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本文对猪心线粒体H~ -ATP酶在大豆磷脂脂质体上重建过程中,二价金属离子(M_e~(2 ))影响膜脂流动性,面电荷密度,酶活及其相关性进行了研究和比较.结果表明:二价金属离子通过与脂酶体酸性磷脂的相作用,影响膜脂的流动性,进而影响H~ —ATP酶的构象,提高了酶活. 相似文献
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用胆酸盐透析法将猪心线粒体细胞色素C氧化酶重组在含心磷脂和二肉豆寇磷脂酰胆碱的脂质体上,以还原态细胞色素C作为酶反应底物,记录脂酶体囊泡外介质液pH的变化,pH下降幅度可以反映细胞色素C氧化酶质子泵的功能。 心磷脂含量不同的细胞色素C氧化酶脂酶体质子泵功能不同。心磷脂含量在10%—40%(w/w)范围内,随心磷脂含量增高,该酶质子泵功能增强;当心磷艏含量超过50%时,该酶质子泵功能却随心磷脂含量的增加表现出下降的趋势。阿霉素可以与心磷脂紧密结合,抑制细胞色素C氧化酶的质子泵功能。然而,少量阿霉素却能增强含70%心磷脂的脂酶体的质子泵功能。 相似文献
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用生物膜的拆离与重建技术,研究了Mg2+对阿霉素(Adriamycin,ADM)抑制猪心线粒体H+-ATP酶及其重建脂酶体(L·H+-ATP酶)活性的影响。用胆酸盐透析方法将H+-ATP酶在大豆磷脂脂质体上重建。实验结果表明,重建H+-ATP酶的ADM的敏感性较仅纯化而未重建者明显增加,这提示ADM的抑制作用依赖于磷脂。但是,在有Mg2+(1mmol/L)条件下重建的H+-ATP酶对ADM的敏感性较无Mg2+者却又显著降低,这提示Mg2+对ADM抑制线粒体H+-ATP酶的作用具有拮抗效应。Mg2+的这种拮抗效应是与其在透析重建H+-ATP酶过程中诱导脂酶体的磷脂的物理状态的改变相关的。所得实验结果对于阐明ADM抑制线粒体H+-ATP酶的作用机理与磷脂的相关性提供了较直接的实验证据。 相似文献
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用生物膜的拆离与重建技术,研究了Mg2+对阿霉素(Adriamycin,ADM)抑制猪心线粒体H+-ATP酶及其重建脂酶体(L·H+-ATP酶)活性的影响。用胆酸盐透析方法将H+-ATP酶在大豆磷脂脂质体上重建。实验结果表明,重建H+-ATP酶的ADM的敏感性较仅纯化而未重建者明显增加,这提示ADM的抑制作用依赖于磷脂。但是,在有Mg2+(1mmol/L)条件下重建的H+-ATP酶对ADM的敏感性较无Mg2+者却又显著降低,这提示Mg2+对ADM抑制线粒体H+-ATP酶的作用具有拮抗效应。Mg2+的这种拮抗效应是与其在透析重建H+-ATP酶过程中诱导脂酶体的磷脂的物理状态的改变相关的。所得实验结果对于阐明ADM抑制线粒体H+-ATP酶的作用机理与磷脂的相关性提供了较直接的实验证据。 相似文献
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1 棕榈酰溶血磷脂酰胆碱 (C16∶0LPC)对甘油二油酸脂 (DOG)诱导的蛋白激酶C(PKC)有双向调控作用 ,低浓度时激活 ,高浓度时反而抑制 .利用差示扫描量热 (DSC)、荧光探针标记等方法 ,研究了磷脂样品浊度、热相变行为、磷脂分子酰链的堆积情况以及分子头部基团间空隙 .C16∶0LPC的加入使脂质体双层膜上磷脂分子堆积更加疏松 ,头部基团间空隙逐渐加大 ,DSC图显示膜上出现两不互溶的区域 :C16∶0LPC富集的DPPS/C16∶0LPC区和C16∶0LPC缺乏的DPPS区 .C16∶0LPC/DPPS摩尔比为 0 .2 3 4时 ,两区域有最大的共存交界范围 ,此时PKC的活性最大 ;C16∶0LPC/DPPS超过 0 .43 4后 ,DPPS的相变峰消失 ,脂质体遭到破坏 ,趋向于微团结构 ,PKC的活性被抑制 .DOG具有保持双层膜稳定的功能 ,在DPPS和DOG组成的体系中需要更高浓度的C16∶0LPC才能破坏脂质体的双层结构 .实验结果表明 ,C16∶0LPC通过改变磷脂脂质体的结构及膜的物理状态 ,影响了PKC的活性 . 相似文献
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目的:制备PP1脂质体,筛选最优处方。方法:用薄膜水化法制备PP1脂质体,以高效液相色谱法(HPLC)测定PP1脂质体的包封率,以包封率为主要指标,选取药脂比、胆固醇磷脂比、温度和水化时间为因素,用正交试验筛选最优配方。结果:用薄膜水法制备的PP1脂质体的最优处方的组成为:药脂比为1:10,胆固醇与二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)比为1:8,温度为40℃,水化时间为3 min。平均包封率为(63.27±3.32)%。PP1脂质体的平均粒径为(157.73±9.74)nm,Zeta电位为(-4.74±0.44)m V。结论:用薄膜水化法制备出的PP1脂质体包封率高,形态和粒径均匀,重现性好,为研究其在眼部的缓释作用奠定了基础。 相似文献
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从猪心线粒体纯化了FoF1-ATPase的膜部分质子通道Fo,SDS-PAGE表明纯度约85%,且不含F1-ATPase的各亚基.将纯化的Fo在含不同纯磷脂组分的脂质体上重建,分别测定心磷脂(CL)、磷脂酸(PA)、磷脂酰肌醇(PI)和磷脂酰丝氨酸(PS)等酸性磷脂对重建Fo质子转运活性的影响,结果表明,它们促进重建Fo质子转运活性的强弱顺序是CL>PA>> PI,而PS却完全抑制重建Fo的质子转运.阿霉素(ADM)显著抑制含CL的重建Fo的质子转运活性,提示CL明显促进Fo的质子转运可能与其具有强烈的形成非双层脂结构的倾向性相关.测定磷脂酰乙醇胺(PE)及二顺油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、二反油酰磷脂酰乙醇胺(DEPE)对重建Fo质子转运活性的影响表明,有形成非双层脂结构倾向性的PE,DOPE明显促进重建Fo的质子转运.荧光猝灭剂HB对重建Fo的内源荧光猝灭及专一性标记蛋白质巯基的荧光探剂acrylodan的荧光光谱分析进一步表明,适当浓度的CL可能使重建Fo具有适合的构象,并表现高的质子转运活性. 相似文献
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用柱层析与薄层层析法从面粉中分离糖脂 总被引:2,自引:0,他引:2
生物膜主要由脂质和蛋白质组成,脂质中除磷脂占主要成分外,还包括少量糖脂,它占总脂质的2%左右。一般植物及微生物膜上糖脂含量较高,如莱氏衣原体膜上糖脂占膜脂50%以上;动物细胞膜上糖脂含量低。面粉中含有0.5—3%的脂质,其中糖脂占26.4%。而单半乳糖甘油二酯(monogalactosyldiglyceride,MGDG),和双半乳糖甘油二酯(digalactosyl diglyceride,DGDG)又占糖脂的69%。面粉来源广,价廉,糖脂含量高,是制备糖脂的理想原料。选用水饱和正丁醇为溶媒1以柱层析与薄层层析方法分离糖脂,可获得较满意的 相似文献
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用预先制备的脂质体与含Triton X-100的胆碱脱氢酶保温随后用Bio-beadsSM-2去除去垢剂而使酶重组到脂质体,Triton X-100的浓度,磷脂-蛋白比,Mg~(2+),pH等均影响重组,脂质体的大小在重组中不是关键因素,重组酶的活力比纯化酶增加70%,重组酶对PMS的Km,相转变温度及活化能均与线粒体内膜接近而不同于纯化酶。 相似文献
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β淀粉样蛋白(amyloid β peptide,Aβ)与细胞膜间的相互作用很可能是阿尔茨海默症病(Alzheimer disease, AD)重要的风险因素。模型膜研究方法在该领域的应用和更新持续至今,但仍存在一些问题有待解决,例如,Aβ插膜后聚集状态与Aβ融合到脂质体膜聚集状态的差异,Aβ插膜后形成微通道的时间及与磷脂成分的关系等。本文试图解析这两个问题,同时,系统地总结出常用的和更新的模型膜研究方法,这些方法包括单层膜插膜及电镜样品的制备,脂质体制备方法的改进,脂质体膜上Aβ42经过高盐及酸清洗后的Western 印迹检测,ANTS-DPX研究脂质体泄漏等。研究结果显示:(1)胞外及膜内Aβ42单体与脂质体膜作用后的聚集状态存在差异,Aβ42单体插膜后更容易聚集成纤维,而膜内融合的Aβ42呈现寡聚体形式;(2) Sepharose CL-4B柱过滤比微型挤出器制备的脂质体更加均一分散;(3)Aβ42在膜上形成微通道很可能是一个缓慢的过程,且与脂质体的磷脂种类相关。这些方法为Aβ42与细胞膜的相互作用提供了实用的研究手段,同时也为其他膜蛋白质与细胞膜的相互作用提供了可以借鉴的办法。研究结果使β淀粉样蛋白代谢过程更加清晰。 相似文献
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β淀粉样蛋白(amyloid β peptide,Aβ)与细胞膜间的相互作用很可能是阿尔茨海默症病(Alzheimer disease, AD)重要的风险因素。模型膜研究方法在该领域的应用和更新持续至今,但仍存在一些问题有待解决,例如,Aβ插膜后聚集状态与Aβ融合到脂质体膜聚集状态的差异,Aβ插膜后形成微通道的时间及与磷脂成分的关系等。本文试图解析这两个问题,同时,系统地总结出常用的和更新的模型膜研究方法,这些方法包括单层膜插膜及电镜样品的制备,脂质体制备方法的改进,脂质体膜上Aβ42经过高盐及酸清洗后的Western 印迹检测,ANTS-DPX研究脂质体泄漏等。研究结果显示:(1)胞外及膜内Aβ42单体与脂质体膜作用后的聚集状态存在差异,Aβ42单体插膜后更容易聚集成纤维,而膜内融合的Aβ42呈现寡聚体形式;(2) Sepharose CL-4B柱过滤比微型挤出器制备的脂质体更加均一分散;(3)Aβ42在膜上形成微通道很可能是一个缓慢的过程,且与脂质体的磷脂种类相关。这些方法为Aβ42与细胞膜的相互作用提供了实用的研究手段,同时也为其他膜蛋白质与细胞膜的相互作用提供了可以借鉴的办法。研究结果使β淀粉样蛋白代谢过程更加清晰。 相似文献
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目的:对透明质酸(HA)靶向绿原酸(CA)脂质体(HA-CA脂质体)进行处方筛选,以及对U14宫颈癌小鼠的抑制作用实验。方法:筛选制备HA-CA脂质体的方法,并以磷脂比、药脂比、PBS的p H为单因素考察指标通过正交实验筛选最优处方;采用透析袋法考察HA-CA的体外释放;Bal b/c小鼠右腋皮下接种U14宫颈癌瘤株,连续尾静脉注射给药14 d后,摘取瘤体称重,并计算肿瘤生长抑制。结果:采用薄膜分散法制备脂质体,最优处方为磷脂比为4:1,药脂比为1:30,PBS的p H为7.4。HA-CA脂质体与CA脂质体释放曲线基本一致,都具有一定的缓释效果。48 h时,HA-CA脂质体和CA脂质体的累计释放度分别为78.39%、83.01%。HA-CA脂质体对U14宫颈癌小鼠的抑瘤率为60.39%,与阳性对照组环磷酰胺相当,高于CA和CA脂质体。结论:HA-CA脂质体由于其具有主动靶向配体HA的修饰,使其抑制U14宫颈癌裸鼠的效果明显高于CA和CA脂质体。 相似文献
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线粒体内膜中含有特异的心磷脂是细胞色素C氧化酶活性的必需脂。本工作测定了心磷脂脂质体对细胞色素C溶液园二色(CD)谱的影响,发现心磷脂可引起血色素铁的氧化,并使其轴向配位场强的对称性下降。提示心磷脂可能参与酶和底物之间的电子转移过程。 相似文献
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用生物膜的拆离与重建方法将从牛脑皮层膜中纯化的激活型GTP结合蛋白(Gs)和腺苷酸环化酶(AC)在含有不同极性头部或不同脂肪酸侧链的磷脂组成的脂质体上重建形成脂酶体,测定脂酶体中AC的基础活力及Gs激活AC的活力。实验结果表明,磷脂影响AC的基础活力和Gs激活AC活力的顺序依次为:PE>PS>PC;含不同脂肪酸侧链的混合磷脂对Gs的激活活力的影响大于含单一脂肪酸侧链的纯磷脂,如PEDPPE,PSDPPS,PCDPPC。含不同脂肪酸侧链的磷脂影响Gs的活力的顺序为DLPC>DMPC>DPPC。用反映磷脂分子的堆积程度的荧光探剂MC540和脂双层的流动性变化的DPH以及专一性标记蛋白质巯基(-SH)基团的荧光探剂acrylodan的测定结果表明,不同磷脂影响Gs的活力的差异主要是由于脂质物理状态的不同所致。 相似文献
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大豆磷脂脂质体对再灌注心肌线粒体的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
利用Langendorff离体心脏灌流装置,研究在缺血-再灌注时补充大豆磷脂脂质体对心肌线粒体膜脂质特性和超微结构的影响。结果:在缺血-再灌注时补充大豆磷脂脂质体可提高线粒体膜磷脂含量,抑制胆固醇-磷脂摩尔比和膜脂质微粘度的增加,改善线粒体的超微结构。结果表明,补充大豆磷脂脂质体对再灌注心肌线粒体的脂质特性和超微结构的损伤性变化具有保护作用。 相似文献