改良CLSI M38-A方案应用于红色毛癣菌的研究进展

国内外学者将改良CLSI M38-A方案应用于红色毛癣菌时进行了改进。这些改进包括红色毛癣菌培养基为燕麦培养基、马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）、沙堡弱葡萄糖琼脂（SDA）,接种物仅含小分生孢子,培养基为RPMI1640,接种物量为CFU/ml,培养温度为28℃,培养时间为7 d,MICs终点确定标准为MIC-0,质控菌株选择须癣毛癣菌MRL1957和红色毛癣菌MRL666。     

红色毛癣菌的生物学特性研究

目的 观察红色毛癣菌在不同温度、不同培养基上的生长和产孢情况,并对其进行分子生物学鉴定.方法 ①大培养:采用沙堡葡萄糖琼脂(SDA)和马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)平皿,27℃、35℃黑暗培养,测量菌落直径,绘成生长曲线.②小培养(钢圈法):采用SDA、PDA、溴甲酚紫乳固体葡萄糖琼脂(BCP-MSG)、乳蜜琼脂(M)和复合维生素B(VitB)培养基,27℃、30℃黑暗培养,观察镜下菌丝生长、孢子产生情况.③进行rDNA 18S和ITS序列测定.结果 在SDA,PDA上,27℃条件下菌落生长速度较35℃快;在5种培养基上,SDA、PDA产孢较快较多,复合维生素B培养基产孢较慢,但产生大分生孢子较多.30℃产孢更丰富.对部分菌株rDNA ITS、18S PCR扩增产物纯化后直接测序,结果在GenBank中比对、分析,相似度为98%～100%,均鉴定为红色毛癣菌.结论 SDA、PDA均为鉴定和分离红色毛癣菌的合适培养基.5种培养基均可用来刺激红色毛癣菌产孢,其中SDA、PDA产孢较早、较丰富.红色毛癣菌rDNA 18S和ITS序列测定是一种快速准确的红色毛癣菌分子生物学鉴定方法.     

束状刺盘孢的体外培养条件研究

目的对束状刺盘孢体外培养,观察形态特征。方法将束状刺盘孢接种在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)中分别置于4℃、28℃、35℃和37℃下培养2周,观察生长情况;选取生长最好的菌株分别接种在沙堡弱培养基(SDA)、PDA、察氏培养基(CPA)、胡萝卜琼脂培养基(CDA)和玉米粉培养基(CMA)中,同一温度下培养2周,观察菌落形态及镜下形态。结果菌株在28℃条件下生长最快、菌落发育饱满、产生灰色色素;菌株在五种培养基中生长快慢依次是PDA>CDA>CMA>SDA>CPA,菌落在PDA、CDA和CMA中呈鼠灰色,SDA中呈白色和棕色,CPA中呈白色和鼠灰色,SDA和CPA中未见分生孢子和刚毛产生。结论在PDA、CDA和CMA中28℃条件下,较适合束状刺盘孢生长。     

三种抗菌织物对红色毛癣菌和须癣毛癣菌生长抑制效应的实验研究

目的通过分析汉麻织物、含纳米银锦纶纤维织物和无机银抗菌整理后棉布对红色毛癣菌、须癣毛癣菌生长的影响,探讨抗菌织物对皮肤癣菌的抑制作用。方法制备红色毛癣菌、须癣毛癣菌的菌悬液,分别接种于上述抗菌织物,并紧贴在PDA培养基表面培养,每12 h观察菌落形态及大小,根据菌落平均直径绘制生长曲线。结果三种抗菌织物上24 h内均未见菌落生长。①汉麻布样上,红色毛癣菌和须癣毛癣菌菌落直径分别在36-84 h、36-72 h时间区间内小于棉布组,差异有显著性（P〈0.05）,之后与棉布组渐趋一致。②含纳米银锦纶织物上,在36-108 h内红色毛癣菌菌落直径小于棉布组,差异有显著性（P〈0.05）,120 h时已无显著差异（P〉0.05）,须癣毛癣菌在48 h后才开始生长,在60-108 h区间内菌落直径小于棉布对照（P〈0.05）。③无机银抗菌整理后棉布样上,红色毛癣菌和须癣毛癣菌分别在48 h和60 h后才开始生长,在120 h以内两种皮肤癣菌菌落直径均小于棉布组,差异有显著性（P〈0.05）。结论三种抗菌织物与棉布相比较,在一定时间区间内,均可显著抑制红色毛癣菌和须癣毛癣菌的生长,尤其是经无机银抗菌整理后棉布的抑菌更有效和持久。     

裂褶菌培养基形态学观察和DNA序列分析

目的通过观察裂褶菌在5种培养基上的生长状态、扫描电镜及DNA序列分析,了解该菌形态学及分子生物学等方面的特征。方法菌落转种于沙氏培养基(SDA),麦芽浸膏琼脂(MEA),马铃薯葡萄糖琼脂(PDA),玉米粉琼脂(CMA)和察氏琼脂(CZA)平皿培养基,27℃和37℃培养2周,观察菌落生长情况,进行扫描电镜检测及DNA序列分析。结果菌落在SDA,MEA和PDA上生长状态较好,呈蓬松白色羊毛状;尿素酶试验阳性,放线菌酮耐受试验阴性。光镜下见分支分隔菌丝、侧生的钉状突起及类水母体变异子实体。扫描电镜见菌丝分隔处闭锁联合、侧生钉状突起和泪滴状球形分泌物。经26S rDNAD1/D2区序列分析证实该菌株为裂褶菌。结论裂褶菌只有丝状型一种菌落形态;分支分隔菌丝及分隔处闭锁联合,侧生钉状突起和泪滴状球形分泌为其形态学特征;孢子由类水母状子实体产生。     

1株致体股癣的颗粒型红色毛癣菌变种的形态学观察与基因鉴定

目的：探讨1株致体股癣的颗粒型红色毛癣菌变种的形态学特点及核糖体基因序列变化。方法1例体股癣患者皮损中分离出1株红色毛癣菌,观察形态学特点,并用PCR测定核糖体转录间区（ITS）、D1/D2区、非转录区基因序列（NTS区）内串联重复亚单位（TRS）。结果该菌株可产生鹿角形菌丝,大分生孢子有中空现象及单侧出芽产孢特征,可在42℃生长;ITS和D1/D2区基因测序鉴定为红色毛癣菌,但TRS-1和TRS-2基因序列分别有2个、1个碱基差异。结论该菌株可能是颗粒型红色毛癣菌的1个变种。     

聚六亚甲基双胍体外抗真菌作用研究

目的探讨聚六亚甲基双胍(PHMB)对浅部真菌病常见致病菌的杀灭作用。方法参照标准的微量液基稀释法和琼脂稀释法检测PHMB粉剂和溶液对红色毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌及白念珠菌临床分离株的体外最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MFC)。结果 PHMB对红色毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌和白念珠菌临床分离株的MIC范围分别为1.0～4.0μg/mL、2.0～4.0μg/mL、2.0～4.0μg/mL和0.3～5.0μg/mL;MFC范围分别为2.0～8.0μg/mL、 4.0μg/mL、2.0～4.0μg/mL和5.0～10.0μg/mL。琼脂稀释法结果表明PHMB溶液浓度为1.25%时,红色毛癣菌、犬小孢子菌和须癣毛癣菌无菌落生长;PHMB溶液浓度为0.32%时,白念珠菌无菌落生长。加入透皮剂氮酮后,杀菌效果并无改变。结论 PHMB对浅部真菌病常见的致病真菌皮肤癣菌及白念珠菌具有较好的抑制和杀灭作用。     

参照CLSIM38-A方案测定皮肤癣菌临床株对4种抗真菌药物的敏感性

目的测定并比较临床分离的皮肤癣菌对4种常用抗真菌药物的敏感性,探讨CLSIM38-A方案用于皮肤癣菌药敏试验的可行性。方法实验菌株为31株临床近期分离的皮肤癣菌。其中红色毛癣菌14株,须癣毛癣菌14株,犬小孢子菌1株,铁锈色小孢子菌1株,絮状表皮癣菌1株。4种抗真菌药物为益康唑、伊曲康唑、特比萘芬、伏立康唑。采用M38-A方案微量稀释法,并适当调整试验参数进行体外抗真菌药物敏感性试验。结果红色毛癣菌和须癣毛癣菌对以上4种药物的敏感性无明显差异。犬小孢子菌、铁锈色小孢子菌、絮状表皮癣菌对所有4种抗真菌药物的敏感性都低于红色毛癣菌和须癣毛癣菌。结论M38-A方案经过调整适用于皮肤癣菌药敏试验。     

须癣毛癣菌的形态学及分子生物学鉴定

目的对临床上分离自人(36株)及狐狸(5株)的须癣毛癣菌菌株进行新的分类系统鉴定,并检测传统的分类方法是否能满足临床鉴定需要。方法①观察原鉴定为须癣毛癣菌菌株在沙氏培养基、1%蛋白胨培养基、溴甲酚紫乳固体葡萄糖琼脂培养基(BCP-MSG)和显微镜下形态学及尿素酶、毛发穿孔等生理学试验表现。②通过ITS区段和LSU区段分子生物学序列分析进行新的分类系统的菌种分型,并对传统形态学和生理学鉴定方法进行检测。结果①41株须癣毛癣菌形态学及生理学试验符合须癣毛癣菌(38株)和红色毛癣菌(3株)菌落的特点。②ITS区段序列分析发现ITS区段能将须癣毛癣菌和红色毛癣菌准确的鉴定到种,但无法明确其种内分型;而LSU区段序列分析可对36株(36/38)须癣毛癣菌有性型做出明确的鉴定。结论传统实验室鉴定方法仍具有其有效性及可靠性。通过分子生物学鉴定,临床分离的须癣毛癣菌皆为指(趾)间毛癣菌(38/38),而LSU区段的序列分析鉴定狐狸源性菌株皆属于本海姆节皮菌,有别于大多数人源性菌株有性型为万博节皮菌,对于须癣毛癣菌的菌种鉴定更优于ITS区段,但分子生物学试验还需结合形态学的观察,才能够对菌种做出正确的鉴定。     

林生地霉血液分离株的形态学观察

目的 进一步了解林生地霉的形态学特征和产孢方式。方法受试菌株复苏后,转种于沙堡培养基,37℃和27℃温箱培养3周,每天观察菌落生长情况,并对其丝状型和酵母样型两种菌落进行光镜观察。在培养1周时,挑取菌落常规制片后行扫描电镜和透射电镜观察。结果 培养第2～3d,菌落开始生长,初为白色绒毛样、粉末样,1～2周后菌落均转变为乳酪样,其中37℃下培养的菌落转变较早。菌丝相时,光镜下可见丰富的分支、分隔菌丝,成链的关节孢子和圆形、椭圆形小分生孢子。酵母相时,光镜下可见丰富的芽生孢子,少量的厚膜孢子、外生或内生的关节孢子,菌丝稀少。扫描电镜下可见菌丝分支末端或侧面着生球形、棒状的分生孢子,末端凹陷。透射电镜下可见分生孢子与菌丝分离时全壁断裂,另一端正在出芽。结论 林生地霉包括丝状型和酵母样型两种菌落形态和链状排列的矩形关节孢子、圆形或椭圆形的小分生孢子、厚膜孢子以及分支、分隔菌丝为其形态学特征,有芽殖、外生和内生节孢子三种产孢类型。     

822例浅部真菌病及其致病菌种分析

目的分析新疆乌鲁木齐市浅部真菌病病原菌的流行趋势。方法对2006年1月～2013年12月就诊于我院皮肤科门诊、有典型临床表现、真菌镜检及培养均阳性的822例患者进行致病病种及菌种分析。使用SPSS17．0统计软件对于结果进行统计分析。结果822例患者包括8个病种：体癣214例（26．0％）,足癣131例（15．9％）,头癣128例（15．6％）,甲真菌病125例（15．2％）,股癣119例（14．5％）,手癣54例（6．6％）,皮肤念珠菌病38例（4．6％）,花斑糠疹13例（1．6％）。菌种分布以须癣毛癣菌为首位,336株（40．9％）,其次为红色毛癣菌共239株（29．1％）,犬小孢子菌68株（8．3％）,铁锈色小孢子菌48株（5．8％）,念珠菌38株（4．6％）,断发毛癣菌33株（4．0％）,许兰黄癣菌23株（2．8％）,马拉色菌13株（1．6％）,疣状毛癣菌9株（1．1％）,紫色毛癣菌7株（0．9％）,支顶孢霉菌4株（0．5％）,曲霉、絮状表皮癣菌各2株（各0．2％）。统计学分析显示：不同性别足癣、股癣、甲真菌病及花斑糠疹构成比有统计学意义（P〈0．05）,除体癣及花斑糠疹外,本组其他浅部真菌病的分布在年龄方面有着明显的差别（P〈O．05）。结论乌鲁木齐市浅部真菌病发病率排在前3位的依次为体癣、足癣、头癣,致病病原菌以毛癣菌为主,须癣毛癣菌为首位致病菌,其次为红色毛癣菌。足癣及甲真菌病好发于女性,而股癣及花斑糠疹好发于男性。除体癣及花斑糠疹外,不同年龄段浅部真菌病分布有明显差异,其中头癣主要好发于青少年。     

濮阳市部分浅部真菌病中癣菌和念珠菌混合感染的分析

目的了解濮阳地区部分浅部真菌病中两种及两种以上真菌混合感染的情况。方法对临床确诊为浅部真菌病的患者456例,取标本行10%KOH直接镜检、真菌培养及菌种鉴定。登记确诊患者相关临床资料,分析其中混合感染的发病特点。结果确诊皮肤癣菌和念珠菌混合感染病例36例,分离率为7.89%,多见于股部(58.33%)和足部(27.78%);分离菌株72株,皮肤癣菌中以红色毛癣菌为主(75.00%),念珠菌中以非白念珠菌为主(72.22%)。结论濮阳地区部分浅部真菌病中混合感染主要为皮肤癣菌和念珠菌的混合感染,多见于股部和足部;致病菌以红色毛癣菌和非白念珠菌为主。     

无锡地区293例儿童浅部真菌病临床分析

目的研究无锡地区儿童浅部真菌病的流行及病原菌特点。方法采用真菌镜检和含氯霉素(和含氯霉素及放线菌酮)的葡萄糖蛋白胨琼脂培养,根据菌落形态及其镜下形态鉴定菌种。结果 293例临床诊断患儿中,直接镜检阳性245例,阳性率83.6%,其中皮肤念珠菌病、足癣、头癣发病例数居前3位,分别为79例(32.2%)、50例(20.4%)和46例(18.8%),共175例,占总病例数的71.4%,其次分别为体癣、甲真菌病、手癣、股癣、花斑糠疹,分别为29例(11.8%)、13例(5.3%)、11例(4.5%)、10例(4.1%)、7例(2.9%)。随着年龄增长,患儿易患疾病有所差异,花斑糠疹0～2岁发病率最高;皮肤念珠菌病0～3岁发病率最高;头癣4～8岁发病率最高;体股癣、手、足癣9～15岁发病率最高。238例镜检阳性标本(7例花斑糠疹除外)共培养出致病菌145株,阳性率为60.9%,其中皮肤念珠菌病培养阳性率为70.9%,股癣70%,体癣51.7%,甲真菌病53.8%,头癣65.2%,足癣50%,手癣45.5%。在145株致病菌中,念珠菌属63例(43.45%),红色毛癣菌43例(29.7%),犬小孢子菌26例(17.93%),须癣毛癣菌4例(2.76%),紫色毛癣菌3例(2.07%),石膏样小孢子菌3例(2.07%),断发毛癣菌2例(1.38%),絮状表皮癣菌1例(0.69%)。结论本研究为无锡地区防治儿童浅部真菌病提供了依据。     

126例面癣临床因素及病原菌分析

目的探讨面癣的致病菌种、临床特点及发病相关因素。方法对126例面癣患者进行真菌分离培养鉴定及流行病学分析。结果面癣见于各年龄段,以11～30岁最多见。患病动物接触史、合并其他部位浅部真菌病史及糖皮质类固醇激素类药物外用史是面癣发病的重要危险因素。分离出皮肤癣菌108株,包括红色毛癣菌63株（58．3％）、犬小孢子菌25株（23．1％）、须癣毛癣菌18株（16．7％）和石膏样小孢子菌2株（1．9％）。结论面癣的发病没有年龄差异,患者可见于各个年龄阶段;面癣的常见致病真菌绝大多数为红色毛癣菌和犬小孢子菌,其发病可能与患者自体接种或接触患病动物相关。面癣容易被误诊,及时进行真菌镜检和培养是降低面癣误诊率的关键。     

广州地区70例儿童头癣病原学分析

目的 了解6a来广州地区头癣类型及病原菌分布特点.方法 采用病例回顾性分析,对2007年7月～2013年9月来广州市中山大学附属第三医院皮肤科门诊就诊的头癣患儿（平均为6.0±3.6岁）真菌直接镜检、培养及分离鉴定的结果进行分析.结果 70例头癣患儿真菌镜检阳性为69例,阳性率为99％,真菌培养阳性为47例,阳性率为81％.白癣为52例,占74％.病原菌包括犬小孢子菌19例（40％）、须癣毛癣菌13例（28％）、紫色毛癣菌5例（11％）,石膏样小孢子菌3例（6％）,其他病原菌为7例（15％）.其中,4～7岁的头癣患儿为35例,占50％.结论 儿童头癣的主要临床类型为白癣.致病菌以亲动物性犬小孢子菌为主.患儿的主要年龄段为4～7岁.     

297例浅部真菌病临床及病原菌菌种分析

目的 探讨皮肤浅部真菌病致病真菌菌种的构成.方法 对297例真菌涂片阳性和培养阳性的浅部真菌病患者,取标本进行分离培养及菌种鉴定,培养阳性标本在形态学上不能准确鉴定的,进行梅里埃API 20C AUX酵母菌鉴定试剂盒或核糖体DNA （rDNA） ITS区序列测定,确切鉴定菌种.使用SPSS 17.0统计软件对于结果进行统计分析.结果 共分离培养出致病菌13种,其中红色毛癣菌86株（29.0％）,须癣毛癣菌68株（22.9％）,念珠菌属59株（19.9％）,暗色真菌属13株（4.4％）,曲霉菌属13株（4.4％）,红酵母菌12株（4.0％）,青霉菌属9株（3.0％）,毛霉菌9株（3.0％）,犬小孢子菌5株（1.7％）,浅白隐球菌3株（1.0％）,毛孢子菌属2株（0.7％）,絮状表皮癣菌1株（0.3％）,混合感染17株（5.7％）.结论 本地区浅部真菌病以甲癣为主,主要致病真菌是红色毛癣菌,但其他种类真菌感染尤其是念珠菌属有明显上升趋势.