乙型肝炎病毒表面抗原aa126 Ile→Ser变异株HBsAg的暂时表达和抗原性鉴定

曾在一个儿童患者体内,发现一个新的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）变异株,其ＨＢｓＡｇ主蛋白ａａ１２６发生Ｉｌｅ（ＡＴＴ）到Ｓｅｒ（ＡＧＴ）的取代。已知ａｄｒ／ａｙｒ亚型ＨＢｓＡｇ１２６位为Ｉｌｅ,而ａｄｗ／ａｙｗ亚型ＨＢｓＡｇ１２６位为Ｔｈｒ,表明ＨＢｓＡｇ１２６Ｓｅｒ是一个新的变异株。用计算机做结构分析的结果表明,突变体ＨＢｓＡｇ１２６Ｓｅｒ主蛋白ａａ１２０－ａａ１３０区段的二级结构与野生型ａｄｒＨＢＶＨＢｓＡｇ１２６Ｉｌｅ相比发生明显的改变。这种构象的变化可能会影响ａ抗原决定簇（ａ１２４－ａａ１４７）的抗原性。为了证实这一点,构建了突变Ｓ基因表达质粒,在ＳＶ４０早期启动子的控制下进行抗原表达。利用ＨＢｓＡｇ９肽（Ｔｈｒ－Ｉｌｅ１２６－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ）抗ｉ单克隆抗体和９肽（Ｔｈｒ－Ｔｈｒ１２６－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ）抗ｔ单克隆抗体进行放射免疫测定,结果表明,这种Ｓｅｒ１２６突变蛋白对抗ｉ单克隆抗体的反应性比野生蛋白减弱,对抗ｔ单克隆抗体的反应性则与ＨＢｓＡｇ１２６Ｔｈｒ接近。但用三种抗－ａ单克隆抗体的检测结果揭示,突变蛋白ＨＢｓＡｇ１２６     

乙型肝炎病毒表面抗原aa126Il3→Ser变异株HBsAg的暂时表达和抗原性鉴定

曾在一个儿童患体内,发现一个新的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）变异株,其ＨＢｓＡｇ主蛋白ａａ１２６发生Ｉｌｅ（ＡＴＴ）到Ｓｅｒ（ＡＧＴ）的取代。已知ａｄｒ／ａｙｒ亚型ＨＢｓＡｇ１２６位为Ｉｌｅ,而ａｄｗ／ａｙｗ亚型ＨＢｓＡｇ１２６位为Ｔｈｒ,表明ＨＢＳａＧ１２６Ｓｅｒ是一个新的变异株。用计算机做结构分析的结果表明,突变体ＨＢｓＡｇ１２６Ｓｅｒ主蛋白ａａ１２０－ａａ１３０区段的二级结构与野生型ａｄｒ ＨＢ     

海分枝杆菌mas基因的功能研究

目的研究海分枝杆菌结核蜡酸合酶(mycocerosic acid synthase,mas)基因在致病中的机制。方法在海分枝杆菌转座子随机突变库中,以菌落形态和抗酸染色的索状形态为标志筛选出索状结构改变的突变株;检测细菌在巨噬细胞内的增殖能力以及斑马鱼感染后的生存率及病理改变。结果获得插入位点位于mas基因不同位置的3个索状结构突变株。海分枝杆菌mas突变株在巨噬细胞内增殖能力减弱;其对斑马鱼的致死能力急剧下降,在斑马鱼体内不能形成肉芽肿并很快被清除。结论海分枝杆菌mas基因与其索状结构形成密切相关,并且对其在巨噬细胞内及宿主体内的生存和繁殖十分重要。     

B22Asn人胰岛素突变体的研究

通过ＤＮＡ定点突变法将人胰岛素Ｂ２２Ａｒｇ改造成Ｂ２２Ａｓｎ,去除其一级结构中碱性蛋白酶位点,以期提高胰岛素在体内的稳定性,突变体基因克隆到表达载体ＰＢＶ２２０中,在Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＨ５α中进行表达,分离纯化后的表达产物经胰蛋白酶和羧肽酶Ｂ联合作用获得重组Ｂ２２Ａｓｎ－人胰岛素,该突变胰岛素具有抗胰蛋白酶水解能力,但是其与受体的结合能力只有标准猪胰岛素的１２．４％,胰岛素结构中的Ｂ２２Ａｒｇ可能在     

mkl基因在海分枝杆菌抵抗宿主免疫中的作用

本研究利用 MycoMarT7噬菌体建立了海分枝杆菌随机突变库,鉴定获得1株转座子插在基因MMAR＿0994（mkl）上的突变株。用野生株和突变株分别感染斑马鱼成鱼,通过观察斑马鱼的存活情况,研究 mkl基因对海分枝杆菌毒力的影响;利用尾静脉注射感染孵出48 h后的斑马鱼幼鱼,于荧光显微镜下观察突变株及野生株在幼鱼体内的播散情况,以检测 mkl基因在细菌与宿主天然免疫相互作用中的功能;将野生株和突变株分别感染小鼠来源巨噬细胞,检测其在巨噬细胞内的增殖。此外,还检测了突变株对酸性环境的耐受情况。结果显示,mkl基因突变株感染斑马鱼成鱼后25 d内没有鱼死亡;在斑马鱼幼鱼感染模型和细胞感染模型中,突变株的增殖明显减弱;突变株对酸性环境压力更敏感。以上结果提示,mkl基因在海分枝杆菌抵抗宿主免疫及致病中发挥重要作用。     

抗病毒感染的遗传工程植物

作物中的一些严重的病毒性病症可以通过用温性病毒或类病毒接种的方法使之得到抑制。但是,这佯的交叉保护方法可能会造成一些损失,危害共它植物,或由于突变或与别类病毒的协同作用而对目标作物本身造成潜在的危害。现在,华盛顿大学和 Monsanto 公司的科研人员通过转移单个病毒基因使烟草获得了对一种病毒病的抗性。这项研究结果是在美国植物生理学学会六月份召开的会议上公布的。     

AcMNPV大方形多角体突变株的特征研究

对在细胞核中只形成一个几乎与细胞核同样大的立方形多角体突变株ＡｃＭＮＰＶ－ＴＫｍｔ５１３的多角体及其感染细胞,做超薄切片及透射电镜观察,结果表明,在感染细胞核内病毒粒子并没有被包埋到多角体蛋白内,而且多角体蛋白人有野生型病毒多角体蛋白那样的晶格结构。生物测定结果表明,经提纯后的突变多角体对虫体无感染力,面感染了突变株病毒的弱的感染力。序列测定结果证实,其ｆｐ２５基因无突变发生,苴ｆｐ２５基因在Ｓｆ     

影响紫云英根瘤菌入侵和根瘤发育的exo基因的克隆及分析

紫云英根瘤菌菌株１０７的３个胞外多糖缺陷突变株ＮＡ－０１、０２、０４不具备诱导宿主植物紫云英结瘤的能力。以ＮＡ－０１突变位点的ＤＮＡ面为探针,从可互补这３个变种的ｅｘｏＲ’－１１质粒上亚克隆到２．６ｋｂ的ＤＮＡ片段。互补试验表明,２．６ｋｂ的片段不仅可纠正突变株的胞外多糖缺陷表型,而且使变种恢复诱导宿主植物形成有效根瘤的能力,２．６ｋｂ片段经Ｔｎ５定位突变后丧失这种恢复能力,表明该片段带有对应于３     

利用CRISPR/Cas9多基因编辑系统在水稻中快速引入遗传多样性

成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)-核酸内切酶9(CRISPR/Cas9)系统已经成为许多物种特定基因组编辑的强大工具.利用CRISPR/Cas9多基因编辑系统成功构建共敲除水稻(Oryza sativa)中8个农艺性状基因的载体.通过遗传转化实验和DNA测序,发现8个基因在T_0代有较高的突变效率,并且T_0代突变株的突变类型包括杂合突变和纯合突变.此外,还在T_0代突变株中发现了纯合的六突突变株、七突突变株、八突突变株.由于T_0代植物中获得丰富的突变体组合类型,因而,观测到靶基因多样的突变表型.该研究表明,CRISPR/Cas9系统在作物育种过程中快速引入遗传多样性方面的潜力.     

B22Asn人胰岛素突变体的研究

通过ＤＮＡ定点突变法将人胰岛素Ｂ２２Ａｒｇ改造成Ｂ２２Ａｓｎ,去除其一级结构中碱性蛋白酶位点,以期提高胰岛素在体内的稳定性。突变体基因克隆到表达载体ｐＢＶ２２０中,在Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α中进行表达。分离纯化后的表达产物经胰蛋白酶和羧肽酶Ｂ联合作用获得重组Ｂ２２Ａｓｎ－人胰岛素．该突变胰岛素具有抗胰蛋白酶水解能力,但是其与受体的结合能力只有标准猪胰岛素的１２．４％．胰岛素结构中Ｂ２２Ａｒｇ可能在胰岛素与其受体结合过程中起重要作用。     

钝顶螺旋藻突变株FBL细胞超微结构

利用透射电镜技术观察钝顶螺旋藻出发株和突变株FBL的细胞超微结构。观察结果表明L出发株和突变株均为多细胞丝状体,细胞间横隔膜清晰,细胞壁均由四层结构组成,细胞质膜内陷形成类囊体,类囊体由双层膜堆积而成,膜上附着藻胆体,类囊体与细胞壁呈垂直方向排列,细胞质内包含有充气液泡等细胞器。与出发株相比,突变株细胞壁表面较光滑,四层结构电子密度较深;类囊体膜增多、变发达;羧化体数量增多;横隔膜收缢明显。     

副粘病毒融合蛋白活性位点中亮氨酸基因突变分析

为了确定副粘病毒融合蛋白（Ｆ）分子上活性位点中亮氨酸在Ｆ的细胞融合作用中的作用,弄清Ｆ融合细胞的分子机理,采用基因定点突变法创造一个酶切位点,用酶切反应初步筛选突变株,然后用ＤＮＡ序列分析进一步确定,并在真核细胞内进行表达,Ｇｉｅｍｓａ染色和指示基因法检测细胞融合功能,荧光强度分析（ＦＡＣＳ）检测表达效率。结果表明,ｈＰＩＶ３等４６０位亮氨酸（Ｌ）和第４７４位异亮氨酸（Ｉ）分别突变成丙氨酸（Ａ）（     

胎脑黑质脑内移植矫正PD鼠纹状体内脑啡肽mRNA过度表达

用６－ＯＨＤＡ损毁大鼠一侧黑质—纹状体通路可引起ＰＤ模型鼠脑纹状体内多巴胺匿乏．同时,亦可导致脑啡肽ｍＲＮＡ过度表达。我们用地高辛标记的ｃＲＮＡ探针对纹状体内脑啡肽ｍＲＮＡ含量进行了斑点杂交定量研究,发现损伤侧脑啡肽ｍＲＮＡ含量较健侧增高８０％,胎中脑移植到失神经支配的纹状体内,脑啡肽ｍＲＮＡ过度表达得以矫正至正常水平,说明胎多巴胺能神经元脑内移植能够调节脑啡肽基因表达,提供了移植物能与宿主发生神经整合、建立突触联系的间接证据。     

~（60）Co－γ射线诱变钝顶螺旋藻的研究

用不同剂量的６０Ｃｏ－γ射线诱变钝顶螺旋藻Ｓｐｉｒｕｌｉｎａｐｌａｔｅｎｓｉｓ出发株（Ｓｐ）ＩＳ－９００１０,筛选获得两株抗高光抑制突变株（Ｓｐ）ＡＩｐ－９００１０和（Ｓｐ）ＡＩｐ－９００１１,然后比较出发株和突变株的一般形态和生理生化特性。出发株和突变株的一般形态有较大的差异,与出发株相比,两个突变株藻丝体显著变短,螺旋数目大大减小。出发株是对高光敏感的品系,而突变株表现明显的抗高光抑制,１３０００ｌｘ光强下出发株和两个突变株的代时分别为２９．４、２０．８和２２．２ｈ。（Ｓｐ）ＡＩｐ－９００１１的光合作用和呼吸作用与出发株相似,而（Ｓｐ）ＡＩｐ－９００１０明显地表现出高光合、低呼吸作用。突变株和出发株都属于中温品系,最适温度为２８℃,具有较广的温度适应范围（２３～３５℃）以及相同的耐盐性,但突变株的生长速率比出发株快、代时短。此外三者的蛋白质含量、氨基酸组成差别不大：（Ｓｐ）ＡＩｐ－９００１１的可溶性多糖比出发株减少４０％。而在（Ｓｐ）ＡＩｐ－９００１０中其含量提高６０％。     

IL—2部分拮抗剂可用于IL—2突变体对受体亚基结合能…

用定点突变法分别得到了两个人白细胞介素－２（ＩＬ－２）的部分拮抗剂１５Ｖａｌ－ＩＬ－２和１２６Ａｓｐ－ＩＬ－２以及一个为ＩＬ－２受体ａ亚基结合缺陷型的突变体６２Ｌｅｕ－ＩＬ－２,当将１５Ｖａｌ－ＩＬ－２或１２６Ａｓｐ－ＩＬ－２与６２Ｌｅｕ－Ｉｌ－２共同保温时,６２Ｌｅｕ－ＩＬ－２的活性受到明显抑制,对此现象机理的分析表明１５Ｖａｌ－ＩＬ－２或１２６Ａｓｐ－ＩＬ－２可用于ＩＬ－２受体亚基结合缺陷型突     

60Co－γ射线诱变钝顶螺旋藻的研究

用不同剂量的＾６０Ｃｏ－γ射线诱变钝顶螺旋藻Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ出发株（Ｓｐ）ＩＳ－９００１０,筛选获得两株抗高光抑制突变株（Ｓｐ）ＡＩｐ－９００１０和（Ｓｐ）ＡＩｐ－９００１１,然后比较出发株和突变株的一般形态和生理生化特性。出发株和突变株的一般形态有较大的差异,与出发株相比,两个突变株藻丝体显著主烃短,螺旋数目大大减小。出发株是对高光敏感的品系,而突变株表现明显的抗高光抑制,     

脊髓灰质炎病毒Sabin株减毒的遗传学基础的研究进展

用Ｓａｂｉｎ株生产的口服脊髓灰质炎减毒活疫苗（ＯＰＶ）由１、２、３型组成,疫苗株是由强毒株经连续传代突变而来,对每种疫苗株而言只有少数位点与减毒有关,特别是５′端非编码区的第５个茎 环结构。现已证实Ｓａｂｉｎ株病毒在人体中复制时由于病毒的回复突变或第２位点的抑制突变导致毒力回升,可能在疫苗接种者和接触者中引发脊髓灰质炎病例。用聚合酶链式反应和限制性内切酶酶切技术作突变分析（ＭＡＰＲＥＣ）对疫苗中的痕量回复突变进行定量分析已成为可能,正逐步用于从分子水平监测ＯＰＶ生产的连续性,成为评价３型ＯＰＶ质量的一个重要指标。     

甲型H1N1流感病毒HA蛋白抗原表位及受体结合位点突变特性的对比研究

人群中流行的H1N1病毒按其来源可分为两类:人感染的猪H1N1病毒与人类季节性H1N1流感病毒。这两类病毒在流行频率、易感性和致病性等方面存在明显差异。文章收集了1918～2009年间17株人感染的猪甲型H1N1毒株以及21株季节性H1N1毒株,通过序列比对、氨基酸残基保守性分析及3D结构对比等生物信息学方法,揭示造成这两类病毒流行病学和感染性差异的机制。研究发现这两类病毒HA蛋白的进化路径并不相同,且两者具有不同的突变特征,人感染的猪H1N1病毒中,Ca1、Ca2、Sa和Sb四个位点均较为保守,仅Cb位点的突变较快;季节性H1N1病毒仅有Ca1位点较为保守,其他四个抗原性位点均具有较快的突变速率,且较多的突变为新类型的氨基酸。另外,对受体结合位点的研究也显示,这两类病毒的该区域存在5个氨基酸水平的差异(ALA138SER、GLN192LYS、GLN196HIS、ALA198GLU和ALA227GLU),这些位点的差异使得人感染的猪H1N1流感病毒比人类季节性H1N1病毒的易感性更强。这些研究结果可为阐明两类H1N1流感病毒感染性及致病性差异提供更多的信息,并有助于进一步认识H1N1流感病毒的进化机制。     

PAK株与PA103株绿脓杆菌外毒素结构基因间的差异及其对功能的影响

对ＰＡＫ株的绿脓杆菌外毒素结构基因进行全长核苷酸顺序测定时发现：来源于ＰＡ１０３株和ＰＡＫ株的ＰＥ基因一级结构间存在差异,其中Ｔｈｒ~（１７９）（ＡＣＣ）→Ａｌａ~（１７９）（ＧＣＣ）、Ｓｅｒ~（５１５）（ＡＧＣ）→Ｇｌｙ~（５１５）（ＧＧＣ）,并有１１个同义突变,但变异并不影响白细胞介素２－绿脓杆菌外毒素融合蛋白的ＡＤＰ－核糖基化活性及其细胞毒活性。     

探讨乙型肝炎病毒子宫内传播的病毒群演变

以６名ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ均阳性的女性携带者及其子宫内感染ＨＢＶ的６例胎儿为对象,探讨母儿间病毒群的演变,检测母儿所携ＨＢＶ Ｓ区４５１－６６０、Ｃ区２０２２－２３０１位核苷酸序列。结果表明了母儿间同源性９８％－１００％,检出５３０、５４６、５８１位点变异致使１２６、１３１、１４３位氨基酸替代。２对母儿Ｃ区同源性１００％,其中一对母儿均有原型株、变异株混合感染。结论子宫内感染大部分母亲将本身携带