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1.
在 B. Braun E S10 型15 L 和 N B S Bio Flo 3000 型5 L 发酵罐中,利用补料分批培养技术高密度表达培养含重组质粒p S B H L11 的大肠杆菌 Y K537 ,生产重组人白细胞介素3( I L3) ,发现在发酵过程中,限制性流加甘油,控制溶解氧在30 % ~40 % 左右、30 ℃生长11h ,42 ℃诱导培养4h ,能将发酵液中最终菌体密度从 O D16600 提高到 O D53600( 相当于每升发酵液含106 克湿菌体) ,并且保持了白细胞介素3 的表达量,占菌体总蛋白的30 % 左右,含量超过33 % g/ L,使 I L3 包涵体产量从湿重22g/ L 提高到85 g/ L,纯化步骤比较简单,超声破菌后经两次洗涤纯度就达到70 % 以上。 相似文献
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高密度发酵生产突变型重组人肿瘤坏死因子rhTNFα-DK2的研究 总被引:9,自引:1,他引:8
通过对发酵基质和发酵关键参数的优化,确定了发酵培养基的磷酸盐浓度为0.15M,甘油浓度为1.2ml/L,补料中甘油浓度为20ml/L,发酵过程中溶解氧控制在30%~60%,pH控制在6.85左右。在5L在NBS-Bioflo3000型自动控制发酵罐中采取加速补料的补料分批培养,重组大肠杆菌YK537/pSB-TK经10h30°C培养和5h42°C诱导培养,最终密度达到60OD600,rhTNFα-DK2的表达量占菌体总蛋白的50%以上,每升发酵液纯化可得到近2g的rhTNFα-DK2。 相似文献
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重组人生长激素在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达研究 总被引:4,自引:0,他引:4
对重组人生长激素基因工程菌pET-11b/rhGH/BL21的培养条件进行了优化,在NBS MPP-40发酵罐中实现了高密度培养和高效表达,三批实验结果表明,在较短的发酵时间(12h)内细菌干重达85g/L,重组人生长激素占总蛋白量的25%左右。 相似文献
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人Mn—SOD cDNA的克隆及高效表达 总被引:13,自引:0,他引:13
用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),以人肝细胞株(L02)总RNA为模板,扩增了人锰超氧化物歧化酶(hMn-SOD)的cDNA。重组到T7启动子控制下的表达载体pET-24a(+)中,构建表爱质粒pET-MnSOD,并转化大肠杆菌BL21(DE3)。SDS-PAGE及蛋白质印迹分析表明,经1mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后,可高效表达一分子量为22kD的蛋白质,与抗人 相似文献
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人铜锌超氧化物歧化酶cDNA的克隆,测序及表达 总被引:16,自引:1,他引:16
用逆转录聚合酶链反应(RTPCR),以人胎肝组织总RNA为模板,扩增了人铜锌超氧化物歧化酶(hCu,ZnSOD)的cDNA,并进行序列分析,将该hCu,ZnSODcDNA重组到T7启动子控制下的分泌型表达载体pET22b(+)中,构建表达质粒pETSOD,并转化大肠杆菌BL21(DE3)。SDSPAGE及蛋白质印迹分析表明,经1mmol/L异丙基硫代βD半乳糖苷(IPTG)诱导后,可高效表达一分子量为19kD的蛋白质,与抗人SOD多抗有特异的免疫反应,表达量约为菌体总蛋白质的30%,具有特异性SOD酶活性,酶活力可达1797u/ml培基。 相似文献
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利用恒溶氧—补料分批技术高密度培养大肠杆菌生产重组人骨形成蛋?… 总被引:10,自引:0,他引:10
对表达人骨形成蛋白-2A的重组大肠杆菌YK537/pDH-B2m在500ml摇瓶中进行了培养条件的摸索实验,继后用5L自控发酵罐进行分批培养和分批补料培养,以获取rhBMP-2A。两种培养方式结果结果比较表明,在培养过程中保持30%-40%左右的溶2解氧和限制性流加葡萄糖可以使BMP-2A的含量达到2.78g/L,最终菌体密度为OD60053,重组蛋白的表达量占菌体总蛋白的25%。 相似文献
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利用恒溶氧.补料分批技术高密度培养大肠杆菌生产重组人骨形成蛋白-2A 总被引:9,自引:0,他引:9
对表达人骨形成蛋白2A(BMP2A)的重组大肠杆菌YK537/pDHB2m在500ml摇瓶中进行了培养条件的摸索实验,继后用5L自控发酵罐进行分批培养和分批补料培养,以获取rhBMP2A。两种培养方式结果比较表明,在培养过程中保持30%~40%左右的溶解氧和限制性流加葡萄糖可以使BMP2A的含量达到278g/L,最终菌体密度为OD60053(相当于干菌212g/L),重组蛋白的表达量占菌体总蛋白的25%。该培养技术的关键是:(1)在培养过程中保持适当的溶解氧;(2)限制性流加葡萄糖;(3)42℃起始诱导的时间控制在对数生长中期,持续表达时间为4h;(4)细菌持续生长的比生长速率控制在03h1左右。 相似文献
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人GM—CSF cDNA的克隆和在大肠杆菌中的表达 总被引:3,自引:0,他引:3
从诱导的人胚肺细胞HFL株中提取总RNA.经RT-PCR反应获取了人GM-CSFcDNA,DNA序列测定表明其顺序与文献报道完全一致。为了获得高效表达,应用PCR改造了人GM-CSF的cDNA5’端核苷酸序列,并将改造的人GM-CSF基因插入含T7启动子的质粒pET-11d构建成表达质粒pETC-5,将此质粒转化大肠杆菌株BL21(DE3)得到表达菌株BLEC4。表达菌株用0.5mol/LIPTG诱导2小时后,产生大量重组蛋白并形成包涵体。SDS—PAGE电泳图谱扫描结果表明,rhGM-CSF产量占菌体总蛋白量的16%。ELISA和TF-1细胞培养测定表明,初步纯化和复性的rhGM-CSF具有天然的hGM-CSF生物活性。 相似文献
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芽孢杆菌M50产生β—甘露聚糖酶的条件研究 总被引:16,自引:0,他引:16
从土壤中分离到9株产生β-甘露聚糖酶的芽孢杆菌(Bacillus sp.)。Bacillus sp.M50250mL三角瓶摇瓶培养试验,以4%的魔芋粉为碳源,1.0%(NH4)2SO4为氮源,0.35%Na2CO3,30~34℃培养60h产酶达到高峰。酶活力为180~220u/mL。100L罐发酵,在30~32℃,1:0.75vvm通气量,200r/min条件下,发酵液酶活力高达330u/mL。 相似文献
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芽孢杆菌M_(50)产生β甘露聚糖酶的条件研究 总被引:3,自引:0,他引:3
从土壤中分离到9 株产生β甘露聚糖酶的芽孢杆菌( Bacillus sp .) 。Bacillussp . M50250m L三角瓶摇瓶培养试验,以4 % 的魔芋粉为碳源,1-0 % ( NH4)2SO4 为氮源,0-35 %Na2CO3 ,30 ~34 ℃培养60h 产酶达到高峰。酶活力为180 ~200u/m L。100L 罐发酵,在30 ~32 ℃,1∶0 .75vvm 通气量,200r/min 条件下,发酵液酶活力高达330u/m L。酶的最适反应温度和pH 分别为50 ℃和6-0 ,低于50 ℃,pH5 .0 ~7 .0 酶稳定。Fe3+ 、Al3+ 、EDTA、Hg2+ 对酶有抑制作用,而Ba2+ 、Mn2+ 对酶有激活作用。发酵粗酶液对苎麻精干麻精练,显示对精干麻的半纤维素残胶具有降解作用。 相似文献
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氧化修饰使HDL促动脉平滑肌细胞胆固醇流出减少 总被引:6,自引:0,他引:6
为了研究氧化修饰对高密度脂蛋白(HDL)转运细胞胆固醇地^3H-胆固醇负荷的培养人动脉平滑肌细胞(SMC)分别与天然HDL及Cu^2+akg HOCl氧化修饰的HDL在37℃温育不同时间后,分别测定细胞^3H-胆固醇清除率。结果发现,温育24h后,经Cu^2+或HOLl氧修饰后的HDL其细胞胆因醇清除率分别较天然HDL下降了30.0%和43.1%(p〈0.01)。结果还发现,Cu^2+或HOCl氧 相似文献
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对聚β-羟基丁酸(PHB)产生菌Z5-GⅡ的发酵培养基及发酵条件进行优化研究;结果表明:该菌株在蔗糖1%,酵母粉0.3%,酵母浸汁0.3%,K2HPO40.2%;pH7.2 ̄7.4的优化发酵培养基中,接种量8%,种28h,发酵培养36h,细胞干重为6.87g/L,PHB产率可达的细胞干重的61.86%。该菌株还可利用葡萄糖生产废液为碳源生产PHB,具有实现工业化生产的潜力。 相似文献
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利用PCR扩增得到粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-3(IL-3)完整基因片段,将其分别克隆pGEM-T构建成GM-CSF/IL-3融合蛋白基因,DNA序列与设计预期一致。将得到的融合蛋白基因克隆对72RNA聚合酶表达载体pT7zz,得到表达质粒pFu,经转化至表达宿主E.coli BL21(DE3),在IPTG诱导下获得融合蛋白目的产物的直接表达。经SDS-PAGE电泳鉴 相似文献
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重组GM—CSF/IL—3融合蛋白的纯化 总被引:4,自引:0,他引:4
重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子/白细胞介素3(GM-CSF/IL-3)融合蛋白是一种很有发展潜力与应用前景的重组药物,它在大肠杆菌中是以饱含体形式表达的,针对这一重组蛋白饱含体的洗涤、变性、复性以及最终的纯化过程,进行了深入地研究,重点分析和比较了不同条件及因素对于重组蛋白包含体变性及复性过程听影响。实验结果表明,8mol/L尿素及10mmol/L的DTT可以使包含体充分溶解。在复性过程中,采用 相似文献
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筛选得到一株高产β-1,4-聚糖酶的耐碱性芽孢杆菌A-30,其固体发酵(Solid state fermentationSSF)时最适培养条件:起始pH为8.0、培养温度32℃、10%(v/w)接种量,含水量为66.6%(v/w),以0.5%的NaNO_3为无机氮源,发酵96h,木聚糖酶活可达6457IU/g(Dry bacterial bran),纤维素酶活(CMCase)可以达到18.66IU/g。氮源组成、温度、pH及发酵时间等对A-30所产木聚糖酶和纤维素酶比例有较大影响。葡萄糖对A-30的阻遏效 相似文献
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HDL受体和肝性脂酶在肝选择性摄取HDL_2-CE中的协同作用 总被引:2,自引:0,他引:2
体外重组3H-CE-无ApoE-HDL2(rHDL2)保持天然HDL2生物活性。大鼠肝窦状隙细胞与rHDL237℃培养3h(正常组);细胞内吞cpm为995±147(x±S.D.,n=2)。细胞进一步97℃培养2h.释放三氯醋酸(TCA)沉淀和TCA上清液中cpm为78±32和12±9。N-乙酰咪唑修饰组为339±62、19±11和9±5。肝素处理组为542±78、34±14和9±8。实验结果提示:(1)肝窦状隙细胞通过HDL受体内吞HDL2摄取HDL2-CE,并通过逆向胞饮将HDL3排出体外.(2)肝性脂酶(HL)直接介导细胞选择性摄取HDL2-CE,导致HDL3生成.(3)HL和HDL受体在介导细胞选择性摄取HDL2-CE中具有协同作用。 相似文献