新疆猪粪便戊型肝炎病毒RNA的检测及序列分析

从戊型肝炎病毒(Hepatitis Evirus,HEV)IgG检测阳性的新疆某猪场采集70份猪粪便,利用逆转录套式聚合酶链方法(RT-nPCR),检测HEV RNA,其中13份为阳性,阳性率18．57％。将PCR扩增产物克隆到pMD18-T载体上,构建成重组质粒并测序,结果表明,13株猪源HEV分离株在HEV ORF2 348bp核苷酸序列的同源性为97．1％～100％,为同一基因型;与HEVⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的同源性分别为74．1％-77．6％,71．6％-74．1％,73.3％～78．2％和82．8％-91.4％,与ⅣA亚型的同源性同源性最高达89．4％-91．4％。以该核苷酸片段绘制的基因进化树显示13株猪源HEV与HEV Ⅳ T1株在同一分支上,属基因Ⅳ型;与国内其他猪源HEV分离株该片段核苷酸序列的同源性为82．6％-91．3％,提示中国猪源HEV的基因型比较一致,同属HEV Ⅳ型。     

新疆猪粪便戊型肝炎病毒RNA的检测及序列分析

从戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)IgG检测阳性的新疆某猪场采集70份猪粪便,利用逆转录套式聚合酶链方法(RT-nPCR),检测HEV RNA,其中13份为阳性,阳性率18.57%.将PCR扩增产物克隆到pMD18-T载体上,构建成重组质粒并测序,结果表明,13株猪源HEV分离株在HEV ORF2 348bp核苷酸序列的同源性为97.1%～100%,为同一基因型;与HEV Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的同源性分别为74.1%～77.6%,71.6%～74.1%,73.3%～78.2%和82.8%～91.4%,与ⅣA亚型的同源性同源性最高达89.4%～91.4%.以该核苷酸片段绘制的基因进化树显示13株猪源HEV与HEVⅣT1株在同一分支上,属基因Ⅳ型;与国内其他猪源HEV分离株该片段核苷酸序列的同源性为82.6%～91.3%,提示中国猪源HEV的基因型比较一致,同属HEVⅣ型.     

福建省2000～2003年戊型肝炎病毒分离株的分子流行病学研究

为研究福建省2000～2003年急性散发性戊型肝炎病毒（HEV）分离株的分子流行病学特征,采用RT—PCR方法扩增HEV ORF2的基因片段,经纯化、克隆、测序后,对其序列用Neighbor-Joining法和Bootstrap法进行基因进化分析。从158例急性散发性戊型肝炎的血清标本中扩增出72份HEV RNA,经基因进化树分析,这72株HEV均属于HEV基因Ⅳ型,且被明显地分为A、B、C、D共4个组群。A群的同源性最高,群内同源性为93．3％～100％;D群的同源性最低,群内同源性在86．6％～100％之间。A群和B群流行株所占比例没有差异;C群流行株所占比例由2002年的7．1％逐渐增加到2003年的26．3％（x^2=10．553,P=0．014）;D群则由85．7％逐渐减少到44．7％（x^2=8．136,P=0．043）。引起福建地区急性散发性戊型肝炎流行的HEV均属于HEV基因Ⅳ型,基因型内存在不同的组群,其中D群的变异较大。     

新疆地区猪戊型肝炎血清流行病学调查

The purpose of the present study was to determine the prevalence of swine Hepatitis E virus (HEV) infection in Xinjiang. 813 swine serum samples collected from 1 to 12 months of age at 9 swine farms in Xinjiang region were tested by ELISA for the presence of IgG antibodies against HEV. The recombinant protein pUS 166 containing region 452-617aa of the ORF2 of HEV US strain was used as coating antigen. The result showed that anti -HEV IgG were detected in 265 of 405 pigs (65.43%) in one group and 238 of 408 pigs (58.33%) in another group, and that the seropositivity rate was not related to geographic district and breeds, but differed remarkably by age, being 40% among the 1- to 3-month-old piglets, but 77.33% among ones over 3-month-old. It suggested that swine HEV was widespread in different geographic regions of XinJiang.     

新疆地区猪戊型肝炎血清流行病学调查

戊型肝炎(HE)是一种经粪-口传播的疾病,在发展中国家造成非常严重的健康问题.近年来的研究证实发达国家也存在戊型肝炎问题.该病主要威胁青壮年,孕妇病死率可高达20%.我国自1982年起就有HE的报道,新疆是HE的高流行区.由于HEV的组织培养研究尚不成熟,因此其诊断手段主要是利用RT-PCR检测病毒RNA,或利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体.而用于血清学检测的抗原主要来自HEV ORF2和ORF3的产物,并且用ORF2产物建立的检测法有足够的敏感性和特异性.自Meng[1]1997年从美国猪体内克隆出戊型肝炎病毒(HEV)基因后,我国以及加拿大,西班牙,新西兰,澳大利亚,印度等国家也都克隆出本国猪HEV基因.虽然我国也进行了猪HEV的检测,但在1988年爆发过人源戊型肝炎的新疆地区猪群感染HEV的情况还不清楚.本研究调查了HEV在猪群的感染状况,对新疆不同地区,猪场,年龄段及品种的猪进行HE的血清学检测.     

接触猪职业人群和对照人群戊型肝炎感染率比较研究

近年来戊型肝炎（Hepatitis E,HE）被怀疑是一种人兽共患病,猪是其重要的宿主.通过在HE流行区比较接触猪人群和对照人群HE感染率,评价接触猪对人群的HE感染的风险.在浙江省北部某县采用限制研究对象的群组匹配的横断面调查,对同地区同年龄段的接触猪人群和对照人群进行问卷调查,采集血液并检测抗HE抗体.研究发现,接触猪人群和对照人群的年龄大致相当,但前者男性比例较高.接触猪人群抗HE抗体感染率（254/340,74.71%）明显高于对照人群（319/512,62.30%）.经过分层分析和多因素非条件Logistic回归分析,平衡性别和年龄因素后,接触猪仍能增加约50%人群的HE感染风险.随着接触年数的增加,其风险也增加,接触猪5～14年和15年以上人群分别比对照人群增加65%和157%的HE感染风险.接触猪人群男性、女性和合计的标化感染率分别为72.30%、65.67%和70.92%,均高于对照人群（69.87%、51.82%和60.80%）,尤其以女性更为明显.在HE流行区,接触猪可能增加人群HE感染风险,对女性的影响可能较大,随着接触猪年数的增加HE感染的风险也增加.由于本研究采用病因和结果同时出现的横断面研究,确切的接触猪和HE感染的关系需要建立合适的接触猪人群队列并结合详细的接触猪暴露调查得到阐明.     

戊型肝炎重叠其他肝炎病毒感染87例临床分析

为更好地了解戊型肝炎的发病情况,现将我院自1999年3月至2002年10月收治87例戊型肝炎患者的临床特点分析如下。     

猪戊型肝炎核酸疫苗的构建及在BAL B/C小鼠免疫效应

将含有kozak序列及BamH I的上游引物和带有终止密码子及EcoRV酶切位点的下游引物,以猪HEVDQ1 ORF2为模板,进行PCR。将扩增片段和pcDNA3.1质粒以BamH I/EcoRV进行双酶切后进行连接。连接产物转化至大肠杆菌DH5α,经测序证明该序列正确,命名为pcDQ1。进行pcDQ1质粒提取,以Vero细胞为表达细胞进行转染,以间接免疫荧光试验进行验证。以100μg/次/只剂量的pcDQ1对BAL B/C小鼠进行免疫以获取单因子血清。共免疫3次,采集血清,进行ELISA效价测定。结果表明,该核酸疫苗可以免疫使小鼠产生抗体。     

广西地区野鼠戊型肝炎病毒感染情况调查

从广西壮族自治区5个市采集256份野鼠肝脏和对应的血清211份,采用HEV抗体(HEV-Ab)酶联免疫试剂盒(双抗原夹心法)对血清样本进行抗-HEV检测,并对不同地区HEV抗体阳性率进行χ2检验。采用HEV核酸荧光PCR试剂盒对肝脏样本进行HEV核酸检测。结果显示,211份野鼠血清抗-HEV的抗体阳性率为6.6%,其中百色市的抗体阳性率最高,为14.1%,其他地区抗体阳性率均在10%以下。256份野鼠肝脏中未检测到HEV核酸。由此可见,广西壮族自治区5个市的野鼠中存在HEV感染,但其是否为HEV的自然宿主及在戊型肝炎传播中起何作用需进一步研究。     

戊型肝炎研究的若干进展

本文重点简述近年来在戊型肝炎的病原学,临床特征和肝脏病理组织学变化方面的研究进展。     

猪戊型肝炎研究进展

自从1997年发现猪戊型肝炎病毒（SHEV）以来,人们对猪戊型肝炎病毒已有一定的研究。就猪戊型肝炎病毒的病原学和分子生物学水平、传染途径、猪场中戊型肝炎病毒的存在情况、与猪接触的人群感染情况,以及诊断方法、研究概况作一综述,并提出了猪戊型肝炎病毒研究方面存在的问题及对猪戊型肝炎病毒研究的前景做了展望。     

猪戊肝病毒存在准种现象

为研究猪戊肝病毒准种存在情况,采用逆转录-巢式聚合酶链反应法(RT-nested-PCR)对四株猪戊肝病毒(Hepatitis E virus)第2可读框(ORF2)部分序列进行PCR扩增,将产物克隆后,每个毒株分别随机挑取20个阳性克隆测序,进行DNA序列分析。结果显示4株HEV不同克隆间的ORF2核苷酸序列同源性分别为96.8%~99.7%、98.8%~99.7%、98.8%~99.7%和100%,有变异的克隆核苷酸序列与上海株(SAAS-JDY5)同源性为96.8%~100%。由此证实感染戊肝病毒的猪个体内存在HEV准种。     

猪戊型肝炎病毒防控及研究策略分析

戊型肝炎为人畜共患病病原, 猪是主要的病毒储库。我国猪场戊肝病毒流行情况复杂, 猪感染率高, 同一地点存在3型或/和4型两种基因型混合污染。病毒存在基因重组和准种现象, 为病毒遗传进化提供了遗传基础。当前猪戊肝感染人的主要媒介为污染的猪肉及其制品, 其他感染机制和途径还有待进一步阐明。应加强对猪HEV与猪场其他流行病原体相互关系的研究, 同时应加强猪HEV相关信息的积累分析包括对猪HEV感染特性和遗传特性进行实时监测, 将猪HEV流行情况纳入兽医公共卫生预警体系, 实现常态跟踪。     

Molecular Epidemiology of Porcine Circovirus Type 3 Infection in Swine Herds in China

正Dear Editor,Porcine circovirus type 3(PCV3)is a new-emerging circovirus belonging to the genus Circovirus in the family Circoviridae in which PCV type 1(PCV1)and PCV type 2(PCV2)were well documented(Palinski et al.2017).PCV1 is a cell culture-derived virus and is considered to be nonpathogenic for swine,whereas PCV2 is the primary etiological agent of porcine circovirus-associated diseases     

Swine Is a Possible Source of Hepatitis E Virus Infection by Comparative Study of Hepatitis A and E Seroprevalence in Thailand

Hepatitis A virus (HAV) and hepatitis E virus (HEV) infection in developing countries are associated with contaminated food or water. Although Thailand is non-endemic for HEV, sporadic infections may occur from zoonotic transmission. Individuals between 7 months to 69 years (mean age = 32.8) from predominantly Islamic Narathiwat (n = 305) and swine farm-dense Lop Buri (n = 416) provinces were screened for anti-HEV and anti-HAV antibodies by commercial enzyme-linked immunosorbent assay and automated chemiluminescent microparticle immunoassay, respectively. Seroprevalence and relative antibody titers were analyzed according to age groups. HAV IgG antibody positive rates in Lop Buri and Narathiwat residents were 39.9% and 58%, respectively (p < 0.001). Greater than 90% of individuals >50 years old in both provinces possessed anti-HAV IgG. In contrast, seroprevalence for anti-HEV IgG was much higher in Lop Buri (37.3%) than in Narathiwat (8.9%) (p < 0.001). Highest anti-HEV IgG prevalence was found among 21-30 year-olds (50%) in Lop Buri and 41-50 year-olds (14.1%) in Narathiwat. In summary, fewer individuals possessed anti-HEV IgG in Narathiwat where most residents abstained from pork and fewer swine farms are present. Therefore, an increased anti-HEV IgG seroprevalence was associated with the density of swine farm and possibly pork consumption. Adults were more likely than children to have antibodies to both HEV and HAV.     

截短的猪戊型肝炎病毒ORF2基因克隆与重组蛋白的原核表达

用巢式PCR从阳性猪戊型肝炎粪便悬液中克隆了截短的猪戊型肝炎病毒ORF2基因(SORF2)片段,并将克隆基因亚克隆到原核表达载体pTO-13上构建表达质粒pTO-T7-SORF2,然后转化大肠杆菌.SDS-PAGE检测发现在大肠杆菌中以包涵体形式获得了高效表达,Western-blot证明表达蛋白具有良好的特异性和反应原性,包涵体纯化时发现该重组蛋白在4 mmol/L的尿素-Tris溶液(pH 7.2)中的溶解度较大,有利于重组蛋白的复性,为开发家畜用诊断试剂,预防猪戊型肝炎的流行与人畜交叉感染奠定了一定的基础.