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为探究利用SARS-CoV-2的ORF1ab基因和N基因作为靶标进行荧光定量检测的Ct值与SARS-CoV-2病毒分离阳性率之间的关系。本研究对广州入境的新型冠状病毒肺炎输入病例临床样本进行荧光定量PCR检测和用Vero细胞进行病毒分离,统计病毒分离率与荧光定量PCR检测Ct值之间的关系,再通过logistics回归模型用Ct值来预测病毒分离率;同时对收集到的临床样本进行三代测序及进化树的构建。结果显示,在160例新型冠状病毒肺炎输入病例临床样本中,分离到74株新型冠状病毒,分离阳性率为46.25%,分离到包括20株Alpha、9株Beta、2株Delta等VOC毒株和2株Epsilon、1株Eta等VOI毒株,其他变异株42株;病例样本荧光定量PCR检测ORF1ab基因Ct值为16.12~39.00,N基因的Ct值为17.82~39.41;病毒分离率与样本荧光定量PCR检测的ORF1ab基因和N基因的Ct值均呈负相关,在Ct值>31时,分离率仅9.10%(6/66),而当Ct值<23.1时,病毒分离阳性率可超过95%,分离到新冠病毒的病例样本荧光定量PCR检测的ORF1a... 相似文献
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TCR基因重排在蕈样肉芽肿诊断中的应用 总被引:2,自引:0,他引:2
T细胞在成熟过程中通过T细胞表面受体基因重排,从而具有特异性识别抗原的能力,在这一过程中的任何失调都会导致疾病。蕈样肉芽肿是由于淋巴细胞的恶性增殖所导致的,病变组织表现出T细胞受体基因重排克隆性。通过Southern印迹分析技术和PCR技术来检测T细胞受体基因重排。T细胞受体基因重排的检测在蕈样肉芽肿的诊断的应用上有重要的参考价值。 相似文献
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【目的】通过分子方法检测近海污染环境优势种灰黄青霉,并为由此而推断污染程度做准备。【方法】根据GenBank中青霉属不同种和相近属种的ITS序列差异和灰黄青霉特有的IAO序列,设计了污染区优势种灰黄青霉的特异性引物AS1/RS4和IAO1/IAO2,建立相应的特异探针检测体系。通过PCR和套式PCR技术,分析比较两对特异序列检测灰黄青霉的差异。【结果】建立的分子检测体系可以排除其它近似或相关菌株干扰,从环境中扩增到目的基因片段。利用引物AS1/RS4作为核酸探针,通过套式PCR菌株DNA的检测灵敏度可达到10fg/μL,当仅有10个数量级分生孢子时即可检测出,从沉积物中检测灵敏度为102个数量级孢子/0.25g。特异酶基因IAO1/IAO2检测灵敏度较前者稍低。【结论】利用特异序列作为探针检测污染环境优势种灰黄青霉的方法可行,在一定范围内,灰黄青霉的出现频率及数量对污染程度有较好的指示作用。 相似文献
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5月9日北京翠宫饭店,罗氏应用科学公司和ACEA Biosciences公司联袂举行了“非标记、实时细胞分析技术专题讨论会”。会议旨在通过对创实时细胞检测技术的介绍,及其在先进的基因分析平台上的应用讨论,提升整个生命科学研究及药物研发产量和质量。尽管基于细胞的检测技术目前已经被广泛应用;但由于实验过程中使用的标记和报告基因有可能会干扰研究状态下的多个生物学过程, 相似文献
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山羊传染性胸膜肺炎病原快速诊断方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
为准确快速鉴定临床疑似山羊传染性胸膜肺炎(CCPP)病原,针对丝状支原体山羊亚种(Mmc)与绵羊肺炎支原体(Mo)16S rRNA基因设计两对特异性引物Ps/Pa、Ms/Ma,通过优化反应条件及体系,建立检测CCPP两种主要致病支原体的双重PCR方法,并检测了所建方法特异性、敏感性及临床应用。当引物、Mg2+及dNTP浓度分别为0.8 pmol/μL、1.5 nmol/μL、0.2 nmol/μL,Ps/Pa与Ms/Mo比例为1 1时,于54℃退火40 s,可最小检出Mmc与Mo核酸量分别为0.1 ng、0.01 ng,敏感性良好。通过特异性与临床疑似病例检测,证明所建方法具较好特异性,可初步应用于临床诊断。 相似文献
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针对精细定位人类复杂性状基因位点,我们拓展了基于熵的连锁不平衡指数到使用病例-父母和无关的对照-父母设计的家系研究.这个指数比较杂合子父母传递给受累子代和非受累子代基因的熵和条件熵.在单一群体和混合群体两种情形下,我们通过模拟调查了该指数的性质.结果表明在不同遗传模型下利用该指数定位的概率随着样本容量的增大而增大.当样本容量超过200,显性模型和加性模型的概率在90%以上.当样本容量超过300,隐性模型和乘积模型的概率在80%以上.当存在群体混杂时,该指数仍然适用于精细定位. 相似文献
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<正>提起“遗传”相信大家都不陌生,我们一般意义上所理解的遗传是指父母性状通过繁殖传递给后代,从而使后代获得其父母遗传信息的现象。而传递的介质是什么呢?毫无疑问那就是基因。由于后代的基因就是父母双方基因的复制,而且这种复制相对来说是稳定且可靠的,所以地球上的各个物种才呈现出了具有延续性的样貌和行为,甚至有时候我们通过父母的外貌可以顺利地找到人群中他们的孩子究竟是谁。 相似文献
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随着我国转基因研究及产业化进程提速,转基因检测的重要性日益凸显,因而快速、高效的分子检测新方法的研发具有重要的生产实践及科研意义。在转基因检测中,常规PCR技术具有检测范围广的特点,但较为费时费力,且对实验条件要求较高;而胶体金蛋白试纸法检测方便、快捷,但可检范围窄。基于此,建立了一套基于核酸层析法快速转基因检测的方法体系。将经液氨研磨后的样品通过一管法提取DNA后直接进行PCR扩增,再将PCR扩增产物滴加到胶体金检测卡上,通过直接观察胶体金卡条显色状况进行结果判别。此方法最终检验出玉米内参基因ZSSⅡB及Zein、大豆内参基因SPS、水稻内参基因Lectin,转基因元件启动子CaMV35S及终止子NOS,以及抗虫基因Cry1Ab/1Ac、抗除草剂基因Bar、Pat、CP4-EPSPS及选择标记基因NPTⅡ、Pmi等外源基因;并成功检出特异性转基因事件Mir604及Bt11。研究获得的核酸层析检测方法具有灵敏度高、省时省力且对检测条件要求低等优点,集PCR法与蛋白试纸检测法二者优势于一身,可广泛应用于转基因产品的精确快速检测,为我国转基因生物安全监管提供了良好的技术支撑。 相似文献
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【背景】抗除草剂转基因作物是全球种植面积最大的一类转基因植物,以除草剂抗性基因作为检测靶标的分子鉴定方法的研究与应用,对转基因生物安全的检测与监测有重要意义。【方法】根据除草剂抗性基因aad1和dmo的核苷酸序列设计PCR检测引物,并进行PCR反应体系优化、方法特异性、灵敏度、再现性等方面的测试,分别建立aad1基因和dmo基因的特异性PCR检测方法。【结果】建立的PCR检测方法在56~64℃的退火温度范围内均能获得一致性结果,具有良好的稳健性。该方法可将含有aad1基因和dmo基因的转基因作物与其他转基因作物区分开,其灵敏度可分别达到20个拷贝和40个拷贝。通过将aad1基因和dmo基因的检测引物放入同一管PCR反应体系中,还能在一次PCR中同时检测这2个靶标基因,双重PCR的检测灵敏度与单一PCR一致。【结论与意义】建立的分子方法可精准检测出含有aad1基因和dmo基因的转基因作物,具有特异性强、灵敏度高的特点,为抗除草剂转基因作物的筛选检测提供了可靠的技术支撑。 相似文献
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陶其敏 《中国生物工程杂志》1986,6(2):27-30
在过去几十年来,世界上用分子水平分析的方法来研究人的基因失调已有许多报告,增加了很多新的知识,这些知识是由于生化的重组基因技术而来,用在单独的分析特异的基因、基因产物以及核酸结构分析编码,基因表达的规律,从而用以检测某些疾病,例如早期妊娠时测定血清或羊水中的基因紊乱,可以及时治疗或预防。 相似文献
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核酸试纸条在检测转EPSPS基因作物中的应用 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:建立快速、简便和特异的检测转EPSPS基因作物的方法。方法:针对转EPSPS基因作物外源基因cp4-EPSPS的8个区域,设计2对特异性引物和1对环引物,对反应体系中的MgSO4、内引物、环引物、甜菜碱、dNTP浓度和反应温度等条件分别进行优化,并用核酸试纸条对扩增产物进行检测,建立用于检测转EPSPS基因作物的环介导等温扩增方法(LAMP)。结果:用建立的LAMP方法检测转EPSPS基因作物时,在64℃恒温反应30 min,即可根据试纸条显色直接观察结果;该方法具有高度特异性,可检测到10个拷贝的EPSPS DNA。结论:LAMP方法可快速、灵敏、特异、经济地检测转EPSPS基因作物,在基层和实验室都具有良好的应用前景。 相似文献
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“想知道自己的孩子能否成为下一个姚明、郎朗吗?带他来参加基因检测吧!”面对这样一句充满诱惑力的广告,每一位望子成龙的家长也许都会怦然心动。不知从何时起,“基因检测”悄无声息地在我们身边流行开来。打开电脑,在Google上输入“儿童天赋基因检测:可以搜索到国内有数十家公司在从事这项业务;在北京、上海、广州、重庆、温州等许多大中城市, 相似文献
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一种有效的复杂疾病基因定位的检测法 总被引:1,自引:0,他引:1
连锁不平衡(LD)应用于某些复杂疾病基因的定位,近年来发展了许多LD定位方法,除TDT外,大多数LD定位方法须先假定无人群混和,人群混合可增大在疾病基因定位时犯Ⅰ类错误的机率,产生无效结果。此方法利用LD来检测标记位点和疾病敏感位点(DSL)的连锁(有连锁不平衡)相关(有连锁)。分析时采用不相关样本,已知其父母基因型和至少父母之一为杂合子,再将随机样本依基因型不同分类,然后对来自不同类的数据应用有力的统计方法进行单独和联合分析。此LD定位法不仅适用于患病和正常个体,而且有效消除据父母基因分类的样本定位时人群混合的影响,分析结果和模拟结果也表明此方法解决了在检测标记位点和疾病敏感位点之间的连锁和相关时人群混和的问题,但与TDT比,此法在检测的位点为DSL时丙能有效和充分地利用矫正数据,检测位点不是DSL时,此法和TDT法可相互补充更有效地检测连锁的DSL。 相似文献
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由于pMCLacI/neo转基因小鼠含有两种不同状态的LacI靶基因,有别于以往所建立的只含有一种靶基因的系统。因此,建立一种能快速、有效的分析这两种靶基因的检测方法,成为该转基因小鼠建立后的又一新课题。通过适当方法将pMCLacI/neo中两种LacI靶基因分析后,采用了新近建立的M9/L正向选择系统进行检测,并用已知的LacI基因突变作为阳性对照,验证该策略的可行性。实验结果提示,M9/L正向选择系统可应用于pMCLacI/neo转基因小鼠中两种LacI靶基因的检测;实验中所建立的突变检测方法快速、有效。 相似文献