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从北京西郊清华园附近田间豇豆上采集的豇豆单孢锈菌(Uormyces vignal Barcl)夏孢子。萌发后提取双链RNA,电泳分析可测出300—8000碱基对的三组双链RNA。从萌发的孢子中通过差迷离心提取病毒样颗粒,可获得二种类型的病毒样颗粒,一种直径为35—40nm的等轴颗粒。另一种为长短不等的棒状颗粒,用提纯物提取核酸电泳分析与直接从孢子中提取的双链RNA有相同的核酸带,从而证明这些双链RNA存在于病毒样颗粒中。 相似文献
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从印度木薯花叶病毒(ICMV)侵染的植物中纯化特异的核酸,经RNAase,DNAasc,Nucle-aseSl,ExonucleaseⅢ和EcoRI酶切,Southern和Dotblots杂交证实,在感病的植株中,存在两种形式的病毒核酸:环状双链DNA和环状单链DNA,后者可能是病毒DNA的(-)链,环状双链DNA经限制性内切酶作用可得2.7kb的线性双链DNA纯化的病毒核酸含DNA1和DNA2两个分子量相近的组份。 相似文献
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双链RNA技术在植物病毒研究中的应用 总被引:19,自引:0,他引:19
含RNA基因组的植物病毒在复制时会产生双链RNA(dsRNA)。本文介绍了用CF--11纤维素粉提取dsRNA的步骤,并列举了dsRNA在植物病毒研究中的应用,其主要应用有(1)用于检测植物病毒;(2)用于病毒株系分化;(3)用于病毒卫星RNA及亚基因组RNA研究;(4)用于侵染性测定及病毒基因组功能研究等。 相似文献
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鸡传染性支气管炎病毒免疫原基因cDNA的克隆和序列分析 总被引:3,自引:0,他引:3
从含有鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的鸡胚尿囊液中快速提取病毒RNA,得到约23kb全长IBV RNA。运用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)得到1.72kb编码全长IBV免疫原糖蛋白S1的基因片段。进一步将此基因片段插入到质粒pUC19中,进行全长片段的序列分析。结果表明,IBV北京株和Beaudette株的核酸同源性为97.8%,与M41株的核酸同源性达98.5%。 相似文献
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从松毛虫中分离一种球状二十面体病毒粒子。病毒直径为44nm 。通过低温冷冻电镜技术和计算机图像处理技术,研究了该病毒衣壳的三维结构。结果表明 ,病毒颗粒具双层结构,衣壳由240个亚基组成,分布于T=4的二十面体上。病毒核酸地衣酚 反应呈阳性,联苯胺反应呈阴性结果。而紫外吸收实验则呈明显的单链特征,辅以酶消化实 验的结果,证实该病毒为单链RNA病毒。琼脂糖电泳显示该病毒RNA分子大小约为5.2kb。SDS-聚丙烯酰胺电泳表明该病毒结构蛋白有一条大小约为52kD主带和一条弱带(39kD)。本病毒 是T-4病毒科的一名新成员,这是我国首次报告的T-4病毒科的病毒。 相似文献
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本文对双链RNA(dsRNA)病毒复制机制的研究进展进行了综述。根据dsRNA病毒复制周期,分以下几方面对其复制的有关分子进行分析:转录、转录本释放和“满头”复制模型、(+)RNA转译、病毒包装、(-)RNA合成等。此外,还简要分析了宿主基因及其产物在病毒复制中的作用。 相似文献
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我国河南与北京腹泻患儿中的星状病毒感染 总被引:4,自引:0,他引:4
人星状病毒(HAstV)是RNA病毒的新家族,从我国河南和北京两地区的急性腹泻患儿便样中鉴定了7株星状病毒,经电镜观察病毒颗粒直径约为28nm,表面呈五角或六角星状形态,用RT-PCR检定为阳性,比较PCR扩增产物的核苷酸序列构建的序列同源性树表明,1990年在河南流行的星状病毒主要为HAstV-1,另有一株HAstV-5,1996年北京流行株为HAstV-5。对HAstV患儿的临床症状进行了讨论 相似文献
11.
反义寡核苷酸的非反义作用 总被引:3,自引:0,他引:3
反义核酸作为一种调控特定基因表达的手段,是通过与特异mRNA分子上5′翻译区、mRNA启动-编码重叠区、核内hnRNA剪接供点结合抑制mRNA的翻译、剪接、转运或通过形成RNA-DNA杂合双链,激活RNaseH,降解mRNA来达到抑制靶基因表达的目的... 相似文献
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水稻齿叶矮缩病毒Segment 9 dsRNA的序列分析及其在大肠杆菌DE3中的… 总被引:3,自引:0,他引:3
通过有机试剂抽提,CF-11纤维素柱层析,从感染水稻齿叶矮缩病毒菲律宾分离株(RRSV-P)的水稻植株中获取该病毒的全基因组,即获得从Segment 1到Segment 10(S1-S10)的10条双链RNA(dsRNA),然后设计合适的引物,用RT-PCR方法得到S9的cDNA并将其克隆到pUC119质粒上扩增,以双链测序法测定该cDNA的全序列。同时又将此cDNA克隆到大肠杆菌表达质粒pGEX 相似文献
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小量快速RNA,DNA提取研究耐药株中GSTЛ及癌基因的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
本文采用一种小量快速RNA制备法(硫氰酸胍-酚,氯仿/异尤戊醇-液氮)和DNA-RNA联合提取法(硫氰酸胍-酚,氯仿/异戊醇-液氮法),提取RNA和同一样本中DNA与RNA,同时采用一种快速液相杂交法,通过标记探针与样品DNA或RNA经变性-复性杂交,凝胶电泳,凝胶抽干,放射自显影。经用本法研究P388/ADR耐药株中的GSTπ及三种癌基因表达表明:耐药株中的GSTπ较敏感株增加1.56倍(p<0 相似文献
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侵染蚕豆的烟草花叶病毒研究 总被引:9,自引:0,他引:9
1993年4月从杭州蚕豆田病株上分离获得病毒分离物B-935A,汁液摩擦接种5科19种植物,B-935A能侵染3科12种植物。被侵染的蚕豆产生黄斑、花叶,后期叶片黄化并有坏列;在菜豆上产生局部枯斑。B-935A的钝化温度为85-90摄氏度,稀释限点为10^-8-10^-7。病毒粒体杆状,平均长度约30nm,病毒的衣壳蛋白亚基只有一条多肽链,分子量约为17.5KD,包裹的核酸为单链RNA,长约6.4 相似文献
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原位分子杂交研究肾综合征出血热尸检组织中汉坦病毒M和SRNA的分布 总被引:3,自引:0,他引:3
本文以核酸原位分子杂交法研究了国内不同地区HFRS尸检病例组织中病毒RNA的分布和定位。结果在19例病例组织中均可检测到病毒RNA。陕西及沈阳地区病例,阳性部位主要是各脏器上皮及实质细胞。江西地区病例,病毒RNA主要出现于各脏器组织内血管壁及毛细血管内皮细胞。广州一例,病毒RNA主要分布于肝脏灶性溶解性坏死区域,肺泡壁和肾间质血管等部位。病毒RNA主要定位于细胞胞浆,呈颗粒状或全浆阳性,也出现于部 相似文献
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本文用氧钒核糖核苷复合物VRC(VanadylRibonucleosideComplex)孵育的方法,从石蜡包埋半年以上的肾组织中提取出RNA,分析了RNA的质量,探讨了影响RNA提取的因素。在此基础上,我们又采用tRNA助沉的方法,进一步从石蜡包埋的微量肾活检组织中提取出RNA,并用逆转录热启动PCR(RT-hotstart-PCR)方法,观察了石蜡包埋的肾活检组织中细胞因子的基因表达。 相似文献
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生物素标记GFV-cDNA探针的制备及在检测葡萄扇叶病毒上的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
以整合到质粒中的GFV-cDNA为模板经PCR合成了生物素标记的GFV单、双链探针。用合成的探针对提纯的cFV-RNA_2、感染CFV的昆诺藜叶及18株而萄进行DNA-RNA杂交检测表明:检测提纯病毒RNA_2的灵敏度为1.5pg/斑点,感染GFV的昆诺藜提取液最高稀释度可达40960倍;11株显示典型扇叶症状的样品杂交结果均为阳性,且汁液稀释400~800倍仍能测出,7株不显示典型扇叶症状的葡萄中3株受到GFV的侵染。单、双链探针最适使用浓度分别为1/200及1/100。 相似文献
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天花粉毒蛋白使核糖体失活的分子机制是它有RNAN-糖苷酶的作用。从樟树种子中纯化的两种新的核糖体失活蛋白(RIP)——辛纳毒蛋白和克木毒蛋白也都具有RNAN-糖苷酶和依赖超螺旋结构的核酸内切酶活性。辛纳毒蛋白还有杀虫活性;克木毒蛋白还有超氧化物歧化酶活性。被RNAN-糖苷酶失活的核糖体用硼氢化钠还原或氨基酸加成反应可部分地复活,这表明失活的核糖体RNA上产生的一个活泼醛基对其失活起着重要作用。工作中建立了荧光标记在凝胶上测定小分子RNA序列和定性测定糖蛋白的两种新方法。 相似文献
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AGPC法是一种快速、简便、有效的RNA提取方法。参照该法自新生大鼠脑组织中提取出总RNA,进一步通过oligo(dT)-纤维素亲和层析分离获得poly(A) ̄+RNA。当poly(A) ̄+RNA或总RNA经显微注射法进入非洲爪蟾卵母细胞后,其翻译系统能够利用外源mRNA合成具有催化活性的胆碱酯酶。表达的胆碱酯酶大部分分泌到卵母细胞培养液中。在一定范围内,mRNA的注射量与胆碱酯酶的表达量成正比。所合成的胆碱酯酶活性可被毒扁豆碱和S-(2-二异丙基氨乙基)甲基硫赶膦酸乙酯(VX)抑制。 相似文献
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引起番茄坏死病的黄瓜花叶病毒TN分离物的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
从南京郊区田间番茄坏死病株中分离出黄瓜花叶病毒TN分离物,经人工接种10科39种植物,能侵染其中的8科26种,接种番茄,辣椒和普通烟都引起坏死症状。TN分离物的失毒温度为50℃,稀释限点5×10 ̄(-3)-5×10 ̄(-4),体外存活期1-2天。蚜虫以非持久性方式传毒,经免疫双扩散测定,TN分离物与黄瓜花叶病毒抗血清呈阳性反应。用差速离心提纯的病毒粒子经电镜观察为廿面体,直径为28nm。SDS-PAGE分析病毒外壳蛋白为单一组份,分子量27500D。病毒核酸组份分析发现,该病毒分离物含有CMV基因组核酸和一个低分子量的卫星RNA。以上结果同已报道的引起番茄坏死的带卫星RNA的黄瓜花叶病毒株系一致(Kearney,C.M.1990;Jorda,C.1992)。本文还讨论了该病害的发生和流行。 相似文献