周组织迁移至次级淋巴器官中起关键作用。随着研究的深入,除了CCR7最主要的趋化作用外,更多的功能逐渐被了解。目前,DCs和CCR7的相关功能已被应用于诱导角膜移植后的免疫耐受等眼科领域。就CCR7在DCs中的功能及其对角膜免疫调节的影响进行综述,探讨其关键作用及可能的治疗靶点。     

CCR7 在树突状细胞中的功能及对角膜免疫调节的研究进展

树突状细胞(dendritic cells, DCs)是体内已知的功能最强大的专职抗原提呈细胞,对于诱导机体初始免疫应答尤为重要。趋 化受体因子7 (chemokine receptor 7,CCR7)是一个已知的调节各类免疫细胞向初级、次级淋巴细胞分化,并向外周淋巴器官归巢 的趋化因子受体,其具有自我平衡表达能力,在趋化DCs 从外周组织迁移至次级淋巴器官中起关键作用。随着研究的深入,除了 CCR7 最主要的趋化作用外,更多的功能逐渐被了解。目前,DCs 和CCR7 的相关功能已被应用于诱导角膜移植后的免疫耐受等 眼科领域。就CCR7 在DCs中的功能及其对角膜免疫调节的影响进行综述,探讨其关键作用及可能的治疗靶点。     

透明质酸孵育树突状细胞对荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的：研究透明质酸对小鼠骨髓来源树突状细胞功能的影响以及回输后荷黑色素瘤小鼠脾淋巴细胞增殖、活化和细胞因子 的变化,进而探讨透明质酸诱导的树突状细胞增强荷瘤小鼠免疫功能的机制。方法：体外细胞因子联合诱导培养小鼠骨髓细胞获 得树突状细胞（DCs）,免疫磁珠分选纯化获得CD11c+树突状细胞,经不同浓度透明质酸（HA）刺激后,采用酶联免疫吸附法 （ELISA）检测培养上清液中细胞因子IL-12p70 含量。建立小鼠皮下B16 黑色素瘤模型,肿瘤局部皮下回输HA 孵育DC后检测 肿瘤大小,应用ConA 检测脾淋巴细胞增殖情况,应用MTT 法检测脾淋巴细胞杀伤活性,ELISA 法检测脾淋巴细胞分泌的 TNF-alpha和IFN-r的表达,以单纯DC回输、生理盐水注射以及正常小鼠（无瘤）组作为对照。结果：在10～100 ug/mL 范围内,HA 以剂量依赖的方式上调DCs 分泌IL-12p70。HA 孵育DC处理组肿瘤生长明显受到抑制;淋巴细胞增殖反应、杀伤活性和细胞因 子TNF-alpha和IFN-r的表达明显高于单纯DC 组和生理盐水组(P < 0.05)。结论：透明质酸可促进小鼠骨髓DC 的成熟;透明质酸孵 育的DC 通过增强荷瘤小鼠的抗肿瘤免疫功能而抑制肿瘤的生长。     

组织因子阳性的细胞和微粒在胃癌高凝状态中的作用

目的:探讨胃癌患者血浆中组织因子阳性的血小板、白细胞和微粒的数量及其促凝活性。方法:将45例胃癌患者根据TNM分期分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期,同时选取30例健康人作为对照组。采用流式细胞术检测组织因子阳性的细胞和微粒数。凝血酶生成实验检测细胞和微粒的凝血活性。结果:胃癌Ⅲ/Ⅳ期患者血浆中组织因子阳性的血小板、中性粒细胞、单核细胞和微粒的数量明显高于胃癌Ⅰ/Ⅱ期和健康对照组。胃癌Ⅲ/Ⅳ期患者血小板、白细胞和微粒的促凝活性与其他组相比显著升高,与增加凝血酶的生成速度和生成总量有关。用抗组织因子抗体抑制TF后,细胞和微粒的凝血活性明显下降。然而,使用抗膜连蛋白V抑制PS后,细胞和微粒的凝血活性虽然有下降趋势,但是并不明显。此外,根治性手术治疗可以降低组织因子阳性的血小板、中性粒细胞、单核细胞和微粒的数量。结论:组织阳性的血小板、中性粒细胞、单核细胞和微粒是胃癌Ⅲ/Ⅳ患者高凝状态的原因之一,通过抑制TF和凝血酶的生成可能降低胃癌患者的血栓发生率。     

胃癌的过继性免疫治疗研究进展

胃癌是目前世界上发病率及致死率较高的恶性肿瘤之一,在东亚地区尤其显著。针对胃癌的治疗手段仍是传统的手术联合化疗、放疗为主,尽管靶向药物治疗提供了新的选择,但其对晚期胃癌的疗效仍然有限。胃癌的免疫治疗作为独特的治疗手段,在近十多年发展较为活跃,特别是过继性免疫治疗手段不断有创新。过继性免疫治疗主要依赖回输具有抗肿瘤活性的细胞,目前回输的细胞由具有非特异性抗肿瘤作用向具有特异性抗肿瘤作用演变,特别是嵌合性抗原T细胞治疗的出现,为进展期胃癌患者提供了有一种潜在的选择。本文对胃癌过继性免疫治疗中采用的不同免疫活性细胞的作用机制、临床应用等进行总结,并针对其不足提出利用基因工程技术增强治疗靶向性、降低免疫逃逸的研究方向。     

血清sCD44v6、HLA-G、G-17、Hp-IgG联合检测在胃癌与癌前病变筛查中的临床价值探讨

摘要 目的：探讨血清可溶性CD44变体6（sCD44v6）、人类白细胞抗原-G（HLA-G）、胃泌素-17（G-17）、幽门螺杆菌-免疫球蛋白G（Hp-IgG）联合检测在胃癌与癌前病变筛查中的临床价值。方法：选择2019年2月至2022年2月期间首都医科大学附属北京朝阳医院消化内科收治的121例胃癌癌前病变患者（癌前病变组）和125例胃癌患者（胃癌组）,另选择同期120例健康体检者作为对照组,检测并比较三组间血清sCD44v6、HLA-G、G-17水平以及Hp-IgG阳性率。根据Hp-IgG阳性情况,将胃癌组进一步分为Hp-IgG阳性组与Hp-IgG阴性组,比较两组间血清sCD44v6、HLA-G、G-17水平。应用Spearman秩相关分析胃癌组血清sCD44v6、HLA-G、G-17水平与Hp-IgG阳性率的相关性,应用受试者工作特征（ROC）曲线分析sCD44v6、HLA-G、G-17、Hp-IgG单独鉴别和联合四项指标鉴别胃癌癌前病变与胃癌的价值。结果：胃癌组血清sCD44v6、HLA-G、G-17水平以及Hp-IgG阳性率高于癌前病变组、对照组（P＜0.05）,癌前病变组血清sCD44v6、HLA-G、G-17水平以及Hp-IgG阳性率高于对照组（P＜0.05）,胃癌组中Hp-IgG阳性组sCD44v6、HLA-G、G-17水平高于Hp-IgG阴性组（P＜0.05）。胃癌组血清sCD44v6、HLA-G、G-17水平与Hp-IgG阳性率呈正相关（rs=0.536、0.492、0.512,P＜0.05）。联合sCD44v6、HLA-G、G-17、Hp-IgG鉴别胃癌癌前病变以及胃癌的曲线下面积为0.863,高于各指标单独鉴别。结论：血清sCD44v6、HLA-G、G-17水平以及Hp-IgG阳性率在胃癌患者与胃癌癌前病变患者中存在明显差异,胃癌患者血清sCD44v6、HLA-G、G-17水平与Hp-IgG阳性有关,联合四项指标检测在胃癌与癌前病变筛查中具有较高的临床价值。     

血清Hcy，叶酸和维生素B12在胃癌及其癌前疾病中的作用

目的:探讨血清同型半胱氨酸(Hcy)、叶酸以及维生素B12在胃癌及癌前疾病中的水平及临床意义。方法:收集2014年1月至2016年8月我院收治的100例胃癌患者(胃癌组),及100例胃良性病变患者包括41例胃炎、34例胃溃疡、25例胃息肉(癌前病变组),并于同期随机选择200例健康体检者为对照组,采用循环酶法测定三组的血清Hcy,电化学发光免疫分析法测定叶酸及维生素B12水平,并分析各指标与胃癌临床病理特征的关系。结果:胃癌组、癌前病变组血清Hcy水平均高于对照组,叶酸及维生素B12水平均低于对照组,并且胃癌组血清Hcy水平高于癌前病变组,叶酸及维生素B12水平低于癌前病变组,差异有统计学意义(P0.05)。Ⅲ+Ⅳ期胃癌患者Hcy水平高于Ⅰ+Ⅱ期,进展期患者Hcy水平高于早期,有淋巴结转移患者Hcy水平高于无转移者,差异有统计学意义(P0.05);Hcy表达与性别、年龄、病变位置以及分化程度无关,差异无统计学意义(P0.05)。叶酸、维生素B12的表达在胃癌患者中与各临床病理特征(性别、年龄、TNM分期、肿瘤浸润深度、病变位置、有无淋巴结转移、分化程度)无明显关系,差异无统计学意义(P0.05)。结论:血清Hcy在胃癌患者中呈高水平表达,而叶酸及维生素B12呈低水平表达,联合检测三种指标有助于早期区分胃癌及癌前病变,同时血清Hcy还可能参与了胃癌的发生发展过程。Hcy、叶酸及维生素B12可作为早期鉴别诊断胃癌及其癌前病变的重要指标。     

体外修饰树突状细胞诱导免疫耐受的研究

目的:探讨体外联合应用白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)和甲基强的松龙(methylprednisolone,Medron)修饰供体树突状细胞(dendritic cell,DC)对小鼠皮肤移植术后免疫耐受的诱导效果,为抗移植术后免疫排斥反应治疗提供依据。方法:以健康成年C57BL/6小鼠为供体。BALB/c小鼠为受体,随机分为6组。除A组外,其余各组均于皮肤移植前3d自尾静脉输入对应的供体DC。具体对应关系如下:A组为空白对照,尾静脉输入生理盐水;B组为输入未修饰的DC;C组为20μg/L IL-10处理组;D组为10mg/L Medron处理组:E组为20μg/L IL-10 10mg/L Medron处理组。同时设立F组,为BALB/c对BALB/c的同种同基因皮片移植。各组行皮肤移植术,观察受体移植皮片存活情况。结果:E组的移植皮片存活时间最长,与其它各处理组相比P＜0．05,存在统计学差异。结论:用IL-10和甲强龙修饰的供体树突状细胞对受体进行预处理,可明显延长移植皮片的存活时间。