MMP-1、MMP-13水平变化与下肢静脉曲张的相关性分析及其意义

探讨MMP-1、MMP-13水平变化与下肢静脉曲张的相关性。采用免疫组织化学法和RT-PCR法比较20例正常大隐静脉及60例曲张大隐静脉中MMP-1、MMP-13表达差异。研究显示,曲张静脉管壁均有不同程度的MMP-1及MMP-13表达,阳性细胞数量随静脉曲张程度加重而增多,静脉曲张组MMP-1及MMP-13的阳性率较正常组明显升高(p0.05,p0.01),且随曲张程度加重而升高;不同患病程度的静脉曲张患者血清中MMP-1及MMP-13 m RNA水平均明显高于正常组,且MMP-1及MMP-13 m RNA随着患病程度的加重表达增强(p0.05,p0.01)。研究表明,MMP-1、MMP-13水平升高与下肢静脉曲张发生显著相关,下肢静脉曲张患者血清中MMP-1、MMP-13水平可作为患者病情评估的一个重要指标。     

SM-22α、α-SMA的表达与下肢静脉曲张具有相关性

探讨SM-22α、α-SMA水平变化与下肢静脉曲张的相关性及其意义。采用间苯二酚品红染色法观察血管平滑肌细胞(VSMCs)结构,通过免疫组织化学染色观察正常大隐静脉及曲张大隐静脉切片SM-22α和α-SMA表达情况;利用RT-PCR检测正常大隐静脉及曲张大隐静脉中SM-22α和α-SMA m RNA表达水平,并用Western blotting检测正常大隐静脉及曲张大隐静脉SM-22α和α-SMA蛋白表达水平。结果显示,曲张静脉管壁血管平滑肌细胞SM-22α和α-SMA阳性表达率较正常大隐静脉均明显降低,与正常组比较,静脉曲张患者血清中SM-22α和α-SMA m RNA表达水平均明显降低,血管管壁平滑肌细胞SM-22α和α-SMA蛋白表达水平均明显降低(p0.05或p0.01)。曲张静脉VSMCs有明显向内膜增殖"迁移"现象,且收缩型VSMCs中SM-22α和α-SMA m RNA及蛋白表达水平均随VSMCs去分化程度增加而减少,这可能是静脉曲张发生、发展的机制之一。     

低切应力对体外培养血管中膜平滑肌细胞原癌基因c-Fos和c-Myc表达的影响

为了探讨切应力影响血管重建的机制,观察了低切应力对完整血管中膜平滑肌细胞原癌基因蛋白c-Fos和c-Myc表达的影响。应用血管体外应力培养系统,将一段完整的猪颈总动脉在体外进行培养,控制血管内培养液为定常流, 压力为1.33×105 Pa,切应力分别为2 Pa(S20组)、0.5 Pa(S5组)和0 Pa(S0组),培养时间分别为1、6和24 h,采用免疫组化和计算机图像分析方法观察血管中膜平滑肌细胞c-Fos和c-Myc的表达。结果显示,S20组仅有少量的表达,而S5组和S0组,血管壁的平滑肌细胞短时间(1 h)内即出现c-Fos和c-Myc表达增高,与S20组相比有显著差异(P<0.01),随后,c-Fos又很快降低(6 h),24 h时已降至基线水平,而c-Myc的表达则持续相对较长的一段时间,且与c-Fos相反,1 h的表达低于6 h。结果表明,在低切应力作用下,血管平滑肌细胞的c-fos和c-myc基因被激活,调节转录,从而调节切应力-血管平滑肌细胞的信号转导通路,进而影响血管平滑肌细胞的增殖和凋亡。     

心房钠尿肽对血管紧张素Ⅱ促血管平滑肌细胞增殖和c-fos原癌基因表达的影响

本工作应用细胞培养、~3氢·胸腺嘧啶核苷参入和斑点杂交的方法,观察到血管紧张素Ⅱ(AGTⅡ)明显促进培养的自发性高血压大鼠的主动脉平滑肌细胞(VSMC)的增殖和c-fos原癌基因的表达;该效应可显著为心房钠尿肽(ANP)所抑制。     

眼镜蛇毒对大鼠延髓c-fos表达的影响

目的 探讨眼镜蛇毒对大鼠延髓c-fos表达的影响.方法 采用免疫组织化学方法,观察并比较c-fos阳性细胞在眼镜蛇毒组、生理盐水组、正常对照组大鼠延髓中的表达.结果 眼镜蛇毒组大鼠延髓外侧网状核c-fos阳性细胞明显多于生理盐水组和正常对照组(P＜0.01).结论 眼镜蛇毒对大鼠延髓c-fos表达有上调作用.     

Rb、P53调控平滑肌细胞c-fos和c-jun基因表达

为研究外源性Rb和P53基因导入血管平滑肌细胞后对c-fos和c-jun基因表达的调控作用,将Rb基因或P53基因重组腺病毒载体转染人脐动脉血管平滑肌细胞,应用RT-PCR和免疫组化法检测c-fos、c-jun的mRNA及蛋白质表达水平,以DNA琼脂糖凝胶电泳和β-半乳糖苷酶染色分别观察细胞凋亡和细胞衰老.结果显示,野生型P53基因导入可诱导平滑肌细胞凋亡,c-fos和c-jun mRNA及蛋白质表达水平显著增高.外源性Rb基因导入能促进细胞衰老,下调c-fos基因表达,但对c-jun基因表达没有明显影响.     

促肾上腺皮质激素引起大鼠肾上腺c-fos原癌基因表达的免疫组化研究

采用冰冻切片及免疫组化法观察了注射促肾上腺皮质激素(ACTH,75U/kg)、胰岛素及正常对照大鼠中肾上腺各部分c-fos原癌基因表达产物Fos蛋白的出现和分布特点。结果表明注射ACTH后90min,大鼠肾上腺皮质网状带出现Fos蛋白染色阳性细胞,阳性染色物集中于细胞核,肾上腺皮质束状带仅见少数Fos蛋白染色阳性细胞,肾上腺髓质则未见Fos蛋白染色阳性细胞。与注射ACTH相反,注射胰岛素引起肾上腺髓质出现Fos蛋白染色阳性细胞。注射生理盐水对照组动物肾上腺皮质和髓质均未见Fos蛋白染色阳性细胞。上述结果表明,注射ACTH或胰岛素可以引起大鼠肾上腺不同部位c-fos原癌基因表达。     

MDM2反义寡核苷酸对血管平滑肌细胞MDM2和p53表达的影响

目的:研究小鼠双微体扩增基因(mouse double minute 2;MDM2)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide;ASON)对血管平滑肌细胞MDM2和p53表达的影响,探讨MDM2反义寡核苷酸包埋支架防治支架内再狭窄的可行性。方法:人工合成一段针对MDM2 mRNA的反义寡核苷酸,脂质体包裹不同浓度ASON转染兔血管平滑肌细胞,RT-PCR和Western-blotting检测MDM2反义寡核苷酸对兔血管平滑肌细胞MDM2和p53表达的影响。结果:不同浓度MDM2反义寡核苷酸作用于兔血管平滑肌细胞后,MDM2和p53 mRNA表达量各浓度组之间有显著性差异(P<0.01),MDM2和p53蛋白表达量各浓度组之间有显著性差异(P<0.01)。结论:MDM2反义寡核苷酸体外能够特异性抑制兔血管平滑肌细胞MDM2表达,提高细胞内p53基因表达量,MDM2反义寡核苷酸有望被进一步应用于药洗脱支架研究。     

Rb、P53调控平滑肌细胞c-fos和c-jun基因表达

为研究外源性Rb和P₅₃基因导入血管平滑肌细胞后对c-fos和c-jun基因表达的调控作用,将Rb基因或P₅₃基因重组腺病毒载体转染人脐动脉血管平滑肌细胞,应用RT-PCR和免疫组化法检测c-fos、c-jun的mRNA及蛋白质表达水平,以DNA琼脂糖凝胶电泳和β-半乳糖苷酶染色分别观察细胞凋亡和细胞衰老.结果显示,野生型P₅₃基因导入可诱导平滑肌细胞凋亡,c-fos和c-jun mRNA及蛋白质表达水平显著增高.外源性Rb基因导入能促进细胞衰老,下调c-fos基因表达,但对c-jun基因表达没有明显影响.     

粉防己碱对血管平滑肌细胞增殖及癌基因表达的影响

采用血管紧张素Ⅱ建立了培养的血管平滑肌细胞增殖模型。用H3-胸腺嘧啶核苷掺入法、流式细胞术、免疫细胞化学及Northernblot方法．观察了粉防已碱对血管平滑肌细胞增殖的作用及对原癌基因和抑癌基因的影响。结果发现：粉防己碱能逆转血管紧张素Ⅱ所致的H3-胸腺嘧啶核苷掺入量增多,阻止血管平滑肌细胞由静止期进入DNA合成期和有丝分裂期,能使c－fos、c—myc、c－sis原癌基因相关抗原及mRNA表达减弱,使P53抑癌基因相关抗原及mRNA表达增强。本文提示：粉防己碱有抑制血管平滑肌细胞增殖作用,同时能影响癌基因表达。     

西酞普兰对应激大鼠额叶皮质神经细胞PCNA、C-fos表达及凋亡的影响

目的：研究西酞普兰对慢性应激大鼠额叶皮质神经细胞增殖细胞核抗原（PCNA）、原癌基因蛋白（C-fos）表达及凋亡的影响。方法：将24只健康雄性SD大鼠随机分为3组（n=8）：对照组（不做任何处理）、应激组（应激＋生理盐水灌胃）、实验组（应激＋西酞普兰灌胃）,采用强迫游泳建立慢性应激模型,用免疫组化法检测PCNA、C-fos蛋白表达水平;TUNEL法检测细胞凋亡情况;尼康图像分析软件测量各指标阳性细胞数量。结果：应激组与对照组比较,可见少量PCNA表达阳性细胞、大量c-fos表达阳性细胞,阳性细胞的体积明显缩小。实验组与应激组比较,可见PCNA表达阳性细胞增多、C-fos表达阳性细胞明显减少,TUNEL阳性细胞数量减少,核浓缩现象较应激组明显减轻,染色也明显变淡,上述差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：慢性应激可影响大鼠额叶皮质神经细胞PCNA、C-fos蛋白表达水平,促进细胞凋亡,西酞普兰可调控额叶皮质神经细胞PCNA、C-fos蛋白表达水平,拮抗细胞凋亡,这可能是西酞普兰预防和治疗慢性应激引起的精神心理疾病的机制之一。     

血清后人血管平滑肌细胞表型转化与microRNAs表达间关系的研究

目的:研究去血清诱导人血管平滑肌细胞发生表型转化与microRNAs表达间的关系。方法:采取人血管平滑肌细胞克隆株HITASY,培养人血管平滑肌细胞(VSMCs)。用去血清的方法处理人血管平滑肌细胞,使VSMCs由去分化表型向分化表型转化,通过蛋白印迹法观察平滑肌细胞中分化标记物蛋白的变化,同时用实时定量PCR法检测细胞中相关microRNA的表达。结果:①去血清处理组与无去血清处理组比较,平滑肌细胞分化标记物(SM-α-actin、calponin)表达显著性增加,而通过SM-α-actin、calponin的蛋白表达量显著增加,提示血管平滑肌细胞向分化表型转化(P0.05);②同时去血清处理组与无去血清处理组比较,Mir-649、Mir-944表达量显著增加,Mir-140、Mir-361表达量显著减少(P0.05)。结论:Mir-649、Mir-944、Mir-140、Mir-361在血管平滑肌细胞表型转化中有关键性作用。     

影响肝癌周围肥大细胞数量的相关因素研究

探讨影响肝癌周围肥大细胞数量的相关因素及其意义。采用二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌模型。应用光镜,免疫组织化学,核酸原位分子杂交和细胞图像分析技术,检测肝癌细胞转化生长因子β（TGFβ）,血管内皮生长因子（VEGF）,c-fosmRNA的表达与癌周肥大细胞（MS）数量变化的相关性。结果显示肝癌细胞浆中TGFβ,VEGF和c-fosmRNA呈阳性表达,其中TGFβ,c-fosmRNA表达的强度与癌周MC数量变化呈平行关系。而VEGF表达的强度与癌周MC数量变化无关。结果表明：肝癌细胞通过释放TGFβ并通过激活原癌基因（c-fos)以旁分泌方式或癌基因产物影响癌周MC的数量。     

氯胺酮和乌拉坦对猫视皮层细胞中刺激诱导的c-fos表达的影响

氯胺酮(ketamine)和乌拉坦(urethane)对神经细胞活动的影响大小和机制尚存在争议。c-fos是刺激依赖表达的立早基因(immediate early genes),其表达量可反应神经细胞活动的强弱。该研究通过免疫组织化学方法比较观察乌拉坦和盐酸氯胺酮急性麻醉对猫初级视皮层细胞中刺激依赖的c-fos蛋白表达的影响。结果显示,氯胺酮组和乌拉坦组初级视皮层各层神经元密度与对照组无显著差异;乌拉坦组视皮层c-fos蛋白免疫阳性细胞密度和免疫反应强度与对照组无显著差异;而盐酸氯胺酮组视皮层细胞中c-fos蛋白免疫阳性细胞密度及免疫反应强度均显著降低。即氯胺酮对视皮层细胞反应的抑制作用较强,而乌拉坦的抑制作用不显著。     

MEF2A基因突变对血管平滑肌细胞增殖迁移及其表型的影响

目的:观察肌细胞增强因子2A(MEF2A)基因突变对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖迁移及其表型的影响。方法:分别将野生型(WT)MEF2A质粒(WT组)、21个核苷酸缺失突变型(△21,显性负突变)MEF2A质粒(△21组)以及MEF2A siRNA(siRNA组)转染进人主动脉血管平滑肌细胞(VSMC),通过溴化噻唑基蓝四唑(MTT)法和Millicell小室观察各组VSMC的增殖和迁移变化,免疫印迹(Western blotting)检测各组VSMC之间MEF2A蛋白、平滑肌α肌动蛋白(α-SM-actin)、SM22α、骨桥蛋白和丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号通路表达差异。结果:MEF2A△21组和MEF2A siRNA组的VSMC增殖增加,迁移数量增多;同时此两组中α-SM-actin和SM22α表达减少,骨桥蛋白表达增加;磷酸化p38和ERK1/2表达也明显增强。结论:MEF2A基因显性负突变及沉默可使VSMC向合成型转化,其增殖和迁移能力增加。而p38和ERK1/2MAPK信号通路可能参与MEF2A基因介导的血管平滑肌细胞表型转化。     

普罗布考对动脉粥样硬化大鼠平滑肌细胞凋亡及p53和Fas蛋白表达的影响

目的探讨普罗布考防治动脉粥样硬化（AS）的机制。方法选用雄性大鼠,复制大鼠AS模型,随机分为动脉粥样硬化模型组、普罗布考组和正常对照组。大鼠造模成功后给予普罗布考治疗,6周后处死大鼠,采用流式细胞术检测平滑肌细胞凋亡率及凋亡相关基因p53和Fas蛋白的表达。结果模型组大鼠血管平滑肌细胞凋亡率明显高于对照组（P〈0．05）,p53和Fas蛋白的表达增强（P％0．05）,主动脉壁可肉眼观测典型斑块。普罗布考组大鼠平滑肌细胞的凋亡率明显低于模型组（P〈0．05）,p53和Fas蛋白表达下调（P〈0．05）,主动脉斑块面积较模型组减小明显。结论普罗布考通过调节p53和Fas蛋白表达来调节AS大鼠平滑肌细胞的凋亡。     

间断切口与长切口获取大隐静脉在冠状动脉旁路移植术中作用的对比研究

目的:比较冠状动脉旁路移植术(CABG)中采用间断切口与长切口获取大隐静脉作为静脉桥材料的优缺点。方法:选择2011年12月至2012年12月宁夏医科大学总医院心脏大血管外科111例行CABG的冠状动脉粥样硬化性心脏病患者为研究对象。根据术中获取大隐静脉方法的不同,随机将其分为两组,长切口组64例,在CABG中采用长切口法获取大隐静脉,间断切口组47例,在CABG中采用间断切口法获取大隐静脉。比较两组大隐静脉获取时间、下肢切口缝合时间、下肢手术时间、大隐静脉桥长度、下肢切口长度和下肢切口并发症发生率的差异。结果:间断切口组大隐静脉桥长度及下肢手术时间(45.4±6.7)cm,(65.8±10.3)min与长切口组(47.5±6.7)cm,(65.8±10.3)min比较无统计学差异(P0.05)。间断切口组获取大隐静脉的时间(48.9±8.3)min显著长于长切口组(37.3±5.8)min,下肢切口长度与缝合时间(17.0±3.5)cm,(16.9±3.4)min明显短于长切口组的(43.5±6.4)min,(31.7±5.9)min,差异均有统计学意义(P0.05)。两组大隐静脉壁的损伤情况比较无统计学差异(P0.05),但间断切口组术后下肢切口延迟愈合、感染、渗出、下肢血肿等并发症的发生率低于长切口组(P0.05)。结论:在冠状动脉旁路移植术中,间断切口获取大隐静脉能够显著缩短下肢手术切口长度,有助于减少术后下肢切口感染、延迟愈合、渗出、下肢血肿等并发症的发生。     

高表达C3aR的肥大细胞在糖尿病肾病患者肾组织中的分布及病理意义分析

选取糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)早期、中期、晚期以及正常移植供肾各15例,分别作为DN早期组、中期组、晚期组和正常对照组,利用各个病例的肾穿刺组织标本进行C3aR免疫组化染色,分析各组中高表达C3aR浸润细胞的数量和分布特点,及其与DN发生、发展的关系,利用连续切片、免疫荧光双套色染色、免疫电镜、及甲苯胺蓝染色等方法对DN患者肾组织中高表达C3aR的浸润细胞进行细胞类型鉴定.结果表明:a.光镜和免疫电镜的形态学分析显示DN患者肾组织中高表达C3aR的浸润细胞在形态上具有肥大细胞的特点,免疫荧光双套色染色的分析显示,C3aR浸润细胞CD45阴性、CD68和类胰蛋白酶阳性,与肥大细胞的情况一致,甲苯胺蓝特殊染色进一步证实这是一种肥大细胞.b.正常移植供肾组织中虽有肥大细胞分布,但数量很少;从DN早期组到DN中期组,再到DN晚期组,肾组织中肥大细胞的数量有一种不断增加的趋势;DN患者肾组织肥大细胞的数量与24 h尿蛋白和血肌酐水平均具有很好的线性相关性.上述工作不仅揭示了在DN发生发展过程中肥大细胞在DN患者肾组织中的数量及分布情况,提示肥大细胞很可能参与了DN的发生发展过程,同时,DN患者肾组织肥大细胞高表达过敏毒素C3a受体C3aR的发现,提示C3a/C3aR通路很可能在DN患者肥大细胞的招募和激活过程中有重要作用.     

重组人白介素-10抑制晚期糖基化终产物诱导的大鼠血管平滑肌细胞和血管新生内膜的增殖

研究观察了重组人白介素10(rhIL-l0)对晚期糖基化终产物(AGE)刺激下离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖及对SD大鼠血管损伤后新生内膜增殖的影响。体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,采用MTS／PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态;应用流式细胞术测定细胞周期;利用p44／42磷酸化抗MAPK抗体的蛋白免疫印迹法测定p44／42 MAPK磷酸化蛋白表达。利用大鼠颈动脉血管损伤模型,观察rhIL—10对新生内膜增殖的影响。结果显示：(1)AGE处理组与对照组相比,AGE对血管平滑肌细胞增殖具有明显的刺激作用(P＜0．05)。rhIL-l0单独应用对血管平滑肌细胞生长没有影响(P＞0．05)。在AGE刺激下,低至100ng／ml的rhIL-l0可抑制血管平滑肌细胞的生长(P＜0．05)。(2)流式细胞术测定的结果显示,rhIL—10可以使AGE作用下的VSMC大部分处于Go／G1期,与对照组相比有明显差异(P＜0．01)。(3)AGE对p44／p42 MAPK磷酸化蛋白表达有显著的增强作用,此作用可被rhIL—10抑制(P＜0．001)。(4)大鼠颈动脉损伤后,rhIL—10治疗组的动脉血管新生内膜/中层面积比低于对照组约45％(P＜0．01)。表明抗炎细胞因子rhIL—10可抑制AGE诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和血管新生内膜的增殖。     

间断性人工重力对模拟失重大鼠颈总动脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的:研究3周模拟失重大鼠颈总动脉平滑肌细胞凋亡的变化及间断性人工重力对其的影响。方法:以尾部悬吊大鼠(SUS)模拟失重,同期每天悬吊23h、站立1h(STD)模拟间断性人工重力的对抗效果,用M30染色及Tunel染色方法观察3周SUS组、同步对照(CON)组及STD组颈总动脉平滑肌细胞早期和中晚期的凋亡情况,并用免疫组织化学方法及Western blot印迹方法观察各组大鼠颈总动脉组织Caspase-3的蛋白表达变化。结果:与CON组比较,SUS组大鼠颈总动脉平滑肌细胞M30染色阳性细胞明显减少,STD组M30染色阳性细胞较CON组及SUS组显著增加;SUS组Tunel染色阳性细胞较CON组及STD组显著减少,STD组Tunel染色阳性细胞较CON组及SUS组显著增加;SUS组Caspase-3的表达较CON组显著降低(P<0.05),STD组Caspase-3的表达较CON组及SUS组显著增高(P<0.01)。结论:模拟失重可引起大鼠颈总动脉平滑肌细胞凋亡减少,每日1 h的-Gx对抗使颈总动脉的凋亡增加。Caspase-3可能在调控模拟失重所致血管组织平滑肌细胞的凋亡中发挥作用。