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岩豆凝集素的圆二色性与生物学活性关系的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
岩豆凝集素(MDL)的远紫外圆二色性谱(CD谱)显示216-217nm处的单一负峰。此时MDL分子含有16.2%的α螺旋,46.3%的β折叠和37.5%的无规卷曲。pH9.0时负峰红移至220nm,且在217-222nm处的峰值几乎相同;在20-40℃范围内,CD谱的变化甚微;60℃时谱峰蓝移;在80℃或100℃时,212nm处出现一大负峰。1mol/L或2mol/L脲时,MDL的CD谱已发生明显变化,二级结构单元也有变化,凝集兔红细胞的活性也随之减弱;随脲浓度的增加,MDL的谱峰蓝移,最终在212nm处出现大负峰。当胍浓度为0.75mol/L时,MDL的CD谱即有明显变化和活性丧失;胍浓度继续增加,CD谱逐渐成为特征的无规卷曲的谱形。在pH9.0、温度超过80℃、脲或胍浓度分别高于2mol/L和0.75mol/L时,MDL的CD谱发生显著变化的同时,其凝集兔红细胞的生物学活性全部丧失,分子的二级结构单元也发生很大改变。 相似文献
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用圆二色谱研究了天花粉蛋白在酸性和碱性溶液中的构象,并观察了在十二烷基磺酸钠(SDS)溶液中天花粉蛋白分子构象的变化,用Chen,Yang与Martinez等人的方法计算了各种条件下天花粉蛋白二级结构含量.结果表明:在很宽广的pH范围内(从pH2到pH12)分子构象基本上是稳定的.但是,在强碱性条件下即pH>12(室温)或pH11.5(40℃)螺旋含量显著减少.在碱性条件下,于250nm附近出现一新的CD带,它的强度与离解的酪氨酸残基个数呈线性关系,说明这一新带主要是由离解的酪氨酸残基产生的. 相似文献
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岩豆凝集素(MDL)的远紫外圆二色性谱(CD谱)显示216-217nm处的单一负峰。此时MDL分子含有16.2%的α螺旋,46.3%的β折叠和37.5%的无规卷曲。pH9.0时负峰红移至220nm,且在217-222nm处的峰值几乎相同;在20-40℃范围内,CD谱的变化甚微;60℃时谱峰蓝移;在80℃或100℃时,212nm处出现一大负峰。1mol/L或2mol/L脲时,MDL的CD谱已发生明显 相似文献
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【目的】构建多靶向siRNA表达载体对里氏木霉碳阻遏抑制因子CRE1、CRE2、CRE3和CRE4进行同时多靶向siRNA干扰,以研究其对里氏木霉纤维素酶基因表达的调控作用。【方法】根据此前研究筛选出沉默cre1、cre2、cre3和cre4基因的4个最佳siRNA序列,设计并构建了A多靶向表达载体,另根据cre1、cre2、cre3和cre4基因中所含有的5个共有序列设计并构建了B多靶向表达载体,将两者转化至里氏木霉QM9414。经筛选后分别在48 h和120 h对各转化子进行纤维素酶酶活力测试(CMC活力测试和滤纸酶酶活力测试)及利用qPCR检测相关基因的表达。【结果】通过RT-qPCR测定结果表明,两种表达载体均可同时抑制里氏木霉的分解代谢物阻遏基因cre1、cre2、cre3和cre4的表达,纤维素酶活力比出发菌株明显升高,多靶向抑制菌株的CMC酶活和滤纸酶活比出发菌株平均提高了1.95倍和2.66倍。纤维素酶基因cbh1和egl1的表达水平比出发菌株也有明显提升,平均提高了3.83倍和3.95倍。纤维素酶相关基因xyr1的表达水平与出发菌株相比也明显上升,平均提高了2.78倍。【结论】多靶向沉默里氏木霉的碳代谢阻遏蛋白有利于解除葡萄糖效应,提高非还原糖的利用,从而提高纤维素酶的产量,使纤维素酶的表达得到更大的提升,为里氏木霉表达纤维素酶在分解代谢物阻遏基因调控方面提供了实验依据和新的技术思路。 相似文献
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tRNA在相应的氨酰合成酶(以下简称合成酶)的催化作用下与其对应的氨基酸发生特异性连接是保证蛋白质正确翻译的首要前提。这种特异性主要是由tRNA上的一个或几个非连续的碱基或碱基对所组成的个性元件(identityelement)决定的。这些个性元件是... 相似文献
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岩豆凝集素分子修饰与圆二色性的关系研究 总被引:1,自引:0,他引:1
天然态岩豆凝集素(MDL)远紫外圆二色性(CD)谱显示216nm处单一负峰,是一种高β-折叠构象凝集素;近紫外CD谱呈现282nm处负峰和260~275nm及295nm处的负肩,经N-乙基顺丁烯二酰亚胺(NEMI)和对氯汞苯甲酸(PCMB)修饰MDL的巯基,其近紫外CD谱未发生变化,远紫外CD谱仅发生细微变化,MDL凝集活性保持不变;PCMB过量时,CD谱呈现典型的无规卷曲谱形,MDL完全丧失凝集活性,去除PCMB后,活性又全部恢复.二硫苏糖醇(DDT)修饰MDL的二硫键并用碘乙酸(ICH2COOH)保护巯基,MDL远紫外CD谱216nm处的负峰红移至225nm,且显著减小;同时,近紫外CD谱282nm处负峰几乎消失,两负肩分别保持完整,分子中α-螺旋降低,无规卷曲增加较多,MDL凝集活性未发生变化.用N-溴代丁二酰亚胺(NBS)修饰MDL分子中的色氨酸,导致216nm负峰蓝移至208nm且变小,分子中无规卷曲和α-螺旋增加,β折叠减少,近紫外CD谱295nm负肩消失,282nm负峰红移至287nm,MDL凝集活性完全丧失. 相似文献
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测定了自马槟榔(Capparis masaikai Levl.)种子分离的二种甜味蛋白MaⅠ和MaⅡ的远紫外区域圆二色谱,并按Yang和Chen的方法用最小二乘法计算了它们的构象单元含量,结果表明α螺旋含量最多:对MaⅠf_H=0.43、f_β=0.24、f_R=0.33;对MaⅡ,f_H=0.37、f_β=0.33、f_R=0.30;其相关系数均为0.9876;计算所得理论曲线与实验曲钱其本吻合。二种甜蛋白的激光拉曼光谱测定结果也表明其主要构象单元为α螺旋,此外,均无SH谱带:MaⅠ的Tyr残基暴露于分子表面;与MaⅡ相比,MaⅠ有明显的545cm~(-1)和1101cm~(-1)谱带,这可能从构象上说明MaⅠ与MaⅡ对热和变性剂处理表现不同的原因。 相似文献
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铁缺乏及运动对大鼠红细胞膜圆二色谱、膜表面电荷及膜流动性的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
采用圆二色谱、膜表面电荷及膜流动性指标测定了铁缺乏和运动大鼠红细胞膜的损伤变化。发现铁缺乏和运动两因素同时存在时红细胞膜蛋白的α-螺旋含量显著偏高,边缘缺铁运动组偏低。运动使红细胞膜表面电荷显著下降。反映膜脂质流动性的,值各实验组差异不显著。提示缺铁和运动所致膜损伤与膜蛋白氧化修饰或膜蛋白成分增减有关。 相似文献
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本文综述了圆二色谱激子手性法进展及其在天然产物绝对构型确定中的应用. 相似文献
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用近紫外CD光谱技术追踪了PEP羧化酶与各种配基的相互作用。底物PEP、必需金属离子Mg~( )、PEP-Mg~( )以及效应剂G6P、Gly、G6P-Gly,均可引起高粱叶片PEP羧化酶近紫外CD光谱各不相同的变化。这表明高粱叶片PEP羧化酶分子构象有较大的灵活性,不同的配基与酶相互作用可引起酶分子不同的构象变化,因而使酶分子表现出催化功能、调节特性、必需氨基酸残基的化学反应性以及稳定性诸方面的差异。 相似文献
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棕色固氮菌固氮酶FeMo蛋白与过量(5-6个当量)的酸性靛蓝保温30-60分钟后,蛋白中的P-金属原子族全部氧化,然而蛋白中的FeMoCo全都处于还原状态。Na2S2O4使这种部分氧化的FeMo蛋白中的P-ciuster重新不,甲基紫精可加快这种还原,而亚甲蓝等氧化剂则使这种蛋白中的FeMoCo受到氧化,对这种部分氧化的FeMo蛋白分别进行CD还原滴定和测定氧化过程中的EPR/ABS的变化已经得到p-Cluster和FeMoCo的氧化还原当量数目。 相似文献
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由远紫外圆二色谱算得枯草杆菌A014(Bacillusspp.)所分泌的新型抗菌多肽LCI在水溶液中的各种构象含量为:α螺旋4.7—6.0%,β折叠67.2-72.8%,无规卷曲和转角21.1-28.1%。对多种方法的二级结构预测结果进行综合分析表明,LCI可能含有3个β转角,4个β折叠片段,仅含少量或不合α螺旋.晶体最大线度可达0.2×0.2×0.4mm,属于三方晶系。其六方H晶胞为a=b=51.21空间群为R32。 相似文献
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镉诱导蚯蚓金属硫蛋白的分离纯化及其溶液构象的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
镉诱导蚯蚓匀浆液经热沉淀,乙醇沉淀后,经凝胶过滤SephacryS-200柱层析,得三个镉结合蛋白峰,分子量依次为40,17及9kD。这三个组份再分别经DEAESepharose Fast Flow柱层析,分别得三、三、二个镉结合蛋白峰。根据光谱学特征、巯基含量及氨基酸组成等分析,认为凝胶过滤第二峰为金属硫蛋白(MT),其经DEAE柱层析所得三个峰为MT三个亚型。对蚯蚓MT三个亚型在不同PH条件下 相似文献
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Pamela Beckmann Stephen R. Martin Andrew N. Lane 《European biophysics journal : EBJ》1993,21(6):417-424
The interaction of the trp repressor with several trp operator DNA fragments has been examined by DNA gel retardation assays and by circular dichroism, in the absence and presence of the corepressor l-tryptophan. The holorepressor binds stoichiometrically to both the trpO and aroH operators, forming 1:1 complexes. In the presence of excess protein, additional complexes are formed with these operator fragments. The relative electrophoretic mobilities of the 1:1 complexes differ significantly for trp and aroH operators, indicating that they differ substantially in gross structure. A mutant trp operator, trpO
c, has low affinity for the holorepressor, and forms only complexes with stoichiometries of 2:1 (repressor: DNA) or higher, which have a very low electrophoretic mobility. Specific binding is also accompanied by a large increase in the intensity of the near ultraviolet circular dichroism, with only a small blue shift, which is consistent with significant changes in the conformation of the DNA. Large changes in the chemical shifts of three resonances in the 31P NMR spectrum of both the trp operator and the aroH operator occur on adding repressor only in the presence of L-tryptophan, consistent with localised changes in the backbone conformation of the DNA.Abbreviations CD
circular dichroism
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trpO, trpR
aroH trp operator fragments
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trpO
c
trpMH mutant trp operator fragments 相似文献