在膜蛋白分子侧向运动中细胞骨架的作用

本实验采用体外培养的人胃癌细胞,利用免疫荧光技术和FRAP技术研究细胞骨架和膜表面ConA受体复合物的侧向扩散运动.实验分成5组:①用CB处理细胞5小时;②CB处理5小时后,除去药物,换正常培养液培养1小时;③用秋水仙素处理5小时;④秋水仙素处理细胞5小时后,除去药物,换正常培养液培养2小时;⑤对照组.经CB处理细胞后,胞质微丝减少或消失,但是膜ConA受体复合物的侧向扩散运动增加〔D〕=1.05×10~(-1)cm~2/sec,当除去CB后,微丝重新出现,膜ConA受体复合物的侧向扩散运动又减慢〔D〕=0.81×10~(-1)cm~2/sec,与对照组相似.而无论是用秋水仙素处理细胞,还是撤药后微管收复,都不能看到膜表面ConA受体复合物侧向扩散运动的变化.以上结果表明:影响膜表面ConA受体复合物的侧向扩散运动主要在于微丝的作动.     

蟾蜍心肌肾上腺素能受体的类型和含量

用放射配基结合分析法,研究了不同温度条件下蟾蜍心脏各部位肾上腺素能受体的类型和含量。结果表明,常温蟾蜍心肌膜在37℃同β-受体的特异性标记配基~3H-双氢心得舒(~3H-DHA)的最大结合(B_(max))及Kd值分别为:全心,55.11±6.22fmol/mg蛋白及2.15±0.42nmol/L;窦房,55.80±7.03fmol/mg蛋白及2.65±0.37 nmol/L;心室,54.27±3.06 fmol/mg蛋白及1.84±0.14 nmol/L,同样温度条件下,窦房及心室心肌膜同α-受体的特异性标记配基~3H-双氢麦角隐亭(~3H-DHE)没有特异性结合,经过5—8℃,10d以上低温服习的蟾蜍,在10℃测试,其α-,β-受体的结合量和亲和力无异于常温蟾蜍。上述结果提示,蟾蜍心肌只有β-受体,温度对受体的类型和含量无明显影响,这种受体类型和含量在相当大的温度范围内保持不变。     

用膦酰化试剂[o-ethyl-s-(diisopropylaminoethyl-2)methanethiophosphonate]滴定乙酰胆碱酯酶的活性中心

用稳定的乙酰胆碱酯酶不可逆抑制剂(MTP)滴定了猪脑尾核、眼镜蛇蛇毒和电鳗电组织乙酰胆碱酯酶溶液的活性中心数。抑制剂与这些酶的二级反应常数分别为:1.69×10~5l·mol~(-1)·s~(-1);6.72×10~5l·mol~(-1)·s~(-1)和6.78×10~5l·mol~(-1)·s~(-1)。因为MTP膦酰化的紫贻贝血淋巴液乙酰胆碱酯酶容易自活化,故此法不能用来滴定这种酶的活性中心。     

实验3 RNA的分离纯化

一、哺乳类细胞总RNA的提取 1.从培养细胞中提取 (1)准备10瓶(底面积为4.5×8.5cm~2)长得半满的培养细胞(约10~7个细胞)。 (2)吸去瓶中培养液,各加入5ml新鲜培养液,37℃培养4小时左右。 (3)吸去培养液,各加入5ml预冷的1×PBS溶液     

两种人胃癌细胞M期与间期时相质膜表面Con A受体复合物分布及侧向运动

利用荧光标记和荧光漂白恢复方法研究了两种人胃腺癌细胞M期与间期时梠中,细胞膜表面ConA受体复合物分子的分布与侧向运动.结果表明:MGC80-3细胞M期时相与SGC7901细胞间期时相膜表面ConA受体复合物分布近似,其侧向运动方式呈扩散型;SGC 7901 M期时相细胞膜表面ConA受体复合物的分布与MGC80-3细胞间期时和相基本类似,其侧向运动主要是流动型.凡是受体复合物是流动型运动的细胞.其膜上可动分子的百分比都寓于扩散型运为的细胞,P值小于0.01.     

两种人胃癌细胞M期与间期时相质膜表面Con A受体复合物分布及侧向运动

利用荧光标记和荧光漂白恢复方法研究了两种人胃腺癌细胞M期与间期时梠中,细胞膜表面ConA受体复合物分子的分布与侧向运动.结果表明:MGC80-3细胞M期时相与SGC7901细胞间期时相膜表面ConA受体复合物分布近似,其侧向运动方式呈扩散型;SGC 7901 M期时相细胞膜表面ConA受体复合物的分布与MGC80-3细胞间期时和相基本类似,其侧向运动主要是流动型.凡是受体复合物是流动型运动的细胞.其膜上可动分子的百分比都寓于扩散型运为的细胞,P值小于0.01.     

脂肪细胞上的半夏蛋白受体

本文对分离的大鼠附睾脂肪细胞与半夏蛋白结合的若干性质进行了探讨。脂肪细胞与半夏蛋白的结合是专一的,非标记半夏蛋白可完全地置换~(125)Ⅰ-半夏蛋白。脂肪细胞上半夏蛋白受体与半夏蛋白的结合对半夏蛋白而言是一饱和过程,饱和曲线呈反曲形,但Scatchard图形则是一不规则的曲线,提示脂肪细胞上可能存在不止一种半夏蛋白受体。根据饱和曲线计算,每个脂肪细胞可结合大约6～7×10~7个分子半夏蛋白。当反应液中~(125)Ⅰ-半夏蛋白浓度对细胞而言足够高时,半夏蛋白与其受体的结合随溶液中细胞浓度的增高而增加。半夏蛋白与其受体的结合随温度的升高而减少,37℃的结合量仅为0℃的10%左右。在24℃时,半夏蛋白与其受体的结合很快达到平衡,但自然解离则极慢。在0℃达到平衡的半夏蛋白-受体复合物,当移置到37℃时,则很快解离,达到新的平衡,提示复合物在0℃比在37℃稳定。反应液中α-甲基甘露糖苷浓度为0.1M或甘露聚糖浓度为2毫克/毫升时,均观察不到它们有促使复合物解离的作用。伴刀豆球蛋白A具有显著的但不完全的抑制半夏蛋白与其受体结合的能力,它也能使半夏蛋白-受体复合物部分解离。胰岛素即使浓度高达2.5×10~(-5)M亦不抑制~(125)Ⅰ-半夏蛋白与其受体的结合。     

用原位电泳技术测定艾氏腹水癌细胞膜的流动性

细胞膜组分(膜蛋白、膜脂等)分子能沿膜进行侧向扩散运动,研究这种运动对了解细胞的功能有重要意义。原位电泳(In Situ Electrophoresis)是近年发展起来的测量细胞膜组分侧向扩散的新技术之一。我们用这种技术研究了小鼠艾氏腹水癌细胞膜ConA(Concanavalin A)受体的侧向扩散,并测得在22℃时,其侧向扩散系数为3.2×10~(-10)cm~2/see。实验结果提示,侧向扩散系数具有较大离散性可能是癌细胞的特征之一。     

脂肪细胞上的半夏蛋白受体

本文对分离的大鼠附睾脂肪细胞与半夏蛋白结合的若干性质进行了探讨。脂肪细胞与半夏蛋白的结合是专一的,非标记半夏蛋白可完全地置换~(125)I-半夏蛋白。脂肪细胞上半夏蛋白受体与半夏蛋白的结合对半夏蛋白而言是一饱和过程,饱和曲线呈反曲形,但Scatchard图形则是一不规则的曲线,提示脂肪细胞上可能存在不止一种半夏蛋白受体。根据饱和曲线计算,每个脂肪细胞可结合大约6～7×10~7个分子半夏蛋白。当反应液中~(125)I-半夏蛋白浓度对细胞而言足够高时,半夏蛋白与其受体的结合随溶液中细胞浓度的增高而增加。半夏蛋白与其受体的结合随温度的升高而减少,37℃的结合量仅为0℃的10%左右。在24℃时,半夏蛋白与其受体的结合很快达到平衡,但自然解离则极慢。在0℃达到平衡的半夏蛋白-受体复合物,当移置到37℃时,则很快解离,达到新的平衡,提示复合物在0℃比在37℃稳定。反应液中α-甲基甘露糖苷浓度为0.1M或甘露聚糖浓度为2毫克/毫升时,均观察不到它们有促使复合物解离的作用。伴刀豆球蛋白A具有显著的但不完全的抑制半夏蛋白与其受体结合的能力,它也能使半夏蛋白-受体复合物部分解离。胰岛素即使浓度高达2.5×10~(-5)M亦不抑制~(125)I-半夏蛋白与其受体的结合。     

人鼻咽癌上皮细胞(CNE)高温株三种表型的变化

本文报道CNE细胞高温(41℃)株及其两个克隆株(CNE/2e-H,CNE/2a-H)在软琼脂中的集落形成率、对培液血清的敏感性,以及对ConA的凝集反应,并与相应的常温株(CNE,CNE/2e和CNE/2a)进行了比较。结果发现,高温株在软琼脂中的集落形成率和ConA凝集率均明显低于其常温株,分别为P<0.05和P<0.05—0.01。当血清浓度由20%降低为5%时,培养7天后各常温株的细胞密度变化不明显(P>0.05),但各高温株则差别显著(P<0.05—0.01)。鉴于体外转化的细胞和体外培养的肿瘤细胞能在半固体培基中的生长特性与其成瘤性之间存在密切的相关性,再结合另外两种表型的改变,可以认为CNE-H、CNE/2e-H和CNE/2a-H经长期41℃培养后可能出现了细胞恶性程度减弱的变化。     

苋菜的光合特性

宽菜Amaranthus cruentus cv.生长在调控的温室条件。在光强0至800μmol.m~(-2)S~(-1),光合速率(PN,μmol.CO_2m~(-2)、s~(-1))随光强(PFD,μmol、m~(-2)、s~(-1))增高而增大,其关系为PN=56.82 PFD×10~(-3)—2.13。光补偿点为60μmol.m~(-2)、s~(-1)。叶片在1400 μmol.m~(-2)、s~(-1)达到光合光饱和点。在叶温35℃,叶片/空气水蒸汽压陡度20 m Pa、Pa~(-1)和外界CO_2浓度340μ1、1~(-1),光饱和光合速率为51.63±4.90μ mol.CO_2、m~(-2)、S~(-1)。在光强0至600μmol.m~(-2)、s~(-1),气孔传道率随光强增高而增大。光强高于600μmol.m~(-2)、s~(-1),气孔传道率变化较小。细胞间CO_2浓度为120μ1.1~(-1)由于细胞间CO_2浓度在光合速率——CO_2关系曲线的转折点,可能表明光合作用不受气孔限制。结果表明,苋菜适于高光强环境生长,在干旱条件下具有高的光合速率。     

DNA重组技术：Ⅲ.重组质粒在大肠杆菌中的转化

氯化钙法是用质粒DNA转化细菌细胞,尤其是大肠杆菌细胞最常使用的方法。实验操作如下: (1) 将受体菌接种在平板培养基上划线,37℃过夜,进行活化。 (2) 挑选单菌落,接于5ml LB培养液,37℃震荡过夜。 (3) 从上述培养液中取0.5ml,转入50mlLB培养液,37期震荡培养2～4小时,到细菌密度大约为5×10~7/ml,OD_(575)约为0.8。     

FPR 实验结果的计算机分析

自1976年 Axelrod 等人首先建立了荧光漂白恢复(简称 FPR)理论以来,该理论已被广泛用于研究细胞膜中脂类和蛋白质的侧向运动。我们实验室于1980年建立了 FPR 实验装置,并测定了鼻咽癌细胞膜表面受体的扩散系数,和研究了林蛙卵表面受体的运动方式。在数据处理过程中,感到漂白后的初始荧光强度 F_k(0)、漂白后荧光恢复的渐近值 F_k(∞)以及漂白参量K 的不确定性均会增加实验结果计算的误差。Yguerabide 首先注意到了这一问题,提出了减小计     

荧光光谱法研究白藜芦醇与超氧化物歧化酶的相互作用

利用荧光光谱法研究了白藜芦醇与超氧化物歧化酶的相互作用。结果表明,白藜芦醇能使超氧化物歧化酶的内源荧光发生猝灭。研究在不同温度下白藜芦醇对超氧化物歧化酶的荧光猝灭作用,证明超氧化物歧化酶的荧光强度变化是由二者形成复合物所引起的,猝灭机制属于静态猝灭。相关荧光猝灭参数经Stern-Volmer方程分析,发现白藜芦醇与超氧化物歧化酶具有1个结合位点,并计算得到了不同温度下白藜芦醇与超氧化物歧化酶的结合常数(K_A):8.63×10~5(25℃)、7.75×10~5(35℃)和7.73×10~5(45℃)。通过计算热力学参数,可知白藜芦醇与超氧化物歧化酶的相互作用主要是由分子之间的静电作用引发的。并且,白藜芦醇-超氧化物歧化酶复合物的形成是伴随吉布斯自由能降低的自发反应。     

酿酒酵母原生质体融合的研究

本实验通过酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)营养缺陷型菌株H802-9A(a ade~-his~7 cys~2 tyr~1)和H802-3 A(a ade~- cra~1)进行原生质体融合,获得营养互补的重组融合子,选择两亲株的对数生长早期细胞(2-4×10~7个/m1),在0.1％β-琉基乙醇及1-2％蜗牛酶的作用下,原生质体形成率达99-100％,在35％聚乙二醇(MW6000)-10mMCaC1溶液的作用下,可获得融合率为2.6×10~(-6)-2.1×10~(-7)的杂合子,自发回复突变率1.5-7×10~(-9)。     

外电场对叶绿体结构和功能的影响的研究 Ⅰ外电场对菠菜叶绿体荧光和延迟发光的影响

外加交变电场,使菠菜叶绿体荧光降低和延迟发光增强。这两个效应可被反应系统中加入光合磷酸化解联剂、短杆菌环肽(1×10~(-5)-1×10~(-6)M)去除,而不被另一个解联剂、氯化铵(2×10~(-3)M)去除。已知短杆菌环肽能够去除膜内外质子梯度和电位差,而氯化铵仅能去除质子梯度,据此推测,外电场对荧光的猝灭和增强延迟发光的效应,可能是由于外电场诱导膜内外电位的变化,使膜能化的结果。     

离子束注入对衣康酸生产菌种的改良

用10keV、剂量5.2×10~(14)～5.2×10~(15)ions/cm~2的氮离子注入衣康酸生产菌株土曲霉A9003,在2％LiCl抗性平板筛选到一株能在39℃发酵的衣康酸高产菌株。该菌株在30L发酵罐发酵产酸7.5％,转化率60.1％,发酵周期50h。     

激光光漂恢复技术测定林蛙卵第一次卵裂前卵表面的运动

激光光漂恢复技术测定了异硫氰基荧光素标记的林蛀卵表面分子在第一次卵裂前的运动。发现固着在玻片上的剥离“细胞膜”的分子运动形式为扩散。扩散系数为(4.6±1.3)×10~(-12)cm~2/s,可动部份为15%。完整卵子上的分子运动形式为流动。细胞膜在不停地流动着。它可能起着协助细胞质运动的作用。细胞膜流动的速度随时间而异,卵裂前不久,在大多数的卵子上,出现两个流动较慢的谷,少数细胞只测到一个谷。这可能与光漂起始时间,光斑与未来分裂沟的距离,和卵子间的差异有关。也讨论了这种速度变化与表面收缩波的关系。     

幽门螺旋菌在双相培养基中生长特性的研究

本文观察了幽门螺旋菌在固体及液体—固体双相培养基上生长的特性,37℃72小时培养后,定量实验表明,固体培养基上菌数为1.02×10~2cfu/ml,而双相培养基上则为1.14×10~4cfu/ml;用血液双相培养基,对CP进行了生长曲线的测定,从0小时加入1.02×10~2cfu/ml开始,按每天平皿活菌计数,共5天(24、48、72、96、120、144h)分别为2.5×10~2cfu/ml,4.97×10~2cfu/ml,1.14×10~4cfu/ml,1.24×10~5cfu/ml,2.87×10~5cfu/ml,9.75×10~4cfu/ml以后逐日下降;液相培养液24—144小时pH测定,pH由7.2下降至6.4—6.9。     

人胃癌不同周期细胞膜表面ConA受体的分布与侧向运动

本文研究了人胃低分化粘液性腺癌细胞MGC 80-3不同周期时相中ConA受体的分布与侧向运动。MGc 80-3细胞经同步化培养,用F-ConA标记。被标记细胞中G_1、S和G_2期呈不连续的分布,但它们之间又存在显著的差异。M期呈较均匀的强荧光分布(与其它时相细胞比较)。荧光漂白恢复方法测定ConA受体复合物侧向运动表明:各个周期时相之间不仅运动方式不同,而且运动速率也有显著差异。M期与G_1期主要表现出扩散型运动;而S期与G_2期表现为流动型运动。G_1期的扩散系数大干M期的;S期的流动速率大于G_2期的。但可动分子百分比以G_2期最高。这些结果表明了ConA受体的动力学性质。它受到细胞周期的调节。