Ghrelin-GHSR通路在急性低氧暴露大鼠胃炎症反应中的调节作用

由胃合成分泌的食欲刺激激素（ghrelin）可通过结合并激活生长激素促分泌激素受体,（growth hormone secretagogue receptor,GHSR）在调节胃功能方面发挥重要作用。急性低氧暴露导致的消化系统营养吸收障碍和胃肠道炎症反应是否通过Ghrelin-GHSR通路调控尚无研究。本研究采用Wistar大鼠为研究对象,随机分为4组：低氧暴露0 h组、12 h组、24 h组和48 h组,低氧干预在10.2%氧浓度的低氧房中进行。干预前后记录体重;通过分子生物学检测指标评价胃组织炎症因子含量、食欲刺激激素和下丘脑GHSR mRNA相对含量和蛋白质表达水平。本研究证实,随着低氧暴露时间的延长,大鼠体重减少量逐渐增加（12 h：3.73±3.08 g、24 h：8.77±5.04 g、48 h：12.53±6.16 g）;胃组织炎症因子IL-2、IL-4、IL-10、TNFα和MCP-1蛋白含量在低氧12 h后增加（4816.9±983.7 / 9074.5±1107.8 / 18895.1±2967.5 / 37.1±9.8 / 143.5±12.5 pg/mL vs. 166.1±34.6 / 38.3±4.2 / 1429.6±123.9 / 1.7±0.3 / 13.5±2.1 pg/mL）,随着低氧时间延长,炎症因子水平逐渐下降至正常水平（24 h：846.4±94.8 / 1269.8±167.9 / 5769.7±892.6 / 7.5±2.1 / 39.3±8.5 pg/mL;48 h：546.5±97.3 / 374.9±84.9 / 1889.7±982.3 / 2.1±0.8 / 24.6±6.4 pg/mL）;低氧12 h后胃组织食欲刺激激素 mRNA水平较0 h组下降（0.49±0.06 vs. 1, P < 0.05）,48 h后上升（3.79±0.54 vs. 1, P < 0.01）,胃组织的食欲刺激激素蛋白含量在低氧24 h和48 h后均出现上升（1.23±0.15 / 1.16±0.12 vs. 1, P < 0.05）;下丘脑GHSR mRNA在低氧48 h后上升（1.99±0.29 vs. 1, P < 0.01）,蛋白质水平在低氧24 h和48 h后均出现下降（0.35±0.06 / 0.48±0.04 vs. 1, P < 0.05）。表明急性低氧暴露会导致Ghrelin-GHSR通路下调,进而促进胃组织炎症反应,而随着低氧暴露时长的延续,Ghrelin-GHSR通路可通过下调胃中炎症因子水平而避免消化系统的进一步损伤。     

ω-3 PUFAs对小鼠炎症性肠病调节性T细胞影响的研究

目的探究ω-3多不饱和脂肪酸（ω-3PUFAs）对小鼠炎症性肠病（IBD） CD4⁺ CD25⁺ Foxp3⁺调节性T细胞（Treg）的影响。 方法选取新疆医科大学第五附属医院实验动物中心提供健康雄性Balb/C小鼠120只,均采用三硝基苯磺酸诱导成IBD模型,根据腹腔注射药物随机分为空白对照组（生理盐水）、ω-3 PUFAs组[2.5g/（kg·d）浓度ω-3 PUFAs]、硬脂酸对照组（饱和脂肪酸硬脂酸）、二十二碳六烯酸（DHA）组。各组小鼠组织学评分,Treg细胞表型,胞内细胞因子mRNA表达水平,上清液中细胞因子水平比较采用单因素方差分析。 结果与空白对照组比较,硬脂酸空白对照组、DHA组与ω-3 PUFAs组小鼠组织学评分[（4.12±0.89）分比（3.82±0.51）分、（2.51±0.74）分、（1.04±0.36）分] 、干扰素（IFN）-γ水平[（203.51±10.29） pg/mL比（165.32± 11.67） pg/mL、（128.34±6.77）pg/mL、（105.29±6.81）pg/mL]均下降,CD4⁺ CD25⁺ Foxp3⁺ Treg细胞表型比例[（3.80±0.89）﹪比（7.22±1.13）﹪、（3.90±0.75）﹪、（10.10±1.29）﹪]、细胞Foxp3 mRNA表达水平[（96.74±6.65）比（107.33±6.82）、（122.67±8.53）、（165.22±10.43）]、白细胞介素10（IL-10） mRNA表达水平[（0.59±0.18）比（0.98±0.29）、（1.22±0.59）、（1.47±0.53）]、上清液中细胞因子IL-10水平[（83.51±4.67） pg/mL比（108.35±7.22）pg/mL、（122.29±15.33）pg/mL、（153.67±15.28） pg/mL]、Foxp3水平[（9.65±1.29）pg/mL比（13.73± 1.32）pg/mL、（15.67± 2.57）pg/mL、（19.53±2.18）pg/mL]均升高,差异具有统计学意义（P均< 0.05）;与硬脂酸对照组比较,ω-3 PUFAs组与DHA组细胞Foxp3、IL-10 mRNA表达水平、上清液中细胞因子IL-10、Foxp3水平均升高,IFN-γ水平降低,差异具有统计学意义（P均< 0.05）。 结论ω-3 PUFAs可以有效调节IBD小鼠免疫功能紊乱,减轻机体炎症水平,为IBD治疗提供新思路。     

下调血管生成素样蛋白7表达对血管紧张素Ⅱ介导的血管平滑肌细胞炎症反应的影响

目的探讨RNA干扰血管生成素样蛋白7 （Angptl7）基因对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的血管平滑肌细胞（VSMC）炎症因子的影响及其作用机制。 方法体外培养人VSMC,分为常规F12K培养基培养（对照）和1 μg/mL AngII培养24 h。VSMC用AngⅡ（1 μg/mL）处理24 h后,采用siRNA-Angptl7和阴性对照siRNA-NC在Lipofectamine 2000介导下转染VSMC。RT-qPCR检测mRNA表达水平;Griess反应测定一氧化氮（NO）含量;蛋白免疫印记法检测相关蛋白的改变;酶联免疫吸附法检测VSMC中炎症因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-1β （IL-1β）和IL-6水平。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验,两组间比较采用独立样本t检验。 结果与对照比较,1 μg/mL AngⅡ处理可促进VSMC中Angptl7 mRNA （0.97±0.06比3.05±0.21）和蛋白表达（1.01±0.12比1.61±0.14）,亦可促进VSMC中IL-1β[（45.21±8.10）比（126.17±11.77） pg/mL]、IL-6[（50.50±7.51）比（108.50±9.51）pg/mL]和TNF-α的表达[（60.77±9.58）比（185.67±17.35）pg/mL],差异有统计学意义（P均< 0.01）。与对照和转染siRNA-NC相比,转染siRNA-Angptl7下调Angptl7蛋白表达（0.99±0.12,0.98±0.12比0.44±0.14,P < 0.01）。与AngⅡ干预组相比,siRNA-Angptl7降低AngⅡ介导的VSMC炎症反应相关蛋白TNF-α、IL-6和IL-1β的表达,核因子κB （NF-κB）/诱导型一氧化氮合酶（iNOS）/环氧化酶2 （COX-2）信号通路相关蛋白NF-κB、iNOS和COX-2表达及NO含量亦降低,差异有统计学意义（P均< 0.01）。与siRNA-NC相比,siRNA-Angptl7组AngⅡ诱导的VSMC炎症反应相关蛋白TNF-α （0.99±0.13比0.51±0.12）、IL-6 （1.00±0.12比0.38±0.05）和IL-1β的表达（0.99±0.14比0.48±0.11）,NF-κB （1.00±0.10比0.42±0.08）、iNOS （1.02±0.12比0.42±0.10）和COX-2表达（1.00±0.11比0.52±0.12）均降低,NO含量[（54.78±2.76）比（18.08±3.61）μmol/L]亦降低,差异有统计学意义（P均< 0.01）。 结论AngⅡ可通过Angptl7促进VSMC炎症反应,下调Angptl7蛋白表达可以抑制VSMC的炎症反应,其作用机制可能与抑制NF-κB/iNOS-COX-2信号通路有关。     

芍药苷通过抑制脊髓Akt-NF-kB信号通路及小胶质细胞激活缓解炎症性疼痛

芍药苷具有抑制炎症和镇痛的作用，在治疗炎症疼痛方面具有重要价值，但其作用机制尚不明确。本研究发现，弗氏完全佐剂诱导小鼠炎症疼痛模型，用80 mg/kg芍药苷腹腔注射能有效缓解疼痛。检测发现芍药苷治疗后，小鼠机械性痛阈与热板痛阈均明显升高（机械性痛阈值：由6.38±1.00 g提高至8.31±0.81 g；热板痛阈值：由5.78±0.76 s提高至9.90±1.58 s）；同时抑制外周炎症因子TNF-α等的释放（由708.71±46.55 pg/mL降低至588.65±16.02 pg/mL）；免疫组织化学检测发现，芍药苷能有效抑制脊髓背角小胶质细胞的激活；NO检测结果发现，脊髓部位NO合成降低（3.55±0.28 μmol/L·g^-1Pro降至2.25±0.71 μmol/L·g^-1Pro）；Western 印迹检测证实，脊髓部位iNOS在使用芍药苷后，表达恢复正常水平。同时发现，Akt-NF-κB信号可能参与芍药苷的镇痛作用。上述结果提示，芍药苷缓解慢性炎症疼痛可通过抑制炎症因子释放，也通过抑制脊髓小胶质细胞的激活，而此过程依赖抑制Akt-NF-κB信号的激活。     

类叶升麻苷通过上调miR-204对缺氧/复氧诱导H9C2细胞凋亡的抑制作用

目的探讨类叶升麻苷对缺氧/复氧（H/R）处理大鼠心肌细胞（H9C2）损伤的影响及其分子机制。 方法体外培养H9C2细胞,H/R （4 h/20 h）建立心肌细胞损伤模型,并采用1、10、100 μmol/L类叶升麻苷,转染miR-204模拟物阴性对照（miR-NC）、转染miR-204模拟物（miR-24）,100 μmol/L类叶升麻苷干预+转染miR-204抑制剂阴性对照、100 μmol/L类叶升麻苷+转染miR-204抑制剂干预H/R细胞。分别进行RT-qPCR、MTT、流式细胞术、Western blot检测miR-204表达水平、细胞活力、细胞凋亡率和相关蛋白表达,利用相应试剂盒检测乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测白细胞介素-6 （IL-6）、白细胞介素-β （IL-β）和肿瘤坏死因子-α （TNF-α）的含量。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验。 结果与心肌损伤模型比较,10、100 μmol/L类叶升麻苷的细胞凋亡率[（25.62±1.96）%比（18.17±1.27）%,（11.24±0.57）%]、Bax（0.71±0.05比0.51±0.04、0.29±0.03）、LDH [（243.16±11.31）比（121.22±4.52）,（94.39±2.82）U/g]、MDA [（1.82±0.07）比（1.13±0.04）,（0.92±0.04）nmol/mg]、IL-6 [（121.45±6.18）比（87.16±4.53）,（47.11± 2.24）pg/mL]、IL-1β [（229.82±8.48）比（175.32±8.73）,（113.14±5.63）pg/mL]和TNF-α表达水平[（138.18±6.60）比（92.24±4.04）,（61.53±4.17）pg/mL]降低,Bcl-2 （0.18±0.01比0.35± 0.03、0.52±0.04）、SOD [（18.72±1.26）比（38.81±1.51）,（45.43±1.29）U/mg]和GSH-Px表达水平[（58.74±2.28）比（89.24±2.82）,（94.66±3.05）U/mg]升高（P均< 0.05）;与miR-NC比较,转染miR-204的细胞凋亡率[（24.12±1.12）%比（9.26±0.49）%]、Bax （0.62±0.04比0.25±0.02）、LDH [（229.11±8.47）比（86.32±5.92）U/g]、MDA [（1.75±0.08）比（0.85± 0.05）nmol/mg]、IL-6 [（134.47±7.31）比（55.26±2.13）pg/mL]、IL-1β [（211.14±9.70）比（98.11±3.18）pg/mL]和TNF-α表达水平[（152.92±3.49）比（51.34±2.66）pg/mL]降低,Bcl-2 （0.22±0.01比0.57±0.03）、SOD [（20.92±1.38）比（47.68±1.76）U/mg]和GSH-Px表达水平[（62.65±2.76）比（91.13±3.80）U/mg]升高（P < 0.05）;10、100 μmol/L类叶升麻苷可提高H/R诱导H9C2细胞中miR-204的表达水平（P < 0.05）;且下调miR-204逆转了类叶升麻苷对H/R处理H9C2细胞凋亡、氧化应激和炎症因子的影响。 结论类叶升麻苷可能通过上调miR-204表达缓解H/R诱导的H9C2细胞损伤。     

PSP下调miR-345-5p对雨蛙素诱导的AP腺泡细胞氧化应激和炎症因子表达

目的探讨黄精多糖（PSP）对雨蛙素诱导的急性胰腺炎（AP）腺泡细胞氧化应激和炎症因子表达的影响及分子机制。 方法取对数期大鼠胰腺腺泡细胞AR42J,采用100 nmol/L雨蛙素处理细胞6 h,建立AP腺泡细胞损伤模型,并采用不同浓度（1、2、4 mg/mL）PSP处理AP细胞（AP+PSP-L、AP+PSP-M、AP+PSP-H）。试剂盒检测细胞中丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）活性以及培养液中白细胞介素-6 （IL-6）、肿瘤坏死因子-α （TNF-α）和IL-1β水平,实时荧光定量PCR （RT-qPCR）检测miR-345-5p表达水平。将miR-345-5p抑制物转染AR42J细胞,检测下调miR-345-5p表达对AP细胞氧化应激和炎症因子表达的影响。将miR-345-5p模拟物转染AR42J细胞,检测上调miR-345-5p表达和PSP处理对AP细胞氧化应激和炎症因子表达的影响。两组比较采用t检验,多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。 结果与对照比较,AP细胞MDA含量、IL-6、TNF-α、IL-1β水平和miR-345-5p表达水平均升高,SOD和GPx活性降低（P < 0.05）。与AP细胞比较,不同浓度（1、2、4 mg/mL）PSP作用的AP细胞中MDA含量[（1.08± 0.07）比（0.88±0.06）,（0.73±0.06）,（0.60±0.05） nmol/mg]降低,SOD [（43.01±4.37）比（59.60±5.62）,（72.37±6.32）,（94.21±8.70） U/mg]和GPx活性[（29.03±2.51）比（44.11± 4.71）,（58.07±4.20）,（72.67± 6.56） U/mg]均升高,培养液中IL-6 [（310.72±22.27）比（257.01±20.85）,（192.28±17.70）,（146.93±11.90） pg/mL]、TNF-α [（223.82±21.87）比（175.57±15.85）,（137.00±11.31）,（89.26±7.05） pg/mL]、IL-1β表达水平[（41.66±3.85）比（33.82±3.20）,（26.15±2.56）,（20.14±1.71） pg/mL]和miR-345-5p表达水平（2.78±0.24比2.38±0.21,1.91±0.12,1.25±0.13）均降低,且呈浓度依赖性,差异有统计学意义（P均< 0.05）。下调miR-345-5p表达后,AP细胞中MDA含量[（1.13±0.08）比（0.72±0.06） nmol/mg]降低,SOD活性[（41.31±3.98）比（81.73±7.62） U/mg]和GPx [（28.82±2.97）比（61.41±5.81） U/mg]升高,培养液中IL-6 [（314.65±25.02）比159.76±11.93） pg/mL]、TNF-α [（235.18±23.13）比（100.41±8.09） pg/mL]和IL-1β水平[（48.67±4.50）比（27.73±2.54） pg/mL]降低（P均< 0.05）。上调miR-345-5p表达可逆转PSP对AP细胞的影响。其中MDA含量[（0.58±0.03）比（0.95±0.08） nmol/mg]升高、SOD活性[（96.52±9.54）比（54.24±4.15） U/mg]、GPx活性[（79.62±6.23）比（39.81±3.84） U/mg]降低、IL-6 [（145.38±12.49）比（275.38± 21.55） pg/mL]、TNF-α [（84.83±7.81）比（183.73±16.39） pg/mL]和IL-1β [（19.38±1.85）比（36.97±3.62） pg/mL]的表达水平升高（P均< 0.05）。 结论PSP以剂量依赖方式减轻雨蛙素诱导AP细胞炎症反应和氧化应激损伤,其机制与下调miR-345-5p表达有关。     

白藜芦醇通过调节SIRT1/NF-κB通路减轻力竭训练致大鼠肾脏炎症反应

白藜芦醇是天然存在的沉默信息调节因子2相关酶1(sirtuin1，SIRT1)小分子激动剂，其肾的保护作用已在多种肾疾病动物模型中得到了验证。然而，白藜芦醇是否能够改善力竭训练导致的大鼠肾损伤，以及是否通过SIRT1/NF κB信号通路调节运动性肾损伤大鼠肾炎症反应，尚缺乏系统研究。本研究将32只SD大鼠随机分为安静对照组(Con组)，白藜芦醇组（Rsv组），力竭运动组（Ex组），力竭运动+白藜芦醇组（Ex+Rsv组）。Rsv和Ex+Rsv组每天灌胃50 mg/kg体重剂量的白藜芦醇， Ex和Ex+Rsv组进行4周力竭训练，最后1次训练后24 h取材。本研究结果显示，与Con组相比，Ex组大鼠Scr（175.66 ± 16.08 vs.153.34 ± 8.67，P < 0.01）、BUN（6.67 ± 0.53 vs.5.37 ± 019，P < 0.01）和尿NGAL（9.01 ± 0.18 vs.7.48 ± 0.31，P < 0.01）水平均显著升高，Ex组大鼠肾组织NF κB P65在蛋白质水平表达显著升高（0.77 ± 010 vs. 0.27 ± 0.03，P < 0.01）；各组大鼠肾组织SIRT1在蛋白质水平表达上，Rsv组显著高于Con组（0.90 ± 0.14 vs. 0.43 ± 0.15，P < 0.05），Ex+Rsv组显著高于Ex组（1.0 ± 0.28 vs. 0.38 ± 0.12，P< 001）；与Ex组相比，Ex+Rsv组大鼠肾组织NF-κB P65（0.57 ± 0.13 vs. 0.77 ± 0.10，P < 0.05）和Ac-NF-κB P65（0.52 ± 0.13 vs. 0.78 ± 0.11，P < 0.05）在蛋白质水平表达显著降低。以上结果表明，4周大强度力竭运动导致大鼠出现运动性肾损伤，并激活大鼠肾NF-κB的表达。白藜芦醇可显著提高大鼠肾组织SIRT1在蛋白质水平的表达，并增加脱乙酰化作用，降低NF-κB P65蛋白质乙酰化修饰水平，进一步降低NF-κB的表达。白藜芦醇减轻力竭训练致大鼠肾的炎症反应的机制可能与SIRT1/NF-κB通路有关。     

TLRs信号通路激活的MSCs外泌体对巨噬细胞极化的影响

目的探讨Toll样受体（TLR）3和4信号通路激活的间充质干细胞外泌体（MSCs-Exo）对巨噬细胞极化的影响。 方法差速贴壁法体外培养大鼠骨髓源MSCs,用外泌体提取试剂盒分别提取MSCs、TLR3信号通路激活的MSCs、TLR4信号通路激活的MSCs培养上清中的外泌体。用含10%FBS、10%L929条件培养基的RPMI-1640培养得M0型巨噬细胞,实验分6组：对照组及MSCs-Exo、TLR3信号通路激活的MSCs-Exo、TLR4信号通路激活的MSCs-Exo、LPS、IL-4+IL-13分别与M0型巨噬细胞共培养,48 h后收集各组巨噬细胞光镜下观察形态,流式和qPCR检测免疫表型（CD206、Arg-1、TNF-α、iNOS）及炎症因子（CCL22、IL-1β、IL-6、IL-10）表达的改变。组间比较采用单因素方差分析及独立t检验进行统计学分析。 结果MSCs鉴定符合间充质干细胞特性,MSCs-Exo为双层膜囊泡结构,直径在40 ~ 200 nm之间,表达外泌体标志性蛋白CD9、HSP70;光镜下观察各组巨噬细胞形态,加MSCs-Exo及TLR3和TLR4信号通路激活的MSCs-Exo刺激的巨噬细胞呈长梭形,伪足较多;流式检测发现,加MSCs-Exo及TLR3和TLR4信号通路激活的MSCs-Exo刺激的巨噬细胞均高表达CD206（107.2±6.87、102.4±9.83、112.0±9.24 vs 56.0±7.38,F?=?47.234,P均< 0.001）、Arg-1（135.2±6.87、130.2±7.59、203.4±9.07 vs 117.8±9.12,F =109.827,P =?0.009、0.048、0.000）;低表达TNF-α（27.0±5.65、24.6±5.02、25.6±4.15 vs 36.6±7.09,F = 4.882,P = 0.046、0.015、0.017）,而MSCs-Exo刺激的巨噬细胞低表达iNOS（240.2 ± 8.43 vs 308.8±9.88,P < 0.001）;TLR3和TLR4信号通路激活的MSCs-Exo刺激的巨噬细胞iNOS表达差异无统计学意义（P > 0.05）。qPCR检测发现,加MSCs-Exo及TLR3和TLR4信号通路激活的MSCs-Exo刺激的巨噬细胞均高表达CCL22（2.277±0.744、1.570±0.209、1.642±0.443 vs 1.000±0.111,F = 23.654,P = 0.015、0.003、0.031）、IL-10（1.233±0.136、2.426±0.343、1.390±0.155 vs 1.000±0.130,F?= 103.251,P = 0.048、0.000、0.008）,低表达IL-1β（0.383±0.035、0.640±0.143、0.242±0.073 vs 1.000±0.082,F = 12.315,P = 0.000、0.005、0.000）、IL-6（0.386±0.066、0.655±0.046、0.533±0.090 vs 1.000±0.204,F = 30.140,P = 0.001、0.006、0.016）。 结论TLR3和TLR4信号通路激活的MSCs-Exo均能促使巨噬细胞向M2型极化。     

人特异性CHRFAM7A基因抑制小鼠肾缺血再灌注损伤炎症反应

本研究探讨人特异性CHRFAM7A基因抑制小鼠肾缺血再灌注损伤早期炎症作用及其机制。 12只野生型（wild type, WT）C57BL/6成年雄性小鼠随机分为2组：野生型假手术组（WT Sham）和野生型肾缺血再灌注损伤（WT RIRI）组。12只性别、年龄匹配的 CHRFAM7A转基因（transgenic mice, GT）小鼠也随机分组为：转基因型假手术组（GT Sham）和转基因型肾缺血再灌注损伤（GT RIRI）组,每组各6只。除WT 和GT假手术组仅行剖腹手术外,所有小鼠均夹闭双侧肾蒂40 min,再灌注24 h后,留取各组小鼠血清及肾组织标本。生化分析仪检测血清中的尿素氮（BUN）和肌酐（Scr）水平;ELISA法检测白介素-8（IL-8）、肿瘤坏死因子（TNF-α）和胱天蛋白酶7水平;免疫组织化学染色法检测高迁移率族蛋白1（HMGB1）表达水平;苏木-伊红（HE）染色和原位末端标记法（TUNEL）染色观察肾组织病理损伤;流式检测HK-2细胞凋亡率。结果显示,与WT Sham组对比,WT RIRI组血清中,BUN、Scr、IL-8和TNF-α含量增加（P<0.0001）;肾组织中,胱天蛋白酶7水平增高（P＜0.001）,HMGB1平均光密度值增加(P<0.0001),肾组织细胞凋亡指数（AI%）增高(P<0.0001)。与GT Sham组对比, GT RIRI组血清BUN、Scr、IL-8和TNF-α含量增加（P<0.05,P<0.0001, P<0.01, P<0.01）;肾组织中,胱天蛋白酶7水平明显增高（P＜0.01）,HMGB1平均光密度值增加(P<0.0001),肾组织细胞AI%增高(P=0.0005)。与WT RIRI组对比,GT RIRI组血清中的BUN、Scr水平降低（P<0.0001）,IL-8、TNF-α、HMGB1和胱天蛋白酶7的水平明显下降（P<0.01, P<0.0001, P<0.0001, P<0.01）,肾组织细胞凋亡指数（AI%）下降（P=0.0003）.与pLVX空载质粒+氯化钴组相比,pLVX-CHRFAM7A+氯化钴组的凋亡率(19.31%±1.45 vs 34.92%±4.21, P<0.001)明显下降。上述结果表明,人特异性CHRFAM7A基因在小鼠肾缺血再灌注损伤中,通过抑制早期的炎症反应,对肾组织发挥保护作用。     

自剪切多肽P2A对自然杀伤细胞的高效诱导扩增作用的研究

目的改进现有过继性人自然杀伤（NK）细胞体外诱导、分化及扩增方法,实现高效定向分化及大量扩增NK细胞的目的。 方法利用自剪切多肽P2A连接IL-15和4-1BBL基因,通过慢病毒感染和药物筛选的方法制备稳定表达IL-15和4-1BBL的K562滋养层细胞株。该方法可刺激人PBMC细胞向NK细胞分化及高效增殖。实验结果以 ±s表示并用两样本t检验进行比较。 结果经该方法培养的CD3^- CD16⁺ 56⁺ NK细胞增殖倍数达到（4480.43±37.80）倍;CD3^- CD16⁺ 56⁺ NK细胞纯度达到94.79%;细胞内表达IFN-γ和TNF-α的NK细胞比例为（63.07±3.37）%和（54.85±2.04）%,分别高于对照组（16.28±2.86）%和（14.53±1.15）%（t = 62.25,22.66,P均< 0.01）;细胞分泌至培养上清液中的IFN-γ和TNF-α浓度为（111.39±6.95）?pg/ml和（32.76±3.23） pg/ml,分别高于对照组（44.99±4.74）pg/ml和（11.09±2.45）?pg/ml（t = 20.56,7.21,P均< 0.01）;在体外,该方法培养的NK细胞对K562细胞的杀伤效率为（78.52±7.36）%,高于对照组（48.53±6.66）%（t = 11.56,P < 0.01）;对H520细胞的杀伤效率为（65.03±3.27）%,高于对照组（35.85±3.99）%（t = 11.35,P < 0.01）。 结论利用自剪切多肽P2A构建稳定高表达的IL-15和4-1BBL的K562滋养层细胞株,从而提高了NK细胞增殖倍数、纯度和细胞毒性。     

CTRP4基因表达上调通过抑制炎症因子调控食欲调节相关蛋白表达

上调中枢补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白4(complement-C1q/tumor necrosis factor-related protein 4, CTRP4) 可以改变下丘脑食欲调节相关蛋白的表达,抑制小鼠摄食且降低其体重。然而,CTRP4如何调控食欲调节相关蛋白的表达尚不清楚。本研究通过上调小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a)中的CTRP4,探讨CTRP4调控食欲调节相关蛋白的潜在作用机制。通过对N2a细胞未做干预、转染绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)重组腺病毒和CTRP4过表达重组腺病毒,将其分为空白对照组(Control组)、阴性对照组(Ad-GFP组)及CTRP4过表达组(Ad-CTRP4组)。干预72 h时,用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测细胞CTRP4 mRNA表达,采用Western 印迹检测细胞CTRP4、Pomc、Npy、p-STAT3/t-STAT3、TNF-α、IL-6、SOCS3在蛋白质水平的表达。结果显示,与对照组相比,Ad-CTRP4组的CTRP4 mRNA水平(26 258.44±10 403.47 vs. 1.81±0.79 vs. 1.00±0.00, P<0.01)及蛋白质水平显著增加(10.44±7.99 vs.0.64±0.62 vs. 1.00±0.75, P<0.01)。Ad-CTRP4组的p-STAT3/t-STAT3(3.38±1.70 vs. 0.86±0.57 vs. 1.00±0.63, P<0.01)和Pomc(1.81±0.19 vs. 1.15±0.18 vs. 1.00±0.22, P<0.01)表达均显著增高;SOCS3(0.69±0.15 vs. 1.00±0.12 vs. 1.00±0.07, P<0.01),IL-6(0.40±0.19 vs. 1.03±0.17 vs. 1.00±0.16, P<0.01),TNF.α(0.39±0.27 vs. 1.05±0.46 vs. 1.00±0.29, P<0.05)及Npy (0.55±0.14 vs. 1.21±0.38 vs. 1.00±0.24, P<0.05)表达均显著下降。上述结果提示,在N2a细胞中,上调CTRP4可能通过抑制炎症因子TNF-α和IL-6,降低负性调节因子SOCS3的表达,增加STAT3磷酸化表达水平,从而调控食欲调节相关蛋白的表达。     

人CD137抗体促进NK细胞对乳腺癌细胞特异性杀伤作用的体外研究

目的探讨人自然杀伤(NK)细胞在CD137抗体作用下通过抗体依赖性细胞毒性作用(ADCC)介导对乳腺癌细胞的杀伤作用。方法NK细胞表型和细胞因子检测实验分组:阴性对照组(未用人CD137抗体处理的NK细胞)、CD137抗体处理组(10μg/mL人CD137抗体处理4 h的NK细胞);NK细胞毒性检测实验分组:根据体系中是否添加NK细胞、人CD137抗体和西妥昔单抗分为8组。流式细胞术检测两组NK细胞表面CD16分子的表达情况,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测两组NK细胞培养上清液中干扰素(IFN)-γ和肿瘤坏死因子(TNF)-α的浓度,乳酸脱氢酶(LDH)法检测8组反应体系中表皮生长因子受体(EGFR)高表达乳腺癌细胞系MDA-MB-231和EGFR低表达乳腺癌细胞系MDA-MB-453的杀伤比例,并采用t检验或析因分析进行统计学分析。结果与阴性对照组比较,CD137抗体处理组CD16+NK细胞比例(79.57﹪±0.92﹪比90.43﹪±0.67﹪)、细胞因子IFN-γ浓度[(388.90±7.02)pg/mL比(523.90±1.90)pg/mL]和TNF-α浓度[(20.59±4.09)pg/mL比(47.22±2.14)pg/mL]均升高,差异有统计学意义(P<0.05);MDA-MB-231细胞杀伤的三因素析因分析结果显示:NK细胞、人CD137抗体和西妥昔单抗3个因素分别对MDA-MB-231细胞的杀伤都有作用(F=5227.276、201.473、1792.242,P均<0.001),3个因素两两之间的交互作用对MDA-MB-231细胞的杀伤也都有作用(F=183.903、1517.187、33.483,P均<0.001),3个因素的二级交互作用差异有统计学意义(F=41.505,P<0.001)。结论人CD137抗体可增强NK细胞分泌细胞毒性因子IFN-γ和TNF-α的能力,同时可上调NK细胞表面CD16分子的表达,从而使得NK细胞可能通过西妥昔单抗介导的ADCC作用增强对表皮生长因子受体(EGFR)高表达乳腺癌细胞的杀伤作用。     

δ-联蛋白通过AKT信号通路调控OGD/R后的炎症反应

δ-联蛋白(delta-catenin)作为高表达于神经系统的黏附蛋白质,在神经系统的功能发挥中有着至关重要的作用,但其在缺血缺氧性脑病中的研究尚未见报道。本文通过体外培养原代皮层神经元,构建氧糖剥夺/再灌注（oxygen-glucose deprivation/reperfusion, OGD/R）模型。用Western 印迹、LDH等方法显示,与对照组相比,δ-联蛋白在OGD/R模型后的不同时间点（0、4、12、24 和48 h）表达呈先降低后升高的趋势。在12 h表达量最低（0.48±0.08 vs 1.53±0.18,P<0.05）,在48 h表达升高到对照组水平（1.35±0.15 vs 1.53±0.18,P>0.05）。用siRNA慢病毒干扰δ-联蛋白表达后,ELISA结果显示,和对照组相比,OGD/R后,IL-1β和IL-18升高（24.80±1.64 vs 12.75±0.87,28.12±2.69 vs 12.99±1.24,P<0.05）,但在干扰δ-联蛋白表达后,和OGD组相比,IL-1β和IL-18释放降低（12.81±0.78 vs 24.80±1.64,14.27±1.37 vs 28.12±2.69,P<0.05）。Western 印迹结果显示,AKT信号通路磷酸化位点Ser 473活化增高（1.08±0.04 vs 0.85±0.06,P<0.05）,但Thr 308位点活化无改变（1.17±0.06 vs 1.11±0.08,P>0.05）。在siRNA慢病毒干扰并且联合使用AKT信号通路抑制剂GSK 690693后,和OGD+siRNA组相比,IL-1β和IL-18释放增高（24.58±0.99 vs 12.81±0.78,31.62±2.23 vs 14.27±1.37,P<0.05）。上述结果显示,δ 联蛋白通过AKT信号通路调控OGD/R后的炎症反应,这可作为δ-联蛋白功能研究的新的实验依据。     

Biphasic and monophasic pattern of brain natriuretic peptide release in acute myocardial infarction

This study evaluated brain natriuretic peptide (BNP) release in acute myocardial infarction (AMI), absolute values as well as pattern of its release. There are two different patterns of BNP release in AMI; monophasic pattern--concentration in the first measurement is higher than in the second one, and biphasic pattern--concentration in the first measurement is lower than in the second one. We observed significance of biphasic and monophasic pattern of BNP release related to diagnostic and prognostic value. We included in this prospective observational study total of 75 AMI patients, 52 males and 23 females, average age of 62.3 +/- 10.9 years with range of 42 to 79 years. BNP was measured and pattern of its release was evaluated. In AMI group BNP levels were significantly higher than in controls (462.88 pg/mL vs. 35.36 pg/mL, p < 0.001). We found statistically significant real negative correlation (p < 0.05) between BNP concentration and left ventricle ejection fraction (LVEF) with high correlation coefficient (r = -0.684). BNP concentrations were significantly higher among patients in Killip class II and III compared to Killip class I; Killip class I BNP = 226.18 pg/mL vs. Killip class II 622.51 pg/mL vs. Killip class III 1530.28 pg/mL, p < 0.001. BNP concentrations were significantly higher in patients with; (i) myocardial infarction vs. controls; (BNP 835.80 pg/mL vs. 243.03 pg/mL); (ii) in pts with positive major adverse cardiac events (MACE) vs. negative MACE (BNP 779.08 pg/mL vs. 242.28 pg/mL, p < 0.001); (iii) in pts with positive compared to negative left ventricle (LV) remodelling (BNP 840.77 pg/mL vs. 341.41 pg/mL, p < 0.001). Group with biphasic pattern of BNP release had significantly higher BNP concentration compared to monophasic pattern group. In biphasic pattern group we found significant presence of lower LVEF, Killip class II and III, LV remodelling and MACE. We found that BNP is strong marker of adverse cardiac events in patients presenting with a myocardial infarction. In our AMI group we found significant elevation of BNP and it is suspected that second peak secretion is not only due to systolic dysfunction and subsequent remodeling of LV but also due to impact of ischaemia. Patients with biphasic pattern probably have worse prognosis due to severe coronary heart disease. Besides its diagnostic role as a simple blood marker of systolic function, BNP is also important prognostic marker who helps making clinical decision about early invasive vs. conservative management.     

糖皮质激素联合玻璃酸钠关节腔内注射治疗膝关节骨性关节炎的临床研究

目的:探究糖皮质激素联合玻璃酸钠关节腔内注射治疗膝关节骨性关节炎的临床疗效。方法:选取2012年6月至2014年6月期间我院接收的120例患有膝关节骨性关节炎的患者,并按照随机数字数表法分为观察组和对照组,每组60例,均给予膝关节腔内注射2.5 m L玻璃酸钠,在治疗第一周给予观察组患者膝关节腔内注射1 m L复方倍他米松,对照组给予相同剂量的注射用水;分别对治疗前、治疗后1周、2周、1个月、3个月、5个月时患者膝关节Lequence评分,并对比两组治疗效果。结果:治疗后,两组膝关节Lequence评分均显著低于治疗前,且观察组降低更明显,差异均有统计学意义(P0.05);观察组患者治疗后1周、2周、1个月、3个月、5个月总有效率均高于对照组,且差异具有统计学意义(P0.05)。结论:糖皮质激素联合玻璃酸钠关节腔内注射治疗膝关节骨性关节炎具有良好的临床疗效,为临床治疗提供了新的思路。