欧洲小叶椴的胚培养与快速繁殖

1植物名称欧洲小叶椴（Tilia cordata Mill．）。 2材料类别成熟胚。 3培养条件（1）／3动培养基：MS＋6-BA2．0mg·L^-1（单位下同）＋NAA0．1;（2）增殖培养基：MS＋6．BA1．0＋NAA0．1;（3）壮苗生根培养基：1／2MS＋IBA1．0＋NAA0．3。以上培养基均加入0．55％琼脂和20g·L^-1。蔗精,pH5．8-6．0。培养温度为（25±2）℃;光照培养时间12h·d^-1,光照强度40．50μmol·m^-2·s^-1。     

冷冻对山羊精子转染外源DNA和体外制备转基因胚胎的影响

本实验将鲜精和冻精分别与地高锌标记的线形化的pEGFP-N,质粒孵育转染,用原位杂交方法检测转染效率;PCR和Southern Blotting检测精子与外源DNA的整合效率;与成熟卵母细胞体外受精,PCR检测阳性胚胎比率,用透射电镜技术、碘化丙锭和羟化荧光素双探针技术和单细胞电泳（Single Cell Gel Electrophoresis,SCGE）技术,观察精子冷冻前后的超微结构、精子质膜完整性和精子核DNA损伤的变化,研究冷冻对山羊（Caprahircus）精子转染内化外源DNA和体外制备转基因胚胎的影响及机理。结果表明,冻精显著提高了转染外源DNA的效率（81．60％±16．59％VS32．95％±2．93％,t=4．873,P=0．003;41．80％±6．26％vs27．89％±8．64％,t=2．634,P=0．039）。PCR和Southern Blotting检测表明外源DNA已经整合到精子基因组上。用冻精与成熟卵母细胞体外受精,体外受精穿透率和卵裂率显著低于鲜精组（24．19％±3．15％vs58．86％±3．73％,t=7．131,P〈0．001;11．83％±2．37％vs29．71±3．47％,t=4．302,P〈0．001）,但体外生产的胚胎PCR阳性率比鲜精组显著提高（45．45％±10．87％VS24．44％±6．06％,t=1．750,P=0．013）。超微结构观察和双荧光探针检测都发现冷冻-解冻精子质膜完整性降低（8．34％±4．21％VS65．67％±6．46％,t=12．492,P〈0．001）,SCGE显示冷冻极显著增加了精子彗尾长度和彗星细胞比例（42．67μm±4．56μmvs21．14／Lm±2．36μm,t=5．644,P=0．005;60．00％±4．00％vs17．37％±2．57％;t=15．787,P〈0．001）。冷冻-解冻可以提高山羊精子转染外源DNA的效率,冷冻破坏精子质膜完整性,解除质膜的阻碍作用,是提高外源DNA转染效率的一个主要原因[动物学报54（6）：1089-1097,2008]。     

温度、盐度和体长对西藏拟潘（Daphniopsis tibetana Sars）排氨率的影响

在实验室内研究了温度（T=3、8、14、20℃和22℃）、盐度（S=5、10、15、20和25）和体长（0．80、1．23、1．51、1．84mm和2．38mm）对西藏拟潘排氨率（NR）的影响。结果表明,在试验温度范围内,西藏拟潘幼溢排氨率随温度（r）的升高而升高,其回归方程为NR=0．0359Ln（T）-0．0185（n=5,r=0．9881,P〈0．05）,数值范围为0．022～0．092mg／（g·h）。在盐度（S）试验中,西藏拟潘幼潘排氨率有同样的趋势,回归方程为NR=0．0535e^0.0213s（n=5,r=0．9884）,其数值范围为0．061—0．092mg／（g·h）。而体长试验中,西藏拟潘排氨率随体长（L）的增加而降低,回归方程为NR=0．0568L^-1.4154（n=5,r=0．9938,P〈0．05）,数值范围为0．017—0．083mg／（g·h）。     

蚊子花的组织培养与快速繁殖

1植物名称蚊子花（Lopezia cordata Hornem．）。 2材料类别茎段和顶芽。 3培养条件基本培养基为MS。（1）芽诱导培养基：1／2MS（MS大量元素用量减半）;（2）增殖培养基：MS＋6-BA0．2mg·L^-1（单位下同）＋NAA0．2;（3）生根培养基：I／2MS＋NAA0．5。以上培养基中均加入6g·L^-1琼脂和30g·L^-1蔗糖,pH5．9—6．0。培养室中温度为（24＋1）℃,光照时间为16h·d^-1,光照强度约为60μmol·m^-2·s^-1。     

气体NO处理对蒜苗生长和抗氧化酶活性的影响

以改良的蒜为材料,用不同浓度NO气体（0．1、0．5、1．0μmol·L^-1）在无氧环境中熏蒸大蒜3h后,检测蒜苗生长、光合色素和可溶性蛋白质含量以及抗氧化酶活性的结果表明：0．1和0．5μmol·L^-1NO气体熏蒸的蒜种长成的幼苗,叶中光合色素和可溶性蛋白含量、假茎长、株高和假茎粗均大于未经NO熏蒸的植株,叶中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）和过氧化氢酶（CAT）的活性均提高;而1．0μmol·L^-1的NO则抑制蒜苗生长,且抗氧化酶活性亦下降。气态NO处理的鳞茎幼苗生长也得到促进,以0．5μmol·L^-1NO处理的效果最佳。     

氨溴索对粘液型铜绿假单胞茵生物膜藻酸盐作用的体外研究

目的探讨氨溴索对铜绿假单胞菌临床分离株形成的生物膜（biofilm,BF）主要成分藻酸盐的干预作用,研究其对藻酸盐合成过程中起重要作用的基因表达和合成过程中限速酶活性的影响,以及其对藻酸盐降解的影响。方法建立铜绿似单胞菌临床分离株BF体外模型,培养7d后得到成熟BF。将BF内的细菌振荡下来后,用疏酸-苯酚法检测氨溴索对藻酸盐含量的影响;RT-PCR检测藻酸盐合成过程中重要基因algD、algU、algR和mucA的mRNA表达;分光光度计检测合成过程中限速酶——GDP-甘露糖脱氢酶（guanosine diphospho-D-mannose dehydrogenase,GMD）的活性,并检测藻酸盐的降解情况。结果在氨溴索3．75mg／ml作用下,藻酸盐含量（mg／g）由86．4024±0．8588下降到59．9199±0．5803（F=66．2,P〈0．01）;其合成重要基因algD、algU、algR和mucA的mRNA的表达分别由1．2994±0．0173、1．0488±0．0457、0．9888±0．0267和0．8731±0．0336变化为1．0253±0．0265、0．9594±0．0106、0．8536±0．0179和1．0770±0．0503（F=91．9,41．1,88．4和56,9,P均〈0．05）;其合成限速酶GMD活性由0．0989±0．0055下降到0．0558±0．0016（F=121．2,P〈0．01）;藻酸盐的降解量（△mg／g）由1．4122±0．0073变化为1．4175±0．0019（F=21．81,P〉0．05）。1．875mg／ml氨溴索作用下,有同样的趋势但效应不如高浓度明显。结论氨溴索可以降低铜绿假单胞菌BF藻酸盐的含量,影响藻酸盐合成过程中重要基因algD、algU、algR和mucA的mRNA的表达,降低藻酸盐合成限速酶GMD活性,但对藻酸盐的降解无影响。     

同色兜兰的组织培养与快速繁殖

1植物名称同色兜兰[Paphiopedilum concolor（Bateman）Pfitz．]。 2材料类别种子。 3培养条件种子萌发培养基：（1）MS＋100mL·L^-1香蕉汁;（2）1／2MS＋100mL·L^-1香蕉汁。原球茎继代增殖培养基：（3）1／2MS＋NAA0．2mg·L^-1（单位下同）＋100mL·L^-1香蕉汁;（4）1／2MS＋NAA0．4＋100mL·L^-1香蕉汁;（5）1／2MS＋6-BA0．5＋NAA0．2＋100mL·L^-1。     

HPLC法测定参坤养血片中原儿茶醛含量的研究

目的:建立用高效液相色谱法测定参坤养血片中原儿茶醛含量的方法.方法:色谱柱为伊利特HYPERSIL ODS(200mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为水:甲醇:冰乙酸(80:19:1),检测波长为280nm,流速为1.0ml/min,柱温为室温.结果:原儿茶醛进样量在0.014～0.084μ g范围内与峰面积积分值线性关系良好(r=0.9995),平均回收率为96.92%(RSD=1.42%).结论:本方法简便、快捷、专属性强、重现性好,可用于参坤养血片的质量控制.     

三氧化二砷脂质体透过载瘤大鼠血脑屏障的实验研究

目的：观察三氧化二砷（As2O3）脂质体通过载瘤大鼠血脑屏障（BBB）的效果。方法：超声薄膜分散法制备三氧化二砷脂质体,建立药物标准曲线,检测包封率;立体定向技术建立C6／Wistar大鼠脑胶质瘤模型;取Wistar雄性载瘤大鼠84只,随机分为三氧化二砷脂质体组和三氧化二砷组,分别经静脉注射三氧化二砷脂质体和三氧化二砷注射液,给药后0．5h、1h、2h、4h、8h、16h、24h取大鼠脑组织冻存,应用双道原子荧光法检测载瘤大鼠脑组织中的砷含量。结果：制备稳定的三氧化二砷脂质体,包封率分别为92、2％,92．2％,92．3％;As2O3脂质体组及As2O3给药后7个时间点鼠脑组织中砷含量（μg／L）分别为：341．09±18．18,523、98±27．36,475．19±15、52,467.02±22．46,471．52±24．38,382.30±13．26,282．47±19．71;99.93±17.10,148.07±26、21,101.78±17．54,89．09±19．41,74.39±13．85,50．44±15.31,51．52±19．23。比较给三氧化二砷组及给三氧化二砷脂质体组载瘤大鼠脑组织中砷含量有显著差异（P〈0．05）。结论：三氧化二砷脂质体对血脑屏障的透过性明显优于单纯砷剂。     

泥胡菜中芦丁含量分析

建立高效液相色谱法测定泥胡菜中芦丁的方法,优化芦丁的提取工艺。使用Diamonsil（TM）C18柱,流动相：乙腈-0．4％磷酸溶液（20：80）,检测波长：255nm,流速：1ml／min,柱温：30℃。样品用50％乙醇超声提取30min提取率最高为0．166％;芦丁在0．1～2．0μg范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0．9994）,平均加样回收率99．3％（RSD=0．8％,n=5）。该方法准确、快速、重现性好,可作为控制泥胡菜质量的有效测定方法。