氨基磁性微球固定化木瓜蛋白酶及其应用

目的:采用实验室自制氨基磁性微球固定化木瓜蛋白酶,并将其应用于啤酒中蛋白质的水解.方法:考察不同给酶量、戊二醛浓度、固定时间等因素对固定化木瓜蛋白酶的影响.将固定化酶用于啤酒的处理,测定其游离氨基酸变化.结果:实验表明给酶量1.2mg/ml,戊二醛浓度5%,固定化时间4h为固定化最佳条件.酶活力测定表明,在最优化条件下制备的固定化酶较溶液酶具有更低的Km值(0.489%:3.412%),更好的酸碱(6.8:7.2)和温度耐受性(77℃:67℃),操作和储藏稳定性也得到了很大提高.固定化酶水解啤酒中蛋白质后,啤酒混浊度降低了0.013个单位,酪氰酸和苯丙氨酸等游离氨基酸有不同程度的增加,啤酒色泽和口味得到了改善.结论:磁性固定化木瓜蛋白酶较溶液酶有更佳的稳定性和更好的可操作性,具有广泛的应用前景.     

用磁性微球载体固定化酶的研究

含铁磁体的高分子微球,其表面可化学偶联酶,抗体、抗原等生物活性物质,从而增加生物质的稳定性和存活期,同时可用外部磁场快速简便地分离反应物,因此磁性微球载体已逐渐应用于细胞、蛋白质的分离、亲和层析和放射免疫等生化技术领域。许多酶反应是临床     

磁性复合微球固定化酶制备过程及其研究进展

磁性复合微球作为一种优良的载体,广泛应用于生物医学和技术上,如蛋白纯化、药物绑定、酶固定化等.磁性复合微球制备过程包括纳米磁性粒子合成、磁性复合微球制备,将酶与经表面戎基、氛基、环氧基等功能基团修饰或直接与磁性微球共价结合,或者与表面经金属离子鳌合的磁性微球吸附从而实现酶固定化.本文介绍了磁性复合微球的制备过程及其在固定化酶方面的研究进展.     

磁性微球固定化胶原酶筛选抑制剂的研究

以表面修饰的磁性微球作为载体,以共价结合的方式将胶原酶固定化,从56种中草药中快速筛选具有抑制作用的种类。结果表明:表面羧基磁性微球与胶原酶能较好地固定化,酶的反应浓度为2 mg/m L,并且不影响其活性。以SDS-PAGE电泳的方法作为检测手段,从56种中草药中筛选出草河车对胶原酶具有较好的抑制作用。     

生物磁性高分子，微球制备研究与应用进展

本文综述了磁性高分子微球的研究现状,并总结了目前常用的各种磁牲高分子微球的制备方法及其在生物医学上的应用。最后展望了磁性高分子微球的发展前景。     

尼龙固定化木瓜蛋白酶及其应用研究

 尼龙经CaCl_2和H_2O的甲醇溶液处理,稀HCl水解用戊二醛交联以制备固定化木瓜蛋白酶。在溶液酶浓度为1mg/mL pH7.5—8.0、4—15℃条件下固定3h,活力回收42.5％,相对活力46％,偶联效率52％,半衰期72天。溶液酶Km值和固定化酶K_m~(aPP)值(底物酪蛋白W/V,％)分别为0.28％和0.35％。溶液酶和固定化酶分别在pH6.5和pH8.0以下活力稳定;最适pH分别为7.0和8.0;在65℃处理30min活力分别为原有活力的89％和66％。当酪蛋白浓度为1.5％和2.5％以上活力分别受到抑制。固定化酶在6mol/L脲中连续浸洗5次共6h其活力稳定,仍有原活力的44.4％;用以处理啤酒浊度比对照下降了2-11倍;蛋白质含量下降了55％;冷藏(4℃)120天,无冷混浊发生;同时各项理化指标和风味不变。     

高分子膜载体固定化木瓜蛋白酶

在浸润条件下,以0.5%(v/v)戊二醛交联的高分子膜尼龙载体固定化木瓜蛋白酶。对固定化条件进行了优化,比较了固定化酶与游离酶的酶学参数。结果表明,4℃、pH6.0条件下,将膜载体浸润于2mg/mL酶液中5h,固定化酶活为303.4U/g。固定化酶最适反应pH为6.0～7.0,最适反应温度为65℃。其pH稳定性、热稳定性均比游离酶高。     

纳米磁性壳聚糖微球固定化酵母醇脱氢酶的研究

建立了以纳米级磁性壳聚糖微球(magnetic chitosan microspheres , M-CS)为载体固定化酵母醇脱氢酶(yeast alcohol dehydrogenase,YADH)的方法,优化了YADH的固定化条件,考察了固定化酶的性质。结果表明,M-CS 呈规则的圆球形,粒径在30nm 左右,具有较好的磁响应性。酵母醇脱氢酶固定化适宜条件为:50 mg 磁性壳聚糖微球,加入20mL 0.25 mg/mL 酵母醇脱氢酶(蛋白质含量)磷酸盐缓冲液(0.05 mol/L ,pH 7.0) ,在4 ℃固定2h。M-CS 容易吸附酵母醇脱氢酶,但吸附的酶量受载体与酶的比例、溶液的离子浓度、溶液pH的影响明显,而温度对吸附的酶量的影响则相对较弱。相对于游离的酵母醇脱氢酶,固定化酶的最适温度略有升高,可明显改善其热稳定性、酸碱稳定性、操作稳定性和贮存稳定性。     

海藻酸钠-壳聚糖固定化木瓜蛋白酶催化内吗啡肽的合成

反应体系以乙腈作为有机介质,在微水有机溶剂体系中以Boc-Trp-OH和Phe-NH2为底物,用海藻酸钠 壳聚糖固定化木瓜蛋白酶催化合成Trp-Phe-NH2时,产率为27.8%．在这一合成反应中,对pH值、离子强度、溶液含量、反应温度、酶用量和反应时间进行正交试验,证明pH是本合成过程的最重要影响因素．反应体系以乙腈为有机介质,在微水有机溶剂体系中以 Boc-Tyr-Pro-OMe和Trp-Phe-NH2为底物,用IPSAC催化合成Tyr-Pro-Trp-Phe-NH2,产率为35~2%．     

用木瓜蛋白酶及固定化木瓜蛋白酶拆分DL-苯丙氨酸

为了将手性化合物D-苯丙氨酸和L-苯丙氨酸进行分离,利用木瓜蛋白酶及固定化木瓜蛋白酶催化的方法对其拆分．试验结果表明,用DL-苯丙氨酸合成N-乙酰-DL-苯丙氨酸,得率为88.7％．木瓜蛋白酶、海藻酸钠 壳聚糖固定化木瓜蛋白酶(IPSAC)、尼龙布固定化木瓜蛋白酶(IPN)催化合成N-乙酰-L-苯丙氨酰苯胺时,对催化合成过程影响最大的因素分别是溶液中的离子强度、溶液中的离子强度、反应温度;溶液中的离子强度与pH对合成的影响较大．本试验得出分别用木瓜蛋白酶、IPSAC、IPN催化合成N-乙酰-L-苯丙氨酰苯胺的3个最佳方案;用此3个方案合成时,产率分别为61.2%、54.7%、36.3%．N-乙酰-L-苯丙氨酰苯胺水解生成L-苯丙氨酸,产率59.2%,光学纯度为96.6％．N-乙酰-D-苯丙氨酸水解生成D-苯丙氨酸,产率61.7%,光学纯度为95.7％．     

功能化磁性纳米粒子在固定化酶研究中的应用

酶是高效的生物催化剂,在生物技术领域有广泛的应用。然而,不可再生催化的高成本和酶的有效成分分离回收,是实现大规模工业化应用需要解决的关键问题。磁性纳米粒子(magnetic nanoparticles,MNPs)具有优异的磁回收性质。通过设计和制备功能化MNPs作为固定化酶的多功能载体,是解决这一问题的有效途径之一,可为酶的工业化大规模应用提供条件。近年来,功能化磁性纳米粒子在酶的固定化领域基于载体性质、固定化方法和应用有广泛研究。文中重点介绍了近年来各种功能化磁性纳米载体,特别是Fe3O4纳米粒子,在固定化酶中的应用。根据功能化试剂的差异分类,实例讨论了不同功能化修饰的磁性纳米载体对酶的固定化,包括硅烷修饰的磁性纳米载体、有机聚合物修饰的磁性纳米载体、介孔材料修饰的磁性纳米载体以及金属-有机骨架材料(metal-organic framework,MOF)修饰的磁性纳米载体。同时,结合可持续工业催化的发展要求,对磁性复合载体固定化酶的发展前景进行了展望。     

木瓜蛋白酶在飘珠上的固定化和红外活化

用火电厂的废物——飘珠作载体,将木瓜蛋白酶固定化得到成功,比活力为天然酶的26.6％。但发现,采用适当的红外辐射又可使固定化酶活力提高约30％。     

磁性固定化胰蛋白酶的催化特性及应用的研究

详细研究了磁性固定化胰蛋白酶的催化特性,并与溶液酶进行比较,发现胰蛋白酶经固定化后最适pH值向碱性方向移动了1．0个pH单位,最适温度提高了5℃,K值略有增大。对该固化酶的热稳定性和操作稳定性也进行了研究,结果表明,胰蛋白酶经固定化后热稳定性明显提高,操作稳定性也得到了一定的改善,经3次重复使用后,活性保持43．8％,对啤酒澄清和裸皮软化显示较好的应用前景。     

氨基化二氧化硅颗粒固定木瓜蛋白酶研究

采用正硅酸乙酯与N-(β-氨乙基)氨丙基三乙氧基硅烷在油包水形成的微胶囊中同步水解的方法,一步法制备了氨基化的二氧化硅颗粒,得到的颗粒粒径在0.3～0.5μm之间,平均大小为0.37μm, 氨基含量和颗粒大小可控,氨基含量高达56mmol/g。此颗粒经戊二醛处理后,采用共价法固定木瓜蛋白酶,固定化最适pH6.5,最佳给酶量为15mg/g载体,固定化酶的最适反应温度为70℃,最适反应pH为6.5,固定化酶热稳定性,pH耐受性,贮存稳定性都明显高于游离酶,表明此颗粒可作为一种优良的酶固定化载体。     

乙二醇对木瓜蛋白酶催化活性的影响

对不同浓度乙二醇水溶液影响木瓜蛋白酶水解酪蛋白的催化活性及构象的改变进行研究。结果表明,木瓜蛋白酶在乙二醇水溶液中水解酪蛋白的活性显著下降。动力学测定表明,木瓜蛋白酶在乙二醇水溶液中最大反应速度明显下降;差示光谱显示,在乙二醇水溶液中木瓜蛋白酶的二级结构发生了变化;荧光发射光谱显示,木瓜蛋白酶在乙二醇水溶液中发射峰位几乎没移动,但发射强度明显增高。     

甲醇溶液对木瓜蛋白酶催化活性的影响

试验结果表明,木瓜蛋白酶在一定浓度甲醇溶液中水解酪蛋白的活性显著上升;动力学测定表明,该酶在甲醇溶液中Km下降;在甲醇溶液中木瓜蛋白酶催化酪蛋白水解反应的最适pH为8.5,最适温度为70℃;紫外差示光谱研究表明,在甲醇溶液作用下木瓜蛋白酶的二级结构发生了变化;荧光发射光谱研究表明,木瓜蛋白酶在甲醇溶液中发射峰位向低波长移动,荧光峰值明显增高。     

Peptide Synthesis in Organic Media with the Use of Subtilisin 72 Immobilized on a Poly(Vinyl Alcohol) Cryogel

Subtilisin 72 serine protease (EC 3.4.21.14) immobilized on a poly(vinyl alcohol) cryogel was used as a catalyst in the syntheses of N-protected peptide p-nitroanilides of the general formulas Z(or Boc)-Xaa-Phe-pNA (Xaa = Leu or Ala), Z-Ala-Xaa-Yaa-pNA (Xaa = Leu or Ala; Yaa = Leu or Phe), and Z-Ala-Ala-Xaa-Yaa-pNA (Xaa = Leu, Arg, or Gly; Yaa = Phe, Leu, Gly, Asp, or Glu). The syntheses were carried out in DMF-acetonitrile mixtures. A number of protected di-, tri-, and tetrapeptides were prepared in yields up to 99%. The syntheses were found to retain stereoselectivity under the conditions studied. The activation of carboxyl group of the acylating component was shown to have a positive effect upon the coupling rate.