松江鲈鱼体表黏液抑菌效果研究

以松江鲈鱼(Trachidermus fasciatus)体表黏液作为试验材料,分别用水、酸、有机物3种不同的提取剂对其进行粗提取,采用滤纸片法和二倍稀释法确定其抑菌效果,只有酸的粗提物对所检测的6种病原菌有明显的抑制作用,且抑制作用由大到小的排列顺序是:维氏气单胞菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、嗜水气单胞菌、弗氏柠檬酸杆菌、沃氏葡萄球菌。用SDS-PAGE定量分析酸的粗提物蛋白质表达谱,其蛋白大小95 kD,且在34-55 kD之间含量最高。初步研究表明松江鲈鱼体表黏液酸的粗提物在抵抗上述病原菌入侵方面发挥了主要作用,其抗菌蛋白的确定还有待进一步分析。     

黄鳝血清和体表粘液蛋白的比较研究

本文用反相高效液相色谱法测定了黄鳝血清和体表粘液蛋白的氨基酸种类和含量,比较了二者的氨基酸组成变化。结果表明：二者都含有17种氨基酸,血清的氨基酸总量为397．11mg／l00ml,体表粘液蛋白的氨基酸总量为259．29mg／l00m1,血清与粘液蛋白中氨基酸含量差异最大的是蛋氨酸、半胱氨酸。应用SDS—PAGE分析和比较了血清和体表粘液蛋白的分子量大小及特有区带效,黄鳝血清与体表粘液蛋白分子量相同的蛋白区带数为2条,其分子量大小分别为19．5kDa、96．0kDa。其中血清的特有蛋白带为18条,体表粘液的特有蛋白带为8条。此外,对二者的相关性和体表粘液特异性的免疫机制作了探讨。     

不同水生脊椎动物的血清与黏液蛋白图谱分析

因脊椎动物的血清与黏液中含有大量蛋白质及其他生物活性物质, 而具有多种生理、生化与抗病防御功能。为了解水生脊椎动物血清与黏液中所含主要蛋白成分及其异同, 我们分别从中华鲟(Chinese sturgeonAclpenser sinensis grdy)、鲫鱼(Crucian carp Carassius auratus)、草鱼(Grass carp Ctenopharyngodonidellus)、赤点石斑鱼(Red-spotted grouper Epinephelus akaara)、青石斑鱼(Banded grouper Epinephelusawoara)、狗鱼(Pikes Esox reicherti)、江豚(Finless porpoise Neophocaena phocaenoides)、黄颡鱼(Yellow catfishPelteobagrus fulvidraco)、鳜鱼(Mandarin fish Siniperca chuatsi) 这9 种水生脊椎动物中, 采集血清和皮肤黏液样本。利用考马斯亮蓝G-250 法, 测定了不同水生脊椎动物的血清和黏液样品中总蛋白的含量; 经SDS-PAGE 蛋白电泳, 分别获得不同水生脊椎动物血清及黏液蛋白图谱; 比较和分析了同种动物血清和黏液、不同动物之间血清与血清或黏液与黏液之间蛋白图谱的差异。结果表明:这些动物的血清蛋白组分有显著相似性, 在分子量45—120 kD 之间, 蛋白条带大量集中分布; 除青石斑鱼外, 其他8 种水生脊椎动物都有分子量约为 28 kD 和 14 kD 相同或相近的两条蛋白带。草鱼、鲫鱼、鳜鱼、狗鱼、黄颡鱼和江豚的黏液蛋白, 除了都含有分子量大小约为45 kD 的蛋白条带外, 其他无显著相似性。对同种水生脊椎动物的血清与黏液蛋白比较, 虽然黄颡鱼的血清与黏液中分子量相近的蛋白带最多, 也仅约为38%, 可见其蛋白带的种类和含量都存在显著差异。       

多倍体麦类作物Wx蛋白检测的SDS-PAGE方法

本文通过对小麦蜡质蛋白的实验和研究,详细论述了蜡质蛋白的特性、提取 原理、电泳原理和检验原理。对多倍体麦类作物Wx蛋白亚基的检测,提出了应用效果良好的电泳系统,并就提取方法、凝胶配方和操作步骤进行了描述。本文还列出了部分麦类作物蜡质蛋白亚基基本模式示意图和实验例证,具有很好的参考价值。 Abstract:The waxy protein property,principles of its extraction,electrophoresis and detection were discussed in detail in this paper.According to the detection of polyploid wheat waxy subunits,an effective electrophoresis system was given with the extraction method,gel composition and operating steps listed.The basic iso-form patterns of wheat and related species as well as an application example were also showed in the paper.It is recommended that this paper is valuable both as reference and in application.     

适合SDS-PAGE分析的黑根霉菌丝蛋白质提取方法

为制备适合SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析的黑根霉菌丝蛋白样品,采用不同的提取方法对黑根霉的茵丝进行蛋白质提取。结果表明：黑根霉菌丝经低温冷冻过夜后,直接用0．2mol／LNaOH处理10min,再加入上样缓冲液沸水浴,这一方法能快速、方便、有效的提取蛋白质。利用该方法比较了黑根霉与黑根霉甲苯耐受茵菌丝蛋白组成上的差异。     

SDS-PAGE法测定His-tag融合蛋白分子量产生偏差的原因

Ｈｉｓｔａｇ／ＮｉＮＴＡ系统是新发展起来的一个亲和纯化重组蛋白的有用工具,现常用于基因编码产物的特性研究中。ＳＤＳＰＡＧＥ是实验室测定蛋白质分子量通常采用的方法,而许多实验室用此方法检测Ｈｉｓｔａｇ融合蛋白时却常发现测得的分子量偏大,产生偏差的原因尚未阐明。为弄清这一问题,本实验室在研究一个Ｈｉｓｔａｇ融合蛋白Ｐ７３Ｈｉｓ时,首先用ＳＤＳＰＡＧＥ法测得其分子量确实比理论计算值大,然后对其进行Ｃ末端氨基酸顺序测定、电喷雾质谱分析,结果证实其实际分子量与理论值一致。酶切去除包括Ｈｉｓｔａｇ在内的部分肽段使ＳＤＳＰＡＧＥ法测量蛋白分子量的偏差大大降低,证实Ｈｉｓｔａｇ确实是造成偏差的原因之一。推测由于Ｈｉｓｔａｇ中的碱性氨基酸的作用造成蛋白在ＳＤＳＰＡＧＥ中迁移变慢,而导致偏差。这一现象值得引起有关研究者的注意。     

正常和蛙病毒感染后大鲵血清和黏液蛋白图谱比较分析

为了更好地了解大鲵在感染蛙病毒过程中的生理生化及抗病毒反应, 通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) 辅以密度分析, 对大鲵正常血清和感染血清、正常黏液和感染黏液的蛋白图谱分别进行测试比较。结果显示: 在正常血清(CS)、包括自然感染血清(NS)和人工感染血清(AS)在内的感染血清中,蛋白带集中在6080 kD, 其含量超过血清蛋白总量的42%; 正常血清在1457 kD 之间有16条蛋白带: 57、53、50、43、40、38、36、31、27、26、25、22、16、15.5、15 和14 kD, 其中正常与感染血清(包括NS和AS)比较, 有10条共有蛋白带: 57、43、40、31、27、26、25、15.5、15 和14 kD和4条差异蛋白带: 53、33、22 和16 kD。正常黏液(CM)和感染黏液(NM或AM)共有11条蛋白带: 116、100、75、57、53、45、27、18、17、16和15 kD, 但感染黏液多出7 条蛋白带: 90、52、43、32、26、20 和13 kD。还有些蛋白带含量出现变化, 如45 kD条带在CM中占总蛋白量的19.3%, 而在AM中仅占总蛋白的3.8%。研究证实蛙病毒感染能导致大鲵黏液和血清蛋白图谱发生变化, 也为深入探寻两栖类抗病毒相关的蛋白生物标记提供了有价值的信息。     

小鼠肠道优势菌群失衡肠黏液sIgA、黏液素的变化

目的研究肠道菌群失衡对小鼠肠黏膜机械屏障的影响,探讨优势菌群与肠道黏膜屏障的相互作用机制。方法利用ELISA法检测肠黏膜sIgA含量变化,RT-PCR技术及免疫组化法检测肠黏膜上皮细胞Mucin2、Mucin3和防御素mRNA转录产物的变化。结果菌群失衡小鼠小肠段肠黏膜sIgA水平下降,重度菌群失衡组与正常组比较下降显著（P〈0.05）,与轻度菌群失衡组相比下降明显。菌群失衡小鼠上皮细胞中的Mucin2、Mucin3和防御素mRNA转录产物与正常小鼠相比明显增高,在杯状细胞胞浆内Mucin2蛋白阳性表达增强,且重度菌群失衡组与轻度菌群失衡组小鼠比较,Mucin2、Mucin3和防御素增高明显。结论菌群失衡可导致肠黏膜sIgA分泌量随菌群失衡程度呈下降趋势,同时引起黏液层中黏液素和防御素分泌量增加。     

鲇肠道黏液细胞的类型、分布、发育及分泌方式研究

利用阿利新蓝-过碘酸雪夫氏试剂(AB-PAS,AB染液pH2．6),对鲇(Silurus asotus)肠道黏液细胞的类型与分布进行了研究,同时采用扫描和透射电镜,研究了黏液细胞的发育与分泌方式。结果显示:鲇肠道黏液细胞染色后呈深蓝色、淡蓝色和浅蓝色,主要含有酸性黏多糖:形态上进一步可将其分为囊状、梨状和杯状三种形态。肠道中黏液细胞的分布密度以中肠最高。其次是后肠,前肠最低;肠道黏液细胞由肠黏膜基底层细胞衍生后,不断向肠腔表层推移而发育成熟;发育过程中黏液细胞内富含大小不等的黏原颗粒,其分泌方式为顶浆分泌。     

SDS-PAGE分析转基因小麦与主栽小麦杂交后代的高分子量麦谷蛋白亚基

目的:高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)1Ax1、1Dx5是对小麦面包烘烤品质有重要影响的优质亚基。将转基因小麦株系与普通小麦栽培品种常规杂交并快速筛选后代,以选育含有外源优质亚基的主栽小麦品系。方法:将分别含有1Ax1、1Dx5亚基的转基因小麦株系B102-1-2、B73-6-1与3种普通小麦主栽品种鄂恩1号、鄂麦12号、日喀则8号常规杂交,用不连续SDS-PAGE方法鉴定12组杂交组合(正反交)F1代311颗籽粒的HMW-GS。结果:不连续SDS-PAGE分析大量子代带型,能够快速鉴定筛选出具有优质亚基的株系,转基因获得的外源优质HMW-GS基因在大部分F1子代中能够共显性遗传。结论:常规杂交育种能使外源基因有效地整合进主栽小麦的基因组中,进一步分析后代遗传的稳定性和遗传规律就可以培育出优质的新品种;不连续SDS-PAGE快速筛选优质亚基的株系具有可操作性和实用性。     

鲫鱼血清和皮肤粘液IgM的分离纯化及部分性质的鉴定

采用盐析法结合葡聚糖凝胶柱 ,分离纯化鲫鱼血清IgM ;然后制备兔抗鲫鱼血清IgM多克隆抗体 ,将其偶联到Sepharose 4B上制成亲和柱 ,用于分离纯化皮肤粘液IgM。结果表明 :33%～ 4 5 %硫酸铵溶液沉淀处理可以去除鲫鱼血清中除IgM外的很多杂蛋白 ,再经葡聚糖凝胶柱纯化 ,IgM纯度可达 80 %以上 ,其重链和轻链的分子量分别为 79和 2 5kDa ;以兔抗鲫鱼血清IgM多克隆抗体亲和柱分离皮肤粘液IgM ,分离效果良好 ,IgM重链的分子量为 88kDa ;Westernblot显示兔抗鲫鱼血清IgM多克隆抗体识别的是血清和皮肤粘液IgM的重链部分。用ELISA测定鲫鱼血清中IgM含量在一年中的变化 ,结果表明IgM在春夏季的含量高于秋冬季     

Allometric Growth in Four Species of Digenetic Trematodes of Marine Fishes from Belize

Four species of digenetic trematodes of marine fishes from Belize are studied for allometric growth: Multitestis rotundus Sparks, 1954 (Lepocreadiidae), Stenopera equilata Manter, 1933 (Opecoelidae), Leurodera decora Linton, 1910 (Hemiuridae), Prosorhynchus pacificus Manter, 1940 (Bucephalidae). These are compared with six other species for which allometric growth is known. Positive growth is exhibited in all species only by the hindbody, whereas the forebody, suckers, and pharynx are negative in all. The body width, post-testicular body, and gonads are positive in some species and negative in others. At times the body proportion or organ is growing at about the same rate as the body length.     

Helical Antifreeze Proteins Have Independently Evolved in Fishes on Four Occasions

Alanine-rich α-helical (type I) antifreeze proteins (AFPs) are produced by a variety of fish species from three different orders to protect against freezing in icy seawater. Interspersed amongst and within these orders are fishes making AFPs that are completely different in both sequence and structure. The origin of this variety of types I, II, III and antifreeze glycoproteins (AFGPs) has been attributed to adaptation following sea-level glaciations that occurred after the divergence of most of the extant families of fish. The presence of similar types of AFPs in distantly related fishes has been ascribed to lateral gene transfer in the case of the structurally complex globular type II lectin-like AFPs and to convergent evolution for the AFGPs, which consist of a well-conserved tripeptide repeat. In this paper, we examine the genesis of the type I AFPs, which are intermediate in complexity. These predominantly α-helical peptides share many features, such as putative capping structures, Ala-richness and amphipathic character. We have added to the type I repertoire by cloning additional sequences from sculpin and have found that the similarities between the type I AFPs of the four distinct groups of fishes are not borne out at the nucleotide level. Both the non-coding sequences and the codon usage patterns are strikingly different. We propose that these AFPs arose via convergence from different progenitor helices with a weak affinity for ice and that their similarity is dictated by the propensity of specific amino acids to form helices and to align water on one side of the helix into an ice-like pattern.     

沙鳅亚科四种鱼脑的形态结构和特征

应用解剖学方法对中华沙鳅(Sinibotia superciliaris)、宽体沙鳅(S. reevesae)、紫薄鳅(Leptobotia taeniops)、小眼薄鳅(L. microphthalrna)脑的形态结构和特征进行比较观察。结果显示,上述沙鳅亚科4种鱼脑的形态结构与真骨鱼类相似,由端脑、间脑、中脑、小脑、延脑5部分组成。脑各部分结构在属内差异不显著,属间除相对大脑体积和相对小脑体积存在极显著差异外,其他部分均无显著差异。紫薄鳅和小眼薄鳅大脑及小脑体相对体积较大,可能与喜营流水生活,需具有较高运动协调能力有关。     

Swimming Performances of Four California Stream Fishes: Temperature Effects

The critical swimming velocity (U_crit) of four California stream fishes, hardhead, Mylopharodon conocephalus, hitch, Lavinia exilicauda, Sacramento pikeminnow, Ptychocheilus grandis, and Sacramento sucker, Catostomus occidentalis was measured at 10, 15, and 20°C. Hardhead, Sacramento sucker, and Sacramento pikeminnow swimming performances tended to be lowest at 10°C, higher at 15°C, and then decreased or remained constant at 20°C. Hitch swimming performance was lower at 10°C than at 20°C. There were no significant differences among species at 10 or 15°C, although pikeminnow and hitch were ca. 20% slower than hardhead or sucker. At 20°C hardhead, Sacramento sucker, and Sacramento pikeminnow had remarkably similar U_crit but hitch were significantly (by 11%) faster. We recommend that water diversion approach velocities should not exceed 0.3ms^–1 for hitch (20–30cm total length) and 0.4ms^–1 for hardhead, Sacramento pikeminnow, and Sacramento sucker (20–30cm TL).     

世界范围内“四大家鱼”入侵现状及其适应特性

原产中国的鲢(Hypophthalmichthys molitrix)、鳙(Aristichthys nobilis)、草鱼(Ctenopharyngodon idella)和青鱼(Mylopharyngodon piceus),即"四大家鱼",已分别被引入到世界上很多个国家和地区,在其中将近一半的地区成功入侵,远高于一般入侵生物的建群概率。这与其自身的高繁殖力、宽广的生理耐受性和食性,以及遗传结构多样性等特征有关,还与新栖息地环境因素密切相关。四大家鱼野外繁殖所需的具有一定流量、流速、足够长且通畅的河道,是其成功入侵的必备环境因素;气候因素也影响四大家鱼成功入侵的概率。此外,入侵地的饵料丰度以及与其他入侵生物的协同作用,也能促进四大家鱼在引入地建群之后的入侵速度和程度。     

鱼类线粒体DNA多态性研究

介绍了鱼类线粒体ＤＮＡ多态性研究的方法及其在鱼类各学科领域中的广泛应用。     

种子中Puroindoline蛋白的SDS-PAGE分析

Puroindolne蛋白是小麦中特殊的Triton X-114可溶性蛋白质,对小麦籽粒硬度有着决定性的影响.从二倍体、六倍体小麦材料及小麦近缘种粗山羊草成熟种子中提取Puroindoline蛋白,就对该蛋白的SDS-PAGE及染色条件进行了优化和讨论,建立了浓缩胶T(凝胶浓度)为4、C(交联度)为2.6、电泳电压为128 V;分离胶T为13.5、C为2.6、电泳电压240 V,分离胶电泳时间1.5 h的结果稳定且重复性好的优化的SDS-PAGE条件.同时为降低电泳染色的实验成本,简化实验步骤,用蓝染法代替常用的银染法,并获得了良好的效果,为小麦中Puroindoline蛋白质的进一步研究奠定了实验基础.     

几种不同食性鱼类部分血液生化指标的比较研究

采用7020型全自动生化分析仪,测定了黄鳝、鲤鱼、草鱼和鳙鱼血清中总蛋白（TP）、血糖（BG）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、肌酐（creafinine）、尿素（Urea）、尿酸（UA）、磷（P）、钙（Ca）、铁（Fe）和镁（Mg）等11项生化指标,比较研究了这几种不同食性鱼类生化指标的差异.为期二周的饥饿试验,表明黄鳝和鲤鱼等在饥饿状态下生化指标的变化存在较大不同.