胶体金免疫层析技术在兽医学中的应用

胶体金免疫层析技术是一种固相免疫标记技术,具有操作简单、反应灵敏迅速、判定结果直观、无需特殊设备和专业人员等优点。胶体金检测技术一直以来在人类医疗领域中应用较为广泛,近年来该项技术也逐渐应用到兽医临床检测等方面中。目前在兽医领域内,该项技术已经在细菌性疾病、病毒性疾病及寄生虫性疾病等多方面都有应用。本综述对胶体金免疫层析技术进行简述,并对该项技术在兽医领域中的应用加以总结和展望,以期能为今后胶体金的相关研究提供参考。     

心肌肌钙蛋白I和糖原磷酸化酶同工酶BB金标记免疫层析联合检测法的建立

目的：建立人心肌肌钙蛋白I（cTnI）及糖原磷酸化酶同工酶BB（GPBB）的胶体金免疫层析联合检测法。方法：以纯化的人心肌cTnI和GPBB为免疫原免疫小鼠,制备抗cTnI和抗GPBB单克隆抗体,并用胶体金标记cTnI和GPBB抗体,采用免疫层析技术建立快速准确检测cTnI和GPBB的胶体金免疫层析法。结果：建立的检测方法灵敏度高,可检出血液样品中1ng／mL的cTnI和7ng／mL的GPBB;特异性强,与心肌肌钙蛋白T、心肌肌钙蛋白C、肌酸激酶同工酶均无交叉反应。结论：该方法特异性强,灵敏度高,快速、简便,弥补了传统心肌梗死诊断方法的不足,对急性心肌梗死的早期筛查有重要意义,具有较高的临床应用价值和广泛的应用前景。     

胶体金免疫层析技术在疟疾诊断中的应用

疟疾仍然是21世纪人类健康的严重威胁之一,快速准确的诊断是疟疾防治的关键。目前利用胶体金免疫层析技术研制的诊断盒主要有4种,在疟疾快速检测方面发挥了重要作用,本文着重综述了这4种诊断盒在疟疾检测中的应用情况以及各自的特点。     

甲胎蛋白和癌胚抗原的胶体金免疫层析同步检测

目的:探讨建立一种同时快速检测甲胎蛋白(AFP)和癌胚抗原(CEA)两种肿瘤标志物的方法.方法:用胶体金分别标记鼠抗AFP单克隆抗体和鼠抗CEA单克隆抗体,喷于胶金垫上.与之配对的抗体喷在硝酸纤维素膜(NC膜)上分别做检测线T2和T1,兔抗鼠二抗喷在NC膜上做质控线,利用免疫层析技术进行检测.结果:采用Frens方法制备的胶体金粒径在20nm,紫外可见吸收峰在521 nm处,金标抗体的最适pH在9.0,最适抗体量为200μl,胶体金标记2.4μg抗体.测试结果表明同时检测AFP和CEA的试纸条灵敏度分别为20 ng.mL-1和5 ng.mL-1,检测时间仅需10min,与PSA、CA125、CA15-3、Ferritin、Human Albumin等没有交叉反应,稳定性好.结论:应用胶体金免疫层析技术,实现了AFP和CEA的同步检测.     

土拉弗朗西斯菌胶体金免疫层析快速检测方法的建立

目的建立胶体金免疫层析技术快速定量检测土拉弗朗西斯菌。方法利用胶体金标记和双抗体夹心免疫层析技术,建立土拉弗朗西斯菌的快速检测方法,评价其特异性和敏感性,并拟合检测曲线进行定量检测。在面粉、饼干、果冻、梨汁等食品样品中添加土拉弗朗西斯菌的FopA蛋白模拟污染样品,评价该方法对固体、半固体、液体等食品样品的检测能力。结果该法可在10min内完成定性和定量检测,灵敏度为750ng／ml,线性范围750～24000ng/ml、回收率为56．7％-89．2％。结论所建立的检测土拉弗朗西斯菌的胶体金免疫层析方法,能快速、灵敏、特异、准确地检测样品中的土拉弗朗西斯菌,适用于现场快速检测。     

胶体金免疫层析试纸条技术在病毒检测领域的应用研究现状北大核心CSCD

胶体金免疫层析试纸条技术是一种快速、灵敏和精准的固相标记检测技术,胶体金免疫层析试纸条具有价格低廉、操作简便、检测快捷和特异性强的优点,具有在短时间内灵敏、准确地定性检测出相关病毒的潜在能力,有效解决传统检测方法在医学、兽医、动植物病毒检测和农药残留检测等领域存在检测时间长、设备不便和专业性强的弊端。目前在检测领域,该技术在检测细菌性疾病、病毒性疾病和预防传染性疾病大面积扩散等方面都有应用,因此,该技术在检验方面具有巨大的发展空间。文中主要对胶体金免疫层析技术进行综述,并对该技术在生物病毒检测方面进行总结和展望。     

胶体金免疫层析技术的应用与展望

本文主要介绍了胶体金免疫层析技术的发展及其在人体激素或疾病有关蛋白的检测、病原微生物有关蛋白或抗原抗体的检测、寄生虫相关抗原抗体的检测、药物浓度的监测等方面的情况,并对该技术作了展望。     

胶体金免疫层析技术的研究进展

胶体金免疫层析技术是一种常用的免疫层析检测方法,由于其操作简单、省时、制造成本较低、结果易判读等特点,非常适合于现场检测,广泛用于生物、医药、食品等领域。但该技术也存在一些不足,如质量控制困难、灵敏度低、不易定量等,在一定程度上限制了其应用。本文,简述了该技术的原理、特点和国内外研究进展,重点综述了该方法的不足及改进的可能性,为拓宽其应用范围提供帮助。     

神经元特异性烯醇酶和癌胚抗原胶体金免疫层析联合检测

目的：应用双抗夹心胶体金免疫层析方法,实现对神经元特异性烯醇化酶（NSE）和癌胚抗原（CEA）两种肺癌肿瘤标志物的快速联合检测。方法：采用柠檬酸三钠还原法制备20nm胶体金颗粒,并分别对鼠抗NSE、CEA单克隆抗体进行标记,分别与之相配对的另一种单克隆抗体被喷在硝酸纤维素膜（NC膜）上,制成免疫层析检测试条。溶液中的抗原NSE、CEA与金标记抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动,与膜上固定的抗体结合形成肉眼可见的红色线条。结果：该试纸条只与NSE、CEA有特异性反应,与CA125、CYFRA21-1、TPA等肺癌标志物无交叉反应。标准样品中两种抗原的检测灵敏度分别可达到5ng/mL和3ng/mL。结论：胶体金免疫层析技术检测NSE、CEA特异性强、灵敏度高、简便快速,不需特殊仪器设备,有广泛应用价值。     

神经元特异性烯醇酶和癌胚抗原胶体金免疫层析联合检测

目的:应用双抗夹心胶体金免疫层析方法,实现对神经元特异性烯醇化酶(NSE)和癌胚抗原(CEA)两种肺癌肿瘤标志物的快速联合检测。方法:采用柠檬酸三钠还原法制备20nm胶体金颗粒,并分别对鼠抗NSE、CEA单克隆抗体进行标记,分别与之相配对的另一种单克隆抗体被喷在硝酸纤维素膜(NC膜)上,制成免疫层析检测试条。溶液中的抗原NSE、CEA与金标记抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动,与膜上固定的抗体结合形成肉眼可见的红色线条。结果:该试纸条只与NSE、CEA有特异性反应,与CA125、CYFRA21-1、TPA等肺癌标志物无交叉反应。标准样品中两种抗原的检测灵敏度分别可达到5ng/mL和3ng/mL。结论:胶体金免疫层析技术检测NSE、CEA特异性强、灵敏度高、简便快速,不需特殊仪器设备,有广泛应用价值。     

免疫胶体金法提取环境标本中细菌DNA技术*

将抗DNA单克隆抗体标记在胶体金颗粒上制成免疫胶体金试剂,提取标本中DNA,直接用于PCR检测,从而建立一种简单、快速、高效的免疫胶体金方法提取环境标本中的DNA。结果表明:应用免疫胶体金试剂可有效去除环境标本中PCR抑制剂,浓缩模板,提高PCR检测敏感度3～4个数量级。操作步骤简单,无需使用有机溶剂,避免环境污染,吸附了DNA的免疫胶体金可直接用于PCR扩增。研制了免疫胶体金试剂并确定其最佳反应条件,有效提高PCR技术在检测现场环境标本中的敏感性和实用性。     

免疫胶体金法提取环境标本中细菌DNA技术

将抗-DNA单克隆抗体标记在胶体金颗粒上制成免疫胶体金试剂,提取标本中DNA,直接用于PCR检测,从而建立一种简单、快速、高效的免疫胶体金方法提取环境标本中的DNA。结果表明：应用免疫胶体金试剂可有效去除环境标本中PCR抑制剂,浓缩模板,提高PCR检测敏感度3～4个数量级。操作步骤简单,无需使用有机溶剂,避免环境污染,吸附了DNA的免疫胶体金可直接用于PCR扩增。研制了免疫胶体金试剂并确定其最佳反应条件,有效提高PCR技术在检测现场环境标本中的敏感性和实用性。     

委内瑞拉马脑炎病毒重组抗原的制备纯化及其胶体金免疫层析检测方法的建立

目的:表达委内瑞拉马脑炎病毒E2重组蛋白,并结合胶体金免疫层析技术建立一种简便检测委内瑞拉马脑炎病毒特异性抗体的方法。方法:利用已经构建的表达E2抗原的工程菌, 用IPTG诱导, 表达蛋白主要以包涵体的形式存在。通过一系列条件的变性、复性、透析,所制抗原用以包被硝酸纤维素膜,利用胶体金标记和免疫层析技术,建立委内瑞拉马脑炎病毒快速检测方法。对该方法的敏感性、特异性和稳定性作出评价。结果:重组工程菌可表达分子质量为 40 kDa的目的蛋白, 纯化后的蛋白质经SDS-PAGE显示纯度达95%以上。建立的检测方法可在20 min内完成检测。对症状相似及近缘的其他病毒进行检测,均无非特异反应。试纸条在37℃下保存2周,检测结果不变。该方法与R&;D公司商品化的ELISA试剂盒灵敏度检测无明显差异;对92份阴性血清进行检测,两种检测方法的符合率为96.7%。结论:重组委内瑞拉马脑炎病毒蛋白产生的包涵体变性复性后生具有良好的重复性和稳定性, 可作为委内瑞拉马脑炎病毒多种检测方法的抗原原料。胶体金免疫层析法具有快速、灵敏、特异、稳定的特点,适用于现场检测。     

免疫胶体金技术的应用及展望

免疫胶体金技术是继三大标记技术(荧光素、放射性同位素和酶)后发展起来的固相标记免疫测定技术。免疫胶体金标记技术是以胶体金作为示踪标志物,应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。近年来,该技术在医学、动植物检疫、食品安全监督等各领域得到了日益广泛的应用。从胶体金技术的基本原理、制备方法、标记技术、应用现状及其优点等方面作一简要综述,并对该技术的发展前景作了展望。     

狂犬病病毒抗体胶体金检测试纸的制备

通过胶体金免疫层析技术建立一种特异、便捷、快速的狂犬病病毒抗体检测方法,对犬等动物免疫狂犬病疫苗后的抗体水平监测提供参考。用醋酸锌沉淀法沉淀狂犬病病毒CVS11,Sepharose 4FF进行层析纯化。用柠檬酸三钠还原法制备的胶体金,标记纯化的狂犬病病毒,喷于试纸的结合释放垫 (金标垫),将SPA (葡萄球菌表面A蛋白) 和纯化的兔抗狂犬病病毒IgG分别喷于试纸的T (检测线) 处和C (对照线) 处,组装试纸条。用制备的试纸条对261份犬血清进行检测,与快速荧光灶抑制试验 (RFFIT) 检测的结果一致;对已知效价的犬狂犬病毒中和抗体 (VNA) 大于0.5 IU,结果为阳性;对狂犬病病毒中和抗体 (VNA) 小于0.5 IU/mL的血清,结果为阴性。制备的狂犬病病毒抗体胶体金检测试纸检测犬血清抗体,具有特异、便捷、快速的特点,能够检测出狂犬病病毒中和抗体大于0.5 IU的血清,适用于临床犬血清抗体水平监测,具有良好的应用前景。     

以膜为固相载体的免疫胶体金快速试验

免疫胶体金标记技术是现在免疫标记技术的一个重要范畴,20世纪80年代末期,人们把胶体金免疫技术与固相膜结合发展了胶体金免疫快速试验,由于其简便、快速、结果直观从而得到了广泛的发展和应用,且其商业前景广阔,目前人们对其需求越来越多。本文对其基本原理及其中应注意的问题做了一些介绍,并对其应用领域及发展方向进行了探讨。     

流感嗜血杆菌快速检测胶体金试纸的研制

以流感嗜血杆菌外膜蛋白P 6为检测标志物,利用胶体金免疫层析技术建立一种快速、灵敏、准确检测流感嗜血杆菌的方法。对P6蛋白(GenBank登录号:AGH02799)进行生物信息学分析,获取其胞外结构域中抗原表位最丰富的肽段,预测其中的线性抗原表位P6Line (62–75 aa),化学合成后经免疫、抗体纯化得到线性表位抗体,同时利用重组P6蛋白制备多克隆抗体,建立基于双抗体夹心免疫层析技术的流感嗜血杆菌快速检测方法,并对该方法的特异性、灵敏性、重复性和稳定性作出评价,同时对该方法进行临床模拟试验,平板培养法验证其准确性。建立的检测方法可在15 min内完成对样本的检测,检测敏感度高(1×10~5 CFU/mL)、特异性强,与其他诸如肺炎链球菌、卡他莫拉菌、肺炎支原体、嗜肺军团菌等常见9种的呼吸道病原菌无交叉反应;试纸条在25℃保存具有良好的重复性和稳定性;200份临床样品检测结果与平板培养法的阳性符合率为90.5%。P6蛋白具有高度的表面暴露性和较强的抗原性,可作为流感嗜血杆菌检测标的物,胶体金免疫层析法具有快速、简便、灵敏的特点,适用于呼吸道感染的临床快速检测。     

免疫标记技术的进展及纳米技术在其中的应用

酶免疫标记、胶体金免疫标记及荧光免疫标记技术是目前应用最广泛的免疫反应检测技术。随着科学技术,尤其是纳米技术的发展和生物医药等方面的需求,人们在提高检测灵敏度、简化操作步骤、有效缩短检测时间等方面,取得了很多可喜的进展。本文将分别针对酶免疫标记、胶体金免疫标记及荧光免疫标记技术三方面的进展情况,尤其是纳米标记技术在免疫反应检测中的应用进展进行综述。     

基于胶体金标记米曲霉素的免疫层析试纸法快速筛查SLE

目的 建立基于胶体金标记米曲霉素(AOL)的快速筛查系统性红斑狼疮(SLE)的免疫层析试纸法。方法 利用大肠杆菌BL21原核表达特异性识别核心岩藻糖基的AOL基因(FleA),并进行纯化及胶体金标记。利用特异性识别IgG的Protein G以及胶体金标记的AOL共同建立快速筛查SLE的免疫层析试纸法(ICS)。结果 成功表达并纯化AOL重组蛋白,并进行胶体金标记;应用胶体金标记AOL的ICS检测SLE患者血清呈阳性反应,而健康对照及其他自身免疫性疾病(类风湿关节炎、IgA肾病和结缔组织病等)呈阴性反应。结论 成功建立基于胶体金标记AOL的快速筛查SLE的ICS,为SLE早期筛查提供了可靠依据。     

酶联免疫法和胶体金法在胃镜检查前检测乙肝表面抗原的结果观察

目的:比较酶联免疫法和胶体金法在胃镜检查前检测乙肝表面抗原的结果,以探讨酶联免疫法和胶体金法在检验与病理科乙肝表面抗原检测中的应用价值。方法:选择2017年1月~2019年12月我院进行胃镜检查的100例上消化道疾病患者,均在胃镜检查前检测乙肝表面抗原,对照组使用胶体金法进行检测,观察组使用酶联免疫法进行检测。比较酶联免疫法和胶体金法在胃镜检查前检测乙肝表面抗原的阳性率、敏感度以及特异度。结果:酶联免疫法和胶体金法在胃镜检查前检测乙肝表面抗原的阳性率分别为35.00%(35/100)和33.00%(33/100),两种方法相比较没有明显的差异(P>0.05);酶联免疫法在胃镜检查前检测乙肝表面抗原的敏感度(97.34%)与特异度(98.12%)均明显高于胶体金法(P<0.05)。结论:酶联免疫法和胶体金法在胃镜检查前对乙肝表面抗原均有比较高的阳性检测率,但是酶联免疫法具有更高的敏感度以及特异度,仍然是现今检测乙肝表面抗原的主要方法,胶体金法由于检测方法更加简便和直观、方便携带、结果更加快捷,而且不需要特殊的仪器设备,更加适用于临床上紧急状态下患者的检测以及感染者初筛等情况。