1．3倍体HBV YIDD变异株真核表达载体构建及鉴定

构建HBV YIDD拉米夫定耐药株1．3倍全基因真核表达载体,为进一步探讨乙肝病毒变异株的生物学特性及筛选抗病毒药物奠定基础。参考GenBankHBV序列设计并合成一系列引物,以临床证实为拉米夫定耐药的病人HBV DNA为模板,通过PCR扩增得到HBV全基因组并克隆至pGEM—T Easy载体中,经测序证实聚合酶基因存在YIDD变异,然后以该病人的HBV全基因组为模板构建1．3倍全基因HBV—YIDD变异真核表达载体pcDNA3．1（＋）-1．3HBV。通过PCR扩增,酶切及测序证明pcDNA3．1（＋）-1．3HBV表达载体构建成功,该表达载体的构建为后期建立稳定表达HBV—YIDD变异的细胞模型提供材料。     

人类免疫缺陷病毒感染者免疫功能重建不全的研究进展

约20%的人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染者在接受抗病毒治疗后,外周血CD4^＋ T细胞水平无法有效恢复,即免疫功能重建不全,但发生机制目前尚不明确。本文根据HIV感染者的临床和免疫学指标,分析发生免疫功能重建不全的风险因素;进一步从外周循环系统中T细胞损伤、细胞因子变化及肠道黏膜局部CD4^＋ T细胞删除等方面解析可能机制,其中肠道黏膜CD4^＋ T细胞删除可能与肠道微生物菌群诱导的细胞焦亡有关。虽然目前国际上有多项关于免疫功能重建不全患者治疗方案的临床试验,但由于缺乏一致的、有力的基础研究证据,导致疾病诊断指标缺乏,单独细胞因子给药治疗亦未取得突破性进展。因此,应深入探索免疫功能重建不全发生机制,进行大样本、长时间的前瞻性队列研究,制定免疫功能重建不全的临床与免疫学界定标准,从而为临床治疗提供科学依据。     

可卡因对外侧缰核神经元的作用及机制初探

目的：探讨可卡因对外侧缰核神经元的作用及可能机制。方法：腹腔注射可卡因,观察内、外侧缰核神经元c—Fos蛋白的表达;在外侧缰核微电泳可卡因,观察其痛相关神经元自发及痛诱发放电的改变：应用全细胞膜片钳技术观察可卡因对外侧缰核神经元延迟整流K^＋电流的影响：结果：①可卡因明显增加外侧缰核c—Fos蛋白表达,但不明显增加内侧缰核c—Fos蛋白表达。②微电泳可卡因至外侧缰核,引起外侧缰核痛兴奋神经元放电增加和痛诱发反应增强,痛抑制神经元放电减少和痛诱发反应减弱.③膜片钳研究显示,可卡因抑制外侧缰核延迟整流K^＋通道,导致K^＋电流减少。结论：外侧缰核神经元对可卡因有较高的敏感性,可卡因能兴奋多数外侧缰核神经元,可能是由于其抑制神经元延迟整流K^＋通道开放产生的.     

极端耐热纤维素酶Cel74的表达、纯化与特性

从海栖热袍菌中克隆出编码热稳定性的纤维素酶基因,以热激载体pHsh为表达质粒,构建重组质粒phsh—Ceff4,并转化至大肠杆菌中进行表达。基因表达产物通过热处理和离子交换层析,重组酶纯度达电泳纯。对纯化的重组酶酶学性质研究表明,最适反应温度85℃,最适反应pH4．6,pH4．5—6．0之间酶的相对酶活在80％以上。Co^2＋对酶活性有促进作用,Ca^2＋、Mg^2＋、Zn^2＋不影响酶活性,而Cu^2＋、Ni^2＋、Mn^2＋对酶活性有抑制作用。     

交感神经损毁术对自发性高血压大鼠血压和红细胞Na~＋外流动力学的影响

本实验研究了皮下注射６—羟多巴胺（６—ＯＨＤＡ）施行交感神经损毁术对成年自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）血压和红细胞Ｎａ＋外流动力学的影响。结果表明,在幼年期施行交感神经损毁术的ＳＨＲ血压显著低于未损毁组,同时红细胞Ｎａ泵驱动的的Ｎａ＋外流最大速率显著下降、Ｎａ＋－Ｋ＋外向协同转运系统的单位活性升高。三者均接近ＷＫＹ大鼠的测定值。相反,损毁成年ＳＨＲ交感神经不影响上述两个动力学参数,血压也未见明显改变。此外,不论幼年或成年期注射６—ＯＨＤＡ均可降低Ｎａ＋—Ｌｉ＋对向转运系统驱动的Ｎａ＋外流最大速率。上述结果提示,在ＳＨＲ早期发育过程中,交感神经营养因子可能降低Ｎａ＋—Ｋ＋外向协同转运活性,继而刺激Ｎａ泵代偿功能增强。这种现象可能同时存在于ＳＨＲ动脉平滑肌,因而是高血压产生的一个原因。关于交感神经损毁术后ＳＨＲ红细胞Ｎａ＋—Ｌｉ＋对向转运最大速率下降的机制尚不清楚,但与交感神经早期营养作用的消除无关。     

云雾山典型草原火烧不同恢复年限土壤化学性质变化

云雾山典型草原处于黄土高原半干旱地区,也是草原火灾多发区,试验比较了未烧地与新烧地、火烧后3 a和火烧后11 a土壤有机碳(SOC)、全N、全P和速效K含量的变化过程。测量的土壤深度为50 cm,每10 cm一层,比较了4个样地0—10 cm、10—20 cm、20—30 cm、30—40 cm、40—50 cm土壤养分的变化。结果表明:(1)新烧地土壤剖面各层SOC、全N、全P和速效K含量都显著高于未烧地。(2)火烧后3 a样地土壤剖面各层SOC、全N、全P和速效K含量与未烧地差异不显著。(3)火烧后11 a样地土壤剖面各层全N含量都显著高于未烧地,SOC、全P和速效K含量除了0—10 cm层与未烧地差异不显著外,其它土层均显著增加。(4)4个样地的土壤剖面各层从上到下SOC、土壤全N、全P和速效K含量呈递减趋势。(5)3个火烧样地土壤表层(0—10 cm)的pH值和未烧地差异不显著。     

广西黧蒴锥林群落分析

根据乔木层次优势种、灌木层优势种和草本层优势种将分布在广西的黧蒴锥（Castanopsis．fissa Rehd．et Wils．]林分为5个群丛,且各群丛的优势种均为黧蒴锥。对5个群丛的地理分布、生境特点、群落结构和物种组成也进行了分析。这5个群丛分别为：黧蒴锥-鼠刺-杜茎山-狗脊＋金狗群丛（C．fissa-ltea chinensis—Maesa japonica—Woodwardia japonica＋Cibotium barometz Assoc．）、黧蒴锥-鸭脚木-罗伞树＋东方乌毛蕨群丛（C.fissa—Schefflera octophylla—Ardisia quinquegona＋Blechnum orientale Assoc．）、黧蒴锥-鸭脚木-九节木＋东方乌毛蕨群丛（C．fissa—Schefflera octophylla—Psychotria rubra＋Blechnum orientale Assoc．）、黧蒴锥-基脉润楠-野锦香-金狗＋东方乌毛蕨群丛（C．fissa—Machilus decursinervis—Blastus cochinchinens-Cibotium barometz＋Blechnum orientale Assoc．）和黧蒴锥-茶杆竹＋淡竹叶群丛（C．fissa-Pseudosasa amabilis＋Lophatherum gracile Assoc．）。     

羊草草原土壤微生物的分布及其与土壤因子间的关系

 本文较系统地研究了东北羊草草原土壤微生物的分布规律和环境因子对微生物分布的制约作用。结果表明：微生物的数量、生理群的数量及微生物总生物量在羊草和杂草群落土壤生境中均最高,而碱茅和碱蓬群落生境中最低,隐子草群落生境居中。土壤全磷、全氮、全钾、pH和活性有机质对微生物有较大的直接作用,通径系数为6.15—2.02。全氮—全磷、活性有机质-全磷、pH-全磷、pH-全钾、全钾—全磷、活性有机质—全氮、活性有机质—全钾和有机质—全氮之间的间接作用对微生物影响最明显,作用系数为5.94—2.90,其余因素的作用相对不显著。     

臭牡丹根伍用小剂量环磷酰胺治疗慢性肾炎16例

目的：探讨臭牡丹根伍用小剂量环磷酰胺治疗慢性肾炎的疗效。方法：本文采用臭牡丹根伍用小剂量环磷酰胺（cyclophos-phamide,CTX）治疗慢性肾炎16例,其小剂量CTX用量为200 mg/日,采用静脉滴注的连续给药方式,其总有效率为93.75%,且BUN、Scr明显下降,复发率为6.25%,无明显的毒副作用。结果：臭牡丹根伍用小剂量环磷酰胺治疗慢性肾炎疗法疗效显著,肾功能改善明显,复发率低,且该单味中药来源广泛,使用方便。结论：臭牡丹根伍用小剂量环磷酰胺治疗慢性肾炎,不失为一种治疗慢性肾炎值得推广的方法。     

不同阴离子对二色补血草盐腺Na＋分泌速率的影响

本文以二色补血草（Limonium bicolor）为实验材料,用Hoagland营养液和200mmol·L—NaCl、NaBr、NaNO3溶液分别处理12h,测定二色补血草盐腺的Na＋分泌速率、叶片Na＋含量和MDA（丙二醛）含量以及质膜透性,并利用非损伤微测技术探索可能与盐腺相关的转运蛋白,以探讨不同阴离子对二色补血草盐腺分泌Na＋的作用及其可能原因。结果表明：在NaCl处理12h时二色补血草叶片Na＋分泌速率达到最大,然后逐渐下降;不同钠盐处理下叶片Na＋分泌速率为NaCl〉NaBr=NaNO3〉Hoagland,而叶片Na＋含量NaBr〉NaCl〉NaNO3〉Hoagland;不同盐处理下叶片质膜透性和MDA含量无显著性差异;利用Na—K—C1共转运体专一性抑制剂bumetanide处理发现Na＋分泌速率显著降低。这些结果表明Na—K—Cl共转运体可能参与盐腺分泌Na＋。     

染病刺参凝集素的分离纯化与性质比较

目的：研究刺参免疫机制,探寻其发病机理。方法：刺参（Apost／chopusjapon／cus）经磷酸盐缓冲溶液抽提、20—75％硫酸铵分级沉淀、DEAE—SepharoseF．F．和SephadexG一100柱层析,得到刺参凝集素（A几）。结果：经SDS—PAGE显示单一条带,亚基相对其分子量为31000。分别提取感染Tenacibaculum属和Vibrionaks属两种刺参烂皮病病原菌的刺参凝集素,感染Temcibaculum属病菌刺参的凝集素产量较大,但凝集兔红细胞的作用均不被所测试的单糖和寡糖所抑制,而仅被牛甲状腺球蛋白所抑制。凝集兔红细胞的作用均不被二价金属离子Ca2＋、Mg2＋、Mn2＋、Zn2＋及EDTA所抑制。在pH4．0。10．14系列缓冲液中均有活性,其中在pH4．0—7．5时活性最大。该凝集活性在90℃加热30min后凝集活性仅损失50％。结论：推断菌株Tenac／bacu／um可诱导刺参体内产生大量的凝集素。     

人外周血单核细胞来源的树突状细胞的体外“2＋2”陕速法培养及其鉴定

以人浓缩白细胞来源的CD14^＋单核细胞为前体,建立体外快速培养树突状细胞（dendritic cell,DC）的方法。采用密度梯度离心和MACS磁珠分选系统,收集高纯度的CD14^＋单核细胞：以rGM—CSF、rIL-4联合分化2天诱导不成熟DC,再将分化后的细胞以rTNF-α,IL-1β、IL-6、PGE2共同活化2天得到成熟DC。流式细胞仪检测结果表明,分化2天的不成熟DC具有吞噬能力,且表型HLA—DR、CD40、CD80表达在80％以上,CD83、CD86基本不表达,成熟后的DC能够激活T细胞增殖,HLA—DR表达增高,CD83、CD86表达占85％。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对CD4^＋CD25^＋调节性T细胞免疫抑制功能的影响

目的探讨牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,Pg）对CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（regulatory T cells,Tregs）免疫抑制功能的影响。方法采用酚水法提取Pg ATCC 33277株脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）。免疫磁珠法分离BALB／c小鼠脾脏CD4^＋CD25^＋Tregs并进行体外培养,同时给予不同剂量（0～500ng／ml）Pg—LPS干预,培养48h后收集细胞及上清液。Real-TimePCR法测定培养细胞Foxp3mRNA的表达,ELISA法分别测定细胞上清液中IL-10、TGF-β水平;采用体外淋巴细胞混合培养法对Pg-LPS干预后的CD4^＋CD25^＋Tregs进行功能抑制试验。结果Pg-LPS干预不影响CD4^＋CD25^＋Tregs分泌IL-10和TGF-β,但是能够显著上调CD4^＋CD25^＋TregsFoxp3mRNA的表达,增强其免疫抑制作用;当Ps—LPS浓度低于300ng／m1时,CD4^＋CD25^＋TregsFoxp3mRNA表达以及免疫抑制作用的增强与Ps—LPS浓度之间呈剂量-效应关系。结论Pg-LPS能够增强CD4^＋CD25^＋Tregs的免疫抑制作用,这种免疫抑制增强效应可能与CD4^＋CD25^＋Tregs Foxp3基因表达的上调有关,并且不具有抑制性细胞因子依赖性。     

产脂肪酶木霉菌株的筛选鉴定及酶学性质研究

筛选到4株可产生脂肪酶的真菌菌株,分别是153—1、13—2、30425和西1-1,经形态观察、ITS序列测方法鉴定,30425、153—1鉴定为Trichoderma harzianum,西1-1、13—2鉴定T.longibrachiatum。研究了脂肪酶的基本酶学性质,153—1、13-2、30425和西1-1酶的最适作用温度为45℃、40℃、20℃、20℃,最适pH为9．5、10．0、7.5、9．5,金属离子对153—1、13—2、30425和西1-1酶活的影响存在差异,其中Mn^2＋、Cu^2、Pb^2＋对4株菌株的酶活均为抑制作用,而Ba^2＋对4株菌株的酶活均为不同程度的激活作用。     

肾脏疾病患者体液氨基酸模式

使用 DNS— cl( Dimethylamino-naphthylane-5-sulfony chloride)荧光试剂 ,标记氨基酸成 DNS— AAs( DNS_ Amino Acids) ,然后采用聚酰胺薄膜层析 ,制成具有 2 0余种 DNS— AAs的荧光薄膜层析图谱 ,选择其中所需要检测的氨基酸 ,分别经洗脱后在日本岛津 RF— 51 0荧光分光光度计上 ,进行定量检测 ,分析了 3 6例慢性肾炎患者 ,1 8例尿毒症患者血浆中 1 2种游离氨基酸和 3 5例慢性肾炎患者尿液中 1 3种游离氨基酸 ,分别与 2 9例正常人血浆和3 0例正常人尿液中游离氨基酸进行了比较 ,以此探讨肾脏疾病体液氨基酸模式的同时提供氨基酸治疗肾脏疾病的科学依据。     

手性Schiff－Base在手性PTC条件下的双不对称诱导烷基化

本文报道了以苯甲醛甘氨酸酯〔乙酯,（—）—簿荷醇酯〕西佛碱作为反应底物,烯丙基溴,溴苄,对硝基溴作为烷基化试剂,在以（—）—Ｎ—基氯化辛可宁丁,（＋）－Ｎ基氯化辛可宁作为催化剂的固液相转移条件下的双不对称诱导烷基化反应,进而水解得到α—光学活性氨基酸。光学产率为２．５７—２２．４％,实验中观察到了双不对称诱导效应。     

酸牛乳治疗菌群失调性肠炎两例报告

酸牛乳为乳酸杆菌制剂,对治疗肠炎和纠正肠道菌群失调具有较好效果。我院自1986年起,应用于临床,近年来,对两例肾功不全并菌群失调患者治疗获良好效果。例1,李××,女,50岁,病案号107237诊断:慢性肾炎,普通型,肾功不全,尿毒症期,接受血液透析治疗中,于88年5月19日出现腹胀,腹痛、腹泻稀便,每日排便5次以上,大便呈白色粘液胶冻状。曾内服黄连素、止痢灵等药物症状不见好转。停服抗生素后改用酸牛乳治疗,服后第二天腹胀腹痛明显减轻,腹泻次数减少,服后第三天症状     

ADP—Fe~（2＋）启动脂质过氧化的化学发光研究

以化学发光法和雨二醛测定法为实验手段研究了ＡＤＰ—Ｆｅ２＋启动的脂质过氧化反应以及几种金属离子对该反应的影响、结果表明,当反应体系中只有ＡＤＰ－Ｆｅ２＋存在时,通过化学发光法和丙二醛测定法都可以现察到脂质过氧化反应在０—５分钟内有一“潜伏期”存在,同时在微粒体浓度保持不变的条件下,增大二价铁离子的浓度,则脂质过氧化的水平增强。如果反应体系中同时加入ＡＤＰ—Ｆｅ２＋与ＡＤＰ—Ｆｅ３＋,则反应起始时的“潜伏期”消失。当ＡＤＰ—Ｆｅ３＋、ＡＤＰ—Ａｌ３＋和ＡＤＰ－Ｐｂ２＋单独存在时本身并不启动脂质过氧化,但对ＡＤＰ－Ｆｅ２＋启动的脂质过氧化都有增强作用,并且三价铁离子对鼠肝微粒体脂质过氧化的增强作用随着ＡＤＰ－Ｆｅ２＋浓度的增大而逐渐加强。将化学发光法与雨二醛测定法的结果加以比较,发现微粒体本身对它的脂质过氧化反应过程中的发光具有猝灭作用。     

拟南芥下胚轴原生质体的膜片钳全细胞记录（简报）

建立了拟南芥下胚轴原生质体的膜片钳全细胞记录方法,观测到的全细胞电流主要是外向K＋电流,其对胞外K＋浓度具有一定的依赖性,并为K＋通道阻断剂Ba2 显著抑制,外源ATP和Ca2 分别对拟南芥下胚轴原生质体的全细胞外向K 电流有显著影响,表明拟南芥下胚轴细胞质膜外向K＋通道,可能通过蛋白磷酸化或Ca2 信使调控的机制,参与细胞信号转导。     

芦笋皮层组织培养植株再生

报道了芦笋皮层组织培养再生植株的方法。表明：皮层在ＭＳ＋１ｍｇ／Ｌ２,４—Ｄ＋２ｍｇ／Ｌ６—ＢＡ培养基上形成无色或淡绿色疏松型愈伤组织,而ＭＳ＋２ｍｇ／Ｌ６—ＢＡ＋０．１ｍｇ／ＬＩＡＡ培养基则对芽的分化有利;试管苗的生很壮苗以无激素的ＭＳ为最佳培养基。此外,本试验还研究了不同碳源、不同激素组合对芦笋皮层离体培养再生植株的影响。