杏愈伤组织的超低温保存

杏茎段在附加１．０ｍｇ／Ｌ ２,４－Ｄ和０．１ｍｇ／Ｌ ＢＡ的改良ＭＳ培养基中诱导出愈伤组织,放入１０％ＤＭＳＯ＋０．５ｍｏｌ／Ｌ山梨醇或葡萄糖的冰冻保护剂中,以１Ｃ／ｍｉｎ的降温速度降至－４０℃,停留２ｈ后投入液氮保存,在４０℃水浴中化冻。继代培养８次生长１５－２０ｄ的愈伤组织保存后的相对存活率最高,不同品种基因型保存效果差异很大,保存后的愈伤组织生长量比对照减少,但经过２次继代培养后不再表现差     

中麻黄悬浮培养体系的建立

本文用中麻黄无菌苗为外植体,其切段培养在附加２ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ和０．５ｍｇ／Ｌ　６　ＢＡ的ＭＳ培养基上,全部脱分化形成白色疏松愈伤组织。愈伤组织继代培养于ＭＳ＋０．５ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ＋０．２ｍｇ／Ｌ６ＢＡ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋４％蔗糖的培养某上。以继代培养愈伤组织为材料进行悬浮培养,培养基为附加０．２ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ＋０．１ｍｇ／Ｌ６ＢＡ＋０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ＋２％蔗糖的ＭＳ液体培养基,得到分散性好,细胞形状接近圆形,细胞大小均一,细胞团多由２－３０个细胞组成的悬浮培养体系。第三代悬浮培养细胞增长率为０．３５ｇ·ｆｗ／２０ｍｌ·ｄ,细胞有丝分裂指数为１１．２％。条件培养和高密度接种可缩短延迟期,条件培养不能提高分裂指数,１ｇ／１０ｍｌ接种密度可使分裂指数提高至２１．２％。     

硬粒小麦单倍体原生质体培养及植株再生

由硬粒小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ｄｕｒｕｍ Ｄｅｓｆ．）×玉米（Ｚｅａ ｍａｙｓＬ．）建立的单倍性胚性愈伤组织,在继代培养４ 个月后置于含２．０ ｍ ｇ／Ｌ２,４－Ｄ、３％ 蔗糖、２００ ｍ ｇ／Ｌ水解酪蛋白、１４６ ｍ ｇ／Ｌ谷氨酰胺和３００ ｍ ｇ／Ｌ天冬氨酸的ＭＳ液体培养基中进行悬浮培养,４ 个月后形成了生长迅速、由大小不同（０．５ ～５ ｍ ｍ ）的愈伤组织块组成的愈伤组织悬浮系。酶解试验表明,２．０％ 纤维素酶ＲＳ和０．５％ 的离析酶效果最好,而液体悬浮培养物和固体培养的愈伤组织（在酶解时用锋利的解剖刀片切成１ ｍ ｍ 左右的小块）都能释放出大量原生质体,但悬浮培养物释放出的原生质体状态较好,胞质更浓厚,用ＫＭ８ｐ 培养基以琼脂糖包埋培养方式培养时分裂频率可达５％ 左右。由原生质体再生的小愈伤组织经增殖、筛选后可获得胚性愈伤组织,将其转移至分化培养基Ⅰ（０．２ ｍ ｇ／Ｌ ２,４－Ｄ、１．０ ｍ ｇ／Ｌ ＢＡＰ、０．１ ｍ ｇ／ＬＮＡＡ、３％ 蔗糖、２００ ｍ ｇ／Ｌ 水解酪蛋白、１４６ ｍ ｇ／Ｌ谷氨酰胺和３００ ｍ ｇ／Ｌ天冬氨酸的ＭＳ固体培养基）和Ⅱ（不含２,４－Ｄ,其它成分同Ⅰ）上进行分步分化培养可再生出完整植株,分化频率约为２０％     

大叶紫花苜蓿愈伤组织原生质体再生植株

大叶紫花苜蓿下胚轴诱导的愈伤组织在继代培养基上生长快速,易于分散。继代第１２ｄ的愈伤组织原生质体的得率为６．５×１０７／ｇ鲜重。原生质体培养基为ＳＨ基本培养基,含有１．０ｍｇ／Ｌ２,４－０、０．５ｍｇ／ＬＢＡ、２．０ｇ／ＬＣＨ、２％蔗糖、６％葡萄糖、５ｍｍｏｌ／ＬＭＥＳ,培养密度为１．０×１０５／ｍＬ。培养至第１２ｄ时的原生质体再生细胞植板率为３．７％。由原生质体形成的小愈伤组织在含２．０ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ的ＭＳ固体培养基上大量增殖。增殖的愈伤组织转移至２．０ｍｇ／Ｌ２－ｉｐ＋０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ的Ｂ５培养基上,形成体细胞胚并发育成完整植株。     

苦丁茶愈伤组织的诱导与褐变抑制

以叶片为材料,对苦丁茶愈伤组织的诱导,继代培养及褐变调控的研究表明：（１）苦丁茶愈伤组织的诱导及继代培养均以ＭＳ附加ＢＡ ２．０ｍｇＬ＾－１和ＮＡＡ ４．０ｍｇＬ＾－１的培养基效果最好;（２）０．１％的植酸可明显促进愈伤组织生长、抑制褐变,而硫代硫酸钠效果最差;（３）连续培养４０－５０ｄ愈伤组织增长倍数达到最大值;（４）继代２７次以后愈伤组织生长速度开始下降。这些条件为下一步细胞培养生产苦丁茶甙等     

埃斯基红豆草下胚轴愈伤组织原生质体的培养与植株再生

埃斯基红豆幼苗的下胚轴切段在附加２,４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ,ＫＴ１ｍｇ／Ｌ的ＭＳ中形成胚性愈伤组织。来自１１－１３个月龄、继代６－１５天的愈伤组织的原生质体,在改良的Ｖ－ＫＭ液体培养基中可持续分裂形成细胞团,培养１０天时的分裂率和克隆率分别为６５．８８％和５３．３８％周后就可将将原生质体形成的小愈伤组织转于培养基上。原生质体在改良的Ｂ５液体培养基也可以分裂形成小愈伤组织,但分裂率低于Ｖ－ＫＭ。来自原     

秦艽体细胞愈伤组织诱导及继代研究

本文报道了秦艽取叶、幼苗为外植体诱导愈伤组织试验。结果表明,取幼苗６７－Ⅴ培养基,２４－Ｄ２５ｍｇ／Ｌ,ＮＡＡ０５ｍｇ／Ｌ,诱导频率最优,可高达１００％。继代培养,以６７％培养基,ＮＡＡ０５ｍｇ／Ｌ,２４－Ｄ（１－１５）ｍｇ／Ｌ最优     

粉叶小檗愈伤组织的培养及小檗碱的含量

由粉叶小檗（Ｂｅｒｂｅｒｉｓ ｐｒｕｉｎｏｓａ）的茎、腋芽、叶、实生苗的子叶及胚轴均可诱导出愈伤组织。Ｂ５＋２,４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．２ｍｇ／Ｌ培养基对诱导较好,而Ｂ５＋２,４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ对愈伤组织生长较适宜。接种量在０．４－０．８ｇ（２０ｍｌ培养基）之间较为适宜。经薄层层析－分光光度法、薄层扫描法是鉴定,证明愈伤组织具有合成小檗碱的能力,含量高达１．８１４８％。     

烟草愈伤组织继代培养期间呼吸途径与活性氧水平动态变化

继代培养期间的烟草愈伤组织总呼吸速率分别在第11天和第19天出现两次跃升,同时抗氰呼吸的发生与运行逐渐加强,在两呼吸高峰之间达到极大值,随后则逐渐下降,但愈伤组织的电子传递仍以细胞色素途径为主．通过对愈伤组织衰老过程中活性氧代谢变化分析,发现抗氰呼吸发生与H     

箭胡毛杨愈伤组织诱导、保存与再分化

本研究以箭胡毛杨幼叶为外植体,通过对愈伤组织的诱导、保存的再分化的研究,筛选出适宜的培养基和培养条件。外源激素6－BA与IAA的9种配比中,0．5／0．1对箭胡毛杨愈伤组织诱导率可达90％。蔗糖浓度的大小与愈伤组织增长量成正比,与褐变开始时间成反比,当浓度为2％时,继代周期可长达63d。适宜的光照时间可延长愈伤组织保存期并维持良好的组织结构：日光照14h,愈伤组织褐化时间可达到80d;日光照时间少于12h,愈伤组织松散,颜色黄白,褐变开始时间短。经较长时间保存后未褐变愈伤组织的胚状体和丛生苗分化发生时间与分化率不受继代周期影响。当愈伤组织开始褐化后,组织再分化时间延长,分化率大幅度降低。不同继代周期对再生试管苗的生根无影响。     

杜仲愈伤组织中次生代谢产物积累动态研究

以杜仲愈伤组织为材料,研究了不同接种量及培养时间、不同来源的愈伤组织及其继代次数对愈伤组织生长和次生代谢产物含量的影响。结果表明,愈伤组织继代培养时接种量在0．35g左右比较合适。愈伤组织的生长曲线大致呈S形,在20d时达到最大值,而总黄酮和绿原酸的含量均在16d时达到最大值。在继代培养中,茎和叶愈伤组织的增长量、绿原酸和总黄酮含量均在第三代达到最大值;下胚轴诱导的愈伤组织的增长量、绿原酸和总黄酮含量均在第四代达到最大值;子叶愈伤组织的增长量和总黄酮含量在第五代达到最大值,绿原酸含量于第四代达到最大值。不同来源的愈伤组织中,叶愈伤组织中绿原酸含最最高,下胚轴愈伤组织中总黄酮含量最高。     

生姜离体叶片愈伤组织悬浮细胞系建立与植株再生

以‘莱芜大姜’为试材,研究了生姜离体叶片愈伤组织的诱导以及细胞悬浮系建立与植株再生。结果表明,以生姜试管苗叶片为外植体,接种到MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖的培养基上,可有效诱导出生长迅速、质地疏松的愈伤组织。将获得的愈伤组织接种到MS+0.15 mg/L 2,4-D+6.0 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖的液体培养基上,25℃黑暗条件下震荡培养25-30 d,可建立分散性好、生长迅速的悬浮细胞系,细胞悬浮系培养的适宜参数为:初始接种量为1.0-1.5 g,继代培养的适宜间隔期为15 d,继代培养液体培养基更新比例为3/4。将悬浮细胞接种到固体培养基MS+0.2 mg/L NAA+10.0 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖上可获得再生植株。     

The Influence of Different Factors on Cell Growth and α-tocopherol Content of Culture from Carthamus tinctorius

Calli were induced from root, hypocotyl, cotyledon and flower bud of Carthamtus tinctorius. All calli had the capability to synthesize α-tocopherol. Among these calli, the hvpocotylcallus was better than others in cell growth rate and α-toeopherol content. Culture conditions could intensively influence the growth rate and α-tocopherol production of callus from Carthamus tinctorius. Sucrose (30g/L) was good for callus growth and glucose (30g/L) was good for α-tocopherol accumulation. High concentration (0.55%) of inositol could obviously stimulate both growth rate and α-tocopherol synthesis of callus. The inoculum quantity for best callus growth was 0.035 to 0.067g dry wt/flask (50ml volume). In addition, α-tocopherol content was effectively increased by culture callus in high CO2 concentration. Studies on optimum cuhure conditions of callus culture showed that the callus growth rate, α-tocopherol content and yield were 1.88, 2.03 and 3.30 times respectively as high as of the control by administration of 0.45%–0.55% inositol, 10% coconut milk, 0.1–0.5% casamino acid, 30g/L sucrose and 10g/L glucose.     

烟草愈伤组织继代培养与分化期间核酸代谢的比较研究

柳叶烟草愈伤组织在分化和芽原基形成期间,DNA 和RNA 含量均高于继代培养物;在芽原基形成后和幼芽生长期间(12天以后),DNA和RNA 含量持续上升,而同期继代培养物巳进入生长静止期,DNA 和RNA 含量基本不变或略有下降。根据RNA 电泳结果还进一步分析了两种愈伤组织培养物各RNA 组分变化与总RNA 含量变化的关系。分化培养物在芽原基形成时有明显升高的RNase 活性峰和持续上升的RNA 合成速率;而此时期继代培养物的RNase 活性及RNA 合成能力均较低;分化愈伤组织的DNA 合成速率在幼芽生长期间仍维持上升趋势,且显著高于同期继代愈伤组织的合成速率。这些结果表明,烟草愈伤组织分化培养物比继代培养物有更旺盛的核酸代谢能力。     

裸脚菇0612-9液体菌种优化及其对后续发酵产活性物质的影响

裸脚菇0612-9次级代谢产物具有强烈抗青绿霉活性,可作为微生物源防腐剂用于柑橘保藏,但是其发酵周期长,产出能耗大效率低。用摇瓶对裸脚菇0612-9的液体菌种培养基、培养条件进行优化并对优化后液体菌种接种种龄、接种量进行探索,最后用5L发酵罐进行放大发酵验证。取样计数测定菌丝球数量、过滤称重测定菌丝干重、HPLC监测活性物质Ⅱ的积累、牛津杯法评价抗青绿霉活性。经研究最佳碳源为玉米粉和麦芽糖,最佳氮源为蛋白胨,最佳液体菌种培养基组成为：玉米粉30g/L、麦芽糖10g/L、蛋白胨15g/L、KH₂PO₄ 2g/L、MgSO₄·7H₂O 1g/L;最佳培养条件：起始pH 5、接种3×Ф7mm菌块、装液量100mL/250mL三角瓶、温度28℃、转速160r/min;优化前菌丝球数46个/10mL,菌丝干重0.28g/100mL,优化后菌球数达985个/10mL,菌丝干重达0.69g/100mL,分别为优化前的21.4倍、2.43倍;后续发酵使用种龄9d的液体菌种、接种量7.5%。优化后液体菌种在发酵罐中后续发酵周期从10d缩短至5d,缩短50%,产量比优化前提高8.28%。     

寡糖素对西洋参和人参愈伤组织培养的影响

红花、人参和黑节草寡糖素(简称CO、GO和DO)分别加入到培养基中,均能影响西洋参和人参愈伤组织生长和皂甙的合成。CO、GO和DO促进西洋参愈伤组织皂甙合成的最适浓度分别为5ppm、15ppm和10ppm,皂甙产率分别为14.89mg/flask、11.24mg/flask和14.53mg/flask,均明显高于对照(8.22mg/flash).CO、GO和DO促进人参愈伤组织皂甙合成的最适浓度分别为5ppm、20ppm和5ppm,皂甙产率分别为11.79mg/flask、11.20mg/flask和10.48mg/flask,均明显高于对照(6.65mg/flask),它们在适度浓度下对人参愈伤组织的生长均有促进作用。     

贡蕉胚性细胞悬浮系的建立和植株再生

鲜食蕉品种的高度不育性和多倍性制约了用传统育种方法培育生产实践中所需的新品种 ,建立稳定的胚性细胞悬浮系是香蕉生物技术育种的前提。以目前国内尚未建立该体系的鲜食蕉品种贡蕉 (AA)未成熟雄花序的第 1～ 15位花梳为外植体 ,对胚性细胞悬浮系的建立和植株再生体系进行了优化。结果表明 ,5～ 6个月的培养后可获得分生小球体和浅黄色、松散易碎的胚性愈伤组织。 9μmol/L 2,4 D对外植体愈伤组织的诱导效果最好 ,诱导率为 40.96 % ,胚性愈伤组织诱导率可达7.45 % ,其中5.79%的胚性愈伤组织来源于第 6～12号位置的花梳。胚性愈伤组织悬浮培养后 ,通过 3个月的筛选和继代培养 ,可得到均质的胚性细胞悬浮系。该培养体系合适继代周期为 15d ,继代时合适的起始接种量为每 30mL培养基加 2mLPCVECS。培养 6个月的胚性细胞在体细胞胚诱导培养基中培养15d后可见到白色半透明体细胞胚的发生 ,体细胞胚诱导率为 2 80× 10³个 mLPCV。成熟体细胞胚的萌发率为 17 2 8% ,其中发育成正常的再生植株的百分率为 14 16 %。     

STATISTICAL OPTIMIZATION OF GREEN FLUORESCENT PROTEIN PRODUCTION FROM Escherichia coli BL21(DE3)

An optimized cultivation condition is needed to maximize the functional green fluorescent protein (GFP) production. Six process variables (agitation rate, temperature, initial medium pH, concentration of inducer, time of induction, and inoculum density) were screened using the fractional factorial design. Three variables (agitation rate, temperature, and time of induction) exerted significant effects on functional GFP production in E. coli shake flask cultivation and were optimized subsequently using the Box–Behnken design. An agitation rate of 206 rpm at 31°C and induction of the protein expression when the cell density (OD_600nm) reaches 1.04 could enhance the yield of functional GFP production from 0.025 g/L to 0.241 g/L, which is about ninefold higher than the unoptimized conditions. Unoptimized cultivation conditions resulted in protein aggregation and hence reduced the quantity of functional GFP. The model and regression equation based on the shake flask cultivation could be applied to a 2-L bioreactor for maximum functional GFP production.     

影响籼稻体细胞胚胎发生几个因素的研究

以 IR36、IR50、IR52及 IR54等品种的幼穗及成熟种子为材料,研究了蔗糖浓度、2,4-D、NAA、激动素及脱落酸对体细胞胚胎发生、结构的保持及植株分化的影响。6%蔗糖有利于胚性愈伤组织的诱导;3%的有利于胚性结构的保持及植株分化。当培养基中不含2,4-D,而含激动素与 NAA 时,幼穗直接出芽;当不含激动素而含2,4-D与 NAA 时,外植体产生非胚性愈伤组织;当不含 NAA 而含2,4-D 与激动素时,外植体产生胚性愈伤组织。认为,2,4-D与激动素是籼稻体细胞胚胎发生的基本因素,而 NAA 的作用是不明显的。不同外植体(幼穗与成熟种子)的体细胞胚胎发生,对2,4-D 与激动素的反应略有不同,幼穗更为敏感。在继代培养基中,加入低浓度的脱落酸有利于胚性结构的保持。随着继代世代的延续,分化培养中愈伤组织所表现出的绿色生长点状物不能发育成完整植株。     

‘陇东’紫花苜蓿原生质体最佳分离条件

以‘陇东’紫花苜蓿（Medicago sativa L.cv.‘Longdong’）下胚轴愈伤组织为材料,研究酶液组合、酶解时间、酶液渗透压、愈伤组织继代培养时间及预处理措施对原生质体分离效果的影响。结果表明：获得产量最高（8.8×105个·g-1）、活力最高（88.55%）的原生质体最佳酶液组合为2%纤维素酶＋0.5%果胶酶＋0.3%崩溃酶、酶解时间为10h、酶液渗透压即甘露醇浓度为0.55mol·L-1,愈伤继代培养天数为12d、预处理措施为4℃、黑暗条件下放置24h。