同种异体大鼠骨髓间充质干细胞移植对放射性空肠损伤的修复作用

目的观察同种异体骨髓间充质干细胞（MSCs）移植对放射性空肠的修复作用。方法全骨髓贴壁体外培养大鼠MSCs并进行DAPI标记。对大鼠行5 Gy X线全腹部照射,每隔72 h照射1次,共5次,制备放射性空肠损伤动物模型。取40只大鼠,随机分成正常对照组、模型及MSCs治疗组及DAP标记组。激光共聚焦显微镜下观察DAPI标记的MSCs在空肠组织中富集情况。病理学观察MSCs对放射性空肠损伤的修复作用。结果正常大鼠空肠黏膜结构清楚,隐窝深遂,腺体丰富,模型组7 d黏膜上皮细胞坏死脱落,隐窝几乎完全破坏,治疗组7 d黏膜坏死组织较少,黏膜增厚,30 d治疗组核分裂相增加,较模型组增加明显。结论成功建立放射性空肠损伤动物模型,MSCs可以促进空肠再生与修复。     

骨髓间充质干细胞对肾移植受者T淋巴细胞分化和miRNA-155表达的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）对肾移植受者T淋巴细胞分化和miRNA-155表达的影响。 方法选取2013年1月至2017年12月于福州总医院接受MSCs诱导+同种异体肾移植术的受者20例（MSCs组）,对照组为同期配对的异体肾移植受者20例。两组患者术后免疫抑制方案均为霉酚酸酯+他克莫司+强的松。两组患者分别于移植术前、术后第15天抽取静脉血,流式细胞仪检测外周血CD4⁺ CD25⁺ FoxP3⁺ Treg细胞/?CD4⁺细胞亚群比值;ELISA检测白细胞介素2（IL-2）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素10（IL-10）浓度;免疫磁珠分选外周血T淋巴细胞后,Rea1-time PCR法检测外周血T淋巴细胞中miRNA-?155的表达。两组间均数比较采用独立t检验,治疗前后均数比较采用配对t检验。 结果移植前两组肾移植受者外周血CD4⁺ CD25⁺ FoxP3⁺ Treg细胞/?CD4⁺细胞比值、IL-2、IL-?10、TNF-α、T淋巴细胞miRNA-155表达水平差异均无统计学意义（P均> 0.05）;术后第15天,与对照组相比,MSCs组外周血CD4⁺ CD25⁺ FoxP3⁺ Treg细胞/?CD4⁺细胞亚群比值（30.44﹪?± 4.23﹪? vs 26.06﹪?±4.77﹪,t = 2.365,P = 0.042）、IL-10水平（20.35?ng/?L?±?5.10?ng/?L? vs 16.63?ng/?L±6.26?ng/?L,t = 2.062,P?=?0.046）上升,而IL-2（27.47ng/?L±4.30 ng/?L vs 31.40?ng/?L±5.33 ng/L,t = 2.252,P = 0.015）、TNF-α（41.52?ng/?L±8.32?ng/L vs 46.67?ng/?L±6.71?ng/L,t = 2.157,P = 0.037）和T淋巴细胞miRNA-155表达水平（1.61±0.31 vs 1.89±0.15,t = 3.688,P?= 0.001）则降低。 结论MSCs能够升高肾移植受者外周血CD4⁺ CD25⁺ FoxP3⁺ Treg细胞/?CD4⁺细胞比值和IL-10水平,降低IL-2、TNF-α和T淋巴细胞miRNA-155表达水平,与MSCs的免疫耐受诱导有关。     

骨髓间充质干细胞对重症急性胰腺炎胰腺组织修复的促进作用研究

目的观察骨髓间充质干细胞（BMSCs）抑制坏死性凋亡促进修复重症急性胰腺炎（SAP）的可能机理。 方法（1）分离、培养和鉴定大鼠BMSCs;（2）构建牛磺胆酸钠（NaT）诱导的SAP大鼠模型,并分成正常组（NC）、假手术组（Sham）、SAP模型组（SAP）、PBS治疗组（PBS）、BMSCs治疗组和Necrostain-1 （Nec-1）治疗组,并检测胰腺病理评分和血淀粉酶水平;（3）运用Western Blot和qRT-PCR方法检测各组受损胰腺组织内RIPK1、RIPK3、Caspase-8、MLKL蛋白及mRNA表达,各组均数间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验。 结果BMSCs可以被诱导分化成骨、软骨、脂肪,并高表达CD44 （99.82﹪）、CD73 （99.87﹪）、CD90 （99.99﹪）、CD105 （99.78﹪）,低表达CD11b （0.65﹪）、CD19 （0.85﹪）、CD34 （0.70﹪）和CD45 （1.20﹪）。SAP组胰腺病理评分（12.90±1.79）及血淀粉酶水平（1052.41±183.12） mU/ ml均高于NC组[评分：0.40±0.52,淀粉酶水平：（236.62±33.21） mU/ ml]和Sham组[评分：0.50±0.53,淀粉酶水平：（242.31±27.94） mU/ ml]（F = 200.275,F = 143.245,P均< 0.001）,且SAP组受损胰腺组织内RIPK1、RIPK3、MLKL表达升高、Caspase-8表达降低（F = 179.905,P < 0.001）;BMSCs组和Nec-1治疗组胰腺病理评分及血淀粉酶水平均低于PBS治疗组[评分：7.20±1.23、7.00±1.05比12.60±1.65,F = 200.275,P < 0.001;淀粉酶水平：（452.21±101.68）mU/ml、（570.18±148.47） mU/ml比（972.77±204.29） mU/ml,F = 143.245,P < 0.001],同时受损胰腺组织内RIPK1、RIPK3、MLKL表达下调、Caspase-8表达升高（F = 179.905,P < 0.001）。 结论BMSCs可能通过抑制坏死性凋亡通路活化来修复SAP。     

亲缘供者外周血红细胞参数对造血干细胞采集影响的经验分析

目的探讨亲缘供者外周血红细胞参数对COBE Spectra血细胞分离机的自动外周血干细胞采集程序（AutoPBSC程序）与单个核细胞采集程序（MNC程序）的影响及经验分析。 方法选取河北燕达陆道培医院2019年6月至2021年2月小红细胞亲缘供者31例45次采集为小红细胞组,选取同期非小红细胞亲缘供者51例60次采集为非小红细胞组,分别应用AutoPBSC程序和MNC程序,比较两组采集情况及采集产品相关指标。采用独立样本t检验和Mann-Whitney U检验分析2组计量资料的差异。 结果与小红细胞AutoPBSC程序组比较,小红细胞MNC程序组血小板（PLT）降低率[（25.88±15.83）﹪比（36.64±10.22）﹪]、采集效率[32.65﹪（23.60﹪,73.82﹪）比63.74﹪ （59.83﹪,68.55﹪）]、采集物体积[（158.83±34.39）比（222.91±63.9）mL]、MNC总数[（218.04±117.57）×10⁸/L比（350.24±127.64）×10⁸/L]、CD34⁺细胞总数[113.83×10⁶/L （79.25×10⁶/L,154.10×10⁶/L）比233.26×10⁶/L （177.18×10⁶/L,392.51×10⁶/L）]、MNC计数[（4.04±2.61）×10⁸/kg比（5.54±2.22）×10⁸/ kg]、CD34⁺计数[1.84×10⁶/kg （1.16×10⁶/kg,4.41×10⁶/kg）比3.64×10⁶/kg （2.49×10⁶/kg,6.37×10⁶/kg）]均升高,差异有统计学意义（P < 0.05）;与非小红细胞AutoPBSC程序组比较,非小红细胞组MNC程序组采集物体积[（162.83±51.74）比（242.56±43.25）mL]升高,差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论对造血干细胞移植供者红细胞体积偏小时,应用MNC程序采集外周血造血干细胞,比应用AutoPBSC程序更有优势。     

IL-12重组质粒联合骨髓间充质干细胞对MCF-7人乳腺癌细胞侵袭及裸鼠移植瘤生长的影响分析

目的探讨IL-12重组质粒联合骨髓间充质干细胞（BMSC）对MCF-7人乳腺癌细胞侵袭及裸鼠移植瘤生长的影响。 方法分离纯化培养BMSC原代细胞,制备BMSC条件培养基,分析BMSC条件培养基对MCF-7细胞株体外增殖和凋亡的影响;建立裸鼠MCF-7转移瘤模型,分为对照组、BMSC组、IL-12组以及联合组,各组每3 d进行一次瘤内注射,共注射3次,15 d后处死裸鼠,比较各组裸鼠肿瘤、脾脏重量。采用χ²检验、t检验以及方差分析进行统计学分析。 结果BMSC条件培养基能够抑制MCF-7细胞增殖,且随着作用时间的延长其抑制作用升高[24 h（13.42±1.93）%,48 h（16.83±1.77）%,72 h（20.21±2.01）,F = 6.271,P = 0.000]。BMSC条件培养基处理MCF-7细胞,可有效促进MCF-7细胞凋亡,且随着作用时间的延长细胞凋亡率升高[24 h（10.82±2.18）%,48 h（18.73±2.95）%,72 h（28.15±3.52）%,F = 9.215,P = 0.000]。与对照组裸鼠肿瘤体积[1 d（124.12±9.28）mm³,3 d（582.41±17.28） mm³,7 d（983.42±42.10） mm³,15 d（793.46±109.38） mm³]比较,BMSC组[1 d（132.61±12.41） mm³,3 d（378.46±23.08） mm³,7 d（542.61±58.49）mm³,15 d（329.48±47.51） mm³]、IL-12组[1 d（119.85±13.10） mm³,3 d（322.75±26.49） mm³,7 d（518.37±67.54）mm³,15 d（302.17±68.53） mm³]以及联合组[1 d（123.41±8.94）mm³,3 d（217.85±24.03）mm³,7 d（318.29±47.32） mm³,15 d（189.27±37.58）mm³]裸鼠肿瘤体积生长速度均减慢,差异具有统计学意义（F_1d=0.827,F_3d=37.583、F_7d=31.472、F_15d=15.372,P < 0.001）;处死各组裸鼠后裸鼠肿瘤质量比较,BMSC组[（529.42±98.74） mg]、IL-12组[（544.01±117.85）mg]以及联合组[（327.55±78.56） mg]均低于对照组[（877.42±120.11）mg],且联合组裸鼠肿瘤质量最低,差异具有统计学意义（F = 10.821,P < 0.001）;而裸鼠脾指数BMSC组（7.58±1.21）、IL-12组（7.63±1.09）以及联合组（10.03±1.52）均高于对照组（5.37±0.89）,联合组裸鼠脾质量最高,差异具有统计学意义（F = 13.411,P < 0.001）。 结论BMSC在体内外均具有抑制MCF-7肿瘤增殖作用,联合使用pcDNA6/IL-12对裸鼠MCF-7转移瘤抑制具有着明显的协同作用。     

口腔鳞状细胞癌患者外周血Naa10及淋巴细胞免疫分型的特点及临床意义

目的探讨口腔鳞状细胞癌（OSCC）患者外周血N-α-乙酰基转移酶10 （Naa10）及淋巴细胞免疫分型的特点,并分析其临床意义。 方法选取97例OSCC患者及50名健康体检者,分别纳入患者组、对照组。检测两组受试者外周血Naa10、淋巴细胞免疫分型,并比较不同TNM分期、不同淋巴结转移状态患者外周血Naa10、淋巴细胞免疫分型的差异,总结其特点与临床意义。不同性别人数采用χ²检验,计量资料行正态性检验,满足正态性且组间方差相等则采用t检验,不满足正态性则采用非参数Wilcoxon秩和检验,相关性分析采用Pearson法。 结果患者组血清Naa10为（62.91±17.15）pg/ml,高于对照组的（38.82±9.04）pg/ml,差异有统计学意义（t?= 9.280,P?< 0.05）。患者组CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺、NK细胞百分比分别为（71.63±9.11）﹪、（34.34±4.26）﹪、（1.03±0.28）、（14.23±4.61）﹪,低于对照组的（76.25±2.87）﹪、（45.41±7.08）﹪、（1.77± 0.39）、（19.96±5.13）﹪,CD8⁺、B淋巴细胞百分比分别为（14.23±4.61）﹪、（14.91±3.29）﹪,高于后者的（19.96±5.13）﹪、（9.11±2.60）﹪,差异有统计学意义（P?< 0.05）。TNM分期Ⅰ~Ⅱ期患者42例,其血清Naa10为（64.08±15.26）?pg/?ml,与Ⅲ~Ⅳ期患者的（61.71±13.15）pg/ml比较,差异无统计学意义（t?= 0.820,P?> 0.05）。淋巴结转移者34例,其血清Naa10为（65.15±14.07）pg/ml,与无淋巴结转移者的（61.45±12.66）?pg/?ml比较,差异无统计学意义（t?= 1.321,P?> 0.05）。Ⅰ~Ⅱ期患者CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺、NK细胞百分比低于Ⅲ~Ⅳ期患者,其CD8⁺、B淋巴细胞百分比高于后者,差异有统计学意义（P?< 0.05）。Pearson相关性分析示,外周血Naa10与CD3⁺ （-0.631）、CD4⁺ （-0.529）、CD4⁺/CD8⁺ （-0.587）、NK细胞百分比（-0.603）呈负相关,与CD8⁺ （0.558）、B淋巴细胞百分比（0.670）呈正相关（P?< 0.05）。 结论OSCC患者外周血Naa10明显升高但与TNM分期、淋巴结转移无关;其淋巴细胞免疫分型存在明显改变,且TNM分期的上升、淋巴结转移的发生伴随着CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/?CD8⁺、NK细胞百分比的下降,以及CD8⁺、B淋巴细胞百分比的上升。     

急性呼吸窘迫综合征小鼠肺内源性干细胞表达水平的研究

目的探讨急性呼吸窘迫综合征（ARDS）小鼠肺组织中肺内源性干细胞的表达水平。 方法10只C57BL/6小鼠分成两组：实验组和对照组,实验组通过气管内注射脂多糖（LPS）构建小鼠ARDS模型,采用气管内注射PBS作为对照组;采用胶原酶、热消化法消化小鼠肺组织获取小鼠肺单细胞悬液;双重免疫荧光染色方法鉴定小鼠肺组织中sca-1⁺CD31^-CD45^-细胞;流式细胞术对肺sca-1⁺CD31^-CD45^-细胞进行分选。采用方差分析及独立t检验进行统计学分析。 结果通过气管内注入LPS成功制作小鼠急性ARDS模型;5只小鼠的全肺组织制备单细胞悬液总数目达5×10⁷个/ml,活细胞百分比为98﹪;肺内源性干细胞包括Ⅱ型肺泡上皮细胞、clara细胞以及支气管肺泡干细胞等,通过肺组织双重免疫荧光染色,验证小鼠肺组织Ⅱ型肺泡上皮细胞、clara细胞以及支气管肺泡干细胞;对照组及实验组各样本肺内源性干细胞数目占单细胞悬液细胞数比例呈正态分布,且实验组肺内源性干细胞数目水平（10.73±10.65）﹪较对照组水平（12.23±0.73）﹪降低（t = -3.405,P < 0.01）。 结论ARDS时,小鼠肺内源性干细胞（sca-1⁺CD31^-CD45^-）水平降低,减少的肺内源性干细胞具体去向尚不明确,其有可能参与机体急性炎症过程中气道上皮细胞的修复、再生过程。     

TM4SF1在成纤维细胞与脐带间充质干细胞表达差异的研究

目的寻找成纤维细胞与脐带间充质干细胞（UCMSC）在细胞表面蛋白与分化能力方面的差异。 方法流式细胞术分析细胞表达CD105、CD90、CD73、CD44、CD14、CD34、CD45、CD79a、HLA-DR、FSP-1及TM4SF1的表达情况;细胞分化实验：观察成纤维细胞与UCMSC的成脂、成软骨及成骨能力;RT-PCR检测二者FSP-1、TM4SF1表达情况。两种细胞表型比较采用独立样本t检验。 结果成纤维细胞与UCMSC的表面分子CD105、CD90、CD73、CD44、CD14、CD34、CD45、CD79a、HLA-DR表达相似（P均> 0.05）,都具有成脂、成软骨、成骨的分化能力;成纤维细胞与UCMSC FSP-1阳性细胞比例分别为（98.6±0.3323）﹪及（98.90±0.2665）﹪（t = 0.4677,P = 0.5294）;UCMSC TM4SF1阳性细胞比例为（97.23±0.2250）﹪,成纤维细胞TM4SF1阳性细胞比例为（0.0082±0.0018）﹪（t = 346.9,P < 0.01）。 结论TM4SF1在成纤维细胞与UCMSC上的表达量存在差异。     

白细胞介素4降低脐带间充质干细胞对造血干细胞分化潜能的维持能力

目的探讨白细胞介素4（IL-4）对脐带间充质干细胞（UC-MSC）维持造血干细胞分化的影响。 方法将UC-MSC与脐带血CD34⁺造血干细胞按照造血支持能力常用的方案共培养,实验分为对照组和IL-4组,IL-4处理组加入IL-4（20 ng/ml）培养14 d。收集细胞并计数,使用流式细胞仪检测表达CD34的细胞比例。取3×10³个细胞,加入到半固体培养基,培养14 d后,通过倒置显微镜观察比较各种集落的形成,并使用流式细胞仪分析其中巨噬细胞和粒细胞表面特异性蛋白CD11b、CD14和CD15的表达。对两独立样本进行t检验统计学分析。 结果加入IL-4后,共培养体系中细胞数量（1.31±0.05）×10⁵个/孔与对照组（2.80±0.28）×10^5?个/孔相比下降,差异有统计学意义（t = 7.31,P < 0.05）,并且流式细胞分析显示其中的CD34⁺细胞比例也有降低。3×10³个IL-4组得到的细胞形成巨噬细胞集落形成单位的能力（9.33±1.53）?个/孔较对照组（17.67±0.58）个/孔有明显下降,差异有统计学意义（t = 8.84,P?< 0.001）;形成粒-巨噬集落形成单位的能力（15.67±3.22）个/孔较对照组（29.33±4.04）?个/?孔有明显下降,差异有统计学意义（t = 4.58,P < 0.05）;形成总集落单位的能力（39.33±9.07）个/?孔较对照组（62.67±6.66）?个/?孔也有下降,差异有统计学意义（t = 3.59,P < 0.05）。IL-4组得到的细胞分化出的细胞总数（3.67±1.71）×10⁵个/孔与对照组（9.50± 3.13）×10⁵个/孔相比也明显下降,差异有统计学意义（t = 2.83,P < 0.05）,而流式细胞术分析发现分化成的细胞中CD14⁺细胞比例也下降。 结论IL-4可以降低UC-MSC对造血干细胞分化潜能的维持能力,提示在Ⅱ型辅助T细胞相关体液免疫疾病中使用间充质干细胞治疗时,也需要兼顾机体造血相关功能。     

ω-3 PUFAs对小鼠炎症性肠病调节性T细胞影响的研究

目的探究ω-3多不饱和脂肪酸（ω-3PUFAs）对小鼠炎症性肠病（IBD） CD4⁺ CD25⁺ Foxp3⁺调节性T细胞（Treg）的影响。 方法选取新疆医科大学第五附属医院实验动物中心提供健康雄性Balb/C小鼠120只,均采用三硝基苯磺酸诱导成IBD模型,根据腹腔注射药物随机分为空白对照组（生理盐水）、ω-3 PUFAs组[2.5g/（kg·d）浓度ω-3 PUFAs]、硬脂酸对照组（饱和脂肪酸硬脂酸）、二十二碳六烯酸（DHA）组。各组小鼠组织学评分,Treg细胞表型,胞内细胞因子mRNA表达水平,上清液中细胞因子水平比较采用单因素方差分析。 结果与空白对照组比较,硬脂酸空白对照组、DHA组与ω-3 PUFAs组小鼠组织学评分[（4.12±0.89）分比（3.82±0.51）分、（2.51±0.74）分、（1.04±0.36）分] 、干扰素（IFN）-γ水平[（203.51±10.29） pg/mL比（165.32± 11.67） pg/mL、（128.34±6.77）pg/mL、（105.29±6.81）pg/mL]均下降,CD4⁺ CD25⁺ Foxp3⁺ Treg细胞表型比例[（3.80±0.89）﹪比（7.22±1.13）﹪、（3.90±0.75）﹪、（10.10±1.29）﹪]、细胞Foxp3 mRNA表达水平[（96.74±6.65）比（107.33±6.82）、（122.67±8.53）、（165.22±10.43）]、白细胞介素10（IL-10） mRNA表达水平[（0.59±0.18）比（0.98±0.29）、（1.22±0.59）、（1.47±0.53）]、上清液中细胞因子IL-10水平[（83.51±4.67） pg/mL比（108.35±7.22）pg/mL、（122.29±15.33）pg/mL、（153.67±15.28） pg/mL]、Foxp3水平[（9.65±1.29）pg/mL比（13.73± 1.32）pg/mL、（15.67± 2.57）pg/mL、（19.53±2.18）pg/mL]均升高,差异具有统计学意义（P均< 0.05）;与硬脂酸对照组比较,ω-3 PUFAs组与DHA组细胞Foxp3、IL-10 mRNA表达水平、上清液中细胞因子IL-10、Foxp3水平均升高,IFN-γ水平降低,差异具有统计学意义（P均< 0.05）。 结论ω-3 PUFAs可以有效调节IBD小鼠免疫功能紊乱,减轻机体炎症水平,为IBD治疗提供新思路。     

单倍体造血干细胞移植对儿童重型再生障碍性贫血治疗的并发症分析

目的分析儿童重型再生障碍性贫血(SAA)单倍体造血干细胞移植和同胞全相合移植并发症发生率。方法回顾性分析2010年1月1日至2018年12月31日于苏州大学附属儿童医院进行治疗的SAA患儿(56例),分为治疗组(单倍体造血干细胞移植,35例),对照组(同胞全相合移植,21例)。其中患儿年龄、诊断距离移植时间、总单个核细胞数、总CD34+细胞数、中位随访时间、粒细胞植入时间、血小板植入时间及等级资料[供受体血型相合程度、急性移植物抗宿主病(aGVHD)分级、广泛性慢性移植物抗宿主病(cGVHD)分级、出血性膀胱炎分级、渗漏综合征分级]采用Mann-Whitney U检验。性别、疾病种类、供体与受体性别、预处理方案、CD20单抗的使用、HLA配型、供体来源、移植物来源、植入综合征、巨细胞病毒(CMV)血症、EB病毒(EBV)血症、死亡人数、植入失败人数和骨髓增殖不良人数使用卡方检验进行组间分析。生存曲线以及累积发生率用Kaplan-Meier法绘制,并使用Log-rank检验分析组间差异。结果与对照组比较,治疗组CD19+B细胞的重建延迟,而CD16+CD56+NK细胞数量移植后6个月开始增加,逐渐达到对照组的水平。与对照组比较,治疗组aGVHD、cGVHD、植入综合征和骨髓增殖不良累积发生率(14.29﹪±7.64﹪比57.14﹪±8.36﹪,11.67﹪±7.75﹪比61.59﹪±9.65﹪,9.53﹪±6.41﹪比74.86﹪±7.43﹪,0.0﹪比14.29﹪±5.91﹪)均升高,差异具有统计学意义(P<0.05),两组CMV与EBV感染,5年总体生存率(OS)、无失败生存率(FFS)、无GVHD失败存活率(GFFS)、Ⅲ-Ⅳ度aGVHD及广泛性cGVHD累积发生率比较差异无统计意义(P>0.05)。结论单倍体移植是治疗儿童SAA的有效治疗方案,但与同胞全合造血干细胞移植比较,其GVHD发生率较高,植入综合征和骨髓增殖不良的发生率较高,优化单倍体移植方案有望降低并发症,提高儿童重型再生障碍性贫血的生活质量。     

人CD137抗体促进NK细胞对乳腺癌细胞特异性杀伤作用的体外研究

目的探讨人自然杀伤(NK)细胞在CD137抗体作用下通过抗体依赖性细胞毒性作用(ADCC)介导对乳腺癌细胞的杀伤作用。方法NK细胞表型和细胞因子检测实验分组:阴性对照组(未用人CD137抗体处理的NK细胞)、CD137抗体处理组(10μg/mL人CD137抗体处理4 h的NK细胞);NK细胞毒性检测实验分组:根据体系中是否添加NK细胞、人CD137抗体和西妥昔单抗分为8组。流式细胞术检测两组NK细胞表面CD16分子的表达情况,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测两组NK细胞培养上清液中干扰素(IFN)-γ和肿瘤坏死因子(TNF)-α的浓度,乳酸脱氢酶(LDH)法检测8组反应体系中表皮生长因子受体(EGFR)高表达乳腺癌细胞系MDA-MB-231和EGFR低表达乳腺癌细胞系MDA-MB-453的杀伤比例,并采用t检验或析因分析进行统计学分析。结果与阴性对照组比较,CD137抗体处理组CD16+NK细胞比例(79.57﹪±0.92﹪比90.43﹪±0.67﹪)、细胞因子IFN-γ浓度[(388.90±7.02)pg/mL比(523.90±1.90)pg/mL]和TNF-α浓度[(20.59±4.09)pg/mL比(47.22±2.14)pg/mL]均升高,差异有统计学意义(P<0.05);MDA-MB-231细胞杀伤的三因素析因分析结果显示:NK细胞、人CD137抗体和西妥昔单抗3个因素分别对MDA-MB-231细胞的杀伤都有作用(F=5227.276、201.473、1792.242,P均<0.001),3个因素两两之间的交互作用对MDA-MB-231细胞的杀伤也都有作用(F=183.903、1517.187、33.483,P均<0.001),3个因素的二级交互作用差异有统计学意义(F=41.505,P<0.001)。结论人CD137抗体可增强NK细胞分泌细胞毒性因子IFN-γ和TNF-α的能力,同时可上调NK细胞表面CD16分子的表达,从而使得NK细胞可能通过西妥昔单抗介导的ADCC作用增强对表皮生长因子受体(EGFR)高表达乳腺癌细胞的杀伤作用。     

低强度超声对HeLa肿瘤细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的探讨低强度超声在诱导HeLa肿瘤细胞凋亡中的作用及其机制。 方法将体外培养的HeLa肿瘤细胞根据超声干预强度分为阴性对照组（切断电源后给予假的超声干预）和0.5、1.3、2.0 W/cm²超声干预组,分别通过MTT实验测定细胞活力、存活率,HE染色检测细胞形态,细胞凋亡实验检测细胞凋亡率,流式细胞术测定ROS含量及Western blot实验检测caspase-12、survivin和内参蛋白β-actin的表达情况。多组间比较采用单因素方差分析,各个实验组与对照组比较采用Dunnet-t检验。 结果与阴性对照组比较,0.5、1.3、2.0 W/ cm²超声干预组的HeLa肿瘤细胞活力[（99.23±1.56）﹪比（80.52±1.72）﹪、（54.31±1.69）﹪（27.75±1.26）﹪]、细胞存活率[（99.91±1.51）﹪比（76.69±1.92）﹪、（52.57±1.63）﹪、（29.81±1.22）﹪]、survivin蛋白表达（51.19±0.21比43.46±0.34、25.28±0.29、18.32±0.3）均降低,ROS含量（11.21±0.45比24.34±1.23、38.26±2.47、52.18±1.56）,细胞凋亡率[（4.23±1.21）﹪比（24.16±1.91）﹪、（48.34±1.66）﹪、（70.27±0.98）﹪]、caspase-12蛋白表达（13.05±0.21比20.23±0.19、33.17±0.32、41.52±0.21）均升高,差异具有统计学意义（P均< 0.05）。 结论低强度超声可能通过诱导HeLa肿瘤细胞中caspase-12蛋白表达增加和survivin蛋白表达的减少而使HeLa肿瘤细胞发生凋亡。     

硫化氢通过调控SIRT1抑制阿霉素诱导的H9c2细胞损伤

目的探讨硫化氢（H₂S）对阿霉素（DOX）诱导的H9c2细胞损伤的影响及其作用机制。 方法H₂S对DOX心肌毒性保护作用的实验分组为：对照组（Control组）,5?μmol/?L DOX处理组（A组）,5?μmol/L DOX和400?μmol/L NaHS共同处理组（B组）,400?μmol/L NaHS单独处理组（C组）,5?μmol/L DOX、400?μmol/L NaHS和15?μmol/L Sirtinol共同处理组（D组）,15?μmol/L Sirtinol单独处理组（E组）。SIRT1是否参与H₂S抗DOX心肌毒性作用机制的实验分组为：对照组（Control组）,5?μmol/L DOX处理组（F组）,5?μmol/L DOX和400?μmol/L NaHS共同处理组（G组）,5?μmol/L DOX、400?μmol/L NaHS和15?μmol/L Sirtinol共同处理组（H组）,15?μmol/L Sirtinol单独处理组（I组）。使用MTT法检测细胞活力;Elisa法检测细胞MDA以及SOD水平;DCFH-?DA荧光探针法检测ROS水平;采用Western Blot法检测SIRT1蛋白表达。使用单因素方差分析法进行统计学分析。 结果NaHS预处理可抑制DOX导致的H9c2细胞活力下降：Control组,A组、B组、C组细胞活力分别为100﹪、（54.58±1.58）﹪、（85.05±4.31）﹪、（100.22±4.46）﹪ （F = 134.9,P < 0.001）。NaHS预处理可减弱DOX引起的H9c2细胞ROS、MDA水平的增加以及SOD水平的降低：Control组的ROS、MDA和SOD水平分别是100﹪、（34.18±1.56） μmol/g、（53.69±1.44） U/?mg;A组的ROS、MDA和SOD水平分别是（174.90±12.65）﹪、（72.65±2.66） μmol/g、（31.80±2.05） U/?mg;B组的ROS、MDA和SOD水平分别是（126.08±6.25）﹪、（44.59±1.92） μmol/g、（48.06±1.56） U/mg;C组的ROS、MDA和SOD水平分别是（91.86±1.66）﹪、（32.93±1.56）?μmol/?g、（55.93±1.58）?U/?mg （F?= 83.26,P < 0.001;F = 271.4,P < 0.001;F = 127.0,P < 0.001）。F组（6、12、24?h）H9c2细胞SIRT1蛋白表达水平分别是（0.45±0.03）、（0.27±0.02）、（0.25±0.03）,较Control组（1.00±0.00）降低（F = 611.1,P < 0.001）。本研究还发现,NaHS预处理H9c2细胞能阻止DOX引起的SIRT1蛋白表达下调：Control组、F组、G组、H组的SIRT1蛋白表达水平分别是（1.00±0.00）、（0.31±0.03）、（0.60±0.04）、（1.09±0.09）（F = 123.4,P?2S对DOX诱导的H9c2细胞活力降低的抑制作用：Control组,F组、G组、H组、I组细胞活力分别为100﹪、（54.58±1.58）﹪、（85.37±3.62）﹪、（71.11±2.11）﹪、（97.53±1.45）﹪ （F = 238.2,P < 0.001）。Sirtinol预处理可明显逆转H₂S对DOX导致的H9c2细胞ROS和MDA含量增加及SOD水平降低的抑制作用：Control组的ROS、MDA和SOD水平分别是100﹪、（35.84±2.22）μmol/?g、（53.03±3.16） U/mg;F组的ROS、MDA和SOD水平分别是（184.6±11.33）﹪、（74.78±5.30）μmol/g、（29.26±0.85）U/mg;G组的ROS、MDA和SOD水平分别是（126.5±7.57）﹪、（41.95±3.43）μmol/g、（52.61±2.26）U/mg;H组的ROS、MDA和SOD水平分别是（174.7±5.50）﹪、（67.69±1.52） μmol/g、（35.33±1.95） U/mg,I组的ROS、MDA和SOD水平分别是（98.03±2.86）﹪、（37.66±2.49）μmol/g、51.14 U/mg（F = 112.0,P < 0.001;F = 93.73,P < 0.001;F = 84.92,P < 0.001）。 结论H₂S通过调控SIRT1抑制DOX诱导的H9c2细胞损伤。     

超声引导下前列腺穿刺联合外周血循环肿瘤细胞检测对前列腺癌预后分析

目的探讨超声引导下前列腺穿刺联合外周血循环肿瘤细胞(CTCs)检测对前列腺癌预后的预测效果。方法选取2011年1月至2017年12月期间于郑州大学第二附属医院收治的83例前列腺癌患者为研究对象,全部患者均根据超声引导下经直肠前列腺穿刺活检术确诊为前列腺癌,检测病理标本中CK34BE12、p63、α-甲酰基辅酶A消旋酶(AMACR)等免疫标志物的表达状况,并采用Cell Search细胞搜索系统检测外周血CTCs的数量,据此分为阳性组(≥5个/7.5 ml)和阴性组(<5个/7.5 ml)。分析穿刺组织中免疫标志物表达状况、外周血CTCs计数与患者临床病理特征、生存状况的相关性。各标志物的阳性例数、Gleason评分>7分的比例、TNM分期等定性资料的比较采用x^2检验或Fisher确切概率法,年龄、血常规、凝血功能、肝功能、PSA水平等定量资料的比较采用t检验。采用Kaplan-Meier法进行生存分析,采用多因素Cox比例风险回归模型分析患者预后的预测因素。结果(1)全部患者中外周血CTCs、穿刺组织中CK34BE12、p63、AMACR的阳性率分别为31.33、3.61、3.61、86.75。CTCs阳性组的AMACR阳性率为100.00,高于CTCs阴性组的80.70,差异有统计学意义(x^2=4.227,P<0.05)。(2)AMACR阳性组患者的血红蛋白(HB)低于AMACR阴性组[(123.66±13.33)g/L比(134.89±20.08)g/L,t=2.420,P=0.018],血小板(PLT)、血清谷丙转氨酶、D-二聚体(DD)、前列腺特异抗原(PSA)水平、Gleason评分>7分的比例均高于AMACR阴性组[(197.23±36.98)×10^9/L比(172.83±33.33)×10^9/L,t=2.062,P=0.042;(38.80±10.03)U/L比(31.46±7.83)U/L,t=2.317,P=0.023;(255.00±38.80)μg/L比(220.81±30.99)μg/L,t=2.785,P=0.007;(26.60±12.23)ng/ml比(17.90±8.88)ng/ml,t=2.263,P=0.026;45.83比9.09,x^2=3.916,P=0.048],差异有统计学意义(P<0.05)。CTCs阳性组患者的HB低于CTCs阴性组[(121.69±15.89)g/L比(132.73±18.85)g/L,t=2.767,P=0.007],血清碱性磷酸酶、DD、PSA水平、Gleason评分>7分、T3~T4期、M1期的比例均高于CTCs阴性组[(105.69±30.56)U/L比(88.89±35.58)U/L,t=2.205,P=0.030;(256.63±35.86)μg/L比(236.98±33.30)μg/L,t=2.368,P=0.020;(30.09±11.89)ng/ml比(23.33±10.99)ng/ml,t=2.533,P=0.013;57.69比33.33,x^2=4.381,P=0.036;30.77比8.77,x^2=4.981,P=0.026;50.00比17.54,x^2=9.390,P=0.002],差异有统计学意义(P<0.05)。(3)全部患者的中位生存时间为58.33个月,1、3、5年的生存率分别为88.95、51.81、30.12。AMACR阳性组、CTCs阳性组患者的中位生存时间为40.93、36.93个月,低于AMACR阴性组、CTCs阴性组的66.66、69.56个月,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Cox比例风险回归模型分析结果表明,Gleason评分>7分、M1期、AMACR阳性、CTCs阳性是患者死亡的独立危险因素(HR=1.883、3.666、2.009、2.923,P<0.05)。结论超声引导下前列腺穿刺联合外周血CTCs检测对前列腺癌患者的预后具有重要的预测价值,临床上可根据穿刺组织中AMACR表达水平和外周血CTCs计数进行预后的综合分析。     

人间充质干细胞对乳腺癌细胞生长的影响研究

目的通过构建间充质干细胞(MSC)与乳腺癌细胞间相互作用的共培养模型,探讨MSC对乳腺癌细胞生长的影响。方法用含荧光基因第三代自身失活慢病毒载体感染人类脐带分离提取的MSC和乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7,以单独培养的乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7分别设立对照,2种乳腺癌细胞分别与MSC共培养,检测乳腺癌细胞在MSC作用下增生能力的改变,流式细胞术检测共培养后细胞表面标记物表达。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,多重比较采用Dunnet-t检验。结果MSC在与乳腺癌细胞共培养过程中促进肿瘤细胞生长,第3天共培养组乳腺癌MDA-MB-231细胞数高于单独MDA-MB-231培养组[(5.50±0.71)×10^3个比(1.63±0.41)×10^3个],培养至第7天,两组间MDA-MB-231细胞数差异进一步增大[(81.25±7.40)×10^3个比(26.25±4.15)×10^3个],差异具有统计学意义(P均<0.001);共培养后MSC促进乳腺癌细胞表达干细胞特有标记物CD90,MCF-7从共培养第2天CD90表达率(1.38±0.30)﹪升高至第9天(92.45±2.04)﹪。在共培养中MSC围绕肿瘤细胞集落方式生长,在形态上变长,并发现一种新型混合细胞(hybrid融合细胞)同时表达绿色和红色荧光,且对化疗药物更敏感。结论MSC促进乳腺癌细胞的生长,伴随MSC形态学改变和hybrid融合细胞出现,乳腺癌细胞获得MSC特有CD90表达。