GFE-1多肽与重组人肿瘤坏死因子α融合蛋白的构建及其体外活性和体内分布研究

目的:构建 GFE-1多肽与重组人肿瘤坏死子α(rmhTNF-α)融合蛋白(GFE-1-rmhTNF),研究该融合蛋白的体外活性和体内分布.方法:利用基工程方法,将人工合成的编码 GFE-1的寡核苷酸片段连接在 rmhTNF-α序列的3'端,转入大肠杆菌中诱导表达,采用 Q-Sepharose FF 离子层析柱和 SP-Sepharose FF 阳离子层析柱纯化蛋白,SDS-PAGE 和 Western 印迹鉴定,测定该融合蛋白的体外活性,观察其在小鼠体内的分布情况.结果:构建了融合蛋白 GFE-1-rmhTNF,并在大肠杆菌中获得高效表达.体外活性实验显示,GFE-1-rmhTNF 对 L929细胞有明显的杀伤活性;体内分布实验证实,GFE-1-rmhTNF 在小鼠肺组织的富集高肝肾组织.结论:构建了融合蛋白 GFE-1-rmhTNF,可显著杀伤 L929细胞并特异性富集小鼠肺组织.     

卵泡抑素生理功能研究进展

自20世纪80年代人们从猪和牛的卵泡液中发现卵泡抑素(Follistatin,FST)以来,关于FST的研究从未停止,并通过多种的体内体外实验发现了FST的多种功能作用。FST作为一种分泌型蛋白存在于哺乳动物体内的各种组织器官内,并由多种组织器官分泌,在激素调节,能量代谢,肌肉脂肪组织增殖分化方面具有重大作用。由于FST是从性腺中发现的,人们对于FST调节性激素分泌与信号传递,促进卵母细胞成熟和胚胎发育研究的较为透彻,进行过多个物种的动物实验,查明其作用机制。并且FST作为TGF-β超家族(Transforming growth factor-βsuperfamily)的抑制剂,可以特异性与其一员抑肌素(Myostatin,MST)相结合并产生拮抗作用,促进机体肌肉增殖、分化和膨大。棕色脂肪作为哺乳动物体内重要的代谢组织,一直是人们研究的热点,近年来发现FST可以促进棕色脂肪分化,诱导白色脂肪棕色化,并在细胞实验与小鼠实验中得到验证。对FST及其重要功能进行介绍,简要阐述了不同功能的作用机理及发展前景,旨在为日后FST的进一步研究和开发奠定基础。     

分泌抗脊髓灰质炎 Ⅱ型病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞系

许多年来细胞生物学家进行了很多有关细胞杂交的实验研究,将具有不同遗传特性的两种动物细胞进行融合,形成一种新的杂交细胞,用来进行特定基因在染色体上的定位、基因表达以及动物细胞其它遗传特性的变化等方面的研究。为了观察免疫球蛋白产生的遗传控制,许多实验室进行了小鼠骨髓瘤细胞与其它细胞系之间相互融合的试验。在这样的研究中,Khletr和Milstein 1975,1976)证明,培养的小鼠骨髓瘤细胞能够同用羊红血球免疫了的动物脾细胞发生融合,从中选择出少量的杂交瘤细胞,它可在体     

美国农业部主导的实验动物管理政策演变和启示

美国农业部《动物福利法》监管大中型动物如猴犬猫兔、海洋哺乳动物等的生产运输交易和使用等诸多商贸过程及其用于医学实验或非医学测试。该法规不管辖常用的实验室大鼠和小鼠,因而从动物类型上或从条例细则上不能全覆盖也不适合生物医学研究机构的实验动物管理。美国卫生署和NIH的动物政策管辖全美生物医学研究机构的脊椎类动物实验使用,被国际生物医学研究机构普遍借鉴采纳。美国的这两套动物法规管理体系,目的职能明显不同,既平行,又交叉和相互补充。本文介绍其主要沿革,侧重生物医学研究机构的实验动物使用与管理委员会组成和职能演变,期望对我国实验动物的使用和管理有所启示。     

小鼠主要脑区组织的优化急性分离法

实验小鼠具有体型小,基因特性明确,转基因或突变体品系多,饲养方便,繁殖迅速等优点,已被广泛应用于现代生物学、医学、药理学和心理学研究。在大量采用小鼠为受试对象的同时,国内外研究者也越来越重视实验动物的保护。最大限度地利用实验动物,并尽可能地减少动物使用量,这也是国内外实验室一直追求并建立的理念。本文总结了本实验室快速分离获取小鼠不同脑区新鲜组织用于蛋白免疫印迹和神经细胞培养的经验,旨在为实验初学者提供指导的同时,也为提高实验动物的利用率和降低动物使用数量提供思路和方法。     

汉坦病毒核酸疫苗在小鼠体内表达分布的初步研究

运用生物荧光技术,肌肉免疫接种小鼠含汉坦病毒S抗原基因片段的核酸疫苗,观察重组核酸疫苗在其体内的表达分布。进一步探讨汉坦病毒核酸疫苗的应用前景。扩增纯化已构建好的含有汉坦病毒S抗原基因片段和绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组质粒pEGFP/S;免疫接种小鼠胫前肌,观察pEGFP/S在小鼠体内的表达分布。免疫接种3 d后在实验组小鼠肝、肾、脾、肌肉各组织均检测到较强的绿色荧光。重组质粒pEGFP/S能在小鼠的多个组织器官表达,为深入研究汉坦病毒核蛋白和有效的核酸疫苗奠定了基础。     

重组肌肉抑制素功能分析及其对鸡肌肉发育的抑制作用

肌肉抑制素 (myostatin)为TGF β超家族成员 ,具有典型的TGF β家族成员特有的分子结构与功能。为了深入阐明肌肉抑制素的作用机制 ,研究了重组肌肉抑制素蛋白对鸡胚成肌细胞和小鼠C2 C1 2 成肌细胞增殖与分化的作用 ,同时制备了肌肉抑制素特异性抗体。实验结果表明 ,重组肌肉抑制素对于成肌细胞的增殖过程具有极强的抑制作用 ,主要表现为抑制细胞周期由G1 期向S期的过渡 ,细胞生长速度显著变慢 ;同时重组肌肉抑制素也抑制成肌细胞分化为多核的融合肌管细胞 ,抑制肌肉分化标志myogenin和MHC的表达。由重组蛋白质制备的抗体能够特异性地识别人、小鼠、大鼠和鸡肌肉组织的内源肌肉抑制素。此外 ,通过免疫荧光技术还证实 ,肌肉抑制素主要定位于胞液中     

血锌与肝锌,骨骼锌及肌肉锌的相关性研究

用~(65)Zn同位素示踪法研究了不同年龄LACA小鼠体内血锌与肝脏锌、骨骼锌及肌肉锌的相关性。实验结果表明,血锌的代谢与骨骼内锌及肌肉内锌的代谢有明显的相关关系,而与肝脏内锌代谢无相关关系;骨骼及肌肉中锌含量占全身锌含量的90％,上述结果提示血锌的监测可反映体内锌的水平。     

肌电训练康复仪

前言信息科学领域中,生物电信息的研究已越来越引起人们的重视。其中,肌肉生物电话的研究,不仅能对判断神经肌肉系统机能及形态学变化提供依据,也有助于精经肌肉系统的研究或提供临床诊断。尤其引人注目的,是在生物医学工程与康复工程学科领域中,利用骨骼肌的肌肉生物电能反映人脑运动区活动的这一特点,研制成功的肌电控制假手,能按照人的运动意志来进行操作,因而受到残肢者的欢迎。肌电假手安装条件,除了残端状况外,残肢肌电发放条件是个关键,主要有两项指标:(1)肌电发放强弱;     

ADA-LacZ融合基因直接注射导入小鼠皮肤组织后的表达

将ADA－LacZ融合基因经直接注射导入小鼠皮肤组织,用注射点处的皮肤组织制作冰冻切片,经组织化学方法显示：此融合基因可在皮肤成纤维细胞中表达一种具有腺苷脱氨酶（ADA）和β-半乳糖昔酶（β-gal）双重酶活性的融合蛋白,这种直接将融合基因导入体内进行表达的方式．为在基因治疗和基因疫苗研究中探索一条新的简便可行的外源基因在体内表达的途径,提供了有益的实验依据。     

成体干细胞的性别与疗效有关

干细胞与性别有关.根据一项新研究,取自雌性小鼠的肌肉干细胞用来修复损伤组织要比雄性小鼠的好.这是首次表明,干细胞的再生能力与性别有依赖关系.通常研究者并不专门用文件证明他们用来研究的干细胞系是取自雄性还是雌性.科学家如果仅考虑应用干细胞的一种性别,难免得出有偏见的结果.研究者开始考虑所应用的干细胞的性别作用.因为研究者认识到,多年来所应用的干细胞系都是选择其再生能力好的,而这些干细胞都是取自雌性.为分别研究干细胞雌雄性别的影响,研究者培养了来自15个雌性小鼠与10个雄性小鼠的健康肌肉组织的干细胞系.取自成熟动物组织的肌肉干细胞不象胚胎干细胞那样,会引起很多争论,而且可以不用杀死动物便提取出来.研究者将肌肉干细胞插入罹患类似人类肌肉营养障碍疾病的小鼠体内.两星期后,研究者计数由干细胞产生的健康肌肉纤维.只有1个雄性小鼠的干细胞系产生3 200多根新肌肉纤维,而却有6个雌性细胞系各产生这么多肌肉纤维.研究者在2007年4月9日的Journal of Cell Biology上作了报道.一位专司研究成体干细胞性别差异的科学家说,这是一个关于干细胞研究的新观念,说明干细胞的性别是有重要关系的.研究者说,这可以追溯到X和Y染色体上的某种差别,但其真相尚未了解.对于这种差异的真正机制可能要花几年时间去破解.在最近的研究工作中,研究者发现,某些应激反应基因在其插入的雌性干细胞中比雄性干细胞中活性更高.移植使细胞承受了应力,故研究者提示,在应激反应中性别差异很可能解释移植结果的差异.了解干细胞性别差异的机制,对于临床医师在治疗中用移植干细胞修复损伤组织时很可能有用.例如,研究者可以找到一种方法,将雌性干细胞性能改造雄性干细胞,从而提高未来疗法,即改变并重新插入男子自身干细胞疗法的成功率.     

EV71小鼠适应株制备及体内外感染特点

目的用1日龄ICR小鼠传代制备EV71小鼠适应株,研究EV71亲代株与小鼠适应株的体内外感染特点,建立EV71感染ICR小鼠动物模型,为病毒疫苗和抗病毒药物的研究提供实用的动物评价工具。方法用1日龄ICR小鼠进行EV71病毒(Fuyang-0805)的传代,得到小鼠传代株。以一定浓度亲代株和传代株病毒分别接种RD、Vero、SY5Y、Caco-2四种细胞,定量方法检测各时间点不同毒株在四种细胞上的复制数量,CCK8方法测定各时间点细胞的存活率;同时,两毒株分别腹腔注射感染1日龄小鼠,定期安乐死动物,采集肺、小肠、骨骼肌、大脑四种器官组织,进行动物体内病毒半定量和定量分析,同时进行各器官组织病理学观察、免疫组织化学鉴定。结果与亲代毒株相比较,小鼠传代株(EV71-MMP4)表现出更强的肌肉来源细胞嗜性与毒性;同时,两毒株腹腔注射感染1日龄小鼠后,EV71-MMP4感染的小鼠体重增长较正常小鼠体重增长缓慢;半定量和定量RT-PCR显示,在小鼠肌肉中的病毒载量于感染后1d和5d达到高峰。EV71-MMP4感染组感染率较高、病毒组织分布较广、感染持续性较好、病毒载量较高,高剂量病毒感染后小鼠小肠、心肌和骨骼肌可观察到细胞空泡变性、淋巴细胞浸润等病理变化。免疫组织化学显示感染后小鼠骨骼肌有EV71病毒特异分布。结论阜阳EV71小鼠适应株表现出较亲代毒株更好的小鼠易感性、细胞毒性,所建立的动物模型可用于EV71病毒致病机制、感染特点的研究和病毒疫苗及药物的评价。     

同化类固醇对去势大鼠和小鼠提肛肌重量和肌糖元含量的影响

已有的资料指出,给去势大鼠注射同化类固醇的最初几天内,提肛肌内糖元含量明显增加。随后提肛肌开始迅速生长,而肌糖元含量逐渐减少。本文研究了同化类固醇对去势或正常大鼠与小鼠的提肛肌或 LBM 重量和对肌糖元含量的影响。结果表明,去势小鼠 LBM 生长速度与所给同化类固醇作用强度和剂量大小有关,但LBM 糖元含量与肌肉生长速度无平行关系。大鼠和小鼠去势后提肛肌和 LBM 重量明显减轻,但糖元含量并不减少。胰岛素和可的松可引起小鼠 LBM 糖元明显增加,但肌肉重量并未增长。MT 刺激小鼠精囊的生长,但精囊的糖元含量反而下降。给去势大鼠注射 TP 后,提肛肌、胫前肌和股直肌糖元含量均有显著增加,然而三种肌肉重量与对照组比较,唯提肛肌重量有显著增加。此外,TP 虽促进大鼠提肛肌的生长,而体外试验表明,给药动物提肛肌利用葡萄糖的能力与对照动物并无显著不同。以上结果似可说明,同化类固醇促进肌肉生长的作用非继发于肌糖元含量的增加。至少可以说,同化类固醇促进糖的利用不是引起肌肉生长的主要条件。     

C4亚型人肠道病毒71型的小鼠肌肉适应株对小鼠具有致死毒力

目的人肠道病毒71型（EV71）感染婴幼儿可导致手足口病,偶尔伴随有严重的并发症。建立EV71的小鼠模型是深入研究病毒感染的致病机制、进行疫苗和药物评价的基础。方法将EV71的临床分离株在小鼠骨骼肌中进行系列传代,得到了小鼠的肌肉适应株MP10。使用MP10经腹腔注射感染10日龄ICR小鼠,对感染小鼠的症状、病毒复制和病理进行了监测。结果与临床分离株相比,MP10对人横纹肌瘤细胞（rhabdomyosarcoma cell,RD细胞）的感染力提高,并且对小鼠的毒力增强,MP10感染10日龄小鼠可导致其瘫痪和死亡。病毒主要在骨骼肌中复制,并引发大面积的坏死性肌炎,同时神经组织未观察到病变。病理分析发现：感染小鼠体内与呼吸运动相关的肌肉均发生严重的坏死性肌炎,推测此类肌肉的坏死会影响小鼠的呼吸功能,从而成为导致小鼠死亡的因素之一。结论建立了C4亚型EV71毒株感染10日龄ICR小鼠的模型,该模型可作为研究EV71感染的致病机制、以及疫苗和药物评价的工具。     

弥猴单侧软腭肌肉对针式电极刺激的反应

目的建立针电极口内刺激猴软腭肌肉诱发腭咽闭合运动的模式,取得软腭肌肉运动的有效刺激数值,为软腭肌肉功能重建奠定基础。方法通过解剖成年猕猴软腭的五组肌肉,确定其体表位置;利用实验动物用腭部肌肉电极定位刺激器及针式电极对软腭肌肉进行有效刺激;结合鼻咽纤维镜、头颅侧位X片及软腭造影技术观察、记录肌肉收缩及腭咽闭合动作。结果在猕猴口内定位目标肌肉进行针电极刺激可诱发肌肉收缩。刺激电压为3 V、刺激频率为20 Hz时均能诱发单侧软腭肌肉的有效收缩;单侧腭帆提肌在刺激电压为5 V、20 Hz时可发生腭咽闭合动作。咽腭肌、舌腭肌在刺激电压5 V、刺激频率100 Hz时发生软腭下降动作。腭帆张肌仅发生收缩,而未发生腭咽闭合。应用鼻咽纤维镜和X线成像技术配合能记录腭咽闭合动作。结论弥猴可作为研究软腭肌肉运动模式的实验动物。应用电极刺激软腭肌肉,可初步建立腭咽闭合的动作模式。     

小鼠胚胎干细胞体外发育分化模型

胚胎干细胞 (Embryonicstemcell ,EScell)是多潜能性细胞 ,它在体外既可维持不分化而无限增殖 ,又能参与胚胎发育分化为各种类型细胞和组织而形成器官 ;小鼠ES细胞可供的数量大、在体外培养条件可进行精确调控、实验比较经济加上现代基因及其他生物操作等技术 ,因此小鼠ES细胞体外发育分化系统被广泛地作为模型系统加以利用。小鼠ES细胞体外发育分化研究为推动其他哺乳类动物以及人的ES细胞研究 ,从而将更好地进行细胞、组织工程实验为人类细胞组织和基因治疗服务创造了有利条件。本文将ES细胞体外发育分化情况加以概述 ,以便更好地开展ES细胞体外研究     

医学病毒学生物安全三级动物实验室的建立

目前国内多个机构已建立了BSL-3实验室,这些实验室能够满足细胞水平和动物水平的病原微生物实验活动.医学病毒学生物安全三级动物实验室(ABSL-3)可分为小动物实验室和中(大)动物实验室.小动物实验室主要开展小鼠、大鼠、仓鼠等啮齿类动物的感染性实验活动;中(大)动物实验室主要开展小型猪、猴等实验.动物三级实验室特别是开展中(大)动物实验的高等级实验室,其实验室布局,设备设施,管理体系及流程会有很大的差别.本文从使用者的角度,通过所在机构医学病毒学生物安全三级动物实验室(ABSL-3)的建设与实践,对于筹备和建立以及使用过程中的所面对的问题以及应对,进行了提炼和归纳,分析和探讨,旨在为建设和使用医学病毒学高致病性生物安全三级动物实验室提供借鉴和参考.     

流体动力学法表达乙肝病毒X蛋白小鼠模型的建立

目的建立表达乙肝病毒X蛋白的小鼠模型。方法实验动物分成模型组和对照组,模型组利用已构建的含有HBX基因的真核表达质粒pcDNA3.1（＋）-HBX,对照组以等量生理盐水代替,采用流体动力学法将质粒经尾静脉高压注入小鼠体内,24h后取小鼠肝组织,行免疫荧光、RT-PCR和Western blot法从不同水平检测HBX在小鼠肝组织内的表达情况。结果模型组小鼠RT-PCR显示肝组织内有HBX mRNA的存在,免疫荧光和Western blot检测均有HBX蛋白的表达;对照组小鼠则无HBX表达。结论成功建立了表达乙肝病毒X蛋白小鼠模型,为进一步探讨HBX蛋白在动物体内的生物学作用提供实验基础。     

条斑紫菜多糖抗疲劳生物活性研究

主要应用活体动物实验技术,研究了纯化产物紫菜多糖的抗疲劳作用及量效关系。通过紫菜多糖PY-G1不同剂量对小鼠游泳时间、乳酸脱氢酶活性、肌糖原和肝糖原含量等指标的检测,分析了紫菜多糖提高小鼠抗疲劳生物活性功能及其量效关系。实验结果表明,紫菜多糖可显著延长小鼠游泳时间,最高可以提高37%;并且可以使小鼠在游泳前后乳酸脱氢酶含量分别增加35%和37.5%(P<0.05);增加小鼠肌糖原储备量和肝糖原储备量,其肌糖原储备量和肝糖原储备量最高可以分别增加85.6%和86%。实验结果表明,条斑紫菜多糖具有明显提高小鼠抗疲劳生物学活性。     

超级鼠和超级鱼：介绍转基因动物

转基因动物的研究最初是在小鼠体内进行的,成功地研究转基因小鼠,大约只有九年的历史。这个领域的研究涉及的范围较广,利用转基因小鼠,研究特异的基因在不同组织和不同发育阶段中的表达;有关癌基因机制的分析;免疫机制的研究以及对遗传疾病的了解等。转基因鼠的研究在这些领域里都作出过重要的贡献。什么是转基因动物我们以小鼠为例,将小鼠的受精卵取出,在显微镜下将基因用玻璃微管送入受精卵的精原核中。受精卵通常有两个原核,一个是由精