重组人α降钙素基因相关肽在大肠杆菌中表达条件的优化

为提高人α降钙素基因相关肽(bαCGRP)在大肠杆菌中的表达量,研究了本室构建的pET-hαCGRP重组质粒在E.coli BL21trxB(DE3)pKysS宿主菌中的表达条件.经SDS-PAGE分析和YLN2000凝胶影像分析结果表明,重组菌以LB为培养基,氨苄青霉素浓度为50 mg/L,开始诱导时的菌体密度为OD600=0.6～0.8,所加IPTG的浓度为0.75mmol/L,37℃摇床180±5r/min振荡诱导培养4 h时,可获得高效表达的hαCGRP融合蛋白.重组蛋白的最高表达量占菌体总蛋白的70%～80%;它主要以可溶性形式存在,为下一步纯化工作提供了方便.     

降钙素基因相关肽肽段的抗原性和免疫原性

用固相合成法合成了有关降钙素基因相关肽ＣＧＲＰ五个肽段。它们的氨基酸顺序分别为：ＣＧＲＰ－１（２４－３７）;ＣＧＲＰ－２（１４－３７）;ＣＧＲＰ－３（９－２３）;ＣＧＲＰ－４（１－２３）和ＣＧＲＰ－５（１－１３）。用酶标方法测定了它们的抗原性,发现ＣＧＲＰ－２和ＣＧＲＰ－１能够很好地与抗ＣＧＲＰ抗血清结合。将ＣＧＲＰ－１;ＣＧＲＰ－３和ＣＧＲＰ－５分别免疫兔子,获得的抗血清分别与ＣＧＲＰ进行反应,发现只有抗ＣＧＲＰ－１的抗血清能够与ＣＧＲＰ很好地结合。因此,可以推测ＣＧＲＰ的羧端部分是其免疫活性部位。     

降钙素基因相关肽肽段的抗原性和免疫原性

用固相合成法合成了有关降钙素基因相关肽ＣＧＲＰ五个肽段。它们的氨基酸顺序分别为：ＣＧＲＰ－１（２４－３７）;ＣＧＲＰ－２（１４－３７）;ＣＧＲＰ－３（９－２３）;ＣＧＲＰ－４（１－２３）和ＣＧＲＰ－５（１－１３）。用酶标方法测定了它们的抗原性,发现ＣＧＲＰ－２和ＣＧＲＰ－１能够很好地与抗ＣＧＲＰ抗血清结合。将ＣＧＲＰ－１;ＣＧＲＰ－３和ＣＧＲＰ－５分别免疫兔子,获得的抗血清分别与ＣＧＲＰ进行反应,     

降钙素和降钙素基因相关肽的选择性表达

降钙素和降钙素基因相关肽(CT/CGRP)由同一基因编码,该基因结构及其5＇端侧翼序列决定了它能够在甲状腺C细胞以及中枢和外周神经细胞生成不同的表达产物.这种选择表达调控决定多细胞生物的发育、性别分化和进化.如果表达失控将导致甲状腺髓样瘤(MTC)和骨质疏松症等疾病.文章对该基因的结构和选择性表达调控进行了综述.     

降钙素基因相关肽的合成

降钙素基因相关肽是一个包含有37个氨基酸残基的具有较强降血压生理功能的活性多肽。我们采用常规的固相合成方法,以简单的装置最后经无水氟化氢处理,将肽从树脂上切下,同时脱除所有侧链保护基。粗产物在30％乙酸溶液中用碘作为氧化剂使二个半胱氨酸氧化,形成二硫键。合成的α-人降钙素基因相关肽经反向高效液相层析分离,获得在高效液相层析为单一峰的产物。经酸水解氨基酸分析证明与理论值相符并具有全部生理活性。     

降钙素基因相关肽的研究进展

降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）是由３７个氨基酸残基构成的生物活性多肽,与降钙素（ＣＴ）源子一个共同的基因。ＣＧＲＰ分布广泛,具有很强的血管扩张、降低血压以及心肌正性肌力作用等,并参与心血管系统稳态的调节。目前,ＣＧＲＰ已能人工合成,将为某些心血管疾病如高血压、心肌缺血、痉挛性或闭塞性周围血管疾病等的治疗提供一条崭新的途径。     

人a降钙素基因相关肽基因在酵母细胞中的分泌表达与产物的分…

化学合成的人ａ降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）基因用ＰＣＲ法改造后使其能正确融合在酵母分泌型表达载体ｐＶＴ１０２Ｕ／ａ中的ａ交配因子前导肽序列之后,然后进行克隆并转化酵母宿主菌Ｓ－７８进行表达,培养物的上清用酶标（ＥＬＩＳＡ）鉴定为阳性,而对照Ｓ－７８、ｐＶＴ１０２Ｕ／ａ为阴性,表达量用ＥＬＩＳＡ定量大于２ｍｇ／Ｌ。表达产物经阳离子交换层析（ＣＭ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ２５）和ＨＰＬＣ纯化得到了ＨＰＬＣ     

降钙素基因相关肽的新近研究进展

降钙素基因相关肽（CGRP）是存在于感觉神经末梢的一种神经肽,是具有代表性的一种活性多肽。实验证明CGRP在身体许多组织器官起着重要的调节作用,特别是对脑具有很强的血管扩张、逆转血管痉挛、改善脑血液循环的作用。对肠道免疫功能也有调节作用,同时介导神经免疫系统的相互调节。     

α2-肾上腺素受体对大鼠肠系膜动脉床降钙素基因相关肽释放的调节作用

降钙素基因相关肽（CGRP）从感觉神经末梢的释放受多种机制的调节。本文在离体灌流的大鼠肠系膜动脉床组织上,利用药理学工具药,研究了α2-肾上腺素受体对CGRP的基础和内毒素刺激后释放的作用。结果发现,α2-受体激动剂UK14304（3×10－6mol／L）可以显著抑制CGRP的基础释放和内毒素（1～5μg／ml）刺激后的释放,抑制幅度为22％～42％;用α2-受体拮抗剂Yohimbine（10－5mol／L）可以完全阻断UK14304的作用。结果表明突触前α2-受体对CGRP从外周阻力血管组织的释放,尤其是内毒素刺激后的释放具有抑制作用,在内毒素休克晚期,α2-受体功能减低可能介导了外周组织CGRP的过量释放。     

降钙素基因相关肽（CGRP）受体的纯化和鉴定

降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）为３７肽,它在体内主要分布于神经系统和心血管系统,是较强的扩张血管物质。人们已认识到脑部的ＣＧＲＰ最多,由于新鲜猪脑来源丰富,故我们选用猪脑为材料来纯化ＣＧＲＰ受体。以期为该受体的深入研究提供足够的材料和奠定基础,纯化的受体将用于制备抗ＣＧＲＰ受体的单克隆抗体,为了从猪脑中纯化ＣＲＲＰ受体,首先用含有胆盐的磷酸盐缓冲液将该受体从猪脑细胞膜上解离下来,解离下来的受体量较多,而杂蛋白较少,且受体活性可保持较长时间不降低。以离子交换柱层析（ＱＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ａ－２５）进行初步分离纯化,再用化学合成的ＣＧＲＰ与活化的琼脂糖（Ａｆｆｉ－Ｇｅｌ－１０,Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司产品）制备的亲和层析柱进行亲和层析,取得的纯化受体保留了与１２５Ｉ－ＣａＧＲＰ结合的能力,而与降钙素（Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ）神经肽Ｙ（ＮｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅＹ）和Ｋａｔａｃａｌｃｉｎ等无交叉反应,但与有４６％氨基酸序列同源性的Ａｍｙｌｉｎ有一定交叉反应。纯化的受体经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳和高压液相色谱（ＨＰＬＣ）鉴定呈现单一蛋白条带或蛋白峰,其位置对应分子量为６６ｋＤ。     

人α降钙素基因相关肽基因在酵母细胞中的分泌表达与产物的分离纯化

化学合成的人α降钙素基因相关肽(CCRP)基因用PCR法改造后使其能正确融合在酵母分泌型表达载体pVT102U/α中的α交配因子前导肽序列之后,然后进行克隆并转化酵母宿主菌S－78进行表达．培养物的上清用酶标(ELlSA)鉴定为阳性,而对照S－78、pVT102u／α为阴性,表达量用ELISA定量大于2mg／L。表达产物经阳离子交按层析(CM—Sphadex C₂₅)和HPLC纯化得到了HPLC纯产品。纯化后的CGRP能引起小鼠血压的降低,说明表达的目的蛋白既有CGRP的免疫结合活性,又有CGRP的生理活性。测定其N－端10个氨基酸序列,证明人工合成的CGRP基因在酵母细胞中已正确表达。     

降钙素基因相关肽对血管内膜损伤后内皮细胞功能恢复的 …

在球囊剥脱大鼠主动脉内膜造成的内皮损伤模型上,用ＣＧＲＰ治疗后观察血管内皮合成释放ｖＷＦ含量及ｔ－ＰＡ活性的变化。结果表明ＣＧＲＰ能明显降低ｖＷＦ含量ｔ－ＰＡ活性。提示ＣＧＲＰ能三轻内皮损伤反应,在促内皮细胞增殖的同时对内皮某些功能恢复亦有一定的作用。     

人α降钙素基因相关肽与肿瘤坏死因子的融合表达

用半酶和半化学合成的方法合成和克隆了人ａ降钙素基因相关肽基因,将该基因融合在肿瘤坏死因子之后插入表达载体ｐＳＢ－９２中,使融合基因的５＇端直接置于大肠杆菌ＰＬ启动下游,采用３０℃培养,４２℃诱导,使ＴＮＦ与ＣＧＲＰ融合蛋白在大肠杆菌中获得了表达,表达的融合蛋白既有ＣＧＲＰ的结合活性（酶标检测为阳性）又有ＴＮＦ的生理功能（对Ｌ－９２９细胞的细胞毒活性）。表达菌裂解液走ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳,显示     

炎症介质在内毒素引起大鼠肠系膜血管床降钙素基因相关…

本研究在离体大鼠肠系膜血管床灌流模型上,采用特异放免法测定灌流液中的降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）观察几种常见炎症介质在内毒素引起ＣＧＲＰ释放中的作用,结果显示：前列腺素合成酶抑制剂地塞米松,布洛芬与消炎痛,缓激肽受体Ｂ２拮抗剂ＨＯＥ－１４０,血小板激活因子拮抗剂ＷＥＢ２０８６,组胺Ｈ１受体拮抗剂苯海拉明以及和组胺Ｈ２受体拮抗剂西咪替丁,均能明显抑剂制内毒素引起的ＣＧＲＰ释放,５羟色胺受体拮抗剂ＩＣ     

降钙素基因相关肽基因直接注射大鼠

所设计的基因表达一个含降钙素基因相关肽(CGRP,37个氨基酸)、及其N端信号肽和C端酰胺化位点的多肽.该基因克隆到哺乳动物表达载体pBPV上并构成pBPV-CGRP.将此质粒DNA直接注射自发高血压大鼠并导致其血压在注射样品后3～22 d内明显下降,下降幅度超过了12％,在第16天甚至达到了24.42％.基因直接注射比CGRP本身的降压作用维持时间更久.