粉红孢链霉菌的两个新种

从山东省和西安市的土样中,分离到3株气丝为粉红色调的链霉菌,编号为0769、01762和01 763。经形态、培养特征和生理生化特性的研究,它们与已知的近似种均不相同,因此定为新种,命名为玫瑰暗红链霉菌(Streptomyces roseoerythraeus n.sp.)(0769)和玫瑰肉色链霉菌(Streptomyces roseocarneus n.sp．)(01 762、01763,其中以01 762为标准株)。     

链霉菌属的两个新种

从陕西省武功县的土壤中分离到二株链霉菌,编号为78一113和78一118。其气生菌丝体分别为淡蓝及浅灰蓝,基内菌丝体为蓝色和棕色。螺旋形孢子丝随着培养过程逐渐盘卷成球形或亚球形的团状体,未观察到硬的孢囊壁,类似假孢囊,盘卷的分生孢子链清晰可见。经鉴定,认为是链霉菌属的两个新种,命名为蓝色假孢囊链霉菌(Streptomyces cyaneo-pseudosporangiusn.sp.)和微蓝灰假孢囊链霉菌(Streptomyres plumbeo-pseudosporangius n．Sp．)。     

嗜热放线菌类群分类的研究VI.嗜热吸水链霉菌类群的分类

农民肺病是一种#外源性、过敏性肺泡炎,多数学者认为是与发霉干草接触的农民吸人含有嗜热性放线菌孢子的霉变粉尘而发病。从江苏、湖北、上海等省市采集发病地区干革、霉草、病人痰样,分离出60株嗜热吸水链霉菌。本文报道农民肺病病原菌中的二个新种,讨论了嗜热吸水链霉菌与农民肺病的关系。     

链霉菌科分类的研究III．链霉菌科中的一个新属

从我国云南省西双版纳热带植物研究所的土壤中分离到二株菌,编号80—56、80 57。该菌株气丝形成非轮生的孢子链,基内菌丝体不断裂,形态与培养特征与链霉菌属基本相似。但由于细胞壁水解物中含有…o一二氨基庚二酸、甘氨酸。全细胞水解物中含有半乳糖,与链霉菌属胞壁组分含LL二氨基庚二酸、甘氨酸,不含特征性糖有明显区别。故菌株80—56、80一57不能归人到过去任何一个放线菌属中,因此建立新属——类链霉菌属(Streptomycoides n.gen．),此二菌株为该新属的代表种,定名为青黄类链霉菌(Streptomycoides glaucoflavus n.sp．),典型菌株80—56。     

利用弗氏链霉菌的修饰系统克服吸水链霉菌的限制性障碍——发展吸水链霉菌转化系统的尝试

用来自变铅青链霉菌TK24的质粒plJT02(tsr、mel~+)转化吸水链毒菌应城变种10-22的原生质体,未能得到转化子。但改用来自弗氏链霉菌ATCC 10745的plJ702转化10—22原生质体却得到了转化子。转化频率约10 ~3—10~4转化子/微克DNA。在这些转化子中,只有约1/1000是黑色菌落(mel~+),绝大部分为白色菌落(mel~-)。分别挑出黑色、白色2种菌落,只有从前者能提出电泳可见的plJ702质粒带。2种菌落的质粒提取物,均能转化TK24原生质体并正常表达黑色素。在非选择性条件下,从10-22(pIJ702)黑色菌落的群体中,获得了少数白色菌落,经证明它们是10-22的宿主突变体。这些突变体的plJ702转化子出现均一的黑色菌落。     

吸水链霉菌应城变种的四个内源质粒及其逐个消除的研究

在改良质粒DNA提取方法的基础上,从三种农用抗生素的同一产生菌——吸水链霉菌应城变种中同时发现四个内源质粒,用双向电泳技术确定了它们均为CCC构型,根据分子量从大到小的顺序将它们分别命名为pHZ1、pHZ2、pHZ3和pHZ4,与已知分子量的CCC质粒分子同步电泳估计它们的分子量依次分别为61kb、4.7kb、4.1kb和3.3kb,基于这四个内源质粒中至少部分个体可能为接合性质粒,可在没有某个质粒的衍生菌株的菌坪上形成“麻点”的假设,我们分离和鉴定了三个质粒逐个消除的10-22衍生菌株,并在光学显微镜下确证了二种类型的麻点。     

吸水链霉菌应城变种和庆丰链霉菌种间原生质体融合及其融合子的生物学特性

本文报道利用抗生素产生菌吸水链霉菌应城变种Leu^-Sm^R。90-11菌株(Leu’smr)和庆丰链霉菌A_553-1菌株(Pro^-Sm^R)为亲株,以42％的PEG4000为助融剂,进行了种问原生质体融合,用间接法检出融合重组子38株,其重组频率约为4．5×10^-4。重组子除孢子丝形态外,孢子堆颜色、抗药性、抗菌活性和抗生素生物合成能力方面与亲株均有一定差别,而且不同重组子之间也不相同,特别在抗菌活性方面,其中重组子FL-42和FL-48不仅具有两个亲株所产生的4种抗生素的活性,而且还产生两个亲株不具有的活性物质。通过纸层析谱表明,这种活性物质,两个重组子之间也不相同。     

不吸水链霉菌梧州新亚种基因组文库的构建

以不吸水链霉菌梧州新亚种为材料,提取的总基因组DNA经Sau3 AI不完全酶切。回收20-30kbDNA酶切片段,与经Hpal和BamHI酶切的粘粒载体pKC505进行连接,将连接产物用噬菌体包装蛋白包装。侵染大肠埃希菌DH5α。在舍有安普霉素的LB平板上培养,所得转化子数为12000个,构建成不吸水链霉菌梧州新亚种的基因组文库。以不吸水链霉菌染色体基因组大小为7Mb计算,概括了不吸水链霉菌梧州新亚种约99％的基因组,达到了建库要求的理论值。未扩增文库的滴度为1．2×10^8pfu／L,扩增文库的滴度为4．8×10^11pfu／L,包装效率为每微克DNA1．2×10^5个转化子。随机挑取菌落,提取重组质粒进行酶切电泳分析,均有外源片段插入。基因文库的构建为进一步深入研究梧宁霉素生物合成基因结构及功能奠定基础。     

刺孢吸水链霉菌发酵液的化学成分及抗炎活性研究

研究一株刺孢吸水链霉菌(Streptosporangium hygroscopicus n.sp.)发酵液的化学成分及其抗炎活性。应用多种色谱方法进行分离和纯化,并用NMR、IR和MS等方法解析其结构;然后采用叉菜胶所致大鼠足趾肿胀模型对所得化合物的抗炎活性进行了考察。最终从刺孢吸水链霉菌代谢产物中分离得到5个单体化合物,它们的结构分别为芒柄花素(1),N-乙酰基-2-(4-羟苯基)乙胺(2),阿魏酸(3),3,4,5-三甲基-1,2-苯二酚(4),7,3’-二羟基-4’-甲氧基黄酮(5)。化合物1、2、4和5在15 mg/(kg·d)时,对交叉菜胶所致大鼠足趾肿胀的抑制率分别为47.3%、16.8%、13.6%和50.4%。化合物1、4和5首次从该菌中分离得到;化合物1和5具有较强的抗炎作用。     

不吸水链霉菌11371衍生菌种构建及基因工程宿主菌初筛

采用物理、化学等方法对不吸水链霉菌11371(Streptomyces ahygroscopicus wuzhouensis subsp)进行诱变,获得78株在菌落形态方面与野生菌不同的衍生菌;并对各种衍生菌株进行了抗生素生物活性、内源性质粒以及外源载体转化等研究,初步筛选出2株具有宿主潜力的衍生菌,为构建11371转化体系提供了生物材料和相关理论基础。     

灰褐类群链霉菌的两个新种

从我国土壤分离的链霉菌中,选出气生菌丝体灰色、基内菌丝体褐黑和紫黑的3株菌。经过对形态培养特征和生理生化特性的一系列研究,对比证明与国内外资料上发表的已知种都不同,因此分别定名为两个新种：褐黑链霉菌(Streptomyces fuscoatrus n. sp．)和黑微紫链霉菌(Streptomyces nigroviolens n. sp.)。     

利用弗氏链霉菌的修饰系统克服吸水链霉菌的限制性障碍——发展吸水链霉菌转

用来自变铅青链霉菌TK24的质粒PIJ702（tsr,mel^ )转化吸水链霉菌应城奕种10－22的原生质体,未能得到转化子,但改用来自弗氏链霉菌ATCC 10745的pIJ702转化10－22原生质体却得到了转化子,转化频率约10^3-10^4转化子／微克DNA,在这些转化子中,只有约1／1000是黑色菌落（mel^ ),绝大部分为白色菌落（mel^-),分别挑出黑色,白色2种菌落,只有从前者能提出电泳可见的PIJ702质粒带。2种菌落的质粒提取物,均能转化TK24原生质体并正常表达黑色素,在非选择性条件下,从10－22（PIJ702）黑色菌落的群体中,获得了少数白色菌落,经证明它们是10－22的宿主突变体,这些突变体的PIJ702转化子出现均一的黑菌落。     

阿扎霉素B产生菌吸水链霉菌NND—52的诱变筛选

用紫外线,紫外线加氯化锂（LiCl)、吖啶橙3种诱变方式对阿扎霉素（Azalomycin)B产生菌Strepto-myces hygroscopicus NND-52菌株进行诱变处理,确定了它们的最佳诱变剂量,获得了数株Azalomycin B产量较出发菌株提高3倍以上的高产菌株,编号Al3的菌株摇瓶产量达1100mg/L,且传代稳定。经过对3种诱变方式的比校,发现后两种诱变方式对产量的提高更为有效。     

转座子Tn5096对刺孢吸水链霉菌北京变种RF220转座的诱变

用大肠杆菌/链霉菌穿梭质粒pCZA168(bla,tsr,Tn5096,ColEI rep,Strep repts)多次转化农抗120产生菌刺孢吸水链霉菌北京变种(S.Streptomyces hygrospinocus var. beijingensis)RF220的原生质体,均未得到转化子。来自吸水链霉菌应城变种(S.Streptomyces hygroscopicus var.)10-22突变株的链霉菌质粒pIJ702(tsr mel+)可以转化RF220,但转化频率只有数十个转化子/μgDNA。用来自RF220本身的pIJ702对消除pIJ702后的RF220的原生质体进行了再转化,转化率没有明显的提高。用氨苄青霉素和甘氨酸协同处理RF220的菌丝体,并经-70℃冷冻原生质体再转化,得到了4个pCZA168的转化子。质粒提取、酶切、抗性测定表明：4个转化子中pCZA168中大肠杆菌DNA部分均被切除,成为大小约50～60kb的小质粒,命名为pWZH102(tsr,Tn5096,strep repts)。用pWZH102上的转座子Tn5096对RF220进行转座实验,在168个转座个体中,有2株可能为抗生素生物合成阻断变株,另有产生抗生素水平各异的变株,说明Tn5096的转座可以引起表型的不同变化。     

吸水链霉菌谷氨酰胺转胺酶分离纯化方法改进及结构研究

利用改进的新方法,对吸水链霉菌谷氨酰胺转氨酶(TGase)进行分离纯化.将发酵上清液经过硫酸铵分级盐析后,用Hitrap Q HP阴离子交换柱除掉干扰较大的色素,之后又经Superdex 75 10/300GL凝胶柱和Hitrap Q HP阴离子交换柱的分离,得到高纯度的TGase.纯化后TGase的比活力可达24.5 U/mg,回收率为39.9%.TGase的N-末端前6个氨基酸经测序为DAADER.该研究是对吸水链霉菌TGase的N-末端氨基酸序列的首次报道.将吸水链霉菌TGase的N-末端氨基酸序列与已报道的其它3种链霉菌来源的TGase的N-端氧基酸序列进行比对,序列相似性不高.预测和分析了吸水链霉菌TGase的高级结构,为进一步研究TGase结构和功能的关系,蛋白分子定向改造提供理论依据.     

不吸水链霉菌梧州新亚种基因文库的构建

以不吸水链霉菌梧州新亚种为材料,提取的总基因组经Sau3AI不完全酶切,回收3~9 kb DNA酶切片段,用T4连接酶将回收片段按一定比例与经BamHI酶切、南极热敏磷酸酶去磷酸化处理后的pUC18质粒载体连接,热激法转化受体菌E.coliDH5α,在含有IPTG/X-gal和Amp 的LB平板上筛选重组子,所得克隆数为9×103个,以不吸水链霉菌染色体基因组大小为7 Mb计算,概括了不吸水链霉菌梧州新亚种约99%的基因组,达到了建库要求的理论值。随机挑取白色菌落,提取重组质粒进行酶切电泳分析,均有外源片段插入。基因文库的构建,为进一步深入研究梧宁霉素生物合成基因结构及功能奠定基础。     

转座子Tn5096对刺孢吸水链霉菌北京变种PR220转座的诱变

用大肠杆菌／链霉菌穿梭质粒ｐＣＺＡ１６８多次转化农抗１２０产生菌刺孢吸水链霉菌北京变种ＲＦ２２０的原生质体,均未得到转化子。来自吸水链霉菌应城变种１０－２２突变株的链霉菌质粒ｐＩＪ７０２可以转化ＲＦ２２０,但转化频率只有数十个转化子／μｇＤＮＡ。用来自ＲＦ２２０本身的ｐＩＪ７０２对消除ｐＩＪ７０２后的ＲＦ２２０的原生质体进行了再转化,转化率没有明显的提高。用氨苄青霉素和甘氨酸协同处理ＲＦ２２０的菌