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为获得ɑ-乙酰乳酸脱羧酶的高产突变株,以产ɑ-ALDC的枯草芽孢杆菌3226-5为出发菌株进行了诱变处理。经过微波(小火)物理诱变得到3株高产正突变株W181、W184、W195,经过多次传代实验,表明W181、W195是稳定的突变株。突变株W195的ɑ-ALDC相对酶活(OD522)由出发菌株的0.35提高到0.617,提高了76%,突变株W181提高了66.9%。 相似文献
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α-乙酰乳酸脱羧酶基因在枯草芽孢杆菌中的整合型表达 总被引:2,自引:0,他引:2
α-乙酰乳酸脱羧酶在啤酒生产中能加快啤酒成熟,有重要的应用价值。本研究将枯草芽孢杆菌启动子P43克隆到质粒pUC19-ALDC中的α-乙酰乳酸脱羧酶基因之前,得到重组质粒pUC19-P43-ALDC。重组质粒pUC19-P43-ALDC与质粒pMLK83-BN同源重组,筛选得到枯草芽孢杆菌整合质粒pMLK83-ALDC。用此整合质粒转化枯草芽孢杆菌1A751,挑选出新霉素抗性且无淀粉酶活性的重组菌株。此菌株用LB培养基在37℃、220r/min摇瓶培养过夜,测得α-乙酰乳酸脱羧酶活力为15.6U/mL,说明整合的α-乙酰乳酸脱羧酶基因能够在重组菌株中稳定传代和表达。本研究首次在枯草芽孢杆菌中用整合型的方式重组表达了α-乙酰乳酸脱羧酶,提出了一种有潜力的生产α-乙酰乳酸脱羧酶的新方法。 相似文献
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枯草芽孢杆菌α—乙酰乳酸脱羧酶基因的克隆及表达 总被引:1,自引:0,他引:1
利用鸟枪法构建了供体菌的基因组文库,通过VP反应显色法进行筛选,从约7000个转化子中选出携带ALDC基因的重组质粒(pBG4~pBG5).绘制了pBG4插入片段的限制酶图谱.Southern杂交证明该外源片段来源于供体菌。酶活性测定结果表明ALDC基因在大肠杆菌中获得了表达,为构建带有ALDC的啤酒酵母工程菌奠定了基础. 相似文献
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二种重组α-乙酰乳酸脱羧酶在啤酒生产中降低双乙酰的作用 总被引:3,自引:0,他引:3
利用已构建的含有短芽孢杆菌(Bacillus brevis)和产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)α-乙酰乳酸脱羧酶(α-acetolactate decarboxylase, α-ALDC)基因的工程菌株,并使它们分别在大肠杆菌中高效表达,获得重组α-ALDC。在实验室,用 2L体积的麦芽汁进行啤酒生产试验,添加 2种重组α-ALDC后,使啤酒中的双乙酰含量快速下降到或始终保持在0.1mg/L以下。证明得到的重组a-ALDC能有效地降低啤酒中双乙酰含量。 相似文献
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α—乙酰乳酸脱羧酶的研究 总被引:6,自引:1,他引:6
从细菌中筛选出14株α-乙酰乳酸脱羧酶产生菌。从其中的一株α-乙酰乳酸脱羧酶产生菌提取粗酶,将粗酶样品分别加到主发酵的啤酒和主发酵后的啤酒后,在两种情况下均能明显降低啤酒中的总双乙酰量。 相似文献
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α-乙酰乳酸脱羧酶加速啤酒成熟的研究进展与应用 总被引:15,自引:0,他引:15
较详细地介绍了国内外α-乙酰乳酸脱羧酶(ALDC)的分子生物学研究,细菌ALDC基因在酵母菌中的克隆和表达,以及ALDC酶制剂加速啤酒成熟的应用。 相似文献
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利用已构建的含有短芽孢杆菌(Bacillus brevis)和产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)α-乙酰乳酸脱羧酶(α-acetolactate decarboxylase, α-ALDC)基因的工程菌株,并使它们分别在大肠杆菌中高效表达,获得重组α-ALDC。在实验室,用 2L体积的麦芽汁进行啤酒生产试验,添加 2种重组α-ALDC后,使啤酒中的双乙酰含量快速下降到或始终保持在0.1mg/L以下。证明得到的重组a-ALDC能有效地降低啤酒中双乙酰含量。 相似文献
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根据已知α-乙酰乳酸脱羧酶(α-acetolactate decarboxylase,ALDC)的基因序列,用PCR法从产气肠杆菌(Enterobacter oerogenes)中克隆到约0.8kb的DNA片段,经DNA测序证明是ALDC基因,将该基因重组到质粒pBV220中,转化大肠杆菌,实现了高表达,获得了目的蛋白表达量约50%的转化子;表达产物经鉴定具有ALDC酶活性,为可溶性表达.为下一步应用基因工程手段对其进行改造奠定了基础. 相似文献
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用PCR方法扩增短芽孢杆菌α—乙酰乳酸脱羧酶基因,引入原核表达载体pBV220中,得到重组质粒pALDl。pALDl中的ALDC基因在大肠杆菌中高效表达,每毫升发酵液产酶80单位以下,比原始菌株提高200余倍。SDS-PAGE蛋白质分析表明,大肠杆菌DH5α(pALDl)表达的ALDC占细胞总蛋白量的40%以上。研究了重组质粒稳定性,大肠杆菌DH5α(PALDl)和HB101(pALDl)分别在无选择压力下30℃连续培养50代以上,41℃诱导不同时间,DH5α(pALDl)在热诱导5h后,未发现质粒不稳定性,HB101(pALDl)在热诱导3h后,质粒基本稳定,但热诱导5h后,丢失质粒的细胞约占70%。 相似文献