痘苗病毒基因组密码子使用频率分析

密码子使用的差别是普遍存在的现象,每一个密码子被某些生物偏爱,而在另一些生物中则很少使用.以往这方面的研究多集中在自养生物中,而对纯寄生的病毒本身及其与宿主细胞基因密码子使用频率关系的研究则很少.分析痘苗病毒哥本哈根株189个基因的密码子使用频率发现:总体上痘苗病毒偏爱使用以A/U为结尾的密码子;基因的异质性不强,没有影响密码子使用的主要趋势;在不同转录方向上和表达时相上,基因密码子使用略有不同;不同功能的基因其密码子使用上差别较大;晚期基因比早期基因与宿主密码子使用频率的差别大.上述结果表明:密码子是影响病毒和细胞相互作用、保证其自身生存的重要机制.     

治疗肝坏损有了新希望

移植肝细胞对损坏的肝脏有暂时的帮助。但肝细胞不易在培养物中生长,没有可供移植的足够的量。用基因疗法可以大量生产这种细胞。首先使细胞感染上传送“长生不老基因”修饰过的反转录病毒,从而使细胞的量每48小时翻一番,但这样快的细胞繁殖可能造成癌变。于是研究人员又引入第二个反转录病毒,将第一个反转录病毒消除。把这样改造过的细胞移植给小鼠后,能有效地治疗急性肝坏死。科学家对减缓肝坏死还提出了另一个建议。有异常短的染色体端粒的小鼠比正常的小鼠在肝脏受伤后更易得肝硬化。当研究人员用基因疗法恢复了小鼠端粒酶的功能后,这些…     

反转录病毒基因转移载体

80年代初期,以反转录病毒作载体进行基因转移的技术迅速发展起来。以反转录病毒作载体进行基因转移具有以下几个方面的特点:宿主细胞范围广;病毒感染滴度高;病毒感染宿主细胞后,细胞不发生病变,可以稳定地表达外源基因;基因转移效率高,病毒基因往往以低拷贝整合,易于外源基因表达的研究;反转录病毒较小,易于操作,容纳的外源基因较大(10kb左右);基因转移后不发生重排;经特殊构建的反转录病毒载体,不易产生感染性病毒粒子,比较安全。为了构建一个基因转移效率高、宿主范围广、安全的反转录病毒基因转     

b与b不是等位基因吗

在一个生物体内,如果某对基因是纯合体,例如基因型是bb,那么,在这个生物体的每个细胞中,2个b基因之间算不算等位基因?虽然各种大、中学校的课本中都没有专门对此问题的叙述,但是在许多练习题中都出现了强调这个问题的内容,而且都认为2个b基因之间不是等位基因的关系。     

人巨细胞病毒转化作用的研究进展

人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）属于ＤＮＡ肿瘤病毒,有３个可导致细胞恶性转化的形态转化区,另有病毒即刻早期（ＩＥ）基因的编码产物对细胞生长进行调探。本文最后探讨了病毒导致细胞恶性转化的可能机制。     

复制缺陷型人泡沫逆转录病毒载体构建和外源基因表达

在人泡沫逆转录病毒 (humanfoamyvirus ,HFV)原病毒全长克隆pHRSV13的基础上 ,缺失病毒基因组的env基因和bel基因 ,构建了一个表达标记基因neo和报道基因 gfp的重组人泡沫病毒载体质粒pGPSNI GFP。在与辅助质粒 p△GP共转染情况下 ,得到复制缺陷型的重组病毒颗粒GPSNI GFP。该病毒颗粒可以感染多种宿主细胞 ,将携带的外源基因整合于细胞染色体DNA上并实现表达     

棉铃虫核多角体病毒iap2基因的克隆和序列分析

棉铃虫核多角体病毒(Helicoverpa armigera sinle-nucleocapsid nucleopolyhedrovirus,HaSNPV)基因组中发现了一个抗细胞凋亡基因iap2.该基因位于病毒基因组的BamH I-F片段,全长753个核苷酸,编码250个氨基酸,预计蛋白质分子量29.2kD.在iap2基因上游-30～-33的位置有一个TATA框,在-50～53的位置有一个早期转录信号CAAT,在终止密码子下游有一个poly(A)信号AATAAA,HaSNPV iap2基因编码一个锌指结构和两个BIR结构.与LdMNPV、AcMNPV、SeMNPV和OpMNPV的IAPs及果蝇DIAP2和人类XIAP等九种IAPs相比较,HaSNPV IAP2与其它的BIR(baculovirus IAP repeater)和RING结构在Cys/His基元(motif)位点上高度保守.     

棉铃虫核型多角体病毒凋亡抑制基因对p35基因失活病毒的功能拯救

野生型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）能感染棉铃虫细胞,不引起细胞凋亡,用ＬａｃＺ基因使ＡｃＮＰＶ凋亡抑制基因ｐ３５插入失活,得到缺陷病毒Ａｃｐ３５Ｚ能迅速引起棉铃虫细胞凋亡,但缺陷病毒本身不能复制。用ＡｃＮＰＶ即早期基因ＩＥ１启动子带动棉铃虫杆状病毒（ＨａＮＰＶ）ｐ３５基因在棉铃虫细胞中瞬时表达,能拯救ｐ３５基因失活病毒Ａｃｐ３５Ｚ复制。通过Ｘ－ｇａｌ显色反应和ｄｏｔＥＬＩＳＡ分别检测到了半乳糖苷酶的活性和ｐ３５基因的表达,证明了所克隆的ＨａＮＰＶｐ３５基因不仅是一个凋亡抑制基因,也是一个与杆状病毒复制相关的基因,它的瞬时表达能支持Ａｃｐ３５Ｚ在棉铃虫细胞中复制。     

基因治疗触发免疫反应

改造细胞的排斥作用是基因疗法中的一个大问题,这是在95年对囊纤维化(CF)基因疗法研究的结果。在研究中,最高剂量组CF缺陷病人由于对输送CFTR基因的病毒载体产生局部免疫排斥而患粘膜性炎症。在以前的试验中也有这种情况发生,只是程度较轻。     

棉铃虫核多角体病毒iap2基因的克隆和序列分析

棉铃虫核多角体病毒（Helicoverpa armigera sinle-nucleocapsid nucleopolyhedrovirus,HaSNPV）基因组中发现了一个抗细胞凋亡基因iap2。该基因位于病毒基因组的BamH I-F片段,全长753个核苷酸,编码250个氨基酸,预计蛋白质分子量29.2kD。在iap2基因上游－30－－33的集团有一个TATA框,在－50－53的位置有一个早期转录信号CAAT,在终止密码子下游有一个poly(A)信号AATAAA,HaSNPV iap2基因编码一个锌指结构和两个BIR结构。与LdMNPV、AcMNPV、SeMNPV和OpMNPV的IAPs及果蝇DIAP2和人类XIAP等九种IAPs相比较,HaSNPV IAP2与其它的BIR（baculovirus IAP repeater）和RING结构在Cys/His基元（motif）位点上高度保守。     

抗乙型脑炎病毒单抗重链可变区基因的筛选和鉴别

为了制备抗乙型脑炎病毒的人-鼠嵌合抗体,以分泌抗乙型脑炎病毒单抗的51-8杂交瘤细胞株为材料,分离这一单抗的重链可变区基因。杂交瘤细胞的大分子量DNA经Bam HI部分酶切后,以λEMBL-3为载体,构建了总数为2×10~7pfu的基因文库。以抗乙脑病毒单抗重链可变区cDNA为探针,从360000个噬菌斑中筛选出9个阳性斑,经点杂交及Southern杂交证明它们都含有重链可变区基因的片段。进一步以J_(11)探针(含J_3、J_4和重链增强子)对其中4个重组体进行鉴别。经EcoRI酶切后,有3个重组体含有与肝细胞和Sp2/0细胞相同的3.8kb片段,而第4个重组体(λ8a4)没有这一片段,却有一个4.5kb片段,这是在肝细胞和Sp2/0细胞中不存在的。从而证明前3个重组体的插入片段是未经重排的重链可变区基因片段,而λ8a4中的插入片段含有经过重排的功能性可变区基因。这一4.5kb片段不能与含有J_1—J_2的探针杂交,却同时含有V_H、J,或/和J_4和增强子。进一步证明,这是一个功能性的可变区基因。因此,将这一4.5kb片段分离出来之后,在pUC19中亚克隆并作酶切图。为构建抗乙脑病毒的人-鼠嵌合重链基因奠定了基础。     

复制缺陷型人泡沫逆转录病毒载体构建和外源基因表达

在人泡沫逆转录病毒(human foamy virus,HFV)原病毒全长克隆pHRSV13的基础上,缺失病毒基因组的env基因和bel基因,构建了一个表达标记基因neo和报道基因gfp的重组人泡沫病毒载体质粒pGPSNI-GFP.在与辅助质粒p△GP共转染情况下,得到复制缺陷型的重组病毒颗粒GPSNI-GFP.该病毒颗粒可以感染多种宿主细胞,将携带的外源基因整合于细胞染色体DNA上并实现表达.     

科研快讯

<正>PLoS Pathog:埃博拉病毒蛋白导致大量炎症和血管渗漏发表在PLOS Pathogens杂志上的一则报告:覆盖在病毒表面的,并在感染过程中从受感染细胞脱落的埃博拉病毒GP蛋白,可以引发免疫反应失调,影响血管的通透性。埃博拉病毒有7个基因。其中一个叫GP,其编码两个相关的蛋白质:一个较短的分泌蛋白,一个为更长的贯穿病毒膜、伸出病毒表面的蛋白。在病毒感染中,一些表面的GP被一个人源酶切断,并随后从被感染的细胞脱落。大量脱落的GP和分泌的GP存在于受感染人类和动物的血中。没有利用完整的埃博拉病毒开展工作,Viktor Volchkov和同事在组织培养中制造出脱落的GP和分泌的GP,利用这些蛋白质在人细胞中测试其作用。他们发现,脱落的GP而不是分泌的GP能够结合巨噬细胞和树突状细胞,这两类细胞是埃博拉病毒感染的靶细胞。     

痘苗病毒不同启动子对乙型肝炎病毒表面抗原表达的影响

利用DNA重组和细胞体内同源重组技术,分别获得了P7.5启动子和P11启动子单独带动的乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因的重组痘苗病毒和同一个重组痘苗病毒中含有P7.5和P11启动子分别带动一个HBsAg基因(正反两个插入方向)的四种重组痘苗病毒,比较了它们对HBsAg表达的影响。含P7.5启动子的比含P11启动子的重组痘苗病毒表达的HBsAg水平更高些;在同一个重组痘苗病毒中P7.5和P11两个启动子分别带动HBsAg基因时,两个启动子同向转录表达的HBsAg水平较低,而两个启动子又向转录时表达的HBsAg水平较高,但均没有单一P7.5启动子带动的HBsAg基因的表达水平高。     

Ratiometric-pericam-mt慢病毒的构建及其线粒体钙检测功能的验证

目的:基于由环状异构黄色荧光蛋白(Circularly Permuted EYFP)改造的具有线粒体定位功能的Ratiometric-pericam-mt(rp-mt)荧光蛋白构建携带有rp-mt基因的慢病毒载体,验证其在线粒体钙检测中的功能,为进一步研究线粒体钙稳态在细胞生命活动中发挥的作用提供参考依据。方法:采用慢病毒载体EF-1αF-puro和rp-mt质粒构建携带有rp-mt基因的重组慢病毒载体,经脂质体法在293T细胞中与包装质粒共转染,收集构建好的重组慢病毒EF-1αF-puro-rp-mt并体外感染人肝癌细胞SNU-739,验证重组慢病毒EF-1αF-puro-rp-mt的活性功能。结果:以慢病毒载体EF-1αF-puro为骨架质粒,成功构建了携带有rp-mt基因的重组慢病毒载体(EF-1αF-puro-rp-mt),收集获得的重组慢病毒滴度为4×10~6TU/m L。将携带有rp-mt基因的慢病毒EF-1αF-puro-rp-mt感染SNU-739细胞48小时后,在荧光显微镜下观察到有超过85%的细胞发出绿色荧光,定位于细胞线粒体内,且对SNU-739细胞进行Ru360和CGP37157处理后,细胞荧光强度随线粒体内钙水平改变而增强或减弱。结论:采用脂质体包装法成功构建了携带有rp-mt基因的重组慢病毒EF-1αF-puro-rp-mt,细胞经该慢病毒转染后可稳定表达具有线粒体定位功能的荧光蛋白rp-mt,准确地检测细胞线粒体钙离子水平。     

杆状病毒SpltMNPVSl136基因的克隆、表达及其产物功能

计算机分析斜纹夜蛾核多角体病毒（SpltMNPV)基因组序列,发现第136个读码框基因表达产物具有病毒囊膜蛋白的基本特征,计算机预测的SL136蛋白氨基酸序列N端具有信号肽,C端具有跨膜区,N端区还有一个许多病毒融合蛋白共有的卷曲螺旋结构。通过PCR扩增,我们克隆了Sl136基因并分别构建了原核表达载体pBVSl136及重组病毒表达载体,SDS-PAGE结果表明Sl136基因在大肠杆菌和昆虫细胞中均获得了较高的表达,另外,我们还构建了一个瞬时表达载体pUCSl136。单独转染Sl-zsu-1细胞后,低pH值环境可诱导细胞发生膜融合并形成合胞体,这些实验结果表明,Sl136基因表达的产物是一个病毒膜融合蛋白。     

携带三种报告基因慢病毒载体的构建及其实验研究

慢病毒是逆转录病毒科的一个属.它具有可以感染分裂期及非分裂期细胞、容纳外源性目的基因片段大、目的基因表达时间较长、免疫反应小等诸多优点,因此成为运载目的基因的理想载体而得到广泛的应用.构建了带有3种报告基因即红色荧光蛋白(mCherry)、荧光素酶基因(luciferase)及绿色荧光蛋白(eGFP)的慢病毒载体,其中...     

与抗体形成有关的两个基因

正如26个英文字母组成千千万万单词一样,体内几百个基因通过不同组合产生无数种抗体,已经发现淋巴细胞是通过基因切粘技术来重组这些基因的,此项发现已获诺贝尔奖,但细胞究竟怎样完成这个过程却不清楚。现在科学家报道找到了与重组有关的两个基因。麻省剑桥Whitehead生物医学研究所的David等成功的克隆了一个基因,将它注入对DNA无影响的肌肉细胞可以激活基因重组。日本京都大学的 Honjo 也找到一个基因,它可编码一种蛋白,类似于病毒、细菌及酵母中的DNA内切酶,这些酶属重组酶类,可重组特定的DNA片段。虽然Whitehead研究所的科学     

HIV-1限制因子及其基因多态性

HIV-1是造成世界艾滋病大流行的主要病毒,其在细胞中的复制过程大体分为:吸附,膜融合,脱衣壳,逆转录,入核,整合,转录翻译,病毒包装及出膜。针对这些过程,宿主细胞进化出各种细胞限制因子来限制HIV-1感染细胞。本文简要介绍TRIM5α、APOBEC3G和束缚蛋白(tetherin)等3个细胞限制因子及其基因多态性。     

腺相关病毒介导基因组来源的基因转移与整合

构建一个带β-珠蛋白基因组序列的腺相关病毒载体AV53HS2Δβ2Neo.经包装成重组腺相关病毒后,转导红系细胞.DNA印迹证实包含红系增强子、β-珠蛋白基因和筛选标志基因的前病毒基因组完整整合于红系细胞基因组中.结果说明腺相关病毒载体能介导基因组序列来源的目的基因稳定整合于受体细胞基因组中.