健康长寿老人肠道双歧杆菌鉴定

为研制食品双歧杆菌制剂,从健康长寿老人肠道正常菌群分离并鉴定具有较高生物活性及保健作用的双歧杆菌菌株。对３０份未明菌株标本,进行了分离,纯化,鉴定,经生物学特性,生化试验,同时做代谢产物分析,各菌均产生乙酸和乳酸为主。还做了ＤＮＡ（Ｇ＋Ｃｍｏｌ％）含量测定,测定值在５６～６３范围。而确定３株为婴儿双歧、５株为青春双歧,共选出８株双歧杆菌,为选育优良的双歧杆菌菌株提供了依据。     

适用于分离人肠道中双歧杆菌的选择性培养基

【目的】比较并评价5种双歧杆菌选择性培养基对人源双歧杆菌的分离效果,试图筛选出一种适用于人肠道中双歧杆菌分离培养的选择性培养基。【方法】采集6份健康人粪便样品稀释涂布于5种选择性培养基上,厌氧培养后计数菌落并挑选单菌落进行鉴定。同时提取样品中细菌宏基因组DNA,应用变性梯度凝胶电泳技术(Denaturing Gel Gradient Electrophoresis,DGGE)和荧光定量PCR技术(Quantitative Polymerase Chain Reaction,q-PCR)揭示样品中双歧杆菌种类和数量,并以此为依据,客观评价上述5种选择性培养基的分离效果。【结果】BSM培养基和BLM培养基上双歧杆菌的计数结果与q-PCR的定量结果最为接近,并显著高于其它3种培养基。BLM培养基上分离到双歧杆菌的种类与DGGE图谱多样性分析的结果最为接近。【结论】BLM培养基是一种适用于人肠道中双歧杆菌分离培养的选择性培养基。     

人工喂养新生儿肠道双歧杆菌的初步观察

众所周知,人和动物肠道内孳生着多种微生物,特别是双歧杆菌,是肠道内的非致病微生物,它具有抗感染性、增强免疫性、抗癌性以及延年益寿的功能,对维持人体健康有重要的作用。统计学表明,双歧活性很低或不含双歧活性的人工食品喂养婴儿与喂母乳婴儿相比,前者的发病率与死亡率都高于后者,这与肠菌群分布差异相一致。今对重庆市41例人工喂养新生儿肠道双歧杆菌进行了定量调查与分析。     

嗜酸乳杆菌同化MRS培养基中胆固醇能力的研究

目的 对嗜酸乳杆菌在MRS液体培养基中同化胆固醇的能力进行初步研究。方法模拟人体不同胆固醇水平。结果 嗜酸乳杆菌对低胆固醇或正常水平胆固醇同化作用不明显,而对高胆固醇水平的同化作用比较明显。结论 嗜酸乳杆菌具有同化胆固醇的能力。     

新生儿肠道双歧杆菌数量影响因素与其婴儿期腹泻关系

目的探讨新生儿肠道双歧杆菌数量的相关影响因素,并明确它们与婴儿期腹泻的关系。方法以120例新生儿为研究对象,生后5-7 d均做大便双歧杆菌定量培养,并做相关因素的准确登记,同时严密观察随访至1岁,准确记录其发生腹泻情况。结果母亲分娩方式、临产期及产后是否使用抗生素、母亲妊娠期饮食习惯以及新生儿黄疸期长短与新生儿肠道双歧杆菌数量有相关性。新生儿黄疸期长、母亲临产期及产后使用抗生素均是婴儿腹泻的危险因素;阴道分娩、母亲喜发酵制品及喜素食均是婴儿腹泻的保护因素。结论为避免导致新生儿肠道双歧杆菌数量不足的影响因素,提倡阴道分娩、临产期及产后不用抗生素、妊娠期多食发酵制品和素食,并尽量设法缩短新生儿黄疸时间,以减少婴儿腹泻的发生。     

母乳蛋白核心岩藻糖基化有利于新生儿肠道双歧杆菌增长

目的 探究母乳蛋白核心岩藻糖基化水平的高低对新生儿肠道双歧杆菌丰富度的影响。 方法 采用凝集素印记(Lectin Blot, LB)检测不同母乳样品的母乳蛋白核心岩藻糖基化水平,根据蛋白核心岩藻糖基化水平的高低将母乳样品分为两组;采集两组母乳样品对应喂养的新生儿的粪便,通过 16S RNA高通量测序的方法检测两组婴儿粪便中菌群的构成。 结果 母亲母乳蛋白核心岩藻糖基化水平高组相对于低组,其对应的新生儿肠道中双歧杆菌丰富度显著增高。 结论 高核心岩藻糖基化的母乳可以促进子代肠道中双歧杆菌的优势生长。     

长双歧杆菌发酵培养基的优化

目的对长双歧杆菌液态发酵培养基进行优化。方法以长双歧杆菌（Bifidobacteriumlongum）为发酵菌株,以MRS培养基为基础培养基,以发酵液活菌数为指标,通过单因素添加实验考察发酵培养基的碳源和氮源的种类,并验证优化后培养基的效果。结果优化后培养基的最适碳源为葡萄糖,最适氮源为酪蛋白胨、牛肉蛋白胨、水解乳蛋白,发酵液活菌数达到2．09×10^9CFU／mL,比原MRS培养基（1．22×10^9CFU／mL）提高了71．30％。结论优化后培养基优于原MRS基础培养基,可应用于长双歧杆菌的液态发酵。     

健康蒙古族人肠道中乳酸菌和双歧杆菌多样性

【背景】越来越多的研究发现人类的诸多疾病与肠道菌群失衡有关。乳酸菌和双歧杆菌属于肠道中的有益菌,在不同人群肠道中的多样性不尽相同。【目的】在种水平上分析健康蒙古族人群肠道菌群中乳酸菌和双歧杆菌的多样性。【方法】以27名健康蒙古族志愿者为研究对象,其中14名来自中国内蒙古,13名来自蒙古国。首次采用乳酸菌和双歧杆菌的特异性引物扩增与PacBioSMRT三代测序技术相结合,在种水平上探讨志愿者肠道中乳酸菌和双歧杆菌的丰度和生物多样性,并进一步分析性别、BMI(Bodymassindex)值和地域对上述两者可能的影响,以及优势菌种之间的相关性。【结果】在种的水平上,27名志愿者肠道样品中共鉴定到68个乳酸菌和11个双歧杆菌,其中平均相对含量在1%以上的乳酸菌有8个,包括唾液链球菌(Streptococcus salivarius,36.41%)、瘤胃乳酸杆菌(Lactobacillus ruminis,17.94%)、德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii,3.11%)、罗氏乳杆菌(Lactobacillus rogosae,2.23%)、轻型链球菌(Streptococcus mitis,2.18%)、阴道乳杆菌(Lactobacillus vaginalis,2.02%)、魏斯氏乳杆菌(Weissella confusa,1.54%)和鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus,1.09%);双歧杆菌有5个,包括青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis,39.88%)、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum,27.15%)、链状双歧杆菌(Bifidobacterium catenulatum,26.30%)、两歧双歧杆菌(B. bifidum,3.92%)和角双歧杆菌(Bifidobacterium angulatum,1.71%),聚类分析分为链状双歧杆菌和青春双歧杆菌2个主要的类群。分析结果显示:性别、BMI值和地域均未能显著影响志愿者肠道中乳酸菌和双歧杆菌的菌群结构(P0.05),但男性和女性之间、中国内蒙古地区和外蒙古国的志愿者之间的个别乳酸菌菌种相对含量存在显著差异(P0.05)。对样品中的优势乳酸菌和双歧杆菌进行Spearman相关性分析发现,乳酸菌和双歧杆菌彼此之间相关性较为密切,不同菌种间相关性不尽相同,与具体的菌种有关。【结论】首次采用PacBio SMRT测序技术在种的水平揭示了健康蒙古族人肠道中乳酸菌和双歧杆菌菌种多样性,为在种水平上解析肠道中乳酸菌和双歧杆菌多样性提供了新的研究思路和实施方案。     

新生儿肠道双歧杆菌数量与其相关影响因素的探讨

目的　探讨影响新生儿肠道双歧杆菌数量的相关因素。方法　以重庆医科大学附属二院和重庆市妇幼保健院的12 0例新生儿为研究对象,每例生后5～7d,均采集新鲜大便做双歧杆菌定量培养,并做10个相关因素的准确登记。结果　母亲分娩方式、临产期及产后是否使用抗生素、母亲妊娠期饮食习惯以及新生儿黄疸期长短与新生儿肠道双歧杆菌数量有相关性( P均<0 .0 1)。结论　提倡阴道分娩、临产期及产后不用抗生素、妊娠期多食发酵制品和素食,并尽量设法缩短新生儿黄疸时间,均有益于新生儿肠道双歧杆菌数量相对充足     

婴儿肠道双歧杆菌多样性的研究进展

双歧杆菌是婴儿肠道中最丰富的微生物,对婴儿肠道微生物的成熟和稳定有显著影响,与婴儿健康紧密相关。大量研究表明,婴儿肠道中最广泛存在的双歧杆菌有长双歧杆菌、短双歧杆菌和两歧双歧杆菌。母婴之间垂直传递可直接影响婴儿肠道中双歧杆菌各种属的早期定植和相对丰度变化,特别是分娩方式和喂养方式会显著影响婴儿肠道双歧杆菌。此外,胎龄和辅食等因素对婴儿肠道中双歧杆菌的组成与多样性也有一定影响。本文对婴儿肠道双歧杆菌的种属组成、相对丰度变化以及影响其多样性的因素进行了综述,为婴儿双歧杆菌群落的认识提供一定的理论依据。     

双歧杆菌小鼠肠道定植的优化

目的评价自制的小鼠灌肠器灌肠效果,并探讨双歧杆菌定植的优化方式,更好地建立双歧杆菌在结肠的定植模型。方法选用SPF级C57BL小鼠40只,每组10只,随机分成4组：正常对照组,常规灌胃组,市售灌肠组,自制灌肠组。从市面不同的材料中筛选小鼠灌肠管,并设计小鼠专用灌肠器。记录不同灌注方式时隐血试验等一般指标检测。RT-PCR检测4组脾脏TLR2 mRNA表达水平。免疫组化观察颈动脉血管HGF蛋白水平。体外模拟不同pH值检测双歧杆菌定植HT-29细胞的粘附水平。结果自制的灌肠器在小鼠灌肠操作过程中明显优于市售灌肠器;自制灌肠组隐血试验明显低于市售灌肠组（P〈0.01）;RT-PCR结果显示,自制灌肠组效果最强,市售灌肠组次之,常规灌胃组一般,但均高于正常对照组;HGF的免疫组化显示,自制灌肠组表达最强;粘附试验显示双歧杆菌在pH 7.0环境中粘附能力优于pH 4.5。结论双歧杆菌在结肠定植采用灌肠方式优于灌胃方式;自制灌肠器优于市售灌肠器;优化灌肠液,采用自制的灌肠器灌肠同时优化灌肠操作,能够在小鼠结肠建立较好的双歧杆菌定植模型。     

双歧杆菌的检测与鉴定

根据国内、外近期研究成果,本文综述了双歧杆菌的检测及鉴定方法的研究进展,包括糖发酵法、薄层层析法、生物酶法、免疫学方法以及分子生物学方法的进展,并对其优、缺点进行了分析。     

RAPD分析快速鉴定双歧杆菌

本文应用ＲＡＰＤ技术,选用１１种引物,以嗜酸乳杆菌为对照,对６种１３珠双歧杆菌菌株基因组ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增,分析其ＤＮＡ指纹图谱,并计算其相似性指数。结果表明,双歧杆菌和非双歧杆菌之间,其相似性指数有显著差异;选择合适的引物进行扩增,双歧杆菌不同种间和同种不同株间可表现不同的ＤＮＡ指纹图谱。本文还对ＲＡＰＤ技术应用于双歧杆菌分类鉴定的可能性进行讨论。     

轮状病毒所致幼儿腹泻中肠道双歧杆菌的动态变化

测定36例轮状病毒腹泻幼儿的粪便双歧杆菌数量,与15例健康小儿对照,并对5例轮状病毒腹泻患儿自发病早期至愈后一周作双歧杆菌的动态定量分析,结果提示双歧杆菌在腹泻早期(3天以内)未表现明显脱水时数量不减,腹泻过程中则减少,减少的程度与脱水程度有关。对双歧杆菌在轮状病毒腹泻过程中的作用作了讨论。     

水貂粪便中双歧杆菌的分离与鉴定

目的运用TPY培养基,从健康水貂的粪便中分离培养、筛选出2个肠道菌株。方法细菌培养、菌落形态观察、染色镜检、分离纯化、生化试验和药敏试验。结果分离培养出的2株菌株为双歧杆菌,其中1株为长双歧杆菌,另1株为青春双歧杆菌;双歧杆菌对氯霉素极其敏感,对阿米卡星耐药。结论本实验为毛皮特种经济动物微生态制剂的研究工作奠定了基础。     

双歧杆菌奶粉对幼儿肠道内环境影响

将分离到的短型双歧杆菌 CT5 0 6 6制成菌粉 ,同脱脂奶粉及 L actosucrose混合后即为试验用“双歧奶粉”,其中含短型双歧杆菌 CT5 0 6 6 :10 8CFU / g、L acto- sucrose:6 0 mg/ g。给 8名婴幼儿 (1.0～ 6 .0岁 ,离乳 )每天服用 2 5 .0 g。分别于服用前及服用 1周后、2周后及服用结束 1周后 ,检测服用儿肠内细菌群及腐败产物的变化。双歧杆菌数由服用前的 9.99± 0 .16 (log(CFU ) / g)升高到 2周后的 10 .6 1± 0 .16 ,有十分显著性差异。双歧杆菌数占肠内细菌总数的百分率由服用前的 (2 2 .1± 10 .2 ) %升高到 2周后的 (5 2 .6±12 .2 ) % ,有显著性差异。腐败菌数亦显著下降 ,与服用前相比有显著性差异。粪便中的短链脂肪酸尤其是乙酸及乳酸量显著升高 ,分别由服用前的 (2 35 .5 1± 41.3)μmol/ g、(77.15± 44 .4)μmol/ g升高到服用 2周后的 (311.5 5± 30 .8)μmol/ g、(115 .12± 2 4.2 )μmol/ g,有显著性差异。粪便中的腐败产物显著降低 ,有非常显著性差异。服用 2周后粪便中的吲哚、粪臭素等的含量与服用前相比显著降低 ,有非常显著性差异。服用期间粪便的 p H值显著降 ,有显著性差异。上述结果表明 ,服用“双歧奶粉”后 ,8名服用儿的肠内细菌群及肠道内环境得到改善。     

响应面法优化两歧双歧杆菌发酵培养基

根据两歧双歧杆菌的营养需要和生长特性,采用响应面分析法对两歧双歧杆菌的培养基进行优化研究。先用Plackett-Burman设计法实验确定重要因素,再用最陡爬坡实验法确定因素水平,最后用响应面分析方法求得的最佳培养基配方为经优化的发酵培养基配方为:酪蛋白胨1.0%,大豆蛋白胨0.5%,酵母膏1.63%,半胱氨酸盐酸盐0.0076%,低聚果糖0.13%,葡萄糖0.5%,K2HPO4 0.2%。用此优化的发酵培养基培养两歧双歧杆菌,活菌数可高达7.8×10~9 cfu/ml。     

应用TGGE技术分析人肠道中双歧杆菌的组成

用温度梯度凝胶电泳(TGGE)技术结合16SrDNA克隆、测序,对健康人肠道中双歧杆菌的组成进行了分析。10例健康人肠道双歧杆菌的TGGE分析显示:人肠道内双歧杆菌的组成具有宿主特异性,不同人肠道双歧杆菌种的多样性和种类不同。通过对一健康儿童肠道双歧杆菌属特异性PCR扩增产物的测序及TGGE电泳行为的分析发现,该个体双歧杆菌TGGE图谱中的条带分别代表Bifidobacteriumbifidum、B.infantis、B.longum、B.adolescentis、B.pseudocatenulatum等种和一新种,其中B.pseudocatenulatum(假小链双歧杆菌)是大多数个体共有且较优势的种类。用传统培养方法只检出B.pseudocatenulatum和B.longum两种。基于双歧杆菌属特异性PCR基础上的TGGE方法结合16SrDNA克隆文库分析可较灵敏、直观地反映人肠道中双歧杆菌的组成。