冬凌草甲素缓解脂多糖诱导的Caco-2肠上皮细胞屏障损伤和SIRT1/eIF2α信号通路活性的抑制

目的 探索冬凌草甲素对脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱导的肠上皮屏障障碍的影响及其生物学机制。方法将Caco-2细胞进行单层培养21 d使其分化后，分为对照组、LPS组（2μg/mL LPS处理24 h）、LPS+低剂量冬凌草甲素组（10μg/mL冬凌草甲素预处理30 min,2μg/mL LPS处理24 h）和LPS+高剂量冬凌草甲素组（40μg/mL冬凌草甲素预处理30 min,2μg/mL LPS处理24 h）。采用跨上皮电阻法和FITC-dextran 4通量法评估细胞单层屏障功能；CCK-8法检测细胞活力；乳酸脱氢酶（LDH）法检测LDH释放活性；DCFH-DA探针法检测细胞内活性氧水平；ELISA法检测炎症因子IL-1β和TNF-α分泌水平；免疫荧光法检测细胞的屏障功能相关蛋白闭合蛋白（occludin）和闭锁小带蛋白1(zonula occludens protein 1, ZO-1)的表达分布情况；Western blot法检测SIRT1和p-eIF2α的相对表达水平。结果 与LPS组比较，冬凌草甲素能改善LPS诱导的肠上皮细胞单层屏障障碍，增...     

姜黄素诱导Nrf2核转位对脂多糖引起库普弗细胞分泌炎症细胞因子的影响

目的：研究姜黄素诱导大鼠Kupffer细胞Nrf2核转位对脂多糖（LPS）引起的炎症细胞因子分泌的影响。方法：分别用10μM、20μM和30μM干预Kupffer细胞8h,诱导Nrf2核转位水平;将Kupffer细胞随机分为对照组、LPS组和干预组,对照组正常培养未加姜黄素和LPS,LPS组用10μg／mL的LPS加入Kupffer细胞培养液共同培养2h;干预组用30μM姜黄素干预8h后,余处理同LPS组。Western blot检测Nrf2核转位水平,分光光度法检测细胞MDA、GSH水平,ELISA法检测上清液TNF-α和IL-6,放免法检测IL-1β。结果：①姜黄素诱导Kupffer细胞Nrf2核转位,核转位水平随浓度增加而增高。②LPS组MDA水平较对照组显著升高（P〈0．01）,干预组MDA水平较LPS组显著降低（P〈0．01）,仍显著高于对照组（P〈0．01）。LPS组GSH水平较对照组显著降低（P〈0．01）,干预组GSH水平较LPS组显著升高（P〈0．01）,仍显著低于对照组（P〈0．01）。③LPS组上清液TNF-α,IL-1β和IL-6显著高于对照组（P〈0．01）,干预组均显著低于模型组（P〈0．01）,但显著高于对照组（P〈0．01）。结论：姜黄素通过诱导Kupffer细胞Nrf2核转位,降低LPS诱导的氧化应激损伤,抑制Kupffer细胞分泌炎症细胞因子。     

姜黄素诱导Nrf2 核转位对脂多糖引起库普弗细胞分泌炎症 细胞因子的影响

目的:研究姜黄素诱导大鼠Kupffer细胞Nrf2核转位对脂多糖(LPS)引起的炎症细胞因子分泌的影响。方法:分别用10μM、20μM和30μM干预Kupffer细胞8h,诱导Nrf2核转位水平;将Kupffer细胞随机分为对照组、LPS组和干预组,对照组正常培养未加姜黄素和LPS,LPS组用10μg/mL的LPS加入Kupffer细胞培养液共同培养2 h;干预组用30μM姜黄素干预8h后,余处理同LPS组。Western blot检测Nrf2核转位水平,分光光度法检测细胞MDA、GSH水平,ELISA法检测上清液TNF-α和IL-6,放免法检测IL-1β。结果:①姜黄素诱导Kupffer细胞Nrf2核转位,核转位水平随浓度增加而增高。②LPS组MDA水平较对照组显著升高(P<0.01),干预组MDA水平较LPS组显著降低(P<0.01),仍显著高于对照组(P<0.01)。LPS组GSH水平较对照组显著降低(P<0.01),干预组GSH水平较LPS组显著升高(P<0.01),仍显著低于对照组(P<0.01)。③LPS组上清液TNF-α,IL-1β和IL-6显著高于对照组(P<0.01),干预组均显著低于模型组(P<0.01),但显著高于对照组(P<0.01)。结论:姜黄素通过诱导Kupffer细胞Nrf2核转位,降低LPS诱导的氧化应激损伤,抑制Kupffer细胞分泌炎症细胞因子。     

红景天苷通过调节p38和JNK信号通路抑制BV-2细胞分泌炎性因子

红景天苷是传统中药红景天的主要成分,已有研究显示红景天苷具有一定的抗炎性作用。本研究旨在探讨红景天苷对BV-2细胞炎性反应的调节作用及可能机制。实验分为对照组、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)组、红景天苷组、红景天苷预处理+LPS组,用100μg/L LPS和/或10 mg/L红景天苷处理BV-2细胞,收集细胞培养基上清(条件培养基),采用real-time PCR方法检测细胞IL-6和TNF-αm RNA表达水平,ELSIA方法检测培养基IL-6和TNF-α含量,条件培养基处理PC12细胞24 h后,Hoechst 33258染色检测细胞核形态学改变,cell counting kit 8(CCK-8)试剂盒检测细胞活力,免疫印迹方法检测BV-2细胞p38和JNK的磷酸化水平。结果表明100μg/L LPS处理可显著提高BV-2细胞内IL-6和TNF-α的表达水平(P0.05)。红景天苷可显著下调LPS诱导的BV-2细胞IL-6和TNF-α表达量(P0.05),下调p38和JNK的磷酸化水平(P0.05)。SB202190和SP600125可降低LPS引起的IL-6和TNF-α表达,与红景天苷共处理后可拮抗LPS的诱导效应。与LPS组相比,红景天苷预处理+LPS组的条件培养基处理后,PC12细胞的细胞活力显著升高(P0.05),同时细胞核固缩和聚集情况减少(P0.05)。以上结果提示,红景天苷可在一定程度上抑制小胶质细胞活动,通过调节p38和JNK信号通路减少炎性因子释放,从而降低PC12细胞的损伤。     

下调血管生成素样蛋白7表达对血管紧张素Ⅱ介导的血管平滑肌细胞炎症反应的影响

目的探讨RNA干扰血管生成素样蛋白7 （Angptl7）基因对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的血管平滑肌细胞（VSMC）炎症因子的影响及其作用机制。 方法体外培养人VSMC,分为常规F12K培养基培养（对照）和1 μg/mL AngII培养24 h。VSMC用AngⅡ（1 μg/mL）处理24 h后,采用siRNA-Angptl7和阴性对照siRNA-NC在Lipofectamine 2000介导下转染VSMC。RT-qPCR检测mRNA表达水平;Griess反应测定一氧化氮（NO）含量;蛋白免疫印记法检测相关蛋白的改变;酶联免疫吸附法检测VSMC中炎症因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-1β （IL-1β）和IL-6水平。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验,两组间比较采用独立样本t检验。 结果与对照比较,1 μg/mL AngⅡ处理可促进VSMC中Angptl7 mRNA （0.97±0.06比3.05±0.21）和蛋白表达（1.01±0.12比1.61±0.14）,亦可促进VSMC中IL-1β[（45.21±8.10）比（126.17±11.77） pg/mL]、IL-6[（50.50±7.51）比（108.50±9.51）pg/mL]和TNF-α的表达[（60.77±9.58）比（185.67±17.35）pg/mL],差异有统计学意义（P均< 0.01）。与对照和转染siRNA-NC相比,转染siRNA-Angptl7下调Angptl7蛋白表达（0.99±0.12,0.98±0.12比0.44±0.14,P < 0.01）。与AngⅡ干预组相比,siRNA-Angptl7降低AngⅡ介导的VSMC炎症反应相关蛋白TNF-α、IL-6和IL-1β的表达,核因子κB （NF-κB）/诱导型一氧化氮合酶（iNOS）/环氧化酶2 （COX-2）信号通路相关蛋白NF-κB、iNOS和COX-2表达及NO含量亦降低,差异有统计学意义（P均< 0.01）。与siRNA-NC相比,siRNA-Angptl7组AngⅡ诱导的VSMC炎症反应相关蛋白TNF-α （0.99±0.13比0.51±0.12）、IL-6 （1.00±0.12比0.38±0.05）和IL-1β的表达（0.99±0.14比0.48±0.11）,NF-κB （1.00±0.10比0.42±0.08）、iNOS （1.02±0.12比0.42±0.10）和COX-2表达（1.00±0.11比0.52±0.12）均降低,NO含量[（54.78±2.76）比（18.08±3.61）μmol/L]亦降低,差异有统计学意义（P均< 0.01）。 结论AngⅡ可通过Angptl7促进VSMC炎症反应,下调Angptl7蛋白表达可以抑制VSMC的炎症反应,其作用机制可能与抑制NF-κB/iNOS-COX-2信号通路有关。     

天麻素抑制脂多糖诱导的BV-2小胶质细胞炎症反应及机制研究

目的:研究天麻素对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞炎性反应的影响,并探讨其潜在的作用机制。方法:BV-2小胶质细胞分为对照组、LPS组和天麻素组。LPS和天麻素处理24 h后,MTT和LDH试验检测细胞活性。ELISA实验检测炎性因子白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。Western blot检测细胞中Iba-1和TLR4的表达,以及IκBα的降解和NFκB-P65的核转位情况。结果:LPS刺激后,BV-2细胞活性下降(65.46±3.70%),LDH释放量增加(264.54±17.78 U/L),各炎性因子水平也显著升高。给予天麻素处理后,细胞活性升高(74.33±4.22%),LDH释放量减少(173.88±15.23 U/L),炎性反应降低。同时,天麻素显著抑制LPS诱导的BV-2细胞Iba-1升高,降低了LPS处理后细胞TLR4的升高,IκBα的磷酸化水平和P65的核转位。结论:天麻素可以提高BV-2细胞活性,缓解LPS诱导的炎症反应。其作用机制可能是通过抑制BV-2细胞的过度活化,调控TLR4/NFκB信号通路,最终减少炎症因子的表达。     

内毒素引起的乳鼠心肌细胞血红素加氧酶—1基因的表达

为了探讨在内毒素作用下的乳鼠心肌细胞（neonatal rat cardiomyocytes,NRCMs）血红素加氧酶－1（heme oxygenase-1,HO-1）基因的表达及其在细胞损伤中的作用,分别用10、30及50μg/ml的脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）,10μg/ml LPS 10μmol/ml锌原卟啉Ⅸ（Zn-protoporphyrin-Ⅸ,ZnPPⅨ）和单纯10μmol/ml ZnPPⅨ与培养的NRCMs共同孵育6h,以及10μg/ml LPS与NRCMs共同孵育9h和18h。分别观察细胞HO－1 mRNA表达、MDA含量、LDH释放量与台盼蓝摄取率的变化。结果显示,同样与细胞孵育6h,LPS10μg/ml时HO－1 mRNA表达比对照组增加81.2％,30μg/ml时表达量增加126.3％,50μg/ml时表达量增加92.8％;LPS为10μg/ml时,孵育9h后HO－1 mRNA的表达量比对照组增加93.6％,孵育18h后一增加105.8％。LPS30、50μg/ml,10μg/ml LPS＋10μmol/ml ZnPPⅨ与细胞孵育6h及LPS 10μg/ml孵育18h后,细胞MDA含量、LDH释放量与台盼蓝摄取率明显增加（P＜0.01）;单纯10μg/ml LPS与单纯10μmol/ml ZnPPⅨ孵育6h后,上述指标均无明显升高。结果表明,LPS可诱导NRCMs HO－1 mRNA的表达,且在较低LPS剂量范围内具有时间依赖性和浓度依赖性;NRCMs HO-1 mRNA的表达可减低LPS引起的细胞损伤,这可能是细胞产生的一种自身保护性反应。     

类叶升麻苷通过上调miR-204对缺氧/复氧诱导H9C2细胞凋亡的抑制作用

目的探讨类叶升麻苷对缺氧/复氧（H/R）处理大鼠心肌细胞（H9C2）损伤的影响及其分子机制。 方法体外培养H9C2细胞,H/R （4 h/20 h）建立心肌细胞损伤模型,并采用1、10、100 μmol/L类叶升麻苷,转染miR-204模拟物阴性对照（miR-NC）、转染miR-204模拟物（miR-24）,100 μmol/L类叶升麻苷干预+转染miR-204抑制剂阴性对照、100 μmol/L类叶升麻苷+转染miR-204抑制剂干预H/R细胞。分别进行RT-qPCR、MTT、流式细胞术、Western blot检测miR-204表达水平、细胞活力、细胞凋亡率和相关蛋白表达,利用相应试剂盒检测乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测白细胞介素-6 （IL-6）、白细胞介素-β （IL-β）和肿瘤坏死因子-α （TNF-α）的含量。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验。 结果与心肌损伤模型比较,10、100 μmol/L类叶升麻苷的细胞凋亡率[（25.62±1.96）%比（18.17±1.27）%,（11.24±0.57）%]、Bax（0.71±0.05比0.51±0.04、0.29±0.03）、LDH [（243.16±11.31）比（121.22±4.52）,（94.39±2.82）U/g]、MDA [（1.82±0.07）比（1.13±0.04）,（0.92±0.04）nmol/mg]、IL-6 [（121.45±6.18）比（87.16±4.53）,（47.11± 2.24）pg/mL]、IL-1β [（229.82±8.48）比（175.32±8.73）,（113.14±5.63）pg/mL]和TNF-α表达水平[（138.18±6.60）比（92.24±4.04）,（61.53±4.17）pg/mL]降低,Bcl-2 （0.18±0.01比0.35± 0.03、0.52±0.04）、SOD [（18.72±1.26）比（38.81±1.51）,（45.43±1.29）U/mg]和GSH-Px表达水平[（58.74±2.28）比（89.24±2.82）,（94.66±3.05）U/mg]升高（P均< 0.05）;与miR-NC比较,转染miR-204的细胞凋亡率[（24.12±1.12）%比（9.26±0.49）%]、Bax （0.62±0.04比0.25±0.02）、LDH [（229.11±8.47）比（86.32±5.92）U/g]、MDA [（1.75±0.08）比（0.85± 0.05）nmol/mg]、IL-6 [（134.47±7.31）比（55.26±2.13）pg/mL]、IL-1β [（211.14±9.70）比（98.11±3.18）pg/mL]和TNF-α表达水平[（152.92±3.49）比（51.34±2.66）pg/mL]降低,Bcl-2 （0.22±0.01比0.57±0.03）、SOD [（20.92±1.38）比（47.68±1.76）U/mg]和GSH-Px表达水平[（62.65±2.76）比（91.13±3.80）U/mg]升高（P < 0.05）;10、100 μmol/L类叶升麻苷可提高H/R诱导H9C2细胞中miR-204的表达水平（P < 0.05）;且下调miR-204逆转了类叶升麻苷对H/R处理H9C2细胞凋亡、氧化应激和炎症因子的影响。 结论类叶升麻苷可能通过上调miR-204表达缓解H/R诱导的H9C2细胞损伤。     

补骨脂素抑制膀胱癌T24细胞增殖和迁移的作用及机制研究

目的探讨补骨脂素对人膀胱癌T24细胞存活率、细胞周期、细胞凋亡和迁移的影响及其分子机制。 方法分别用细胞培养液、3‰二甲基亚砜（DMSO）和不同浓度（10、30、50、100 μg/mL）补骨脂素处理膀胱癌细胞分成对照组、DMSO组和补骨脂素组,CCK-8检测细胞存活率。流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。划痕实验检测划痕愈合率。RT-qPCR法检测磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）和蛋白激酶B （AKT） mRNA表达水平、Western blot法检测PI3K和AKT蛋白的表达及磷酸化情况。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。 结果与DMSO组比较,除10 μg/mL补骨脂素作用24 h外,其余浓度补骨脂素作用不同时间的细胞存活率随着补骨脂素浓度增高、作用时间延长而逐渐降低（P < 0.05）。与DMSO组比较,30、100 μg/mL补骨脂素干预24 h后,G1期细胞比例增多,G2/M期比例减少,细胞凋亡率[（9.16±0.97）%、（15.45±1.57）%比（1.02±0.36）%]升高,划痕愈合率[24 h：（45.00±3.44）%、（27.60±2.21）%比（66.10±2.61）%,48 h：（70.00 ± 3.40）%、（45.17±2.44）%比（85.17±3.85）%]降低,PI3K、AKT mRNA表达以及PI3K、AKT蛋白表达水平和磷酸化水平均降低（P均< 0.05）。 结论补骨脂素降低膀胱癌细胞存活率、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡和抑制细胞迁移,其机制可能与下调PI3K、AKT mRNA、蛋白表达及磷酸化水平有关。     

替米沙坦调控miR-495-3p/心肌细胞增强因子2A通路减轻缺氧诱导的神经细胞PC12损伤

目的探讨替米沙坦（TM）调控miR-495-3p/心肌细胞增强因子2A （MEF2A）通路对缺氧诱导PC12细胞损伤的影响和机制。 方法将PC12细胞进行正常培养（对照）,缺氧（缺氧24 h）,缺氧+ 0.1、1、10 μg/mL TM、缺氧+ miR-NC （转染miR-NC）,缺氧+miR-495-3p （转染miR-495-3p模拟物）,缺氧+TM+anti-miR-NC （转染anti-miR-NC,10 μg/mL TM）和缺氧+ TM+anti-miR-495-3p （转染anti-miR-495-3p,10 μg/mL TM）处理。酶联免疫吸附实验（ELISA）检测乳酸脱氢酶（LDH）漏出量和超氧化物歧化酶（SOD）的活性,流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR （RT-qPCR）和Western blot检测miR-495-3p、心肌细胞增强因子2A （MEF2A）表达水平。两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。 结果与对照比较,缺氧处理的PC12细胞LDH漏出率[（9.46±0.97）﹪比（45.69±4.31）﹪]、细胞凋亡率[（5.36±0.54）﹪比（28.36±2.41）﹪]、MEF2A mRNA（1.00±0.08比2.74±0.26）和MEF2A蛋白表达水平（0.39±0.03比0.87±0.06）均升高;SOD活性[（12.24 ±1.13）比（5.13±0.52 ）U/mL）]和miR-495-3p表达水平（1.00±0.08比0.35±0.03）均降低,差异有统计学意义（P均< 0.05）。与缺氧处理比较,缺氧+0.1、1、10 μg/mL TM干预的PC12细胞LDH漏出率[（45.69±4.31）﹪比（32.14±3.84）﹪、（23.54±3.17）﹪、（16.87±1.46）﹪]、细胞凋亡率[（28.36±2.41）﹪比（22.46±2.31）﹪、（17.14±1.65）﹪、（10.23±1.12）﹪]、MEF2A mRNA（2.74±0.26比2.26±0.23、1.87±0.19、1.34±0.18）和MEF2A蛋白表达水平（0.87±0.06比0.75±0.05、0.63±0.04、0.46±0.03）均降低;SOD活性[（5.13±0.52）比（6.87±0.69 ）、（8.01±0.81）、（10.12±1.02）U/mL]、miR-495-3p表达水平（0.35±0.03比0.49±0.04、0.61±0.06、0.83±0.07）均升高,差异有统计学意义（P均< 0.05）。与缺氧+ miR-NC比较,缺氧+ miR-495-3p的PC12细胞LDH漏出率[（46.87±4.28）﹪比（19.65±1.87）﹪]和细胞凋亡率[（28.38±2.44）﹪比（12.36±1.25）﹪]均降低,SOD活性[（5.15±0.51）比（9.67±0.97）U/mL]升高,差异有统计学意义（P均< 0.05）。与缺氧+TM+anti-miR-NC比较,缺氧+TM+anti-miR-495-3p的PC12细胞LDH漏出率[（17.64±1.79）﹪比（32.69±3.57）﹪]和细胞凋亡率[（10.98±1.75）﹪比（22.64±2.13）﹪]均升高,SOD活性[（12.63±1.27）比（7.32±0.71）U/mL]降低,差异有统计学意义（P均< 0.05）。 结论TM通过上调miR-495-3p/MEF2A通路对缺氧诱导的PC12细胞损伤具有保护作用。     

柚皮苷对高糖作用下MC3T3-E1细胞活力和Akt通路相关因子表达的影响

目的探讨柚皮苷（NG）对高糖环境下MC3T3-E1细胞活力的影响及可能的分子机制。 方法体外培养小鼠MC3T3-E1细胞，实验分5组：对照组（正常无血清培养基）、高糖组（含25 mmol/L葡萄糖）、0.1 μmol/L +高糖组（0.1 μmol/L NG + 25 mmol/L葡萄糖）、1 μmol/L +高糖组（1 μmol/L NG+25 mmol/L葡萄糖）、10 μmol/L +高糖组（10 μmol/L NG+25 mmol/L葡萄糖）。药物干预后，采用CCK-8法检测细胞活力；实时荧光定量PCR（qPCR）法检测细胞成骨特异性转录因子（Runx2）、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）、蛋白激酶（Akt1）mRNA的表达；蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞碱性磷酸酶（ALP）、Akt1、IGF-1蛋白的表达。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。 结果CCK8检测结果显示，与对照组比较，高糖组细胞OD值（12 h：0.90±0.01比0.80±0.01，24 h：1.00±0.05比0.84±0.01，48 h：1.09±0.03比0.90±0.01）均降低，差异有统计学意义（P < 0.01）；与高糖组比较，0.1 μmol/L+高糖组细胞OD值（24 h：0.84±0.01比0.93±0.05，48 h：0.90±0.01比0.99±0.01）、1 μmol/L +高糖组和10 μmol/L+高糖组OD值（12 h：0.80±0.01比0.92±0.01、1.01±0.32，24 h：0.84±0.01比1.01±0.04、1.16±0.03，48 h：0.90±0.01比1.12±0.02、1.20±0.02）均升高，差异有统计学意义（P < 0.05）。与对照组比较，高糖组细胞Runx2、IGF-1、Akt1的mRNA的表达水平（24 h：1.00比0.34±0.02、1.00比0.34±0.01、1.00比0.15±0.02）、（48 h：1.00比0.72±0.03、1.00比1.09±0.07、1.00比0.38±0.04）降低，差异有统计学意义（P < 0.01）。与高糖组比较，1 μmol/L +高糖组和10 μmol/L+高糖组细胞Runx2、IGF-1、Akt1的mRNA表达水平（24 h：0.34±0.02比0.62±0.09、0.64±0.05，0.34±0.01比0.77±0.03、1.02±0.07，0.15±0.02比0.24±0.08、0.4±0.09）、（48 h：0.72±0.03比1.27±0.02、1.37±0.02，1.09±0.07比2.44±0.19、2.73±0.04，0.38±0.04比0.86±0.06、1.43±0.03）均升高，差异有统计学意义（P < 0.05）。与对照组比较，高糖组细胞ALP、Akt1、IGF-1蛋白表达水平（48 h：1.00比0.72±0.02、1.00比0.89±0.03、1.00比0.09±0.01）均降低，差异有统计学意义（P < 0.05）；与高糖组比较，0.1 μmol/L+高糖组、1 μmol/L+高糖组和10 μmol/L+高糖组ALP、Akt1、IGF-1蛋白表达水平（48 h：0.72±0.02比1.92±0.02、2.30±0.30、3.09±0.10，0.89±0.03比1.50 ± 0.03、1.43±0.04、1.40±0.13，0.09±0.01比1.75±0.01、2.30±0.31、2.07±0.07）均升高，差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论NG逆转高糖诱导的MC3T3-E1细胞活力减退；同时改善高糖的抑制作用，促进MC3T3-E1细胞IGF-1、AKt-1、Runx2 mRNA和IGF-1、AKt-1、ALP蛋白的表达。     

Ghrelin-GHSR通路在急性低氧暴露大鼠胃炎症反应中的调节作用

由胃合成分泌的食欲刺激激素（ghrelin）可通过结合并激活生长激素促分泌激素受体,（growth hormone secretagogue receptor,GHSR）在调节胃功能方面发挥重要作用。急性低氧暴露导致的消化系统营养吸收障碍和胃肠道炎症反应是否通过Ghrelin-GHSR通路调控尚无研究。本研究采用Wistar大鼠为研究对象,随机分为4组：低氧暴露0 h组、12 h组、24 h组和48 h组,低氧干预在10.2%氧浓度的低氧房中进行。干预前后记录体重;通过分子生物学检测指标评价胃组织炎症因子含量、食欲刺激激素和下丘脑GHSR mRNA相对含量和蛋白质表达水平。本研究证实,随着低氧暴露时间的延长,大鼠体重减少量逐渐增加（12 h：3.73±3.08 g、24 h：8.77±5.04 g、48 h：12.53±6.16 g）;胃组织炎症因子IL-2、IL-4、IL-10、TNFα和MCP-1蛋白含量在低氧12 h后增加（4816.9±983.7 / 9074.5±1107.8 / 18895.1±2967.5 / 37.1±9.8 / 143.5±12.5 pg/mL vs. 166.1±34.6 / 38.3±4.2 / 1429.6±123.9 / 1.7±0.3 / 13.5±2.1 pg/mL）,随着低氧时间延长,炎症因子水平逐渐下降至正常水平（24 h：846.4±94.8 / 1269.8±167.9 / 5769.7±892.6 / 7.5±2.1 / 39.3±8.5 pg/mL;48 h：546.5±97.3 / 374.9±84.9 / 1889.7±982.3 / 2.1±0.8 / 24.6±6.4 pg/mL）;低氧12 h后胃组织食欲刺激激素 mRNA水平较0 h组下降（0.49±0.06 vs. 1, P < 0.05）,48 h后上升（3.79±0.54 vs. 1, P < 0.01）,胃组织的食欲刺激激素蛋白含量在低氧24 h和48 h后均出现上升（1.23±0.15 / 1.16±0.12 vs. 1, P < 0.05）;下丘脑GHSR mRNA在低氧48 h后上升（1.99±0.29 vs. 1, P < 0.01）,蛋白质水平在低氧24 h和48 h后均出现下降（0.35±0.06 / 0.48±0.04 vs. 1, P < 0.05）。表明急性低氧暴露会导致Ghrelin-GHSR通路下调,进而促进胃组织炎症反应,而随着低氧暴露时长的延续,Ghrelin-GHSR通路可通过下调胃中炎症因子水平而避免消化系统的进一步损伤。     

下调TLR4对LPS诱导的支气管上皮16HBE细胞损伤的影响及其机制

目的探讨TLR4对脂多糖（LPS）诱导的支气管上皮16HBE细胞损伤的影响及其机制。 方法将3条siRNA-TLR4-1、siRNA-TLR4-2和siRNA-TLR4-3转染至16HBE细胞中,筛选出最佳的siRNA-TLR4干扰序列进行实验。实验分为对照组（未处理）、LPS组（给予50 μg/ml LPS处理）、LPS+siNC组（转染siRNA-NC后给予50 μg/ml LPS处理）和LPS+siTLR4组（分别转染设计的3条siRNA-TLR4后给予50 μg/ml LPS处理）,采用RT-PCR检测TLR4、IL-6和TNF-α mRNA的表达,MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western Blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、NF-κB p65和IκBα蛋白的表达。多组间比较使用单因素方差分析,组间多重比较采用SNK-q,两组间比较采用独立样本t检验。 结果LPS组与LPS+siTLR4-2组TLR4 mRNA（2.05±0.12,3.28±0.15）和蛋白表达（0.38±0.03,0.77±0.05）比较,差异具有统计学意义（t?= 11.091,11.585,P均< 0.001）;LPS组与LPS+siTLR4-3组TLR4 mRNA（1.39±0.09,3.28±0.15）和蛋白表达（0.31±0.02,0.77±0.05）比较,差异具有统计学意义（t?= 20.857,12.650,P均?< 0.001）且siRNA-TLR4-3的效果最为显著。与对照组相比,LPS组、LPS+siNC组和LPS+siTLR4组细胞中IL-6 mRNA（11.42±1.05,11.38±1.34,6.22±0.35,0.97±0.06,F?= 98.803,P均< 0.01）、TNF-α mRNA（15.76±1.12,15.69±0.87,7.54±0.41,1.03±0.09,F?= 278.064,P均< 0.01）、Cleaved Caspase-3蛋白（0.75±0.06,0.77±0.05,0.38±0.03,0.13±0.02,F?= 154.851,P均< 0.01）、Bax蛋白（0.48±0.05,0.52±0.05,0.33±0.02,0.11±0.02,F?= 71.310,P均< 0.01）、NF-κBp65蛋白（0.64±0.05,0.67±0.05,0.45±0.04,0.28±0.02,F?= 56.571,P?均?< 0.01）的表达水平和细胞凋亡率[（21.36±2.85）﹪,（20.94±3.22）﹪,（13.08±1.16）?﹪,（7.25±1.28）﹪,F?= 25.685,P均< 0.01]均明显升高,而细胞活力（0.53±0.04,0.51±0.04,0.78±0.06,1.15±0.08,F?= 80.811,P均< 0.01）和Bcl-2蛋白（0.28±0.03,0.25±0.03,0.40±0.03,0.69±0.06,F?= 76.762,P均< 0.01）、IκBα蛋白（0.38±0.03,0.35±0.03,0.44±0.03,0.72±0.06,F?= 53.635,P均< 0.01）的表达水平均明显降低;与LPS组相比,LPS+siTLR4组中IL-6 mRNA、TNF-α mRNA、Cleaved Caspase-3蛋白、Bax蛋白、NF-κBp65蛋白的表达水平和细胞凋亡率均明显降低,差异有统计学意义（t = 8.138,11.937,9.553,4.825,5.140,4.661,P均< 0.01）,而细胞活力和Bcl-2蛋白、IκBα蛋白的表达水平均明显升高,差异有统计学意义（t = 6.005,4.899,3.674,P < 0.05）,而LPS组和LPS+siNC组间差异无统计学意义（P > 0.05）。 结论下调TLR4可通过抑制NF-κB通路激活抑制LPS诱导的细胞凋亡和炎症反应减轻16HBE细胞损伤。     

槲皮素对人脑胶质瘤干细胞生物学行为及miR-29s家族的影响分析

目的探讨分析槲皮素对人脑胶质瘤干细胞（BGSCs）生物学行为及miR-29s家族的影响。 方法使用干细胞培养液对U87人脑胶质瘤细胞进行培养,采用CCK-8法检测槲皮素对BGSCs细胞增殖抑制率,采用流式细胞技术检测槲皮素对BGSCs细胞凋亡影响,并采用real-time PCR鉴定槲皮素对BGSCs细胞中miR-29a、miR-29b以及miR- 29c表达的影响。采用t检验以及方差分析进行统计学分析。 结果随着槲皮素浓度的增加,BGSCs细胞增殖抑制率增加24 h 0 μg/ml（0.00±0.12）%、10 μg/ml（1.36±0.38）%、20 μg/ml（15.33±3.01）%、40 μg/ ml（29.50±4.57）%、80 μg/ml（40.21±6.42）%、160 μg/ml（61.21±7.48）,F = 76.273,P < 0.05;48 h 0 μg/ml （0.09±0.05）%、10 μg/ml（9.84±2.17）%、20 μg/ml（28.57±3.84）%、40 μg/ ml（43.59±5.21）%、80 μg/ml（59.50±3.28）%、160 μg/ ml（70.21±9.48）%,F = 85.392,P < 0.05,且同浓度槲皮素作用48 h对BGSCs细胞增殖抑制率高于作用24 h（P < 0.05）。随着槲皮素浓度的升高,BGSCs细胞凋亡率升高[0 μg/ml（13.42±1.21）%、20 μg/ml（38.47±9.28）%、40 μg/ml（59.34±7.20）%、80 μg/ml（71.42±9.47）%,F = 57.493,P < 0.05]。不同浓度槲皮素处理BGSCs细胞后,可促进BGSCs细胞miR-29s家族miR- 29a/ b/ c相对表达量,且随着槲皮素浓度的增加,BGSCs细胞miR-29s家族相对表达量增加[miR-29a 0 μg/ml（1.04±0.08）、20 μg/ml（1.16±0.05）、40 μg/ml（1.30±0.10）、80 μg/ ml（1.41±0.09）,F = 19.281,P < 0.05;miR-29b 0 μg/ml（1.06±0.09）、20 μg/ml（1.13±0.05）、40 μg/ml（1.25±0.07）、80 μg/ml（1.30±0.09）,F = 13.427,P < 0.05;miR-29c 0 μg/ml（1.03±0.07）、20 μg/ml（1.15±0.03）、40 μg/ml（1.22±0.06）、80 μg/ml（1.31±0.08）,F = 14.502,P < 0.05]。 结论槲皮素可有效抑制人脑BGSCs增殖,促进人脑BGSCs凋亡,并促进人脑BGSCs中miR- 29s家族表达。     

Taurine attenuates lipopolysaccharide-induced disfunction in mouse mammary epithelial cells

The intent of this study was to evaluate the active defense reaction of mouse mammary epithelial cells and the cytoprotective and anti-inflammatory properties of taurine to lipopolysaccharide (LPS)-induced disfunction in mouse mammary epithelial cells. (1) Primary cultured mouse mammary epithelial cells were stimulated with LPS for 24 h (final concentration=0, 5, 10, 20 μg/mL). Western blotting demonstrated a significant decrease in the secretion of β-casein in the 20 μg/mL LPS treatment group (P<0.05), while nitric oxide (NO), tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukin-1β (IL-1β), interleukin-6 (IL-6), lactoferrin (LF) and N-acetyl-β-D-glucosaminidase (NAGase) were all significantly increased following LPS treatment (P<0.01). Furthermore, cell survival was significantly inhibited after treatment with 20 μg/mL LPS; however, neither 5 μg/mL nor 10 μg/mL LPS had any effect on cell survival. Therefore, a level of 10 μg/mL LPS was selected to test the protective effect of taurine on mouse mammary epithelial cells. (2) Primary cultured mouse mammary epithelial cells were treated with 0, 5, 15 or 45 mmol/L taurine for 3 h, followed by 10 μg/mL LPS for 24 h. Taurine significantly attenuated the LPS-induced increase in NAGase activity, NO concentrations and the level of TNF-α, IL-1β, IL-6 and LF. Taurine at 45 mmol/L markedly increased β-casein secretion in response to LPS-induced disfunction. This study demonstrated that the addition of taurine to a culture medium significantly inhibited the LPS-induced release of inflammatory factors and increased β-casein secretion from mammary epithelial cells, thereby providing a possible explanation for the protective effect proposed for taurine in the prevention of LPS-induced disfunction in mammary epithelial cells.     

人CD137抗体促进NK细胞对乳腺癌细胞特异性杀伤作用的体外研究

目的探讨人自然杀伤(NK)细胞在CD137抗体作用下通过抗体依赖性细胞毒性作用(ADCC)介导对乳腺癌细胞的杀伤作用。方法NK细胞表型和细胞因子检测实验分组:阴性对照组(未用人CD137抗体处理的NK细胞)、CD137抗体处理组(10μg/mL人CD137抗体处理4 h的NK细胞);NK细胞毒性检测实验分组:根据体系中是否添加NK细胞、人CD137抗体和西妥昔单抗分为8组。流式细胞术检测两组NK细胞表面CD16分子的表达情况,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测两组NK细胞培养上清液中干扰素(IFN)-γ和肿瘤坏死因子(TNF)-α的浓度,乳酸脱氢酶(LDH)法检测8组反应体系中表皮生长因子受体(EGFR)高表达乳腺癌细胞系MDA-MB-231和EGFR低表达乳腺癌细胞系MDA-MB-453的杀伤比例,并采用t检验或析因分析进行统计学分析。结果与阴性对照组比较,CD137抗体处理组CD16+NK细胞比例(79.57﹪±0.92﹪比90.43﹪±0.67﹪)、细胞因子IFN-γ浓度[(388.90±7.02)pg/mL比(523.90±1.90)pg/mL]和TNF-α浓度[(20.59±4.09)pg/mL比(47.22±2.14)pg/mL]均升高,差异有统计学意义(P<0.05);MDA-MB-231细胞杀伤的三因素析因分析结果显示:NK细胞、人CD137抗体和西妥昔单抗3个因素分别对MDA-MB-231细胞的杀伤都有作用(F=5227.276、201.473、1792.242,P均<0.001),3个因素两两之间的交互作用对MDA-MB-231细胞的杀伤也都有作用(F=183.903、1517.187、33.483,P均<0.001),3个因素的二级交互作用差异有统计学意义(F=41.505,P<0.001)。结论人CD137抗体可增强NK细胞分泌细胞毒性因子IFN-γ和TNF-α的能力,同时可上调NK细胞表面CD16分子的表达,从而使得NK细胞可能通过西妥昔单抗介导的ADCC作用增强对表皮生长因子受体(EGFR)高表达乳腺癌细胞的杀伤作用。