稻绿核菌无性孢子形成过程及厚垣孢子萌发率测定

对马铃薯蔗糖人工培养基(PSA)上绿核菌(稻曲病菌)不同培养时期的产孢情况进行了系统的扫描电镜观察。研究结果表明,在培养的前期(前20d),菌落表面往往形成集结状菌丝结构,其上开始产生大量分生孢子;一些分散的菌丝上也可产生少量的分生孢子。而在培养的后期,菌落表面往往形成黄色子实体,内部集生大量厚垣孢子。说明绿核菌在人工培养基上前期以形成分生孢子为主,后期则以厚垣孢子为主,且厚垣孢子的量远远大于分生孢子。萌发试验表明,成熟的厚垣孢子会随着保存时间的延长萌发率急剧下降。因此,新鲜的成熟厚垣孢子是最为理想的接种体。     

七氟醚通过影响外周血miR-340水平逆转脓毒症大鼠巨噬细胞吞噬功能抑制状态的机制

摘要 目的：探究七氟醚通过影响外周血miR-340水平逆转脓毒症大鼠巨噬细胞吞噬功能抑制状态的机制。方法：60只雄性Sprague-Dawley大鼠根据研究目的将大鼠分为对照组、脓毒症组和七氟醚组。通过RT-PCR分析各组大鼠外周血miR-340以及促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达水平。统计各实验组大鼠的存活率。通过血琼脂平板对各组大鼠腹腔液和血液中的细菌进行计数。通过使用荧光显微镜测量吞噬率和吞噬指数。通过蛋白印迹分析p65和NF-κB的蛋白表达。结果：脓毒症组miR-340水平较对照组升高（P<0.05）,七氟醚组miR-340水平较脓毒症组降低（P<0.05）。三组不同时间点存活率相比差异无统计学意义（P＞0.05）;第4 d、8 d脓毒症组大鼠存活率较对照组大鼠降低（P<0.05）,七氟醚组大鼠存活率较脓毒症组升高（P<0.05）。脓毒症组IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达较对照组升高（P<0.05）,七氟醚组IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达较脓毒症组降低（P<0.05）。脓毒症组腹腔液和血液中的细菌数量较对照组升高（P<0.05）,七氟醚组腹腔液和血液中的细菌数量较脓毒症组减少（P<0.05）。血琼脂平板对各组大鼠腹腔液和血液中的细菌进行计数,脓毒症组腹腔液和血液中的细菌数量较对照组升高（P<0.05）,七氟醚组腹腔液和血液中的细菌数量较脓毒症组减少（P<0.05）。脓毒症组p65和NF-κB的蛋白表达较对照组升高（P<0.05）,七氟醚组p65和NF-κB的蛋白表达较脓毒症组降低（P<0.05）。结论：miR-340参与了脓毒症大鼠巨噬细胞吞噬功能调节,七氟醚通过降低外周血miR-340水平减少内毒素诱导的大鼠促炎细胞因子的释放,并恢复巨噬细胞吞噬功能。     

稻曲病菌毒素的活性测定、抗体制备与细胞定位

稻曲病菌在PD 液体培养基中生长良好,并能产生对植物细胞具有高度生物抑制活性的毒素。生物学活性测定袁明,用100%的甲醇能提取稻曲病菌液体培养物中的粗毒素。粗毒素对小麦胚根胚芽的生长有强烈的抑制作用。把毒素主要成分Ustiloxin A 和BSA 偶联后,制备了抗血清,ELISA 检测表明用两种偶联剂偶联所制备的抗体效价分别为1∶20000和1∶6000。进一步的免疫胶体金标记分析表明,所制备的抗体能与茼丝中分泌的毒素特异性结合,说明所获得的抗体是特异性的。     

稻曲病菌毒素的活性测定、抗体制备与细胞定位

稻曲病菌在PD液体培养基中生长良好,并能产生对植物细胞具有高度生物抑制活性的毒素。生物学活性测定表明,用100％的甲醇能提取稻曲病菌液体培养物中的粗毒素。粗毒素对小麦胚根胚芽的生长有强烈的抑制作用。把毒素主要成分Ustiloxin A和BSA偶联后,制备了抗血清,ELISA检测表明用两种偶联剂偶联所制备的抗体效价分别为1：20000和1：6000。进一步的免疫胶体金标记分析表明,所制备的抗体能与茵丝中分泌的毒素特异性结合,说明所获得的抗体是特异性的。     

艾滋病并发马尔尼菲青霉败血症1例

目的：报道1例马尔尼菲青霉败血症。方法患者男性,39岁,主因“发热伴淋巴结肿大1个月”就诊。进行骨髓瑞士染色、血液接种于有氧及厌氧培养瓶、沙氏培养基培养等检查,并对培养物进行形态学及 rDNA 序列鉴定。结果骨髓涂片见细胞内分隔孢子,3种培养方法均见真菌生长。沙氏培养基上菌落为丝状菌,表面为黄绿色粉末状,背面为红色;脑心浸汁培养基为酵母样菌落,37℃培养受限制。经 DNA 序列分析,与马尔尼菲青霉相似性在100℅,鉴定为马尔尼菲青霉。患者诊断为艾滋病并马尔尼菲青霉败血症,立即给予氟康唑治疗,转入传染病医院后因极度衰弱死亡。结论败血症可作为马尔尼菲青霉病首发症状,临床应予以重视;患者血液极具传染性,应注意隔离;对于有冶游史的不明原因发热患者,注意考虑本病可能,必要时行血液培养及 HIV 检测。     

桃褐腐病菌(Monilia fructigena)原生质体制备及再生条件

以桃褐腐病菌(Monilia fructigena)为供试菌株,研究了酶系组成、液体培养基、菌龄、酶解温度、酶解时间对原生质体制备的影响,以及等渗液、固体再生培养基、酶解时间对原生质体再生的影响。结果表明:Fries(1/2)液体培养基培养24h,在10mg/mL崩溃酶+5mg/mL纤维素酶+20mg/mL蜗牛酶+10mg/mL溶菌酶的混合酶液中28°C酶解4h为桃褐腐病菌原生质体制备的最佳条件。采用液体再生涂布平板法,以含Ca2+的STC为等渗液的液体培养基和含蔗糖及Ca2+的Fries(1/2)固体培养基为桃褐腐病菌原生质体再生的最佳条件。经过观察与测定,再生菌株保持了原有的培养性状和致病性,接种桃果实后发病率为100%。     

粟胡麻斑病菌有性世代的研究

诱发粟胡麻斑病菌(Cochliobolus setariae)有性世代的条件:培养温度23—24℃,Sach培养基(pH 不予调整),培养基物稻草杆段。粟胡麻斑病菌有性生殖的方式为异宗配合,病菌菌株间有性杂交的亲和性较低。粟胡麻斑病菌和玉米小斑病菌(Cochliobolus heterostro-phus)的种间杂交,产生不育的子囊。     

易致污染的支原体在固体培养基上的形态特征

目的研究不同条件下、不同生长期易致污染的支原体在固体培养基中的形态特征。方法通过改变支原体菌体浓度、培养时间及培养基组成,观察支原体在固体培养基中的形态变化。结果支原体菌体浓度小于103cfu/m L时,培养至2~3天后可在固体培养基中形成典型的"油煎蛋"状形态,以蔗糖作为碳源培养支原体会导致葡萄糖发酵型支原体(肺炎支原体)不能在固体培养基中形成典型菌落,当使用牛血清代替马血清为支原体提供外源胆固醇时,猪鼻支原体在固体培养基中不能形成典型菌落。结论支原体的不同生长期、菌体浓度、培养基的组成都会使易致污染的支原体在固体培养基上的形态发生变化。     

氧化压力下沙门氏菌可培养性检测及其活的非可培养状态形成情况

【背景】氧化压力会导致细菌进入活的非可培养(viable but non-culturable,VBNC)状态,菌落形成能力可能受到亚致死损伤的影响。目前对于VBNC态细菌的定量检测是基于活菌数与可培养数的差值,因此可培养数的检测对于VBNC态定量研究很关键,培养基组成不合适可能会造成漏检。【目的】分析培养基组成对氧化压力下亚致死损伤细菌检测的重要影响;探究常见食源性致病菌肠炎沙门氏菌在氧化压力下形成VBNC态的情况。【方法】分别采用Luria-Bertani (LB)、beef peptone yeast (BPY)和Salmonella Shigella (SS)培养基检测并比较肠炎沙门氏菌的可培养数;采用RT-qPCR、荧光染色-激光共聚焦显微镜观测氧化压力下肠炎沙门氏菌形成VBNC态的情况。【结果】非选择性培养基LB和BPY能检出亚致死细菌,SS培养基中牛胆盐导致可培养数减少;肠炎沙门氏菌经53°C过氧化氢处理1.5 h后进入VBNC态的比例显著高于53°C过氧化氢+亚铁离子和过氧化氢+柠檬酸处理(P<0.05)。【结论】在对VBNC态的检测中应选择合适的固体培养基检测可...     

用1640培养基培养L型细菌的探讨

用１６４０培养基培养Ｌ型细菌的探讨大连医科大学附属一院１１６０１２刘新元大连医科大学微生物学教研组李岩本试验室用１６４０培养基和其它成份制成的高渗培养基,与８６３培养基和改良Ｋａｇａｎ氏培养基同时对Ｌ型细菌进行培养,并做对比观察。取临床发热病人的血液...     

miR-155通过促进炎症因子释放参与脓毒症肠道屏障功能障碍的发生发展

摘要 目的：探讨miR-155在脓毒症致肠道功能障碍中的表达及作用。方法：（1）临床实验：以2022年5月至2022年8月入住新疆医科大学第一附属医院重症医学科的脓毒症患者和同期健康体检者为研究对象,根据急性胃肠损伤分级（AGI）将脓毒症患者分为AGI组和非AGI组。根据28 d生存情况分为存活组和死亡组,采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（qRT-PCR）法前瞻性观察各组外周血miR-155的变化。（2）体内实验：将20只雄性S/D大鼠按照随机数字表法分为假手术组（sham组）和盲肠结扎穿孔术组（CLP组）,采用qRT-PCR及Western blot法检测miR-155、肠道紧密连接蛋白（ZO-1、claudin-1）的表达,ELISA法检测大鼠肠道组织中IL-1β、IL-6、IL-18的表达水平。(3)体外实验：培养人结直肠腺癌细胞（Caco-2）,并分为正常对照组(完全培养基培养48 h)、脂多糖组（完全培养基培养24 h后加入10 μg/mL LPS处理24 h）。采用qRT-PCR检测miR-155的表达。在倒置荧光显微镜下观察细胞形态的变化。采用CCK-8检测细胞活力。采用免疫荧光观察Caco-2细胞中紧密连接蛋白ZO-1分布的变化。并行细胞旁通透性实验,观察两组细胞旁通透性的变化。结果：（1）脓毒症组和健康对照组相比,脓毒症患者外周血miR-155较健康对照组明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）。AGI组患者外周血miR-155表达较非AGI组明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。脓毒症死亡患者外周血miR-155表达显著升高(P<0.05)。（2）应用CLP模型进行体内动物实验,CLP组大鼠肠道组织miR-155表达较假手术组（sham组）明显升高。CLP组大鼠肠道紧密连接蛋白（ZO-1、claudin-1）较sham组下降,差异具有统 计学意义(P<0.05)。ELISA结果提示,CLP大鼠肠道组织中IL-1β、IL-6、IL-18水平较sham组显著升高（P<0.05）,且肠道组织中miR-155水平与IL-1β、IL-6、IL-18呈正相关（r=0.542,r=0.906,r=868,P<0.05）。（3）与正常对照组相比,经LPS处理后细胞形态破坏、细胞间紧密连接破坏、细胞活力减弱、细胞旁通透性增加。结论：脓毒症发生时伴有肠道屏障功能障碍,miR-155在脓毒症肠道屏障功能障碍中表达升高,并可能通过促进炎症因子的释放参与脓毒症肠道屏障功能障碍的发生发展。miR-155异常表达对脓毒症患者早期肠道功能障碍诊断及预后的评估具有重要价值,可作为脓毒症早期肠道损伤诊断及预后情况的重要指标。     

HIV感染患者口咽、鼻腔内真菌分离率的调查

目的了解HIV感染者口咽及鼻腔内真菌分离阳性率。方法用无菌拭子采集口咽腔溃疡、白斑、口角炎等和咽颊区黏膜分泌物,鼻腔取下鼻甲黏膜或中鼻道黏膜分泌物,直接接种于1 mL沙堡弱液体培养基中。取该离心沉淀物作真菌直接镜检,并接种于科玛嘉念珠菌显色培养基置37℃培养48 h后鉴定。如为丝状真菌,转种于察氏琼脂。25℃培养1周后根据菌落形态结合镜下结构鉴定菌种。结果 94例HIV感染者在口咽腔中真菌培养阳性62例(66%),分离出65株真菌,在鼻腔中真菌培养阳性48例(51%),分离出57株真菌。结论 HIV感染者免疫功能低下,易继发真菌机会性感染,口咽及鼻腔真菌的高寄居率是HIV侵袭性真菌感染的先兆症状,真菌菌种以白念珠菌比例为最高,口咽及鼻腔分别61%和33%。     

178例难治性感染症厌、需氧菌及L型培养检测分析

从检材中培养出细菌是确立感染 (败血 )症诊断和治疗的基本依据 ,而传统有氧条件的培养方法易漏诊厌氧菌和缺壁细菌 ,不能概括致病原因菌的全貌 ,为了提高阳性检出率 ,缩短培养时间 ,我室于 2 0 0 0年 7月～ 2 0 0 1年 12月 ,采用同步培养法对 178例感染 (败血 )症的病人进行培养 ,检测报告如下。1　材料与方法1.1　标本来源　临床诊断为感染 (败血 )症的患者血液标本13 8例 ,中段尿 2 3例 ,胸、腹水及关节液 12例 ,脑脊液 5例。1.2　培养基　厌氧、需氧菌及 L型同步培养基由康健生物技术公司出品 ,细菌分离鉴定培养基为自制 ,药敏纸片由中…     

不同氮源对悬浮培养玫瑰茄细胞的生长及硝态氮同化指征的影响

本文通过改变培养基中的氮源组成,来研究氮源的变化对悬浮培养玫瑰茄细胞的生长及硝态氮同化指征（活体内硝酸还原酶活力）的影响。实验表明,仅在含ＮＯ－３的培养基中能检测到硝酸还原酶活力,而仅含ＮＨ＋４的配方不能检测到该酶活力,表明硝酸还原酶是底物诱导酶。还探讨了培养基中不同的氮源组成对细胞生物量及ｐＨ的影响。     

支原体脱水培养基的研制

支原体脱水培养基的研制纪绍梅，王春玲，严德喜（中国药品生物制品检定所，北京１０００５０）组织培养污染支原体是一个十分严重的问题，检测支原体的方法很多，但直接培养法仍是一种简便、可靠的方法。因为支原体培养基配制手续繁琐，按生物制品规程需要制备马丁消化液...     

甘肃黑蛋巢抗松梢枯病菌物质的分离纯化及抑菌活性

采用MS培养基培养甘肃黑蛋巢Cyathus gansuensis,以生测为导向,乙酸乙酯和氯仿从甘肃黑蛋巢MS培养液中萃取出抗菌活性组分。Rp-18反相色谱柱和高效液相色谱仪相结合,从抗菌代谢产物分离纯化出一种抗松梢枯病菌（Sphaeropsis sapinea）的活性物质CXL-I,高效液相色谱检测表明CXL-I为一纯物质。CXL-I对松梢枯病菌的菌丝生长和孢子萌发有较强的抑制活性,当CXL-I浓度为50цg/ml时对菌丝生长抑制率可达80%,对孢子萌发抑制率达95%以上。     

培养基磷缺乏对黄瓜毛状根生长、抗氧化酶活性及氮源利用的影响

采用液体培养的方法研究了培养基磷缺乏对黄瓜毛状根生长及其抗氧化酶活性及培养基中氮源和钙利用的影响.结果表明,黄瓜毛状根在完全缺磷的培养基中几乎不能生长;而培养基无机磷缺乏会抑制黄瓜毛状根的生长,且浓度越低,其抑制作用越明显,毛状根变得越纤细而长,侧根数减少且短小.与全磷培养相比,磷缺乏培养基培养的黄瓜毛状根可溶性蛋白含量明显偏低,但其SOD和POD活性则明显升高.与完全缺磷(对照)相比,在培养过程中不同无机磷浓度培养的黄瓜毛状根的SOD和POD活性均比对照低.当黄瓜毛状根在不同磷缺乏浓度的液体培养基中培养时,随着培养时间的延长,培养基的电导率逐步下降,并与培养基起始无机磷浓度成正比;其培养基的铵态氮和硝态氮不断被吸收和利用,培养至15d时,培养基中的铵态氮已绝大部分被消耗完毕,但直至培养30d时培养基的硝态氮仍未被消耗完毕.培养基中无机磷缺乏会降低黄瓜毛状根对培养基硝态氮的吸收和消耗以及抑制黄瓜毛状根对钙的吸收.而适当提高培养基的无机磷浓度可促进黄瓜毛状根对培养基中钙的吸收和消耗.     

幽门螺杆菌无血培养方法的建立

目的比较幽门螺杆菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ，Ｈｐ）羊血培养基及自制的活性碳无血培养基培养效果。方法５２例Ｈｐ阳性患者胃粘膜，分别接种于经典的羊血培养基及自制的活性碳无血培养基，３７℃厌氧培养Ｈｐ。结果用羊血培养基培养，Ｈｐ阳性率均高于用活性碳无血培养基培养的阳性率，但没有统计学差异（ｐ＞００５）；两种培养基培养出来的Ｈｐ，菌落、镜下形态及生化特性完全一致，唯后者培养出来的Ｈｐ生长较慢、菌落较小。４位近期服过抑酸药、抗Ｈｐ药物的患者，用羊血培养基培养阴性，而用活性碳无血培养基却能分离培养出Ｈｐ。无论用哪种培养基，培养７天Ｈｐ阳性率均高于培养３天Ｈｐ阳性率，有极显著性差异（ｐ＜００１）。结论羊血培养基适合于一般Ｈｐ分离培养；特殊情况下，特别是抗Ｈｐ治疗后复查，则用活性碳无血培养基较合适。适当延长培养时间，可以提高阳性率。     

血液杆菌Haem atobacter sp.细胞脂肪酸测定的影响因素

应用美国MIDI公司Sherlock MIS系统检测一株归属于血液杆菌属的新菌种Haematobacter sp.HNMC11807的细胞脂肪酸组成,探讨不同培养方法和条件对其细胞脂肪酸组成的影响。采用不同培养条件培养微生物细胞,即不同的培养基组成、固液类型和培养时间;分析比较细胞脂肪酸检测结果存在的差异。同时对比分析仪器专用的两种检测体系,即常规标准和快速标准体系,对样品脂肪酸测定结果的影响。结果发现,细胞脂肪酸组成与其培养条件密切相关,且差异显著。因此,在应用该系统做微生物分类鉴定时,必需严格遵守特定的、统一的培养条件平行进行。     

金黄色葡萄球菌LukF-PV基因的原核表达及血清特异性抗体的检测

目的:在大肠杆菌中表达金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)LukF-PV基因,纯化重组蛋白并以其为抗原检测儿童SA感染者血清特异性IgG抗体,分析不同部位SA感染患者血清LukF-PV抗体水平。方法:将Luk F-PV克隆至pET-28a(+)载体,IPTG诱导重组蛋白表达、His柱纯化重组蛋白后,用间接ELISA检测儿童SA感染者与健康对照者血清特异性IgG抗体水平。结果:成功表达纯化LukF-PV蛋白,儿童SA感染组与健康对照组血清特异性抗体均值分别为(0.309±0.063)、(0.505±0.261),具有统计学意义(P0.05)。不同部位来源标本的感染者中血液组和扁桃体组抗体OD均值分别为(0.634±0.225)、(0.481±0.264)与健康对照组有显著差异(P0.05),其余各组与健康对照组无显著差异(P0.05)。抗体阳性率统计分析中血液组分别与脑脊液组、扁桃体组、咽拭子组、痰液组有统计学意义(P0.05),其余各组间均无显著差异(P0.05)。结论:LukF-PV成功表达纯化,,儿童SA感染组LukF-PV特异性IgG抗体显著高于健康对照组,其中来源于血液和扁桃体部位的SA感染者抗体水平与健康者有显著差异,尤以血液感染者最显著。