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恶臭假单胞菌NA-1菌体培养转化和静息细胞转化联合工艺生产6-羟基烟酸研究 总被引:1,自引:0,他引:1
现有微生物羟基化烟酸采用的是静息细胞转化工艺。但研究揭示,恶臭假单胞菌NA-1(Pseudomonas putidaNA-1)在培养过程中不降解发酵液中由诱导剂烟酸转化形成的6-羟基烟酸,这是由于烟酸的存在抑制了羟基烟酸降解酶的作用,而不是因为细胞停止生长不利用羟基烟酸的缘故。因而尝试利用菌体诱导培养过程进行烟酸转化生产,建立了一种新的生产工艺,即菌体培养转化和静息细胞转化联合工艺。该工艺在恶臭假单胞菌NA-1培养过程中持续补充烟酸以维持1%(W/V)浓度,使烟酸被生长细胞转化为羟基化烟酸并在发酵液中线性积累,而不被进一步降解;培养转化结束后,发酵液中的静息细胞依然拥有很高的羟基化酶活力,能够再次用于转化反应。该联合转化工艺与传统的静息细胞转化工艺相比,不仅节约了诱导剂烟酸,而且6-羟基烟酸的产量提高了65%。 相似文献
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恶臭假单胞菌NA-1菌株烟酸羟基化酶活性的诱导和转化条件的研究 总被引:4,自引:2,他引:4
恶臭假单胞菌NA-1菌株的培养和产酶特性与已报道的产酶菌株粘质沙雷氏菌(Serratiamarcescens)IFO12648和荧光假单胞菌(Psudomonasfluorescens)TN5有所不同,主要反映在最适碳源及浓度、最适诱导剂浓度和最适培养温度等方面。最适的转化条件是温度为30℃,pH为7.0,烟酸的浓度为3%。采用初步优化后的条件和流加底物的方式进行4L上罐生产,恶臭假单胞菌NA-1菌株的6-羟基烟酸产率可达到108.39gL。 相似文献
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恶臭假单胞菌NA_1菌株的培养和产酶特性与已报道的产酶菌株粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens) IFO 12648和荧光假单胞菌(Psudomonas fluorescens) TN5有所不同, 主要反映在最适碳源及浓度、最适诱导剂浓度和最适培养温度等方面。最适的转化条件是温度为30℃,pH为7.0, 烟酸的浓度为3%。采用初步优化后的条件和流加底物的方式进行4L上罐生产,恶臭假单胞菌NA_1菌株的6_羟基烟酸产率可达到108.39g/L。 相似文献
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一株烟酸羟基化转化菌株的筛选和鉴定 总被引:6,自引:3,他引:6
从南京地区的土壤中筛选到一株高效转化烟酸为 6_羟基烟酸的菌株NA_1。形态及生理生化特征测定结果表明 ,NA_1菌株与假单胞菌属 (Pseudomonas)中的恶臭假单胞菌 (P .putida)种的特征基本一致。测定了该菌株的16SrDNA序列并根据 16SrDNA构建了系统发育树 ;在系统发育树中 ,NA_1菌株与恶臭假单胞菌形成一个类群 ,序列同源性为 99%。因此将NA_1菌株鉴定为恶臭假单胞菌 相似文献
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恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)KT2440中的6-羟基烟酸(6HNA)3-单加氧酶(NicC)是烟酸代谢过程中的关键酶。NicC通过在吡啶环上加羟基对吡啶环进行活化,从而使吡啶环可在双加氧酶催化下开环,最终被完全降解。通过去除NicC的N端稀有密码子增加了NicC的表达量,进一步利用Ni-Sepharose重力柱对NicC进行了纯化。通过实验发现,NicC的最适反应温度为30~40℃,最适反应pH为8.0。Cd~(2+)对NicC的酶活有明显的抑制作用。当NADH的浓度为0.25mmol/L时,底物6HNA所对应的NicC的最大酶活为14.1U/mg,K_m值为51.8μmol/L;当6HNA的浓度为0.25mmol/L时,底物NADH所对应的NicC的最大酶活为10.79U/mg,K_m值为15.0μmol/L。通过HPLC和LC-MS分析表明,NicC可以在NADH和氧气的参与下催化6HNA转化生成2,5-二羟基吡啶(2,5-DHP)和甲酸,还可以将对羟基苯甲酸转化生成对苯二酚。同位素标记实验表明,产物2,5-DHP中的氧原子来源于参与反应的氧气。为研究吡啶类化合物微生物代谢提供了理论基础。 相似文献
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目的:建立同时测定石斛类药材中烟酸和烟酰胺含量的HPLC法。方法:采用Supersil AQ C-18柱(4.6 mm×250 mm, 5μm),0.1%庚烷磺酸钠溶液(含7%甲醇和2%异丙醇,pH至2.1±0.1)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为261 nm。结果:烟酸和烟酰胺分别在0.002~0.040 mg/mL(R2=0.999 5)、0.006~0.120 mg/mL(R2=0.9995)浓度范围内线性关系良好,平均回收率为99.68%和99.14%,RSD为1.91%和1.74%。结论:不同种石斛类药材中烟酸与烟酰胺的含量有差异,铜皮石斛中烟酸含量最高,流苏石斛中烟酰胺含量最高。该研究建立的方法简便、准确、重复性好,为石斛药材的品质评价及开发研究提供科学依据。 相似文献
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新月弯孢霉原生质体的形成与11β—羟基化反应 总被引:2,自引:0,他引:2
研究了新月弯孢霉原生质体形成的条件以及 1 1 β-羟基化反应。将培养 1 6~ 1 8h的菌体 ,以0 .6mol/LKCl作为渗透压稳定剂 ,3 0℃下 ,经过 1 %溶壁酶和 1 %纤维素酶混合酶液 ( pH5.6)酶解 4~ 5h ,原生质体释放量达 6.1 1× 1 0 6/ml,再生率为 1 3 .1 %。原生质体细胞具有 1 1 β -羟基化反应的能力 ,氢化可的松转化率为 4 4.4 4%。 相似文献
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以羟基乙腈为唯一氮源, 从土壤中筛选到一株腈水解酶产生菌CCZU-12, 经形态观察生理生化实验和16S rDNA序列分析, 鉴定该菌为假单胞菌属(Pseudomonas sp.)。对菌株CCZU-12产腈水解酶的培养条件及催化反应条件进行优化, 最适产酶培养条件为: 碳源为10 g/L乙酸钠, 氮源为5 g/L酵母粉, 金属离子为1.0 mmol/L Mg2+, 培养温度30 °C, pH值7.0, 接种量4%, 装液量50 mL/250 mL; 最适催化反应温度35 °C, pH值7.0, 反应120 h, 羟基乙腈转化率达到98.9%。 相似文献
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T. Prez-Ruiz C. Martínez-Lozano A. Sanz E. Bravo 《Journal of chromatography. B, Analytical technologies in the biomedical and life sciences》1999,724(2):1185
Separation in capillary electrophoresis is governed by various factors, including buffer type, buffer concentration, pH, temperature, voltage and micelles. Through proper adjustment of these parameters, nalidixic acid and its two major metabolites, 7-hydroxynalidixic and 7-carboxynalidixic, could be separated by micellar electrokinetic capillary chromatography using an electrophoretic electrolyte consisting of 50 mM borate buffer (pH 9) containing 25 mM sodium dodecyl sulphate and 10% acetonitrile. A linear relationship between concentration and peak area for each compound was obtained in the concentration range 0.15–100 μg ml−1, with a correlation coefficient greater than 0.999 and detection limits in the 0.2–0.7 ng ml−1 range. Intra- and inter-day precision values of about 0.8–1.2% RSD (n=11) and 1.3–2.0% RSD (n=30), respectively, were obtained. The method has been applied to the analysis of nalidixic acid and its two major metabolites in serum and urine with limits of sensitivity lower than 0.8 ng ml−1. 相似文献
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该文研究了不同浓度的阿魏酸、对香豆酸、丁香酸、对羟基苯甲酸、香草酸5种酚酸类物质对三七幼苗生长和生理的影响。结果表明:处理后,三七幼苗的苗高、根长、可溶性蛋白质含量、根系活力、CAT以及POD活性均有所降低。其中,阿魏酸各处理组幼苗的苗高及POD活性均显著降低,50、100 mg·L~(-1)的对香豆酸以及100 mg·L~(-1)的香草酸处理组幼苗苗高也分别比对照显著降低16.19%、16.67%和29.29%;对香豆酸、丁香酸以及对羟基苯甲酸各处理组幼苗根长均显著低于对照;香草酸处理组幼苗的根系活力也显著低于对照,且幼苗的CAT活性在10、50、100 mg·L~(-1)丁香酸、对羟基苯甲酸以及香草酸处理下也达到了显著降低水平。此外,1 mg·L~(-1)阿魏酸以及100 mg·L~(-1)香草酸处理组幼苗的叶绿素含量也均显著降低;中高浓度的阿魏酸、对香豆酸、丁香酸、对羟基苯甲酸增加了三七幼苗的MDA含量,而香草酸在0.1、1、10、100 mg·L~(-1)浓度下显著降低幼苗的MDA含量;丁香酸、香草酸、对羟基苯甲酸以及中高浓度的对香豆酸增加了三七幼苗的SOD活性,且香草酸各处理组均达到了显著性水平。综上结果表明,5种酚酸类物质对三七幼苗均具有一定的化感抑制作用,但各酚酸物质的作用方式及强度并不完全一致,阿魏酸的化感影响较大,这为进一步研究三七的化感自毒作用提供了一定的理论参考。 相似文献
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AIMS: The aim of the study was to evaluate the effect of habituation at different pH conditions on the acid resistance of Listeria monocytogenes, Escherichia coli O157:H7 and Salmonella enterica serotype Typhimurium, and to identify potential differences between the adaptive responses of the three pathogens. METHODS: Stationary phase cells of L. monocytogenes, E. coli O157:H7 and S. Typhimurium, grown in glucose-free media, were exposed to pH 3.5 broth directly or after habituation for 90 min at various pH conditions from 4.0 to 6.0. Survivors at pH 3.5 were determined by plating on tryptic soy agar and incubating at 30 degrees C for 48 h. The kinetics (death rate) of the pathogens at pH 3.5 was calculated by fitting the data to an exponential model. RESULTS: Habituation to acidic environments provided protection of the pathogens against lethal acid conditions. This acid protection, however, was found to be pH dependent. For example, for E. coli O157:H7 an increased acid resistance was observed after habituation at a pH range from 4.0 to 5.5, while the maximum acid tolerance was induced at pH 5.0. Furthermore, the effect of low pH habituation was different among pathogens. For L. monocytogenes, E. coli O157:H7 and S. Typhimurium, the pH range within which habituation resulted to increased acid resistance was 5.0-6.0, 4.0-5.5 and 4.0-5.0, respectively, while the maximum acid tolerance was induced after habituation at pH 5.5, 5.0 and 4.5, respectively. SIGNIFICANCE: Acid stress conditions are common within current food processing technologies. The information on adaptive responses of L. monocytogenes, E. coli O157:H7 and S. Typhimurium after habituation to different pH environments provided in the present study, could lead to a more realistic evaluation of food safety concerns and to a better selection of processes in order to avoid adaptation phenomena and to minimize the potential for food safety risks. 相似文献
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Temperature regulates tuber-inducing lipoxygenase-derived metabolites in potato (Solanum tuberosum) 总被引:1,自引:0,他引:1
Nam KH Kong F Matsuura H Takahashi K Nabeta K Yoshihara T 《Journal of plant physiology》2008,165(2):233-238
Temperature is one of the major environmental factors affecting potato tuberization. It has been suggested that lipoxygenase (LOX) mediates between temperature and tuber induction. In this study, the contents of the LOX-derived metabolites hydroperoxylinolenic acid (HPOT), jasmonic acid (JA), tuberonic acid (TA) and tuberonic acid glucoside (TAG) were analyzed in leaves of potatoes growing at different temperatures. At low, tuber-inducing temperature, endogenous levels of JA, TA and TAG rise, indicating their crucial role in tuber induction. The concentration of 13(S)-HPOT seems not to be directly affected by temperature. Instead, the molecule has only a short half-life in leaves and is readily metabolized. 相似文献
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The pentacyclic triterpene acids ursolic acid, oleanolic acid, micromeric acid, maslinic acid and 3-epi-maslinic acid have been isolated from several Salvia and Teucrium species. 相似文献
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用6mol/L盐酸于110℃条件下水解饲料添加剂——叶酸,使之游离出谷氨酸,用氢氧化钠中和调节pH到2,氨基酸分析仪测定谷氨酸含量,经与标准叶酸水解样品比较,计算出叶酸的纯度。该方法重现性好,变异系数CV=0.08%,平均回收率为98.34%,浓度与峰面积呈线性相关,相关系数r=0.9987,可随氨基酸分析同时进行,不需改变任何分析条件。 相似文献
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研究了从硬枝树花中提取得到的4个单体化合物松萝酸(usnic acid)、去甲环萝酸(evernic acid)、巴尔巴地衣酸(barbatic acid)和水杨嗪酸(salazinic acid)对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用,并且对抑瘤率、胸腺指数、脾指数及小鼠白介素-2含量等各个指标的进行检测,以说明此4种化合物对小鼠肿瘤生长的抑制效果。结果表明,松萝酸高、中剂量组,去甲环萝酸高、中剂量组,巴尔巴地衣酸低剂量组,水杨嗪酸高剂量组对小鼠肿瘤有较好的抑制效果,与阴性对照组比较有极显著差异(P0.01),并且这些组的H22荷瘤小鼠血清中白介素-2的含量显著增加,与抑制肿瘤活性具有相关性。 相似文献